وأيد هذا العمل من قبل جامعة باريس السادسة ومنحة بيير فابر الابتكار.

تم تنفيذ كافة الإجراءات وفقا للمعايير الجماعة الأوروبية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية، وبموافقة لجنة الاخلاق المحلية لإجراء التجارب على الحيوانات (إيل دو فرانس-باريس-لجنة والاعتماد 4270). 1. التخدير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضخ جرعة قاتلة من بنتوباربيتال (تصل إلى 1 ملغ / 10 غرام من وزن الجسم) (إبرة 27 عيار وحقنة 1 مل) البريتونى إلى فئران بالغة قبل الجراحة. </li></ol> 2. السفينة الإرواء ملاحظة: ليست هناك حاجة لتطبيق التعليم والتدريب المهني مرهم للعين خلال نضح السفينة. هذا الإجراء السريع (5-10 دقائق) وينتهي في موت الحيوان. تأكيد عدم استجابة مع قليل أخمص قدميه. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مقص القزحية، وجعل شق، حوالي 4 سم، في جدار البطن والصفاق، فقط تحت القفص الصدري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق صغير (بضعة ملليمترات طويلة) في الحجاب الحاجز ومن ثم continuالبريد شق في الحجاب الحاجز على طول القفص الصدري لفضح تجويف الجنبي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع القص بعيدا والمشبك غيض من القص مع مرقئ. وضع مرقئ على الرقبة. تقليم بعناية الأنسجة الدهنية التي تربط عظمة القص إلى القلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اجتياز 15 عيار التروية الإبرة من خلال البطين الأيسر في قمة القلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وأخيرا، استخدام مقص لقطع أحد فصوص الكبد لخلق متنفسا. ملاحظة: يمكن إنشاء منفذ بديل باستخدام مقص القزحية لخلق شق إلى الأذين الأيمن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يروي هذا الحيوان مع 25-50 مل من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) مع مضخة تعمل بمعدل 2.5 مل / دقيقة. يجب أن يتم استبدال الكبد بلانش لأن الدم مع برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد ما يقرب من خمس دقائق، وبمجرد أن السائل من الكبد واضح تماما، ووقف نضح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا تم التخطيط المناعية أو تلطيخ العادية، يروي الحيوان مع 50 مل من امتصاص العرق(منهاج العمل، 4٪ في برنامج تلفزيوني) لمدة 15 دقيقة. ملاحظة: الحذر، والأبخرة PFA سامة. وينبغي أن يتم نضح من الحيوانات مع PFA في غطاء الدخان التهوية. </li></ol> 3. عزل الدماغ ودائرة ويليس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل الدماغ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الرأس مع زوج من مقص جراحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل شق خط الوسط مع مقص القزحية، جنبا إلى جنب الجلد من العنق إلى الأنف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقليم قبالة الجلد لفضح الجمجمة وإزالة أي العضلات المتبقية والأنسجة الدهنية مع مقص القزحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع نهاية حادة من مقص القزحية إلى ماغنوم الثقبة على جانب واحد، وحرك لهم بعناية على طول السطح الداخلي للجمجمة إلى الصماخ السمعي الخارجي (المعروف أيضا باسم قناة الأذن). