تتمتع خلايا جاما دلتا تي بنشاط سام للخلايا قوي ضد العديد من أنواع السرطان، بما في ذلك سرطان الدم النخاعي الحاد. ومع ذلك ، فإن تعميم خلايا غاما دلتا تي في الدم نادر نسبيا ، خاصة في المرضى الذين يعانون من الأورام الخبيثة. ضخ المتبرع المستمدة، X-vivo توسيع غاما دلتا الخلايا التائية، لديها وعد في الحد من تكرار سرطان الدم، وتحسين بقاء المرضى الذين يعانون من سرطان الدم النخاعي الحاد.
الأسلوب المقترح يحقق أكبر من 200، 000 أضعاف غاما دلتا تي توسيع الخلية، والوصول إلى جرعات ذات الصلة علاجيا من منتج خلية غاما دلتا تي نقية للغاية، في ثلاث خطوات سهلة. ربط ذلك IEL للتوسع، ألفا بيتا استنفاد الخلية T عن طريق الفرز المغناطيسي والتوسع الثانوي مكافأة مع AAPCs. وتوسع الطريقة المقترحة فائدة خلايا غاما دلتا تي لأمراض مثل السرطان وأمراض المناعة الذاتية من خلال إنشاء عدد كبير من الخلايا التي يمكن استخدامها على الرف بسرعة.
ويمكن تكييف هذه العملية لتوسيع خلايا غاما دلتا باستخدام أساليب تخصيب مختلفة وإضافة عمليات معالجة إضافية مثل النقل. إثبات الإجراء سيتم في لوس انجليس ، وهو تقني العلاج بالخلايا ، وثلاثة من مختبري. تبدأ عن طريق التملص من عينة المنتج الفوارة، على جهاز الطرد المركزي التدفق المضاد، وذلك باستخدام وسيلة أساسية من محلول الملح المتوازن هانكس، مع 1٪ ألبومين مصل الإنسان والمتوسطة الثانوية للمحلول المالح أو DPBS.
مع سرعة الطرد المركزي elutriation في 900 مرة G، وجمع الكسور على أساس معدل التدفق والوقت. جمع العينات من الكسر الثاني لإجراء اختبار العقم، وعدد الخلايا وphenotyping الخلية عن طريق قياس التدفق الخلوي. من الكسر الثاني، قم بتوسيع جزء من الخلايا اللمفاوية النقية في الثقافة بمعدل 10 مرات إلى 10 إلى الخلايا السادسة لكل سنتيمتر مربع، مع خمسة ميكرومولات لكل لتر من حمض الزوليدرونيك و300 وحدة لكل ملليلتر من إنترلوكين-2 في مفاعل حيوي مغلق للتر الواحد.
احتضان النظام لمدة سبعة أيام عند 37 درجة مئوية، مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون. بعد الحضانة، حصاد الخلايا من قارورة مفاعل حيوي النظام مغلقة لتر واحد. للقيام بذلك، لحام عقيمة حزمة نقل لتر واحد إلى الخط الأحمر من المفاعل الحيوي، واستخدام مضخة الصيدلانية المناسبة لنقل الخلايا إلى حزمة نقل.
خذ العينات لاختبار العقم المتوسط المستهلك وعدد الخلايا وفينوتيبينج الخلية عن طريق قياس التدفق الخلوي. من العينة المتبقية، إعادة تعليق الخلايا في خمس مرات 10 إلى الخلايا الثامنة لكل ملليلتر، في مخزن مؤقت PBS-EDTA تحتوي على 0.5٪ HSA ومستقبلات الخلايا التائية البيوتينية، ألفا بيتا الأجسام المضادة محددة. واحتضان الخلايا في درجتين إلى ثماني درجات مئوية مع اهتزاز.
بعد 15 دقيقة، اغسل الخلايا ب 600 ملليلتر من مخزن PBS-EDTA المؤقت الذي يحتوي على 0.5 HSA والطرد المركزي بمعدل 200 إلى 500 مرة G لمدة 15 دقيقة، عند درجتين إلى ثماني درجات مئوية، لإزالة الجسم المضاد غير المنضم. ثم، إعادة تعليق الخلايا في ما يقرب من خمس مرات 10 إلى الخلايا الثامنة لكل ملليلتر، في مخزن مؤقت PBS-EDTA تحتوي على 0.5٪ HSA و 7.5 ملليلتر لكل قارورة من الميكروبات المضادة للبيوتين محددة. كما هو موضح سابقا، احتضان الخلايا مع اهتزاز، قبل الطرد المركزي تعليق الخلية لإزالة الميكروبات غير المقيدة.
إعادة تعليق ست مرات 10 إلى الخلايا السابعة لكل ملليلتر في المخزن المؤقت PBS-EDTA مع 0.5٪ HSA. جمعها في حقيبة نقل حزمة. سبايك عندما تعليمات من قبل الصك.
بعد ذلك، قم بتركيب مجموعة أنابيب في جهاز فصل الخلايا المغناطيسية السريري. ضع الحزم مع المخزن المؤقت PBS-EDTA وحزمة النقل مع منتج الخلية في الأداة. لاستنفاد خلايا ألفا بيتا T المسماة، حدد بروتوكول استنفاد 1.2 في البرنامج.
