الهدف العام من هذه الطريقة هو الحث على الوذمة اللمفاوية الثانوية متسقة في hindlimb الفئران دون التسبب في المراضة الشديدة. يمكن استخدام هذه الطريقة للحث على الوذمة اللمفاوية الثانوية في الوذمة الخلفية للفئران. الميزة الرئيسية لهذه الطريقة هي أنه يحل الوذمة اللمفاوية غير الهامة التي تستمر ثمانية أسابيع على الأقل دون التسبب في مراضة شديدة.
قد يعاني شخص جديد من هذا الإجراء من الأساليب الجراحية الدقيقة. لذلك نوصي بالتدريب المجهري والإجراءات العملية العديدة لضمان نجاح النتيجة، وكذلك إعداد الباحث حتى يتمكن من إجراء العملية بشكل أكثر كفاءة. إعداد مصدر الإشعاع و التخدير الماوس كما هو موضح في البروتوكول.
ضع لوحة رصاص سميكة 1.5 ملليمتر لضمان أن المنطقة التي تخضع للجراحة فقط يحصل على المشعع. المثال المبين هو فأرة ما بعد الجراحة لتوضيح المنطقة. إعطاء جرعة من 10 تشعيع رمادي.
يجب على الباحثين اتخاذ الاحتياطات اللازمة عند العمل مع الإشعاع. وخلال هذه التجربة، تم إجراء كل التشعيع في غرفة معزولة عن الإشعاع. ولم يتم تشغيل مصدر الإشعاع إلا عندما غادر جميع الموظفين الغرفة.
وزن الماوس قبل الجراحة. فحص عمق التخدير عن طريق مخلب أو الذيل اختبار قرصة. حلق الساق المختارة لإجراء العملية.
تعيين تدفق الأوكسجين إلى 0.8 لتر في الدقيقة. ربطه بمخروط الأنف. تطبيق مرهم العيون.
حقن 0.5 ملليلتر من تحت الجلد المالحة، ويفضل في scruff من الماوس لمنع نقص الدم أثناء الجراحة. وضع الماوس على القماش الجراحي في موقف supine. ضع مخروط الأنف على الخطم.
إصلاح نهاية hindlimbs بلطف مع الشريط، لمنع الماوس من التحول أثناء الجراحة. رفع الجلد مع ملقط على نحو سلس ومقطع فتحة صغيرة تقريبا خمسة ملليمترات قريبة إلى فوسا popliteal. حرك مقصًا حادًا في الفتحة ومقطعًا نحو الركبة ، بحيث ينتهي الشق فوق الركبة مباشرةً.
تأكد من عدم ثقب الأوعية الأساسية، عن طريق رفع الجلد مع ملقط أثناء قص. حرك الماوس إلى موضع عرضة وأكمل الشق المحيطي. تشريح الجلد إلى بضعة ملليمترات فوق الزاوية.
تذكر أن تبقي الأنسجة رطبة مع المالحة العقيمة أثناء الإجراء بأكمله. سحب الجلد من الجرح القريب مع مرنة السحب. وتأكد من أن الوريد الوركي مرئي كما هو مبين.
حقن 0.01 milliliters براءات الاختراع الأزرق الخامس تحت الجلد بين ثاني وثالث من الدلع. اضغط بلطف مخلب بضع مرات لتوزيع البراءة الأزرق V.The توزيع البراءة الأزرق الخامس يمكن أن ينظر إليها من خلال المجهر. الهياكل اللازمة لتكون تصور، والأوعية الليمفاوية القريبة، PLV، العقدة الليمفاوية الزفير، PLN، والأوعية الليمفاوية القاصي الأول، DLV1، والأوعية الليمفاوية القاصي الثاني، DLV2.
تكبير لتصور PLV وligate ذلك باستخدام خياطة النايلون 10-0. اضغط على مخلب لضمان عدم وجود براءات الاختراع الأزرق يمر القريبة إلى الرباط. Ligate الأوعية الليمفاوية القاصيتين كما هو مبين.