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنتاج شق صفها في 3.1.4 على الجانب المقابل، وجعل خط الوسط وقطع على طول السطح الداخلي من العظم بين الجداري لبدء الدرز السهمي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> زرع القزحيةمقص في العظم الجبهي، والحق بين العينين، في الدرز السهمي ثم فتحها لتقسيم الجمجمة في البلدين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع من الدماغ، والاستيلاء على بصيلات الشم وباستخدام مقص القزحية لقطع الاتصالات العصبية على سطحه البطني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الدماغ ووضعه في 60 ملم طبق بتري تحتوي على الجليد الباردة برنامج تلفزيوني لعزل البقر. تزج تماما الدماغ في برنامج تلفزيوني. إذا تم إصلاح الدماغ مع PFA 4٪ (لباجتزاء لاحق والمناعية أو تلطيخ العادية)، ويبقيه في حمام من 4٪ PFA في 4 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل دائرة ويليس ملاحظة: مطلوب مجهر تشريح لعزل البقر. يجب أن تبقى في الدماغ في 4 درجات مئوية في جميع أنحاء الإجراء بأكمله. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الدماغ رأسا على عقب (أي على السطح الظهري لل) لتصور البقرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط صغير للاستيلاء على الشرايين الدماغية الأمامية (ACA) في قاعدة الفص الشمي ( <strأونج&gt; لذلك، الشكل 1) وممارسة الضغط على فصلها من التواصل السفينة. استخدام نفس الإجراء لقطع الشرايين المتوسطة الدماغية (MCA) في ب (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام نهايات حادة من ملقط لرفع وإزالة الشرايين الكبرى التي تكون بقرة من القشرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ارفع بداية الخلفي التواصل الشرايين (PCA) لفصلهم من الدماغ، التي تجتاح الشرايين الدماغية المتوسطة (MCA) مع ملقط. التقاط الشرايين الأمامية (ACA وMCA) وسحبها بلطف على chiasm البصرية في الاتجاه الأمامي الظهري. لمنع الفوضى من البقر، يقطع الإجراء للتعامل مع الشرايين الأخرى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات من 3.2.2 و 3.2.3 للشرايين المخيخيتين والخلفية (SCA) / (PCA) (ج، الشكل 1) والشريان القاعدي (BA) (د، الشكل 1)، وسحب منهم في dorsal- الاتجاه الأمامي. وقف في نهاية الإجراء الموضح طن 3.2.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة البقر كامل عن طريق سحب بلطف مع ملقط. ضع بقرة في 60 ملم طبق بيتري مليئة الجليد الباردة برنامج تلفزيوني وإزالة أي أنسجة المخ تعلق المتبقية مع اثنين من ملقط، وعقد بقرة في مكان مع دبابيس صغيرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على بقرة تحصد في -80 درجة مئوية لمعالجتها لاحقا لتنقية الحمض النووي الريبي (عوائد استخراج الحمض النووي الريبي كميات كبيرة من الحمض النووي الريبي - ما يقرب من 500 نانوغرام) أو استخراج البروتين. ملاحظة: لا يمكن الحفاظ عليه البقرة خارج الحي لمدة 24 ساعة، من خلال تكييف نظام حمام الجهاز المتقدمة للماوس معزولة الشريان حاسة الشم 7. </li></ol></li></ol><img alt="شكل 1" src="/files/ftp_upload/54352/54352fig1.jpg" /> الشكل 1: رسم تخطيطي لعرض بطني من مخ الفأر تسليط الضوء على بقرة يتم تشكيل البقر اثنين من الشرايين السباتية الداخلية (MCA)، والتي هي مستمدة من اثنين من الشرايين الدماغية الأمامية (ACA)؛ وقاعديالشريان (BA) فروع في الخلفية (PCA) ومتفوقة (SCA) الشرايين الدماغية، واثنين من الشرايين الفقرية (VA).

