وأيد هذا العمل منح يبرز الأدنى (ني/N016777/1). Ensis المحدودة، الخدمات العلمية البيئية، مركز بحوث تغير البيئة، جامعة لندن عينات ومؤرخة في صلب الرواسب.

الكتاب لا تمت بصلة إلى الكشف عن

سبب الموصلية الحرارية عالية للمياه، هي النظم الإيكولوجية للمياه العذبة أكثر عرضه لفقدان التنوع البيولوجي من النظم الإيكولوجية الأرضية في مواجهة عالمية الاحترار34. ولذلك، من المهم فهم استجابة الأنواع حجر الزاوية في هذه النظم الإيكولوجية وتحديد آليات للتكيف البقاء على قيد الحياة الإجهاد الحراري. فهم هذه الآليات على الصعيدين الأنواع والمجتمع يمكن أن يساعد على التنبؤ بكيف تتأثر الأنواع بالاحترار العالمي وكيف تتالي أثر على الأنواع الفردية إلى المستويات التغذوية الأخرى. وفي نهاية المطاف، فهم آليات التصدي للاحترار العالمي يتيح تحديد استراتيجيات الإصلاح للحد من انقراض.
تظهر دراسات الحالة المعروضة هنا أن رد ماجنا دال على ارتفاع درجة الحرارة هو توسط شوهها اللدونة في سمات تاريخ الحياة وأنه استجابة لارتفاع درجة الحرارة وحدها لا تفرض تكاليف لياقة واضحة، على الأقل في درس السكان هنا. اللدونة العالية في تاريخ الحياة الصفات معتمد من قبل غير اختلافات في القدرات المتنافسة للسكان (الفرعية) في حضور الاحترار. ومع ذلك، قد يلزم التجارب المنافسة الطويلة الأجل على السكان متعددة إلى تعميم هذه النتائج.
قيامه مراحل نائمة يوفر موردا لم يسبق لها مثيل لدراسة آليات التكيف ومسارات التطور هي من الأنواع عن طريق الساعة10. أنواع العوالق الحيوانية الاستفادة من وقت جيل سريع (حوالي 2 أسابيع)، واستمرارية مراحل نائمة، مما يسمح لجد على المنافسة headtohead ضد أحفاد الخاصة به، أو 'إعادة التشغيل' التطور الذي يبدأ من مختلف الدول الماضية. الإيكولوجيا القيامة أساسا يمكن التحقيق في ما إذا كان نتيجة تطورية معينة يتوقف على بعض الأحداث السابقة. من الممكن تحديد العناصر الوراثية لتطور حاليا في التجارب المعملية باستخدام الكائنات الحية الدقيقة التي جمدت وإحياء 'خطوط الأجداد' إجراء تحليل مقارن مع سليل بهم تطورت6. ومع ذلك، أحد القيود الرئيسية للعمل مع الكائنات المختبرية أن 'الدولة الأجداد' أساس تحولت فعلا. دراسة مراحل نائمة يسمح أخذ عينات العينات من وقت سبقت أي حدث الإجهاد (مثلاً، الظروف البيئية البكر) وقياس مسارات تطورية من الظروف البيئية دون عائق إلى مختلف الدول الماضية حتى العصر الحديث. وفي السنوات الأخيرة، قدمت دراسة التعدد الحمض النووي في مراحل العوالق الحيوانية أحياء أو لا تزال نائمة أفكاراً هامة في العمليات الديموغرافية والتكيف الماضية التي ساهمت في التركيب الوراثي ل السكان اليوم14 , 16 , 25 , 33 , 35 , 36-يمكن مع أعلى إمكانية الحصول على تكنولوجيات إنتاجية عالية التسلسل، التسلسل الجينوم والترنسكربيتوم من مراحل أحياء أو لا تزال نائمة ونوع وعدد من التغيرات الوراثية المتراكمة في تطور السكان على مدى قياس الوقت.
القيامة سوب المقدمة هنا قد تطبيقات هامة في ميدان multi-اوميكس على مستويين. يمكن تطبيق تكنولوجيات متعددة-اوميكس إلى أحياء العينات، مما يتيح تحليلاً شاملا للعناصر الجزيئية المشاركة في الاستجابات التكيفية لضغوط بيئية مختارة. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن تطبيق تكنولوجيات اوميكس إلى ديكابسولاتيد لكن مراحل لا تزال نائمة. حتى الآن، اقتصر تطبيق تكنولوجيات إنتاجية عالية التسلسل ليستريح مراحل بشرط كمية كبيرة من المواد المدخلة. وهذه القيود التي يتم رفع37. مع خفض متطلبات المدخلات المادية والتقدم في نانوفلويديكس، تسلسل الجينوم كله (WGS) من الممكن الآن من قدر ضئيل من 1 نانوغرام أو pg قليلة من بدء المواد38. استخدام الجينوم كله التضخيم (WGA) وتقنيات التضخيم (الرغبة) الترنسكربيتوم كله، تمكن في الإثراء للحمض النووي والجيش الملكي النيبالي من كميات صغيرة جداً من الأنسجة، وثورة ميتاجينوميكس39،40 والطبية البحث41. تمكين هذه التكنولوجيات المطبقة على البيض نائمة ديكابسولاتيد تتجاوز القيود المرتبطة بالسلامة لمراحل نائمة والتحقيق لفترات زمنية طويلة (مثلاً، منذ قرون).
القيامة من اللافقاريات المجتمعات المنتجة ليستريح مراحل يمكن المواءمة بين المجتمع وتاريخها مع التغييرات المعروفة في المناظر الطبيعية، أو مع التغيرات البيئية التي يستدل من التحليلات من رسوبيات أورسويلس2. تحليل التغيرات المجتمع استجابة لتغير البيئة ويوفر لنا القدرة على التحديد الكمي للتغذية المرتدة الإيكولوجية التطوري42 التي لها آثار كبيرة على السكان استمرار43، التفاعلات التغذوية44 ، مجتمع الجمعية45، والتغيرات في وظائف وخدمات النظام الإيكولوجي46. وأخيراً، لها أهمية قصوى لتوجيه حماية التنوع البيولوجي47تنبؤات دقيقة حول الاستجابات البيولوجية للتغير البيئي. النماذج التنبؤية الحالية غير دقيقة في هذا الشأن نظراً لأنها لا تأخذ في الاعتبار الآليات البيولوجية الهامة مثل الديموغرافيا وتشتت، وتطور، والتفاعلات بين الأنواع. فهم كيفية تغيير هذه العمليات مع مرور الوقت، واستخدام هذه المعلومات كمسبق في وضع نماذج للتنبؤ سيحسن قدرتنا على التنبؤ بالأنواع واستمرار المجتمع في مواجهة البيئة تغيير2.
تطبيق SOP المعروضة هنا لا يخلو من التحديات. القيد الرئيسي لإحياء المراحل نائمة هو الحاجة إلى معدات متخصصة لأخذ العينات. بالإضافة إلى ذلك، العملية برمتها، من الرواسب النخل إلى إنشاء ثقافات الاستنساخ، يتطلب قدرا كبيرا من الوقت العملي.
بعض الخطوات سوب المعروضة هنا قابلة لسهولة إلى الأنواع الأخرى من براغيث الماء . وهذه: أخذ العينات، وإنشاء خطوط الاستنساخ، والتصميم التجريبي. بيد قد تتطلب خطوات أخرى من SOP مزيدا من التحسين مصممة خصيصا للأنواع الخاضعة للدراسة. غالباً ما يتم تطبيق إلغاء التغليف للعينات ماجنا دال- تحسين نجاح الفقس. بيد أن هذا النهج قد لا تكون مناسبة لعينات أصغر. الفقس المحفزات يمكن أن تختلف أيضا بين الأنواع48 وبين العينة كونسبيسيفيك49. ومن ثم، قد يكون الأمثل المخصصة لخطوات الفقس SOP المطلوبة من قبل التطبيقات الأخرى القشريات. في حين أن نجاح الفقس من السكان دال-ماجنا منبعث من عصابة بحيرة (30.5 في المائة عبر الأرشيف الرسوبية) تمشيا مع النتائج السابقة49، الفقس النجاح يختلف مع الحفاظ على الدولة من الرواسب، الأنواع 50،51، والمنشأ الجغرافي ل الرواسب48. الدراسات المستقبلية على الآليات التي تنظم دخول والتقدم من خلال مراحل ديبوس مطلوب للتعرف على المحفزات الفقس الأمثل لتلائم مختلف الأنواع.
وأخيراً، الخلفية المعرفة بنظام الدراسة، لا سيما أن وجود هذا نوع الاهتمام على مر الزمن، من المستحسن. يمكن تحقيق هذا عن طريق سجلات تاريخية. إذا لم تتوفر سجلات تاريخية، أخذ العينات، وفحص الطبقات السطحية من الرواسب بحيرة قبل أخذ العينات الأساسية من المستحسن، على الرغم من أنها قد توفر معلومات فقط حول تاريخ أحدث.