اضغط على مخلب عدة مرات مرة أخرى للتأكد من أن أي براءة اختراع الأزرق الخامس يمر القريبة إلى الرباط. في هذا المثال، يمكن ملاحظة أن أحد الأوعية الليمفاوية رشقات نارية بسبب الرباط تعوق تدفق الليمفاوية. إزالة العقدة الليمفاوية الزاوي، العقدة الليمفاوية لديه سطح مثل اللؤلؤ على نحو سلس وملونة من قبل V الأزرق براءات الاختراع على النقيض من الأنسجة الدهنية المحيطة بها.
قبل إزالة وسادة الدهون الإربية، الكي هذه السفينة كما هو مبين. ثم إزالة وسادة الدهون في قطعة واحدة. تأكد من عدم وجود نزيف نشط.
هذا مثال على العقدة الليمفاوية الإربية الموجودة. العقدة الليمفاوية الموجودة في وسادة الدهون الإربية نادرا ما الملونة من قبل V الأزرق براءات الاختراع ويمكن أن يكون من الصعب التفريق من الدهون. إزالة وسادة الدهون في قطعة واحدة هو أفضل وسيلة لضمان إزالة العقدة الليمفاوية.
خياطة حواف الجلد وصولا الى ففة العضلات، مع خياطة النايلون 6-0 باستخدام ملقط وحامل إبرة، وترك فجوة من 2-3 ملليمترات، لتقييد تدفق الليمفاوية السطحية. هذا مثال على الغرز النهائية ، في فوسا popliteal ، الجانب الجانبي من hindlimb ، فوق الركبة ، والجانب الوسيط من hindlimb. إدارة المسكنات ووزنها الماوس بعد الجراحة، ثم وضعه في مجلس الوزراء ساخنة للانتعاش.
كرر الإجراء الخاص بالإشعاع قبل الجراحة. يُظهر هذا الرسم البياني الحجم المُعَد المُدمج لثلاث دراسات منفصلة في الأسابيع الثمانية التي تلت الجراحة. تم تضمين 31 الفئران في المجموع.
يمثل المحور س بعد أسابيع من الجراحة. ويمثل المحور y حجم الـ hindlimb في ملليمتر مكعب. تمثل أشرطة الأسهم الانحراف المعياري.
ومن المتوقع أن تورم من الجراحة وذمة اللمفية المستحثة سوف تنخفض خلال الأسابيع الأربعة الأولى. بعد الأسابيع الأربعة الأولى نرى حالة مستقرة نسبيا من الوذمة اللمفاوية. يزيد حجم التحكم hindlimb خلال الأسابيع الثمانية ، وبالتالي القول بدقة الفرق في الحجم بين الوذمة اللمفاوية hindlimb والسيطرة hindlimb ، وكان هذا غير متوقع.
وتكهن السبب أن الفئران تستخدم hindlimb غير تعمل أكثر من hindlimb تعمل في الأسابيع التالية لعملية جراحية. وهذا يمكن أن يؤدي إلى تضخم في hindlimb التحكم وربما يفسر الزيادة في حجم. للأرقام الفردية على الدراسات الثلاث المدرجة يرجى قراءة البروتوكول.
يُظهر هذا الجدول اختبار المقارنة المتعددة الذي تم اختباره في سيداك لقياسات الحجم المجمعة للدراسات الثلاث المشمولة. وتبين القيمة المحسوبة P أن هناك فرقاً هاماً إحصائياً بين الوذمة الخلفية مع الوذمة اللمفاوية المستحثة و hindlimbs التحكم، خلال كل ثمانية أسابيع من المتابعة. وللتحلي بالتحليل الإحصائي الفردي للمشاريع الثلاثة المشمولة، يرجى قراءة البروتوكول.
هذه الطريقة تحفز الوذمة اللمفاوية ذات الأهمية الإحصائية ، وتستمر ثمانية أسابيع على الأقل. يمكن استخدام هذا الإجراء لدراسة تحجر الوذمة اللمفاوية والبحث عن خيارات العلاج الجديدة. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن تكون قد اكتسبت فهمًا لكيفية تحفيز الوذمة اللمفاوية الثانوية في hindlimb من الفئران ، وذلك باستخدام مزيج من الجراحة الدقيقة والتشعيع قبل وبعد الجراحة.
بمجرد أن يتقن، يمكن إجراء العملية الجراحية في 45 دقيقة.