<ol>
	<li>Beckmann, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-dependent+cerebrovascular+abnormalities+and+blood+flow+disturbances+in+APP23+mice+modeling+Alzheimer's+disease.">Age-dependent cerebrovascular abnormalities and blood flow disturbances in APP23 mice modeling Alzheimer's disease.</a> J Neurosci. 23 (24), 8453-8459 (2003).</li><li>Sadasivan, C., Fiorella, D. J., Woo, H. H., Lieber, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+factors+effecting+cerebral+aneurysm+pathophysiology.">Physical factors effecting cerebral aneurysm pathophysiology.</a> Ann Biomed Eng. 41 (7), 1347-1365 (2013).</li><li>Ritz, K., Denswil, N., Stam, O., van Lieshout, J., Daemen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cause+and+mechanisms+of+intracranial+atherosclerosis.">Cause and mechanisms of intracranial atherosclerosis.</a> Circulation. 130 (16), 1407-1414 (2014).</li><li>Tulamo, R., Fr&#246;sen, J., Hernesniemi, J., Niemel&#228;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+changes+in+the+aneurysm+wall:+a+review.">Inflammatory changes in the aneurysm wall: a review.</a> J Neurointerv Surg. 2 (2), 120-130 (2009).</li><li>Yamada, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+amyloid+angiopathy:+emerging+concepts.">Cerebral amyloid angiopathy: emerging concepts.</a> J Stroke. 17 (1), 17-30 (2015).</li><li>Oy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+atherosclerotic+stroke:+specific+focus+on+the+metabolic+syndrome+and+inflammation.">Intracranial atherosclerotic stroke: specific focus on the metabolic syndrome and inflammation.</a> Curr Atheroscler Rep. 8 (4), 330-336 (2006).</li><li>Lee, H. J., Dietrich, H. H., Han, B. H., Zipfel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+ex+vivo+model+for+the+study+of+cerebrovascular+function+utilizing+isolated+mouse+olfactory+artery.">Development of an ex vivo model for the study of cerebrovascular function utilizing isolated mouse olfactory artery.</a> J Korean Neurosurg Soc. 57 (1), 1-5 (2015).</li><li>Hosaka, K., Downes, D. P., Nowicki, K. W., Hoh, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+murine+intracranial+aneurysm+model:+aneurysm+formation+and+rupture+by+elastase+and+hypertension.">Modified murine intracranial aneurysm model: aneurysm formation and rupture by elastase and hypertension.</a> J Neurointerv Surg. 6 (6), 474-479 (2013).</li><li>Gauthier, S. A., Sahoo, S., Jung, S. S., Levy, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+cerebrovascular+cells+as+a+cell+culture+model+for+cerebral+amyloid+angiopathy:+isolation+of+smooth+muscle+and+endothelial+cells+from+mouse+brain.">Murine cerebrovascular cells as a cell culture model for cerebral amyloid angiopathy: isolation of smooth muscle and endothelial cells from mouse brain.</a> Methods Mol Biol. 849, 261-274 (2012).</li><li>Choi, S., Kim, J., Kim, K., Suh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+in+vitro+culture+of+vascular+endothelial+cells+from+mice.">Isolation and in vitro culture of vascular endothelial cells from mice.</a> Korean J Physiol Pharmacol. 19 (1), 35-42 (2015).</li><li>Peters, D. G., Kassam, A. B., Yonas, H., O'Hare, E. H., Ferrell, R. E., Brufsky, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+transcript+analysis+in+small+quantitiesof+mRNA+by+SAGE-Lite.">Comprehensive transcript analysis in small quantitiesof mRNA by SAGE-Lite.</a> Nucleic Acids Res. 27 (24), (1999).</li><li>Badhwar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stanimirovic,+Hamel,+&amp;+Haqqani+The+proteome+of+mouse+cerebral+arteries.">Stanimirovic, Hamel, &amp; Haqqani The proteome of mouse cerebral arteries.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 34 (6), 1033-1046 (2014).</li><li>Castro, L., Brito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Striatal+neurones+have+a+specific+ability+to+respond+to+phasic+dopamine+release.">Striatal neurones have a specific ability to respond to phasic dopamine release.</a> J Physiol. 591 (13), 3197-3214 (2013).</li><li>H&#252;bscher, D., Nikolaev, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+transgenic+mice+expressing+FRET+biosensors.">Generation of transgenic mice expressing FRET biosensors.</a> Methods Mol Biol. 1294, 117-129 (2015).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