دراسات طويلة الأجل بالغة الأهمية لفهم العمليات الإيكولوجية والتطورية في الطبيعة وفي تقييم كيفية الاستجابة للأنواع وتستمر خلال التغير البيئي1. وهذا يرجع إلى أن العمليات الإيكولوجية التطورية يحدث عبر الأجيال، وحدوث تغييرات في البيئة على مدى فترات زمنية طويلة. وعلاوة على ذلك، توفر الدراسات الطويلة الأجل الرئيسية البيانات التجريبية التي تعمل على تحسين دقة النمذجة التنبؤية للتنبؤ بالاستجابات التطوري للنظم الإيكولوجية الطبيعية للتغيرات البيئية2. دقة هذه النماذج أمر حاسم لتنفيذ استراتيجيات الإدارة والحفظ للحفاظ على التنوع البيولوجي وخدمات النظام الإيكولوجي.
باستثناء بعض الحالات الاستثنائية (مثلاً، داروين غالاباغوس العصافير3 والطحالب4)، الدراسات الطويلة الأجل تقتصر إلى حد كبير على الأنواع مع مرور الوقت القصير الجيل الذي يمكن نشرة في5،مختبر6 , 7 , 8-ومن ثم فإن العمليات التي تعزز دينامية تطورية لا تزال بعيدة المنال. بسبب الصعوبات اللوجستية المرتبطة بالحصول على العينات الزمنية، يتم دراسة البيانات التجريبية أكثر تواترا في المكانية مما في سياق زمني، والاستدلال على العمليات الإيكولوجية التطورية الزمنية أو على غرار من البيانات المكانية. ويعرف هذا النهج استبدال 'مساحة للوقت'9، الفضاء هو الذي اعتمدت بموجبه كبديل لدراسة ديناميات التطور الزمني. القيد الرئيسي لاستبدال 'مساحة للوقت' أن معدلات التكيف على مستويات مكانية مختلفة تختلف عن التغير الزمني في السكان نفسه؛ ومن ثم فهي استنتاجات تستند إلى الاستعاضة عن الوقت مع مساحة منحازة10.
بديلاً قويا يتيح دراسة ديناميات التطور في النظم الإيكولوجية الطبيعية على مر الزمن هو تحليل التغيرات الإيكولوجية والجينية في الأنواع المنتجة لمراحل نائمة11. هذه المراحل نائمة تتراكم على شكل طبقات المحفوظات البيولوجية التي يمكن أن تكون مؤرخة بدقة وتتميز باليوليمنولوجيكالي،من1213. الأهم من ذلك، يمكن أحياء هذه المراحل نائمة والمستخدمة في التجارب المختبرية، حيث يمكن قياس استجابتها التطوري لتغير البيئة مباشرة. يمكن أن تنافس السكان التاريخية ضد أبنائهم تطورت الحديثة لدراسة التغييرات اللياقة البدنية ووظيفة الجينات التي تتطور في خطوة مع التغير البيئي14،،من1516.
مراحل نائمة وتشمل البذور، والخراجات، والجراثيم، والبيض المصارف. على الرغم من أن الدراسات الأولى في أحياء البيض نائمة يعود تاريخها إلى أواخر الثمانينات17، وعدد قليل من الدراسات قد طبقت هذه التقنية في أوائل التسعينات18،19، ميدان "الإيكولوجيا القيامة" قد تم رسميا أنشأت الورقة المنوي كيرفوت وزملاء العمل في عام 199920. وقد طبقت هذه الممارسة أساسا في إعادة البناء باليوليمنولوجيكال أنواع المياه العذبة17،،من21إلى22. ومع ذلك، سوب غير متوفر حتى الآن. هنا، يرد وصف خطوة بخطوة للبروتوكول القيامة المطبقة على البيض نائمة للأنواع الحيوانية Daphnia magna ، من أخذ عينات الرواسب إلى إنشاء ثقافات الاستنساخ من hatchlings. وتناقش الخطوات SOP بسهولة للتحويل إلى الأنواع الأخرى من براغيث الماء، وكذلك الخطوات التي قد تتطلب التحسين إضافية،.
براغيث الماء زوبلانكتيرس المياه العذبة موجودة في معظم الموائل لوتيك23 . أنواع براغيث الماء أما تلزم بارثينوجينس مخصي أو دورية. دال-ماجنا هو بارثينوجين دورية التي تستنسخ كلونالي تحت ظروف بيئية مواتية24. عندما تتدهور الأوضاع البيئية، يحدث إنتاج الذكور وممارسو الجنسي يؤدي إلى تكوين البويضات المخصبة بالدخول في حالة من السكون يحميها من البيئة قضية كيتين تسمى افيبيوم. نسبة من هذه هاتش البيض نائمة عند عودة الظروف البيئية الملائمة. غير أن نسبة كبيرة من المصرف البيض نائمة ابدأ لديه فرصة هاتش وهكذا بناء المحفوظات البيولوجية على مر الزمن. مراحل نائمة ما زالت مدفونة في الرواسب من البحيرات والبرك ويمكن إحياؤه لدراسة ديناميات التطور على مدى فترات زمنية طويلة. لأن البيض نائمة دال-ماجنا ناتجة عن جزئ الجنسي، فتمثيل جيد للتنوع الوراثي الطبيعي ل الأنواع25. وعلاوة على ذلك، يمكن الاحتفاظ بأنها عن طريق الاستنساخ الاستنساخ في المختبر. هذه الخصائص توفر ميزة فريدة من نوعها من طراز اسوي الكائنات الحية، مع الحفاظ على التنوع الوراثي الطبيعي.
يتم عرض دراستين الرئيسية لإثبات مزايا مقارنة مباشرة أحفاد التاريخية والحديثة من سكان نفس ماجنا دال- تعاني من ضغوط بيئية مختارة على مر الزمن. دال-ماجنا العينات قد انبعث من بحيرة الدائري (الدانمرك)، ضحلة (عمق 5 أمتار؛ والسطح 22 هكتار) الأحواض المختلطة التي شهدت زيادة في حدوث متوسط درجة الحرارة وموجات الحرارة مع مرور الوقت. السكان ماجنا دال (الفرعية) يبعث على طول هذا التدرج الزمني يمتد 60 عاماً (1960-2005) ودراسة للتحقيق في تطورية واستجابة لاحترار درجات الحرارة. في الدراسة الأولى في تجربة حديقة مشتركة، وتم قياس التغيرات في الصفات المرتبطة باللياقة البدنية تاريخ الحياة استجابة لزيادة في درجة الحرارة + 6 درجة مئوية، وفقا لتوقعات "الفريق الحكومي الدولي" بشأن "تغير المناخ" للسنوات ال 100 المقبلة 26-واستخدمت في الدراسة الثانية، وتجربة ميسوكوسم لقياس قدرات تنافسية من الثلاثة السكان (الفرعية) بموجب الاحترار. تظهر هذه التجارب مجتمعة أن جميع الصفات تاريخ الحياة والسكان في حضور من الاحترار كالضغط فقط، تظهر مستوى عاليا من اللدونة ولديهم قدرات تنافسية متكافئة. وتوحي هذه النتائج أن الاحترار بالتأكيد واحدة لا تفرض تكاليف كبيرة من اللياقة البدنية، وعلى الأقل في السكان دراستها هنا.

