نمذجة ورم خبيث في الدماغ عن طريق حقن الوريد الخلفي لخلايا سرطان الثدي الالتهابية

استخدمنا طريقة الوريد الذيل لتوليد ورم خبيث في الدماغ في نماذج الفئران باستخدام خطوط الخلايا المشتقة من المرضى الذين يعانون من سرطان الثدي الالتهابي ، أو IBC ، وهو شكل شديد العدوانية من سرطان الثدي الأولي. عادة ما يتضمن توليد ورم خبيث في الدماغ في نماذج الفئران حقن الشرايين داخل القلب أو داخل الشريان السباتي. ومع ذلك ، فإن طريقة الوريد الذيل توفر ميزة على هذه التقنيات لأنها تحاكي بشكل أفضل خطوات استعمار ورم خبيث في الدماغ ، وهي سهلة الأداء نسبيا.

سيقوم الطبيبان شياودينغ هو وإميلي فيلودري ، وكلاهما مدربان في مختبري ، بشرح الإجراء. للكشف عن نقائل الدماغ عن طريق تصوير هيئة أجيال السلام بعد ثمانية إلى 10 أسابيع من حقن الخلايا السرطانية ، قم بتطهير الماوس بنسبة 70٪ من الإيثانول وإزالة الفراء من الرأس والأذنين. قطع منطقة عنق الرحم من الرقبة.

استئصال وإزالة الجمجمة للسماح بحصاد الدماغ. ضع الدماغ في كاسيت الأنسجة وضع الكاسيت في وعاء من DPBS البارد لمدة لا تزيد عن ساعة واحدة. للتصوير بواسطة المجهر الاستريو ، انقل الدماغ إلى غطاء طبق الأنسجة 100 سم تحت مجهر ستيريو مجهز بضوء الأشعة فوق البنفسجية وحدد هدف 0.5x للسماح بتصور الدماغ بأكمله.

اضغط على العرض المباشر وركز العرض بينما يكون الدماغ في الوضع البطني. حدد المرشح المناسب في البرنامج والمجهر لعلامة الفلورسنت في الخلايا ، والتقط صورة. بدون تحريك العينة ، قم بالتبديل إلى تصوير برايت فيلد وحدد مرشح برايتفيلد.

التقط صورة. ثم تخيل الدماغ في الوضع الظهري كما هو موضح سابقا. لتحليل صور الدماغ بالكامل ، قم أولا بتحويل ملفات الصور من TIFF إلى JPEG حتى يمكن فتحها باستخدام أي جهاز كمبيوتر لا يحتوي على البرامج المرتبطة به.

بعد ذلك ، افتح زوجا من صور brightfield و fluorescent وحدد قنوات الملف والدمج. حدد المكونات المناسبة ، وانقر فوق موافق ، واحفظ الصورة المدمجة. لتحديد منطقة ورم الدماغ في صورة الفلورسنت ، حدد التحديد التلقائي.

حرك السهم إلى منطقة موضع GFP وانقر لإنشاء تحديد تلقائيا. ثم انقر مرة أخرى لتأكيد التحديد. سيتم عرض جميع القياسات.

إذا كان من الممكن ملاحظة أكثر من منطقة إيجابية GFP ، كرر القياس مع المنطقة التالية. يمكن اكتشاف الآفات النقيلية في الدماغ في وقت مبكر بعد ثمانية أسابيع من الحقن عن طريق تصوير لوسيفيراز والمجهر الفلوري الاستريو. بعد التصوير ، يمكن تثبيت أجزاء من نقائل الدماغ ومعالجتها من أجل تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوزين للتحقق من وجود آفات ورم خبيث في الدماغ ، وللتلطيخ المناعي الكيميائي للكشف عن علامات بروتينية معينة ذات أهمية.

عند محاولة هذا البروتوكول ، من المهم الحفاظ على صلاحية الخلية عن طريق إبقاء الخلايا على الجليد لمدة لا تزيد عن ساعة واحدة ، وتجنب فقاعات الهواء في تعليق الخلية لمنع تكوين الصمات وموت الفئران. بعد حقن الوريد الذيلي ، نراقب نمو ورم خبيث في الدماغ وتطوره باستخدام تصوير لوسيفيراز. بعد القتل الرحيم ، أكد المجهر الفلوري المجسم والأنسجة آفات ورم خبيث.