نحن هنا وصف بروتوكول استنساخه لعزل دائرة ويليس. الاضطرابات الدماغية الأكثر شيوعا التي تنطوي على بقرة هي vasculopathies المصاحب الجهاز المركزي للمحاسبات، وتصلب الشرايين داخل الجمجمة وتمدد الأوعية الدموية داخل الجمجمة، والتي تؤثر على جدران الأوعية الشريانية. عوامل الخطر م...

دائرة الدماغية الشريانية (الدائرة الشريانية الدماغية)، المعروف أيضا باسم دائرة ويليس (البقرة)، حلقة من Willisor ويليس المضلع) وصفت لأول مرة من قبل توماس ويليس في 1664. وهو مفاغرة الدورة الدموية الموجودة في جميع أنحاء التصالبة البصرية وتحت المهاد التي يمكن أن تعتبر محورا مركزيا توريد الدم إلى الدماغ والهياكل المحيطة بها. يدخل الدم هذا الهيكل عن طريق الشريان السباتي الداخلي والشرايين الفقرية ويتدفق من دائرة عن طريق الوسط الداخلي والشرايين المخية الخلفية. وقد تركت كل من هذه الشرايين والحق الفروع على جانبي الدائرة. وقاعدي، وظيفة التواصل، والتواصل الشرايين كاملة دائرة الأمامي (الشكل 1 والشكل 2). تم تصغير خطر تدفق الدم وضعف في أي من الشرايين تدفق من دمج الدم دخول دائرة من الشريان السباتي والشرايين الدماغية، مما يضمن أن يتم توفير كمية كافية من الدم إلى بالمطر. ويقدم هيكل أيضا الطريق الرئيسي لتدفق ضمانات الدم في أمراض انسداد حاد في الشريان السباتي الداخلي. عدة أنواع من الاضطرابات الدماغية لديهم أصلهم في البقرة. الأكثر شيوعا هي الدماغي اعتلال وعائي اميلويد (CAA) vasculopathies -associated وتصلب الشرايين داخل الجمجمة وتمدد الأوعية الدموية داخل الجمجمة. 1، 2، 3 وهذه الاضطرابات قد يؤدي إلى نقص انسياب الدم بسبب توسع الأوعية، وداخل المخ و / أو تحت العنكبوتية نزيف ترجمة في نهاية المطاف إلى السكتات الدماغية الإقفارية أو النزفية أو ، في أحسن الأحوال، نوبة نقص تروية عابرة. جعلت التطورات الحديثة في إجراءات التشخيص، بما في ذلك تصوير الأعصاب، وربما جنبا إلى جنب مع القسطرة، من الممكن تشخيص هذه الأمراض الدماغية الكبرى سريريا، دون الحاجة لخزعة الدماغ. ومع ذلك، علاجات فعالة ومحددة (الدوائية أو اللف) تفتقر حاليا، وبالتالي هناك حاجة لتعريف جديدأهداف جزيئية. وتحديد الأهداف عقار جديد للوقاية من هذه الأمراض في البشر تتطلب النماذج الحيوانية وسبل عزل الدماغية، الأوعية الدموية بما في ذلك بقرة. وينبغي لهذه النماذج أن يقدم دليلا على والقرائن إلى تغييرات محددة، بما في ذلك التغيرات الالتهابية، والتي تحدث في جدران الأوعية الكبيرة في النماذج الحيوانية من تمدد الأوعية الدموية في الشريان داخل الجمجمة، الجهاز المركزي للمحاسبات أو تصلب الشرايين داخل الجمجمة. 4، 5، 6 قمنا بتأسيس طريقة لعزل الماوس بقرة لتسهيل الدراسات من التهاب الأوعية في مرض الزهايمر (AD) والأمراض ذات الصلة، مثل الجهاز المركزي للمحاسبات. وقد تم تطوير هذه الطريقة لعزل البقرة الماوس لتقييم التعبير الجيني الدماغية التهابات أثناء تطور المرض. جنبا إلى جنب مع الكشف عن ترسب اميلويد بيتا داخل جدران السحايا الرقيقة وحنوني الشرايين، يمكن لهذا الأسلوب يجعل من الاسهل لردعمنجم العلاقة المحتملة بين التعبير الجيني التهاب في جدار الأوعية الدموية الدماغية، وتراكم Aβ الببتيد. شبكة الأوعية الدموية في الدماغ، بما في ذلك السحايا الرقيقة وحنوني في الفضاء تحت العنكبوتية، هو امتداد للشرايين الكبيرة تشكيل دائرة ويليس. ويمكن استخدام الأسلوب هو موضح هنا لعزل بقرة من أي سلالة الماوس ويمكن استخدامها لجميع أنواع الفرز (على سبيل المثال، التعبير الجيني، وإنتاج البروتين والتعديلات البروتين posttranslational) على السفن الكبيرة من الفأرة الدماغية، الأوعية الدموية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="692">
	<tbody>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:173px;">Dulbecco&#8217;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:173px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:173px;">D8537</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:173px;">Dumont #55 Forceps</td>
			<td style="width:173px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:173px;">11295-51</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:173px;">Hardened Fine Iris Scissors&#160;</td>
			<td style="width:173px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:173px;">14090-11</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:173px;">Scissors - Straight / Sharp / Sharp&#160;&#160; 16.5 cm</td>
			<td style="width:173px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:173px;">14002-16</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:173px;">Dumont #7b Forceps&#160;</td>
			<td style="width:173px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:173px;">11270-20</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:173px;">Stereoscopic Zoom Microscope</td>
			<td style="width:173px;">Nikon</td>
			<td style="width:173px;">SMZ745T</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:173px;">CellBIND Surface 60mm Culture Dish</td>
			<td style="width:173px;">Corning</td>
			<td style="width:173px;">#3295</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:173px;">Peristaltic Pump - MINIPULS 3</td>
			<td style="width:173px;">Gilson</td>
			<td style="width:173px;">M312</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:173px;">Pentobarbital Sodique</td>
			<td style="width:173px;">Ceva Sant&#233; Animale</td>
			<td style="width:173px;">FR/V/2770465 3/1992</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocol for isolating the mouse circle of willis