<table><tbody><tr><td>sampling bags</td><td>Fisher Scientific</td><td>11542783</td><td>Sampling bag revolve round wires closure system and safety tabs sterile polyethylene with writing area clear 89&amp;micro;m thickness 140mm x 229mm, 720mL Fisherbrand</td></tr><tr><td>piston corer</td><td>ENSIS ltd</td><td>na</td><td>Long, heavy tube plunged into the sea, lake, pond floor to extract samples of mud sediment. Piston corers have a viariable diameter and are generally in PVC</td></tr><tr><td>precision scale</td><td>Veritas-M124A</td><td>TLP-50</td><td>Analytical Balance</td></tr><tr><td>geological sieve</td><td>UKGE limited</td><td>SV7521</td><td>200 mm diameter geological sieve - 1 mm mesh</td></tr><tr><td>geological sieve</td><td>UKGE limited</td><td>SV7525</td><td>200 mm diameter geological sieve - 0.125 mm mesh</td></tr><tr><td>white sampling tray</td><td>nhbs</td><td>http://www.nhbs.com/title/view/159614?ad_id=1509</td><td>Standard mulipurpose lab trays</td></tr><tr><td>pasteur pipette</td><td>Globe Scientific inc.</td><td>138020B</td><td>Transfer Pipet, 1.7mL, General Purpose, 87mm, Bulb Draw - 0.9mL</td></tr><tr><td>stereo microscope</td><td>nikon</td><td>smz800</td><td>Microscope with magnification range 1x -8x linked to a camera control unit</td></tr><tr><td>petri dish</td><td>EduLab</td><td>153-533</td><td>Sterile 90mm diameter plastic petri dish</td></tr><tr><td>glass jars</td><td>compak</td><td>Round Jam Jars 4oz</td><td>100 mL jars</td></tr><tr><td>glass jars</td><td>compak</td><td>Atum Jars/ Bonta Jar 10oz</td><td>200 mL jars</td></tr><tr><td>glass jars</td><td>bottlecompanysouth</td><td>500ml Food Jam Jar With Twist Off Lid</td><td>500 mL jars</td></tr><tr><td>statistical software R</td><td>https://cran.r-project.org/</td><td>na</td><td>Free online GNU&amp;nbsp; language and environment for statistical computing and graphics</td></tr><tr><td>microdissection forceps</td><td>Fisher Scientific</td><td>41122405</td><td>Fine point stainless steel forceps for microdissections</td></tr><tr><td>image software</td><td>https://imagej.nih.gov/ij/index.html</td><td>na</td><td>Open source ImageJ image processing toolkit written in Java</td></tr><tr><td>mesocosm</td><td>amazon</td><td>na</td><td>Nobby Fauna-Box III, 41 x 23 x 29 cm, 20.0 Liter</td></tr><tr><td>mirocentrifuge tubes</td><td>Sigma_Aldrick - Merck</td><td>Z606340</td><td>premium microcentrifuge tubes 1.5 mL</td></tr><tr><td>AGENCOURT DNAdvance</td><td>Beckman Coulter</td><td>A48705</td><td>DNA extraction kit</td></tr><tr><td>size standard</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4322682</td><td>LIZ500 - Size standard compatible with ABI sequencers</td></tr><tr><td>ABI3032 sequencer</td><td>ABI</td><td>na</td><td>Sequencer used to perform fragment analysis or sanger sequencing</td></tr></tbody></table>

