يصف البروتوكول العام الإجراءات الجراحية التي يتم تنفيذها بسهولة لإزالة التذييل المعروف باسم التصحيح caecal في الفئران. يمكن استخدام نموذج استئصال الزائدة الدودية المورين لدراسة الأدوار البيولوجية للتذييل في التسبب في أمراض الجهاز الهضمي البشري. التذييل البشري هو عضو متنازع عليه.
وقد أشارت الدراسات الحديثة إلى أن الملحق يلعب دورا هاما في الحفاظ على صحة الأمعاء. لدراسة الوظيفة البيولوجية للتذييل، فإن توليد نموذج حيواني مرتبط باستئصال الزائدة الدودية مرتبط بالمرض أمر بالغ الأهمية. في هذا البروتوكول، سوف نصف خطوات بسيطة وآمنة الجراحية لإزالة الزائدة الدودية، والمعروفة باسم التصحيح caecal في الفئران.
لضمان نجاح هذا النموذج، هناك ثلاث خطوات رئيسية كما سترى في الفيديو التالي. أولاً، حدد مكان فئران الفئران قبل الجراحة. ثانياً، قم بعمل شق صغير في البطن.
ثالثا ، تطهير وإغلاق جذع caecum. الجزء الأول، استئصال الزائدة الدودية الفئران. إعداد أدوات جراحية معقمة وحلول تنظيف قبل الجراحة.
تخدير وتأمين الماوس على منصة في وضع supine عن طريق وضع أربعة شرائط من شريط لاصق طبي عبر الأطراف لمنع حركة الوضعية أثناء الجراحة. بلطف لمس البطن كله من الماوس للعثور على الشعور عثرة. تغطية الستائر وتطهير منطقة حلق من البطن الماوس واسعة قدر الإمكان باستخدام مرتين من اليود.
إجراء شق طولي يتراوح بين 0.5 سنتيمتر إلى سنتيمتر واحد في منتصف البطن. وفقا لموقع محدد سلفا من caecum، والبحث عن caecum وإضفاء مظهر بلطف لمدة سنتيمتر واحد تقريبا لتحديد التصحيح caecal. استخدم محلولًا فسيولوجيًا مُدفأًا مسبقًا ومعقّمًا لترطيب الأمعاء.
لمنع المضاعفات المحتملة من نزيف ما بعد العملية الجراحية والعدوى، ligate الأوعية الدموية mesenteric من caecum باستخدام 8-0 خياطه. هيدرات caecum مع المالحة. وضع علامة على منطقة استئصال باستخدام خياطة 4-0 مع حلقة مفتوحة بالقرب من قمة caecum في القولون القريب.
قطع التصحيح caecal تحت استئصال ملحوظ باستخدام مقص صغير والقضاء على محتوى caecal المتبقية مع مسحات القطن الطبية. تطهير جذع من caecum مع اليود. إغلاق الجذع مع خياطة تشغيل باستخدام 8-0 خياطه.
إزالة بعناية حلقة الموضوع 4-0، المستخدمة سابقا لوضع علامة على استئصال في جذع caecum. تعقيم الموقف خياطة باستخدام اليود. إعادة هيدرات منطقة القطع مع المالحة.
إغلاق طبقة العضلات مع خياطة تشغيل باستخدام 8-0 الخيط خياطة. أغلق طبقات الجلد باستخدام خياطة متقطعة مع 4-0 خياطة الخيط. تطهير قطع الجراحية مرتين مع اليود.
ثم، إزالة اليود باستخدام 75٪ الكحول الطبية. الوجه بلطف الماوس مرة أخرى. حقن تحت الجلد 0.1 مليغرام لكل كيلوغرام من وزن الجسم من البوبرينورفين، و 0.4 ملليلتر من المالحة الفسيولوجية.
وبقية الماوس على وسادة الحرارة، حتى يعود إلى وعيه. وضع الماوس مرة أخرى إلى القفص العقيم، ومراقبة عن كثب الماوس لعلامات الألم لمدة ثلاثة أيام بعد الجراحة لضمان شفائها. الجزء الثاني: تحريض سرطان القولون المرتبط بالتهاب القولون مع أزوكسي الميثان، AOM، وDextran كبريتات الصوديوم، DSS، سبعة أيام بعد استئصال الزائدة الدودية.
ذوبان aliquot واحد من AOM وتمييعه إلى 1 مليغرام لكل ملليلتر باستخدام 0.9٪ المالحة العادية. تتم عملية التحضير بأكملها في غطاء الدخان. قم بحل أربعة غرامات مسحوق DSS في 200 ملليلتر محلول المياه autoclaved لإعداد 2٪ DSS.
كل قفص يحتوي على خمسة فئران. جعل حقن داخل الصفاق من AOM مع 0.01 ملليلتر لكل غرام لكل فأرة على أساس وزنه. استبدال المياه autoclaved مع 2 ٪ DSS لمدة خمسة أيام.
سيتم تغذية الفئران بالماء المُقلَد ذاتيًا لدورتين إضافيتين. الجزء الثالث: النتائج. تدفق و ELISA النتائج تشير إلى إزالة ناجحة من التصحيح caecal.
هذا الإجراء يمكن أن تسهم في خفض كبير من خلايا البلازما IgA محددة, تغيير واضح من IgA الإفرازية في الأمعاء الغليزية, مقارنة مع 3٪ DSS, التي لديها معدل وفيات عالية وتغير كبير في الوزن بسبب البراز الدموي الشديد, الشرج التدلى, والبطن abces. و 2٪ DSS مناسبة للعملية برمتها لمعدل البقاء على قيد الحياة عالية إلى ما يقرب من 80٪ وتغيير الوزن المعقول في كل من الصورية ومجموعات استئصال الزائدة الدودية. كما هو موضح في هذه الصور، قمنا بنجاح بتسبّب أورام القولون المرتبطة بالتهاب القولون.
في صور تلطيخ H&E، يشير السهم الأسود إلى القرحة المخاطية، ويشير رأس السهم إلى الورم الغدي، ويشير السهم الأبيض إلى تسلل العدلات بين الغدد. يمكن رؤية مراحل مختلفة من غدية في كل من الصورية ومجموعات استئصال الزائدة الدودية. يمكن استخدام هذا النموذج الزائدي المورين فعالة من حيث التكلفة للإجابة على بعض الأسئلة الهامة مثل: ما هو دور التذييل في تنظيم بكتيريا الأمعاء وكيف يشارك في الاستجابة المناعية في الأنسجة اللمفاوية المرتبطة الأمعاء.
تذكر، لتجنب الضرر في التصاق الأمعاء، قبل موقع caecum وشق الجلد الصغيرة مهمة. بالإضافة إلى ذلك، استخدمنا 2٪ DSS للحث على التهاب القولون. ولكن يمكن استخدام تركيز أعلى من DSS لسلالات الفئران الأخرى.