دائرة الدماغية الشريانية (الدائرة الشريانية الدماغية) أو دائرة ويليس (البقرة) هي مفاغرة الدورة الدموية المحيطة التصالبة البصرية وتحت المهاد التي تزود الدم إلى الدماغ والهياكل المحيطة بها. وقد تورط في العديد من الاضطرابات الدماغية، بما في ذلك اعتلال وعائي دماغي اميلويد (CAA) vasculopathies -associated وتصلب الشرايين داخل الجمجمة وتمدد الأوعية الدموية داخل الجمجمة. تتطلب دراسات الآليات الجزيئية الكامنة وراء هذه الأمراض لتحديد أهداف عقار جديد للوقاية من النماذج الحيوانية. قد يكون بعض من هذه النماذج المعدلة وراثيا، في حين أن آخرين سوف تشمل عزل الدماغية، الأوعية الدموية، بما في ذلك طريقة CoW.The الموصوفة هنا هي مناسبة لعزل بقرة في أي سلالة الماوس ولديه إمكانات كبيرة لفحص (التعبير عن الجينات، وإنتاج البروتين، التعديلات البروتين posttranslational، تحليل secretome، الخ) دراسات على السفن الكبيرة من cerebro- الماوسالأوعية الدموية. ويمكن أن تستخدم أيضا لدراسات المجراة سابقا، من خلال تكييف نظام حمام الجهاز وضعت للمعزولة الشرايين الماوس حاسة الشم.

<html> قتل الماوس perfused برنامج تلفزيوني ويتم عزل البقر كما هو موضح في الفقرة 3.2 من البروتوكول. عند إجراء تشريح بشكل صحيح، يجب أن البقرة يخرج في قطعة واحدة، وينبغي أن تكون شفافة بعض الشيء نظرا لعدم وجود الدم المتبقي في الأوعية الدموية. <p class="jove_content" fo:keep-t...

Watch this Scientific Journal Video about Protocol for Isolating the Mouse Circle of Willis at JoVE.com

Protocol for Isolating the Mouse Circle of Willis

We describe here a reproducible protocol for isolating the mouse circle of Willis.

بروتوكول لعزل الدائرة ماوس ويليس

The cerebral arterial circle (circulus arteriosus cerebri) or circle of Willis (CoW) is a circulatory anastomosis surrounding the optic chiasma and ...

protocol-for-isolating-the-mouse-circle-of-willis

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Neuroscience

13.0K Views.  Sorbonne Universités. We describe here a reproducible protocol for isolating the mouse circle of Willis.