resurrection of dormant daphnia magna: protocol and applications

دراسات طويلة الأجل تتيح تحديد العمليات الإيكولوجية التطورية التي تحدث على مدى فترات زمنية طويلة. وبالإضافة إلى ذلك، أنها توفر البيانات التجريبية الرئيسية التي يمكن استخدامها في وضع النماذج التنبؤية للتنبؤ بالاستجابات التطوري للنظم الإيكولوجية الطبيعية للتغييرات البيئية في المستقبل. ومع ذلك، فيما عدا حالات استثنائية قليلة، دراسات طويلة الأجل نادرة بسبب الصعوبات اللوجستية المرتبطة بالحصول على العينات الزمنية. يتم دراسة ديناميات الزمانية كثيرا في المختبر أو في التجارب ميسوكوسم التي تسيطر عليها مع دراسات استثنائية أن إعمار تطور السكان الطبيعي في البرية.
هنا، يتم توفيرها إجراءات التشغيل القياسية (SOP) أحياء أو أحياء نائمة Daphnia magna، أنواع الحيوانية على نطاق واسع حجر الزاوية في النظم الإيكولوجية المائية، للنهوض بشكل كبير جمع بيانات طولية الدولة للفنون في النظم الطبيعية. وعرف مجال "الإيكولوجيا القيامة" في 1999 كيرفوت وزملاء العمل، على الرغم من محاولات الأولى في تفريخ ديابوسينج العوالق الحيوانية البيض التاريخ إلى الوراء إلى أواخر الثمانينات. منذ ورقة في كيرفوت المنوي، المنهجية لإحياء الأنواع الحيوانية متزايد في كثير من الأحيان طبق، على الرغم من نشر بين المختبرات فقط عن طريق نقل المعرفة المباشرة. هنا، يرد سوب يوفر بروتوكول خطوة بخطوة عن الممارسة المتمثلة في أحياء نائمة Daphnia magna البيض.
دراستان الرئيسية شريطة يقاس في الذي يبعث رد اللياقة البدنية Daphnia magna السكان إلى الاحترار، الاستفادة من القدرة على دراسة السكان التاريخية والحديثة في نفس الإعدادات. وأخيراً، يناقش تطبيق لتقنيات الجيل التالي تسلسل مراحل أحياء أو لا تزال نائمة. هذه التكنولوجيات توفر قوة لم يسبق لها مثيل في تشريح العمليات والآليات للتطور إذا ما طبق على السكان، التي شهدت تغييرات في التحديد الضغط على مر الزمن.