ثم، طرد مركزي منتج الخلية لجمع الكسر الهدف المخصب مع الخلايا التائية غاما دلتا. إعادة تعليق الخلايا التي تم جمعها في المتوسط، وتستكمل مع 10٪ مصل AB الإنسان. إجراء صلاحية عدد الخلايا وتدفق قياس الخلايا phenotyping استنفاد آخر.
جلب الخلايا إلى تركيز النهائي من حوالي مرة واحدة 10 إلى الخلايا السادسة لكل ملليلتر. تشعيع خمس مرات 10 إلى السابعة الاصطناعية المضادة لتقديم الخلايا أو AAPCs لكل قارورة، في 100 رمادي على أداة توليد الأشعة السينية. إعداد ثقافة مشتركة، عن طريق وضع الخلايا المشععة AAPCs و جاما دلتا T في نسبة 10 هو واحد، في قارورة مفاعل حيوي نظام مغلق لتر واحد.
مع لتر واحد من الثقافة المتوسطة، تكملها 10٪ مصل AB الإنسان، البذور تصل إلى 10 قوارير. احتضان الثقافة في 37 درجة مئوية، و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 10 أيام، مع فحص مستويات الجلوكوز واللاكتات كل ثلاثة إلى أربعة أيام باستخدام شرائح والجلوكوز ومتر اللاكتات. إذا انخفض مستوى الجلوكوز إلى 215 ملليغرام لكل ديسيلتر، خفض حجم في القارورة إلى 200 ملليلتر.
اخلط الخلايا في ال 200 ملليلتر المتبقية من الوسائط، وأزل عينة 0.5 ملليلتر لحساب الخلايا وقياس قابليتها للحياة عن طريق تلطيخ البرتقال أو يوديد البروبيديوم. إذا كان عدد الخلايا يساوي، أو أكثر من 10 إلى التاسع، تقسيم محتويات قارورة واحدة إلى قسمين وملء كل قارورة تصل إلى لتر واحد مع متوسط AIM-V، تكملها 10٪ مصل AB الإنسان. إذا كان عدد الخلايا أقل من 10 إلى التاسع، وإطعام الخلايا مع لتر واحد جديد من المتوسطة الثقافة، وتستكمل مع مصل AB الإنسان 10٪، والعودة قوارير إلى الحاضنة.
في نهاية 10 أيام في الثقافة المشتركة، حصاد قوارير المفاعل الحيوي واحد في وقت واحد، وسحب جميع الخلايا في حزمة نقل من الحجم المناسب. بعد إزالة عينات مراقبة الجودة، والطرد المركزي الخلايا في 200 إلى 500 مرة G لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، والتخلص من supernatant. غسل الخلايا في حل من محلول كريستالويد متوازن, تستكمل مع 0.5٪ HSA في 200 إلى 500 مرات G لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
إعادة تعليقها في حجم مستهدف من 100 إلى 300 ملليلتر من محلول كريستالويد متوازن مع 0.5٪ HSA. الخلايا المنفصلة عن كسر الطرد المركزي بعد التدفق المضاد. اثنين أسفرت عن السكان الخلايا الليمفاوية نقية، مع متوسط ممتاز البقاء من 95.80٪ الخلايا التائية غاما دلتا توسع محدد، مع حمض الزوليدرونيك تعتمد على النسبة المئوية الأولية للخلايا القاتلة الطبيعية الموجودة في كسر الخلايا الليمفاوية بعد التملذ.
وكان إثراء مادة غاما دلتا تي الخلية المخدرات، مع مستقبلات الخلايا التائية ألفا بيتا استنفاد متسقة. المنتج المخدرات غاما دلتا تي الخلية المصنعة من ثلاثة متبرعين أصحاء, اجتمع معيار الإفراج عن أقل من 1٪ من مستقبلات الخلايا التائية ألفا بيتا الخلايا التائية الإيجابية, مع متوسط 0.11٪ CD20 الخلايا B إيجابية, و 0.00٪ مستقبلات الخلايا التائية ألفا بيتا إيجابية الخلايا التائية. وكان متوسط النسبة المئوية للخلايا القاتلة الطبيعية في المنتج النهائي حوالي 17.06٪ التي تلبي معيار الإفراج عن أقل من 35٪ تلطيخ سطح الخلية وتحليل تدفق الخلايا، واستخدمت لتوصيف الهوية والنقاء وعملية الشوائب من مادة المخدرات ومنتج المخدرات.
أما إعادة التوسع الثانية التي تحققت من الثقافة المشتركة لمادة المخدرات المضادة للخلايا التائية AAPC وTasta-Delta، فقد ولدت منتجا من أدوية الخلايا التائية غاما - دلتا يستوفي جميع معايير الإطلاق. الباثونات التي تثري سكان الخلايا التائية تؤثر على توسع وخصائص المنتج. ويلزم النظر في أساليب الإثراء والتحقيق فيها على قدم افية قبل بدء عملية التخصيب.