Video: Protocol for Isolating the Mouse Circle of Willis

The NeuroStar TMS Device: Conducting the FDA Approved Protocol for Treatment of Depression

The Neuronetics NeuroStar Transcranial Magnetic Stimulation (TMS) System is a class II medical device that produces brief duration, pulsed magnetic fields. These rapidly alternating fields induce electrical currents within localized, targeted regions of the cortex which are associated with various physiological and functional brain changes.1,2,3
In 2007, O'Reardon et al., utilizing the NeuroStar device, published the results of an industry-sponsored, multisite, randomized, sham-stimulation controlled clinical trial in which 301 patients with major depression, who had previously failed to respond to at least one adequate antidepressant treatment trial, underwent either active or sham TMS over the left dorsolateral prefrontal cortex (DLPFC). The patients, who were medication-free at the time of the study, received TMS five times per week over 4-6 weeks.4
The results demonstrated that a sub-population of patients (those who were relatively less resistant to medication, having failed not more than two good pharmacologic trials) showed a statistically significant improvement on the Montgomery-Asberg Depression Scale (MADRS), the Hamilton Depression Rating Scale (HAMD), and various other outcome measures. In October 2008, supported by these and other similar results5,6,7, Neuronetics obtained the first and only Food and Drug Administration (FDA) approval for the clinical treatment of a specific form of medication-refractory depression using a TMS Therapy device (FDA approval K061053).
In this paper, we will explore the specified FDA approved NeuroStar depression treatment protocol (to be administered only under prescription and by a licensed medical profession in either an in- or outpatient setting).

In this article, we examine the methodology and considerations relevant to the FDA approved depression treatment protocol using the Neuronetics NeuroStar TMS device.

وافق إجراء بروتوكول ادارة الاغذية والعقاقير لعلاج الاكتئاب : جهاز TMS NeuroStar

The Neuronetics NeuroStar Transcranial Magnetic Stimulation (TMS) System is a class II medical device that produces brief duration, pulsed magnetic ...

Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and evaluating mouse models of human disease. MRI is an excellent modality for investigating genetically altered animals. It is capable of whole brain coverage, can be used in vivo, and provides multiple contrast mechanisms for investigating different aspects of neuranatomy and physiology. The advent of high-field scanners along with the ability to scan multiple mice simultaneously allows for rapid phenotyping of novel mutations.
Effective mouse MRI studies require attention to many aspects of experiment design. In this article, we will describe general methods to acquire quality images for mouse phenotyping using a system that images mice concurrently in shielded transmit/receive radio frequency (RF) coils in a common magnet (Bock et al., 2003). We focus particularly on anatomical phenotyping, an important and accessible application that has shown a high potential for impact in many mouse models at our imaging centre. Before we can provide the detailed steps to acquire such images, there are important practical considerations for both in vivo brain imaging (Dazai et al., 2004) and ex vivo brain imaging (Spring et al., 2007) that should be noted. These are discussed below.

Magnetic resonance imaging (MRI) has become an increasingly popular tool for examining the phenotype of genetically altered mice. This article illustrates the methods necessary to achieve high-throughput phenotyping of genetically altered mice using multiple-mouse MRI.

متعددة الماوس تشريحي عصبي التصوير بالرنين المغناطيسي

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and ...

Isolating Nasal Olfactory Stem Cells from Rodents or Humans

The olfactory mucosa, located in the nasal cavity, is in charge of detecting odours. It is also the only nervous tissue that is exposed to the external environment and easily accessible in every living individual. As a result, this tissue is unique for anyone aiming to identify molecular anomalies in the pathological brain or isolate adult stem cells for cell therapy. 
Molecular abnormalities in brain diseases are often studied using nervous tissue samples collected post-mortem. However, this material has numerous limitations. In contrast, the olfactory mucosa is readily accessible and can be biopsied safely without any loss of sense of smell1. Accordingly, the olfactory mucosa provides an "open window" in the adult human through which one can study developmental (e.g. autism, schizophrenia)2-4 or neurodegenerative (e.g. Parkinson, Alzheimer) diseases4,5. Olfactory mucosa can be used for either comparative molecular studies4,6 or in vitro experiments on neurogenesis3,7.
The olfactory epithelium is also a nervous tissue that produces new neurons every day to replace those that are damaged by pollution, bacterial of viral infections. This permanent neurogenesis is sustained by progenitors but also stem cells residing within both compartments of the mucosa, namely the neuroepithelium and the underlying lamina propria8-10. We recently developed a method to purify the adult stem cells located in the lamina propria and, after having demonstrated that they are closely related to bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC), we named them olfactory ecto-mesenchymal stem cells (OE-MSC)11.
Interestingly, when compared to BM-MSCs, OE-MSCs display a high proliferation rate, an elevated clonogenicity and an inclination to differentiate into neural cells. We took advantage of these characteristics to perform studies dedicated to unveil new candidate genes in schizophrenia and Parkinson's disease4. We and others have also shown that OE-MSCs are promising candidates for cell therapy, after a spinal cord trauma12,13, a cochlear damage14 or in an animal models of Parkinson's disease15 or amnesia16.
In this study, we present methods to biopsy olfactory mucosa in rats and humans. After collection, the lamina propria is enzymatically separated from the epithelium and stem cells are purified using an enzymatic or a non-enzymatic method. Purified olfactory stem cells can then be either grown in large numbers and banked in liquid nitrogen or induced to form spheres or differentiated into neural cells. These stem cells can also be used for comparative omics (genomic, transcriptomic, epigenomic, proteomic) studies.