بيانات تجريبية طويلة الأجل بالغة الأهمية لفهم ديناميات التطور واستمرار السكان الطبيعية. وتعد هذه البيانات الصعبة عموما للحصول على بسبب الصعوبات اللوجستية المرتبطة بالحصول على العينات الزمنية وشرط الالتزام الطويل الأجل لجمع البيانات. في دراستين الرئيسية المعروضة هنا، تقدم أدلة تجريبية لاستجابة لدرجة الحرارة من زوبلانكتير المركزية في النظم الإيكولوجية للمياه العذبة أكثر الأوقات التطوري. يتم تمكين هذا عن طريق استخدام المصارف البيض نائمة الطبقات التي توفر الفرصة لدراسة استجابة السكان التاريخية وذريتهم الحديثة للإجهاد البيئي في إعدادات التجريبية المشتركة.
تجربة حديقة مشتركة أظهرت التجربة حديقة مشتركة أن كل تاريخ الحياة الصفات رد على درجة الحرارة (الشكل 6 و رقم 7). وكشف تحليل ANOVA أن جميع السكان (الفرعية) تستجيب للحرارة عن طريق اللدونة (الجدول 2)، باستثناء معدل الوفيات، ولا يستجيب. أدلة التغيرات التطورية (الاختلافات بين السكان (الفرعية)) لوحظ فقط في معدل نمو السكان (الجدول 2)، التي زادت كثيرا في اثنين من الثلاثة السكان (الفرعية) في 24 درجة مئوية (الشكل 6).
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56637/56637fig6.jpg"> رقم 6: تجربة حديقة مشتركة. وترد معايير رد فعل لسمات الحياة التاريخ (الخصوبة وحجم وسن النضج) ومعدل النمو السكاني (r) لكل السكان (الفرعية) تحت درجة حرارة الاحترار (24 درجة مئوية) بالمقارنة مع حديقة مشتركة ونظام درجة الحرارة الحالية (18 درجة مئوية). معدل النمو السكاني 'r' يحسب باستخدام المعادلة (1) عالم رياضيات ألماني. تظهر فواصل الثقة. السكان (الفرعية) التي تم تلوينها: الأزرق (ط): 1960-1970؛ (ثانيا) الأخضر: 1970 – 1985؛ (ثالثا) الأحمر: > عام 1999. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56637/56637fig6large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56637/56637fig7.jpg"> رقم 7: وفيات. معدلات الوفيات لكل السكان (الفرعية) (1960-1970؛ 1970-1985؛ > عام 1999) وترد تحت الاحترار (24 درجة مئوية) بالمقارنة مع النظم الحديثة درجة الحرارة (18 درجة مئوية). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56637/56637fig7large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
تجربة ميسوكوسم بعد أربعة أسابيع تحديد، يمثله الاحترار في 24 درجة مئوية، وتواتر الثلاثة السكان (الفرعية) ولم تتغير كثيرا (χ2 = 0.55, P = 0.76) مقارنة بالعدوى الأولية (الشكل 8). بين الأنماط الجينية 30 التي طعمت في التجربة ميسوكوسم، حددت الأغلبية بعد أربعة أسابيع تحديد (الشكل 9). على وجه التحديد، كانت 70% من الأنماط الجينية الملقحين المستردة، متوافقة مع توقع بويسونيان لاسترداد ممثل واحد على الأقل من كل الوراثي في عينة من 32 فردا.
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56637/56637fig8.jpg"> الشكل 8: تجربة المنافسة-وتيرة السكان. متوسط السكان في المتوسط و quartiles (25th و 75th)، ويرد للثلاثة السكان (الفرعية) ماجنا دال- بعد أربعة أسابيع تحديد في التجارب المنافسة ميسوكوسم (24 درجة مئوية)، بالمقارنة تواتر متساو أولية (في ابدأ). السكان (الفرعية) لوناً مميزاً كما هو موضح في الشكل 6. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56637/56637fig8large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56637/56637fig9.jpg"> الشكل 9: تجربة المنافسة-تردد النمط الوراثي. ترددات الوراثي – متوسط متوسط و quartiles (25th و 75th)، ترد بعد أربعة أسابيع تعرض إلى الاحترار (24 درجة مئوية) بالمقارنة تردد المساواة أولية من الأنماط الجينية (الخط المنقط). أسماء على المحور السيني هي معرف الأنماط الجينية الملقحين، تجميع كل ساكن (الفرعي) (الأزرق، 1960-1970؛ أخضر، 1970-1985؛ الأحمر، > عام 1999). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56637/56637fig9large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>محور</td>
			<td>على</td>
			<td>حجم مجموعة (bp)</td>
			<td colspan="2">كبسولة تفجير (5 '-3')</td>
			<td>التسمية صبغ</td>
			<td>كرر عزر</td>
			<td>الخرائط المواضيعية</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">B008</td>
			<td rowspan="2">HQ234154</td>
			<td rowspan="2">150 – 170</td>
			<td colspan="2">F: تججاتكاكاكجتاكاكا</td>
			<td rowspan="2">مركز فيينا الدولي</td>
			<td rowspan="2">(ح) 9
</td>
			<td rowspan="2">56</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">R: جكتجكتكجاجتككتجااتك</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">B030</td>
			<td rowspan="2">HQ234160</td>
			<td rowspan="2">154-172</td>
			<td colspan="2">F: ككاجكاكاكااجاكجا</td>
			<td rowspan="2">الحيوانات الأليفة</td>
			<td rowspan="2">(GA) 11
</td>
			<td rowspan="2">56</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">R: أككاتتكتكتكككككاكت</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">B045</td>
			<td rowspan="2">HQ234168</td>
			<td rowspan="2">118 – 126</td>
			<td colspan="2">F: جكتكاتكاتكككتكتجكتك</td>
			<td rowspan="2">نيد</td>
			<td rowspan="2">(تيراغرام) 8
</td>
			<td rowspan="2">56</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">R: أتاجتتكاجكاكجكجتكا</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">B050</td>
			<td rowspan="2">HQ234170</td>
			<td rowspan="2">234-248</td>
			<td colspan="2">F: تتكااااتكجكتكككاتك</td>
			<td rowspan="2">6FAM</td>
			<td rowspan="2">(جا) 6
</td>
			<td rowspan="2">56</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">R: تاتجكجتجاتجتتكاج</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">B064</td>
			<td rowspan="2">HQ234172</td>
			<td rowspan="2">135-151</td>
			<td colspan="2">F: كتككتاجكاككجاتككا</td>
			<td rowspan="2">6FAM</td>
			<td rowspan="2">(ح) 8
</td>
			<td rowspan="2">56</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">R: كااكجكجتكجاتااجا</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">B074</td>
			<td rowspan="2">HQ234174</td>
			<td rowspan="2">196-204</td>
			<td colspan="2">F: تكتتكاجكجكاكاتجات</td>
			<td rowspan="2">نيد</td>
			<td rowspan="2">(جيكا) 9
</td>
			<td rowspan="2">56</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">R: تجتجتككتجتكاكتجتكج</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">B096</td>
			<td rowspan="2">HQ234181</td>
			<td rowspan="2">234-240</td>
			<td colspan="2">F: جاتكتجكاجاجتجتا</td>
			<td rowspan="2">مركز فيينا الدولي</td>
			<td rowspan="2">(AC) 15
</td>
			<td rowspan="2">56</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">R: تجاككاكجتكجاجاتت</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">B107</td>
			<td rowspan="2">HQ234184</td>
			<td rowspan="2">250-274</td>
			<td colspan="2">F: جججتجاجكاتكااجاا</td>
			<td rowspan="2">الحيوانات الأليفة</td>
			<td rowspan="2">(ط) 8
</td>
			<td rowspan="2">56</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">R: تجتجاككاجاتاجاجاجاج</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 1: ساتل متعدد. نكبي انضمام عدد (AN)، المعلومات متعدد، تسلسل التمهيدي بكر، بكر حجم مجموعة، فكرة تكرار، صبغة تستخدم لتسمية ترد التمهيدي إلى الأمام، ودرجة حرارة انلينغ (Tm).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="2">موسيقى البوب معدل النمو (r)</td>
			<td>مدافع</td>
			<td>و</td>
			<td>ف</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">تطور (Pop)</td>
			<td>2</td>
			<td>30.309</td>
			<td>< 0.001</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">اللدونة (مؤقت)</td>
			<td>1</td>
			<td>531.546</td>
			<td>< 0.001</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Evol. اللدونة (x البوب Temp)</td>
			<td>2</td>
			<td>65.137</td>
			<td>< 0.001</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">معدل الوفيات</td>
			<td>مدافع</td>
			<td>و</td>
			<td>ف</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">تطور (Pop)</td>
			<td>2</td>
			<td>2.234</td>
			<td>0.1162</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">اللدونة (مؤقت)</td>
			<td>1</td>
			<td>2.679</td>
			<td>0.1071</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Evol. اللدونة (x البوب Temp)</td>
			<td>2</td>
			<td>1.8657</td>
			<td>0، 164</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">الخصوبة</td>
			<td>مدافع</td>
			<td>و</td>
			<td>ف</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">تطور (Pop)</td>
			<td>2</td>
			<td>1.8852</td>
			<td>0.1633</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">اللدونة (مؤقت)</td>
			<td>1</td>
			<td>6.8934</td>
			<td>0.0117</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Evol. اللدونة (x البوب Temp)</td>
			<td>2</td>
			<td>1.6511</td>
			<td>0.203</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">الحجم عند الاستحقاق</td>
			<td>مدافع</td>
			<td>و</td>
			<td>ف</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">تطور (Pop)</td>
			<td>2</td>
			<td>0.211</td>
			<td>0.8106</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">اللدونة (مؤقت)</td>
			<td>1</td>
			<td>11.1361</td>
			<td>0.0017</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Evol. اللدونة (x البوب Temp)</td>
			<td>2</td>
			<td>0.6586</td>
			<td>0.5225</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">العمر عند النضج</td>
			<td>مدافع</td>
			<td>و</td>
			<td>ف</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">تطور (Pop)</td>
			<td>2</td>
			<td>0.7811</td>
			<td>0.4637</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">اللدونة (مؤقت)</td>
			<td>1</td>
			<td>8.0764</td>
			<td>0.0066</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Evol. اللدونة (x البوب Temp)</td>
			<td>2</td>
			<td>0.088</td>
			<td>0.9159</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 2: تحليل التباين (ANOVA). تحليل التباين اختبار ما إذا كانت التغييرات في الصفات تاريخ الحياة ومعدل النمو السكاني لسكان أحياء (الفرعية) تتعرض للاحترار تفسرها التكيف التطوري (السكان)، اللدونة (درجة الحرارة العلاج)، وعلى التفاعل الأجل (تطور اللدونة). كبير فقيم (ف< 0.05) تظهر بخط غامق.
التكميلي فيديو 1: أخذ عينات من الرسوبيات. ويبين استخدام قاطعة "بيغ بن". بيج بن أنبوب أساسية نحو 1.5 متر في الطول مع داخلية أنبوب قطره 14 سم. وهو يتألف من المكبس حبل ورأس قاطعة، التي يتم إرفاق قضبان بمحرك الأنبوب في الرواسب. الماسك أساسية يستخدم لدعم القناة الأساسية التي يتم نشرها من سفينة صغيرة. يدفع المكبس إلى أسفل في الرواسب بضغط الجاذبية. يستخدم إطارا لدعم أنبوب الأساسية أثناء عملية البثق يضطلع جاك زجاجة معدل الذي يدفع المكبس إلى الأعلى باستخدام. كل طبقة الرواسب التي يتم جمعها على سطح مسطح معدني ونقلها إلى أكياس شفافة أخذ العينات للتخزين على المدى الطويل [المظلمة والباردة الشروط (4 درجة مئوية)]. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56637/Supplementary_video1_Sampling.mp4">اضغط هنا لتحميل هذا الملف.</a>
التكميلي فيديو 2: الرواسب النخل. المعدات اللازمة للنخل الرواسب هو مقياس دقة والصواني الأبيض أخذ العينات وثقب سيتا الجيولوجية. يتم الاحتفاظ على الأقل 5 غ من كل طبقة الرواسب، لتحديد العمر إشعاعيا. يتم استخدام ما تبقى الرواسب لعزل افيبيا. هو غربلة الرواسب من خلال ثقب سيتا الجيولوجية اثنين، أحدهما مع 1 ملم وثانية مع 125 ميكرومتر حجم فتحات الشباك، مكدسة فوق بعضها البعض. متوسطة يسكب على غربال مش 1 مم لفصل الطين واللافقاريات الكبيرة، والجسيمات. متوسطة سكب على غربال الثانية مع 125 ميكرون يفصل افيبيا دال-ماجنا والجسيمات الصغيرة. ثم يتم نقل مختبرين للرواسب إلى علبة بيضاء أخذ عينات. دال-ماجنا افيبيا رصدت بالعين المجردة في علبة خلفية بيضاء. وتجمع افيبيا من كل طبقة في أطباق بتري منفصلة. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56637/Supplementary_video2_Sieving_sediment.mp4">اضغط هنا لتحميل هذا الملف.</a>
الفيديو التكميلية 3: إلغاء التغليف. تحت ستيريوميكروسكوبي، فتح باستخدام الملقط ميكروديسيكشن افيبيا ماجنا دال- عن طريق تطبيق الضغط على العمود الفقري للقضية كيتين. دقة يتم إزالة الغشاء الداخلي البيض ويستريح البيض بلطف نقل مع ماصة باستور إلى طبق بتري يحتوي على 10 مل متوسطة. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56637/Supplementary_video3_Decapsulation.mp4">اضغط هنا لتحميل هذا الملف.</a>
الفيديو التكميلية 4: الفقس. بعد التعرض إلى كبيرة طويلة و 20 درجة مئوية، استئناف التنمية الجنين بين ح 48 والأسابيع القليلة الماضية. عند الانتهاء من التنمية، التحرر من شل البيض الأجنة وتسبح بحرية في المتوسط. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56637/Supplementary_video4_Hatching.mp4">اضغط هنا لتحميل هذا الملف.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Resurrection of Dormant Daphnia magna: Protocol and Applications at JoVE.com

