هذا البروتوكول هو أول من يقدم إصابة من نوع التكدم الموحد في أبحاث إعادة تجديد الحبل الشوكي axolotl. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تحاكي الصدمة التي شوهدت في العيادة اليومية، مما يعزز من احتمال أن تكون النتيجة المستقبلية قادرة على الترجمة. يمكن استخدام جهاز إصابة الكدمات في أي نموذج حيواني صغير آخر لإصابة الحبل الشوكي.
التقنية الجراحية صعبة ، وخاصة استئصال لامينك. ولذلك، فمن المستحسن لتدريب الإجراء على عدد كبير من الحيوانات السابقين vivo قبل التقدم إلى في جراحة الجسم الحي. للبدء، قم بإعداد طاولة جراحية عن طريق وضع طبق بيتري قياسي تحت مجهر ستيريو، على رأس قطعة قماش نسيجية جراحية.
وضع axolotl تخدير في موقف عرضة على طبق بيتري، والتفاف عليه في مناشف ورقية بحيث يتعرض الذيل. تحديد الأطراف الخلفية واستخدام زوج من مقص صغير لجعل الشق الأول فقطcaudal لهم. جعل شق عمودي من عارضة حتى يتم الشعور البروز العظمي للعمليات الغرشع.
تمديد القطع من الناحية الجانبية، وبالتالي فإن شق يجتاز العرض الكامل للذيل، ويمسك العمليات العرضية مع ملقط لضمان عمق السليم. ثم تمديد شق عمودي ملليمتر واحد تحت العملية العرضية على كلا الجانبين. ضع الحيوان على جانب واحد ، وبدءًا من النقطة البطنية للشق الرأسي ، قم بعمل شق أفقي يبلغ حوالي 15 ملليمترًا للحيوانات التي يبلغ وزنها 10 إلى 20 جرامًا.
استخدم المقص لتشريحه على الفور من خلال الشق الأفقي حتى يشعر العمود الفقري في خط الوسط. ثم تشغيل الحيوان على الجانب الآخر وتكرار العملية. بعد تشريح في الطائرة المتوسطة العميقة من كلا الجانبين، تشريح من خلال خط الوسط لربط شقين أفقية.
ثم، نقل قطعة حرة من الذيل وعارضة إلى جانب واحد لفضح العمليات spinous. وضع الحيوان في موقف عرضة مع الرأس التي تواجه الجانب الجراح غير الدومينانت، واستخدام زوج من ملقط لفهم العمليات العرضية، فقطcaudal إلى الأطراف الخلفية. ضعي رفعًا لطيفًا نحو رأس الحيوان.
ضع شفرات مقص صغير أفقي حول العملية وقطعها بلطف، مما يعرض الحبل الشوكي. فهم عملية الدوزالية العرضية إلى واحد فقط إزالتها، وتكرار العملية. من الضروري أن تحافظ على رفع مستمر على العملية العرضية لضمان عدم إلحاق الضرر بالحبل الشوكي عند إزالته.
إذا لم تكن المنطقة المكشوفة واسعة بما فيه الكفاية، استخدم زوجين من ملقط لفهم الصفيحة على جانبي الحبل الشوكي وتحريفها بشكل جانبي بحركة لطيفة. عند إزالة العملية العرضية، قد يكون من الضروري القيام بذلك في عدة خطوات. ولذلك، قد يستغرق تعريض الحبل الشوكي عدة دقائق.
لإدخال إصابة نوع كدمة، استخدم طبق بيتري لنقل الحيوان إلى وحدة الصدمات وتألق مصباح يدوي على الحبل الشوكي. ثم، ضع اسطوانة وحدة الصدمات كدمة فوق الحبل الشوكي المكشوف باستخدام التسوية الدقيقة، وخفض الاسطوانة حتى يكون مستوى مع الصفيحة. إرفاق قضيب السقوط إلى المغناطيس الكهربائي، ووضع المطلوب انخفاض ارتفاع الاسطوانة تعديل على وحدة الصدمات.
بعد ذلك، ضع قضيب السقوط على الاسطوانة، إيقاف المغناطيس الكهربائي لإسقاط قضيب على الحبل الشوكي المكشوفة، واستخدام المسمار ضبط الارتفاع لرفع قضيب احتياطية. إذا كان إدخال إصابة حادة، وقطع الحبل الشوكي في قطع عمودي الكمال، ثم كرر التخفيضات اثنين ملليمتر إلى الجانب السد من الجسم. اشعر بشفرات المقص وهي تخدش الجزء البطني من القناة الشوكية لضمان اكتمال التخفيضات، وارفع قطعة الحبل الشوكي من القناة.
لإغلاق الجرح الجراحي، ضع 10 نقطة O خياطة النايلون من الجزء الأكثرcaudal من شق أفقي إغلاق الجروح في طبقة واحدة والعمل نحو الجزء الرأسي من شق. عندما يتم التوصل إلى زاوية، بدوره طبق بيتري وخياطة شق أفقي آخر، ثم تعيين خياطة على الشقوق العمودية. قبل إنهاء التخدير، استخدم الموجات فوق الصوتية عالية التردد للحصول على صور للإصابة.
محاذاة طرف محول مع محور طول الحيوان، وغمره في محلول البنزوكاين حتى يكون فقط بضعة ملليمترات فوق العارضة خلف الأطراف الخلفية للحيوان. تحديد موقع الإصابة والحصول على الصور وفقا لاتجاهات المخطوطة. عند الانتهاء، والعودة axolotl إلى محلول مجاني مخدر عن طريق غمر طبق بيتري في المياه العذبة العميقة خمسة سنتيمترات والسماح للانزلاق الحيوان قبالة.
تم التحقق من صحة إصابات الحبل الشوكي التي تم إنشاؤها باستخدام هذا البروتوكول باستخدام الهماتوسلين و إيوسين تلطيخ على axolotls المصابين والشام. لتأكيد التجديد، تم إعداد أقسام النسيجية بعد تسعة أسابيع من الإصابة. وأظهرت الصور إعادة تأسيس اتصال الحبل الشوكي في الحيوانات المصابة.
الإصابة والتجديد تليها أيضا نحن فحص وظيفة عصبية. تم تسجيل رد فعل الحيوان لتحفيز الذيل مع درجات أعلى تشير إلى وظائف حسية أعلى عن طريق اللمس ونوسسيبل. ومن بين الحيوانات المصابة، كان هناك فقدان للوظيفة العصبية بعد ثلاثة أسابيع من الإصابة، واستعادة تدريجية في غضون تسعة أسابيع.
كما تم تصور إصابة الحبل الشوكي باستخدام التصوير الجرافيكي بالموجات فوق الصوتية ، مما سمح بالتصور للشريان الظهري كعلامة على سلامة السفينة. تم إجراء فحوصات الرنين المغناطيسي في الميدان مباشرة بعد الإصابة وفي ثلاثة وستة وتسعة أسابيع. وكانت هذه الفحوصات قادرة على تصور وذمة واستعادة سلامة الحبل الشوكي.
الاشعة على الفور بعد الاصابة ، كانت عرضة للضوضاء. المريض والجراحة الدقيقة تمهد الطريق لتحقيق نتيجة ناجحة بعد استئصال لامينك من دون ضرر سابق لأوانه في الحبل الشوكي. بعد هذا الإجراء، يمكن تطبيق عدة طرق في الجسم الحي، مثل التصوير والتقنيات الكهربائية الفيزيولوجية.