We describe here a method for biopsying olfactory mucosa from rat and human nasal cavities. These biopsies can be used for either identifying molecular anomalies in brain diseases or isolating multipotent adult stem cells that can be utilized for cell transplantation in animal models of brain trauma/disease.

عزل الخلايا الجذعية الأنف الشم من القوارض أو البشر

The olfactory mucosa, located in the nasal cavity, is in charge of detecting odours. It is also the only nervous tissue that is exposed to the external ...

Isolating LacZ-expressing Cells from Mouse Inner Ear Tissues using Flow Cytometry

Isolation of specific cell types allows one to analyze rare cell populations such as stem/progenitor cells. Such an approach to studying inner ear tissues presents a unique challenge because of the paucity of cells of interest and few transgenic reporter mouse models. Here, we describe a protocol using fluorescence-conjugated probes to selectively label LacZ-positive cells from the neonatal cochleae.
The most common underlying pathology of sensorineural hearing loss is the irreversible damage and loss of cochlear sensory hair cells, which are required to transduce sound waves to neural impulses. Recent evidence suggests that the murine auditory and vestibular organs harbor stem/progenitor cells that may have regenerative potential1,2. These findings warrant further investigation, including identifying specific cell types with stem/progenitor cell characteristics. The Wnt signaling pathway has been demonstrated to play a critical role in maintaining stem/progenitor cell populations in several organ systems3-7. We have recently identified Wnt-responsive Axin2-expressing cells in the neonatal cochlea, but their function is largely unknown8.
To better understand the behavior of these Wnt-responsive cells in vitro, we have developed a method of isolating Axin2-expressing cells from cochleae of Axin2-LacZ reporter mice9. Using flow cytometry to isolate Axin2-LacZ positive cells from the neonatal cochleae, we could in turn execute a variety of experiments on live cells to interrogate their behavior as stem/progenitor cells. Here, we describe in detail the steps for the microdissection of neonatal cochlea, dissociation of these tissues, labeling of the LacZ-positive cells using a fluorogenic substrate, and cell sorting. Techniques for dissociating cochleae into single cells and isolating cochlear cells via flow cytometry have been described2,10-12. We have made modifications to these techniques to establish a novel protocol to isolate LacZ-expressing cells from the neonatal cochlea.

Flow cytometry is a powerful tool allowing for the isolation and study of specific cell populations. This protocol describes steps for isolating LacZ-expressing cells from cochlear tissues from neonatal transgenic mice. Dissociated cochlear cells were labeled using fluorescent-conjugated substrates of &#946;-galactosidase prior to separation via flow cytometry.

عزل LacZ - معربا عن خلايا من أنسجة الأذن الداخلية باستخدام الماوس التدفق الخلوي

Isolation of specific cell types allows one to analyze rare cell populations such as stem/progenitor cells. Such an approach to studying inner ear tissues ...

Trypsin Digest Protocol to Analyze the Retinal Vasculature of a Mouse Model

Trypsin digest is the gold standard method to analyze the retinal vasculature 1-5. It allows visualization of the entire network of complex three-dimensional retinal blood vessels and capillaries by creating a two-dimensional flat-mount of the interconnected vascular channels after digestion of the non-vascular components of the retina. This allows one to study various pathologic vascular changes, such as microaneurysms, capillary degeneration, and abnormal endothelial to pericyte ratios. However, the method is technically challenging, especially in mice, which have become the most widely available animal model to study the retina because of the ease of genetic manipulations 6,7. In the mouse eye, it is particularly difficult to completely remove the non-vascular components while maintaining the overall architecture of the retinal blood vessels. To date, there is a dearth of literature that describes the trypsin digest technique in detail in the mouse. This manuscript provides a detailed step-by-step methodology of the trypsin digest in mouse retina, while also providing tips on troubleshooting difficult steps.