Resurrection of Dormant Daphnia magna: Protocol and Applications

دراسات طويلة الأجل ضرورية لفهم عملية التطور والآليات للتكيف. عموما، هذه الدراسات تتطلب التزامات الحياة وقتها للباحثين. هنا، يتم وصف طريقة قوية هائلة السلف جمع البيانات الدولة للفنون لتوليد بيانات طولية في النظم الطبيعية.

"القيامة نائمة" Daphnia magna: البروتوكول والتطبيقات

Long-term studies enable the identification of eco-evolutionary processes that occur over extended time periods. In addition, they provide key empirical ...

resurrection-of-dormant-daphnia-magna-protocol-and-applications

Research

JoVE Journal

Environment

Resurrection of Dormant Daphnia magna: Protocol and Applications

18.2K Views.  University of Birmingham. دراسات طويلة الأجل ضرورية لفهم عملية التطور والآليات للتكيف. عموما، هذه الدراسات تتطلب التزامات الحياة وقتها للباحثين. هنا، يتم وصف طريقة قوية هائلة السلف جمع البيانات الدولة للفنون لتوليد بيانات طولية في النظم الطبيعية.

Video: Resurrection of Dormant Daphnia magna: Protocol and Applications

Use of Chironomidae (Diptera) Surface-Floating Pupal Exuviae as a Rapid Bioassessment Protocol for Water Bodies

Rapid bioassessment protocols using benthic macroinvertebrate assemblages have been successfully used to assess human impacts on water quality. Unfortunately, traditional benthic larval sampling methods, such as the dip-net, can be time-consuming and expensive. An alternative protocol involves collection of Chironomidae surface-floating pupal exuviae (SFPE). Chironomidae is a species-rich family of flies (Diptera) whose immature stages typically occur in aquatic habitats. Adult chironomids emerge from the water, leaving their pupal skins, or exuviae, floating on the water&#8217;s surface. Exuviae often accumulate along banks or behind obstructions by action of the wind or water current, where they can be collected to assess chironomid diversity and richness. Chironomids can be used as important biological indicators, since some species are more tolerant to pollution than others. Therefore, the relative abundance and species composition of collected SFPE reflect changes in water quality. Here, methods associated with field collection, laboratory processing, slide mounting, and identification of chironomid SFPE are described in detail. Advantages of the SFPE method include minimal disturbance at a sampling area, efficient and economical sample collection and laboratory processing, ease of identification, applicability in nearly all aquatic environments, and a potentially more sensitive measure of ecosystem stress. Limitations include the inability to determine larval microhabitat use and inability to identify pupal exuviae to species if they have not been associated with adult males.

Use of Chironomidae Diptera Surface-Floating Pupal Exuviae as a Rapid Bioassessment Protocol for Water Bodies

Rapid bioassessment protocols using benthic macroinvertebrates are often used to monitor and assess water quality. An efficient protocol involves collections of Chironomidae surface-floating pupal exuviae (SFPE). Here, techniques for field collection, laboratory processing, slide mounting, and identification of Chironomidae SFPE are described.

استخدام الوامئات (ذوات الجناحين) العذراء سلخ بمثابة بروتوكول Bioassessment السريع لالمسطحات المائية العائمة السطحية

Rapid bioassessment protocols using benthic macroinvertebrate assemblages have been successfully used to assess human impacts on water quality. ...

A Simple Approach to Manipulate Dissolved Oxygen for Animal Behavior Observations

The ability to manipulate dissolved oxygen (DO) in a laboratory setting has significant application to investigate a number of ecological and organismal behavior questions. The protocol described here provides a simple, reproducible, and controlled method to manipulate DO to study behavioral response in aquatic organisms resulting from hypoxic and anoxic conditions. While performing degasification of water with nitrogen is commonly used in laboratory settings, no explicit method for ecological (aquatic) application exists in the literature, and this protocol is the first to describe a protocol to degasify water to observe organismal response. This technique and protocol were developed for direct application for aquatic macroinvertebrates; however, small fish, amphibians, and other aquatic vertebrates could be easily substituted. It allows for easy manipulation of DO levels ranging from 2 mg/L to 11 mg/L with stability for up to a 5 min animal-observation period. Beyond a 5 min observation period water temperatures began to rise, and at 10 min DO levels became too unstable to maintain. The protocol is scalable to the study organism, reproducible, and reliable, allowing for rapid implementation into introductory teaching labs and high-level research applications. The expected results of this technique should relate dissolved oxygen changes to behavioral responses of organisms.

This article describes a simple and reproducible protocol to manipulate dissolved oxygen conditions in a laboratory setting for animal behavior studies. This protocol may be used in both teaching and research laboratory settings to evaluate organismal response of macroinvertebrates, fishes, or amphibians to changes in dissolved oxygen concentration.

مقاربة بسيطة لالتلاعب الأوكسجين المذاب لملاحظات سلوك الحيوان

The ability to manipulate dissolved oxygen (DO) in a laboratory setting has significant application to investigate a number of ecological and organismal ...

Basic Methods for the Study of Reproductive Ecology of Fish in Aquaria

Captive-rearing observations are valuable for revealing aspects of fish behavior and ecology when continuous field investigations are impossible. Here, a series of basic techniques are described to enable observations of the reproductive behavior of a wild-caught gobiid fish, as a model, kept in an aquarium. The method focuses on three steps: collection, transport, and observations of reproductive ecology of a substrate spawner. Essential aspects of live fish collection and transport are (1) preventing injury to the fish, and (2) careful acclimation to the aquarium. Preventing harm through injuries such as scratches or a sudden change of water pressure is imperative when collecting live fish, as any physical damage is likely to negatively affect the survival and later behavior of the fish. Careful acclimation to aquaria decreases the incidence death and mitigates the shock of transport. Observations during captive rearing include (1) the identification of individual fish and (2) monitoring spawned eggs without negative effects to the fish or eggs, thereby enabling detailed investigation of the study species' reproductive ecology. The subcutaneous injection of a visible implant elastomer (VIE) tag is a precise method for the subsequent identification of individual fish, and it can be used with a wide size range of fish, with minimal influence on their survival and behavior. If the study species is a substrate spawner that deposits adhesive eggs, an artificial nest site constructed from polyvinyl chloride (PVC) pipe with the addition of a removable waterproof sheet will facilitate counting and monitoring the eggs, lessening the investigator's influence on the nest-holding and egg-guarding behavior of the fish. Although this basic method entails techniques that are seldom mentioned in detail in research articles, they are fundamental for undertaking experiments that require the captive rearing of a wild fish.

A series of basic methods to enable the study of the reproductive ecology of fish kept in aquaria are described. These are useful protocols for collecting fish using SCUBA, transporting live fish, and observing the reproductive behavior of wild-caught fish kept in aquaria.

الطرق الأساسية لدراسة الإيكولوجيا الإنجابية للأسماك في أكواريا

Captive-rearing observations are valuable for revealing aspects of fish behavior and ecology when continuous field investigations are impossible. Here, a ...

Behavior

Swimming Induced Paralysis to Assess Dopamine Signaling in Caenorhabditis elegans

The swimming assay described in this protocol is a valid tool to identify proteins regulating the dopaminergic synapses. Similar to mammals, dopamine (DA) controls several functions in C. elegans including learning and motor activity. Conditions that stimulate DA release (e.g., amphetamine (AMPH) treatments) or that prevent DA clearance (e.g., animals lacking the DA transporter (dat-1) which are incapable of reaccumulating DA into the neurons) generate an excess of extracellular DA ultimately resulting in inhibited locomotion. This behavior is particularly evident when animals swim in water. In fact, while wild-type animals continue to swim for an extended period, dat-1 null mutants and wild-type treated with AMPH or inhibitors of the DA transporter sink to the bottom of the well and do not move. This behavior is termed "Swimming Induced Paralysis" (SWIP). Although the SWIP assay is well established, a detailed description of the method is lacking. Here, we describe a step-by-step guide to perform SWIP. To perform the assay, late larval stage-4 animals are placed in a glass spot plate containing control sucrose solution with or without AMPH. Animals are scored for their swimming behavior either manually by visualization under a stereoscope or automatically by recording with a camera mounted on the stereoscope. Videos are then analyzed using a tracking software, which yields a visual representation of thrashing frequency and paralysis in the form of heat maps. Both the manual and automated systems guarantee an easily quantifiable readout of the animals' swimming ability and thus facilitate screening for animals bearing mutations within the dopaminergic system or for auxiliary genes. In addition, SWIP can be used to elucidate the mechanism of action of drugs of abuse such as AMPH.

Swimming Induced Paralysis to Assess Dopamine Signaling in Caenorhabditis elegans

Swimming induced paralysis (SWIP) is a well-established behavioral assay used to study the underlying mechanisms of dopamine signaling in Caenorhabditis elegans (C. elegans). However, a detailed method to perform the assay is lacking. Here, we describe a step-by-step protocol for SWIP.

الشلل الناجم عن السباحة "تقييم إشارات الدوبامين" في ايليجانس كاينورهابديتيس

The swimming assay described in this protocol is a valid tool to identify proteins regulating the dopaminergic synapses. Similar to mammals, dopamine (DA) ...

الحفظ بالتبريد ل PGCs للحفاظ على سلالات ذبابة الفاكهة على المدى الطويل

Primordial Germ Cell Cryopreservation and Revival of Drosophila Strains

Drosophila strains must be maintained by the frequent transfer of adult flies to new vials. This carries a danger of mutational deterioration and phenotypic changes. Development of an alternative method for long-term preservation without such changes is therefore imperative. Despite previous successful attempts, cryopreservation of Drosophila embryos is still not of practical use because of low reproducibility. Here, we describe a protocol for primordial germ cell (PGC) cryopreservation and strain revival via transplantation of cryopreserved PGCs into agametic Drosophila melanogaster (D. melanogaster) host embryos. PGCs are highly permeable to cryoprotective agents (CPAs), and developmental and morphological variation among strains is less problematic than in embryo cryopreservation. In this method, PGCs are collected from approximately 30 donor embryos, loaded into a needle after CPA treatment, and then cryopreserved in liquid nitrogen. To produce donor-derived gametes, the cryopreserved PGCs in a needle are thawed and then deposited into approximately 15&#160;agametic host embryos. A frequency of at least 15% fertile flies was achieved with this protocol, and the number of progeny per fertile couple was always more than enough to revive the original strain (the average progeny number being 77.2 &#177; 7.1), indicating the ability of cryopreserved PGCs to become germline stem cells. The average number of fertile flies per needle was 1.1 &#177; 0.2, and 9 out of 26 needles produced two or more fertile progeny. It was found that 11 needles are enough to produce 6 or more progeny, in which at least one female and one male are likely included. The agametic host makes it possible to revive the strain quickly by simply crossing newly emerged female and male flies. In addition, PGCs have the potential to be used in genetic engineering applications, such as genome editing.

تسليط الضوء على المؤلف: الحفظ بالتبريد PGC - نهج بديل نحو الحفاظ على سلالات ذبابة الفاكهة على المدى الطويل 

A long-term preservation method for Drosophila strains as an alternative to the frequent transfer of adult flies to fresh food vials is highly desirable. This protocol describes the cryopreservation of Drosophila primordial germ cells and strain revival via their transplantation to agametic host embryos.

الحفظ بالتبريد للخلايا الجرثومية البدائية وإحياء سلالات ذبابة الفاكهة

Drosophila strains must be maintained by the frequent transfer of adult flies to new vials. This carries a danger of mutational deterioration and ...

Genetics

Large-Scale Gravitaxis Assay of Caenorhabditis Dauer Larvae

Gravity sensation is an important and relatively understudied process. Sensing gravity enables animals to navigate their surroundings and facilitates movement. Additionally, gravity sensation, which occurs in the mammalian inner ear, is closely related to hearing - thus, understanding this process has implications for auditory and vestibular research. Gravitaxis assays exist for some model organisms, including Drosophila. Single worms have previously been assayed for their orientation preference as they settle in solution. However, a reliable and robust assay for Caenorhabditis gravitaxis has not been described. The present protocol outlines a procedure for performing gravitaxis assays that can be used to test hundreds of Caenorhabditis dauers at a time. This large-scale, long-distance assay allows for detailed data collection, revealing phenotypes that may be missed on a standard plate-based assay. Dauer movement along the vertical axis is compared with horizontal controls to ensure that directional bias is due to gravity. Gravitactic preference can then be compared between strains or experimental conditions. This method can determine molecular, cellular, and environmental requirements for gravitaxis in worms.

Large-Scale Gravitaxis Assay of Caenorhabditis Dauer Larvae

The present protocol outlines methods for conducting a large-scale gravitaxis assay with Caenorhabditis dauer larvae. This protocol allows for better detection of gravitaxis behavior compared with a plate-based assay.

فحص Gravitaxis على نطاق واسع من يرقات Caenorhabditis Dauer

Gravity sensation is an important and relatively understudied process. Sensing gravity enables animals to navigate their surroundings and facilitates ...

Lethality Bioassay Using Artemia salina L.

Natural products have been used since ancient times to produce medicines. Nowadays, there are plenty of chemotherapeutic drugs obtained from natural sources and used against a plethora of diseases. Unfortunately, most of these compounds often display systemic toxicity and adverse effects. In order to better evaluate the tolerability of selected potentially bioactive samples, brine shrimp (Artemia salina) is generally used as a model in lethality studies. The A. salina test is based on the ability of the studied bioactive compounds to kill the microcrustaceans in their larval stage (nauplii). This method represents a convenient starting point for cytotoxicity studies, as well as for the general toxicity screening of synthetic, semisynthetic, and natural products. It can be considered a simple, quick, and low-cost assay, compared to many other assays (in vitro cells or yeast strains, zebrafish, rodents) generally suitable for the aforementioned purposes; moreover, it can be easily performed even without any specific training. Overall, A. salina assay represents a useful tool for the preliminary toxicity evaluation of selected compounds and the bio-guided fractionation of natural product extracts.

Lethality Bioassay Using Artemia salina L.

This work aims to evaluate and review the Artemia salina lethality bioassay procedure, also identified as brine shrimp lethality assay. This simple and cheap method gives information about the general toxicity (considered as a preliminary toxicity evaluation) of samples, namely, natural products.

المقايسة الحيوية الفتاكة باستخدام الأرتيميا سالينا L.

Natural products have been used since ancient times to produce medicines. Nowadays, there are plenty of chemotherapeutic drugs obtained from natural ...

Chemistry

Neural Stem Cell Reactivation in Cultured Drosophila Brain Explants

Neural stem cells (NSCs) have the ability to proliferate, differentiate, undergo apoptosis, and even enter and exit quiescence. Many of these processes are controlled by the complex interplay between NSC intrinsic genetic programs with NSC extrinsic factors, local and systemic. In the genetic model organism, Drosophila melanogaster, NSCs, known as neuroblasts (NBs), switch from quiescence to proliferation during the embryonic to larval transition. During this time, larvae emerge from their eggshells and begin crawling, seeking out dietary nutrients. In response to animal feeding, the fat body, an endocrine organ with lipid storage capacity, produces a signal, which is released systemically into the circulating hemolymph. In response to the fat body-derived signal (FBDS), Drosophila insulin-like peptides (Dilps) are produced and released from brain neurosecretory neurons and glia, leading to downstream activation of PI3-kinase growth signaling in NBs and their glial and tracheal niche. Although this is the current model for how NBs switch from quiescence to proliferation, the nature of the FBDS extrinsic cue remains elusive. To better understand how NB extrinsic systemic cues regulate exit from quiescence, a method was developed to culture early larval brains in vitro before animal feeding. With this method, exogenous factors can be supplied to the culture media and NB exit from quiescence assayed. We found that exogenous insulin is sufficient to reactivate NBs from quiescence in whole-brain explants. Because this method is well-suited for large-scale screens, we aim to identify additional extrinsic cues that regulate NB quiescence versus proliferation decisions. Because the genes and pathways that regulate NSC proliferation decisions are evolutionarily conserved, results from this assay could provide insight into improving regenerative therapies in the clinic.

Neural Stem Cell Reactivation in Cultured Drosophila Brain Explants

A method to reactivate quiescent neural stem cells in cultured Drosophila brain explants has been established. Using this method, the role of systemic signals can be uncoupled from tissue-intrinsic signals in the regulation of neural stem cell quiescence, entry and exit.

إعادة تنشيط الخلايا الجذعية العصبية في ذبابة الفاكهة المستزرعة في الدماغ

Neural stem cells (NSCs) have the ability to proliferate, differentiate, undergo apoptosis, and even enter and exit quiescence. Many of these processes ...

"القيامة نائمة" Daphnia magna: البروتوكول والتطبيقات

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

استخدام الوامئات (ذوات الجناحين) العذراء سلخ بمثابة بروتوكول Bioassessment السريع لالمسطحات المائية العائمة السطحية

مقاربة بسيطة لالتلاعب الأوكسجين المذاب لملاحظات سلوك الحيوان

الطرق الأساسية لدراسة الإيكولوجيا الإنجابية للأسماك في أكواريا

الشلل الناجم عن السباحة "تقييم إشارات الدوبامين" في ايليجانس كاينورهابديتيس

الحفظ بالتبريد للخلايا الجرثومية البدائية وإحياء سلالات ذبابة الفاكهة

الحفظ بالتبريد للخلايا الجرثومية البدائية وإحياء سلالات ذبابة الفاكهة

الحفظ بالتبريد للخلايا الجرثومية البدائية وإحياء سلالات ذبابة الفاكهة

فحص Gravitaxis على نطاق واسع من يرقات Caenorhabditis Dauer

المقايسة الحيوية الفتاكة باستخدام الأرتيميا سالينا L.

إعادة تنشيط الخلايا الجذعية العصبية في ذبابة الفاكهة المستزرعة في الدماغ