Trypsin digest is one of the most commonly used methods to analyze retinal vasculature. This manuscript describes the method in detail, including key alterations to optimize the technique and remove the non-vascular tissue while preserving the overall architecture of the vessels.

التربسين بروتوكول دايجست لتحليل الأوعية الدموية الشبكية للنموذج الفأر

Trypsin digest is the gold standard method to analyze the retinal vasculature 1-5. It allows visualization of the entire network of complex ...

A Comprehensive Protocol for Manual Segmentation of the Medial Temporal Lobe Structures

The present paper describes a comprehensive protocol for manual tracing of the set of brain regions comprising the medial temporal lobe (MTL): amygdala, hippocampus, and the associated parahippocampal regions (perirhinal, entorhinal,&#160;and parahippocampal proper). Unlike most other tracing protocols available, typically focusing on certain MTL areas (e.g., amygdala and/or hippocampus), the integrative perspective adopted by the present tracing guidelines allows for clear localization of all MTL subregions. By integrating information from a variety of sources, including extant tracing protocols separately targeting various MTL structures, histological reports, and brain atlases, and with the complement of illustrative visual materials, the present protocol provides an accurate, intuitive, and convenient guide for understanding the MTL anatomy. The need for such tracing guidelines is also emphasized by illustrating possible differences between automatic and manual segmentation protocols. This knowledge can be applied toward research involving not only structural MRI investigations but also structural-functional colocalization and fMRI signal extraction from anatomically defined ROIs, in healthy and clinical groups alike.

The present work provides a comprehensive set of guidelines for manually tracing the medial temporal lobe (MTL) structures. This protocol can be applied to research involving structural and/or combined structural-functional magnetic resonance imaging (MRI) investigations of the MTL, in both healthy and clinical groups.

بروتوكول الشامل للتجزئة دليل الهياكل الفص الصدغي الإنسي

The present paper describes a comprehensive protocol for manual tracing of the set of brain regions comprising the medial temporal lobe (MTL): amygdala, ...

Telomerase Activity in the Various Regions of Mouse Brain: Non-Radioactive Telomerase Repeat Amplification Protocol (TRAP) Assay

Telomerase, a ribonucleoprotein, is responsible for maintaining the telomere length and therefore promoting genomic integrity, proliferation, and lifespan. In addition, telomerase protects the mitochondria from oxidative stress and confers resistance to apoptosis, suggesting its possible importance for the surviving of non-mitotic, highly active cells such as neurons. We previously demonstrated the ability of novel telomerase activators to increase telomerase activity and expression in the various mouse brain regions and to protect motor neurons cells from oxidative stress. These results strengthen the notion that telomerase is involved in the protection of neurons from various lesions. To underline the role of telomerase in the brain, we here compare the activity of telomerase in male and female mouse brain and its dependence on age. TRAP assay is a standard method for detecting telomerase activity in various tissues or cell lines. Here we demonstrate the analysis of telomerase activity in three regions of the mouse brain by non-denaturing protein extraction using CHAPS lysis buffer followed by modification of the standard TRAP assay.
In this 2-step assay, endogenous telomerase elongates a specific telomerase substrate (TS primer) by adding TTAGGG 6 bp repeats (telomerase reaction). The telomerase reaction products are amplified by PCR reaction creating a DNA ladder of 6 bp increments. The analysis of the DNA ladder is made by 4.5% high resolution agarose gel electrophoresis followed by staining with highly sensitive nucleic acid stain.
Compared to the traditional TRAP assay that utilize 32P labeled radioactive dCTP&#39;s for DNA detection and polyacrylamide gel electrophoresis for resolving the DNA ladder, this protocol offers a non-toxic time saving TRAP assay for evaluating telomerase activity in the mouse brain, demonstrating the ability to detect differences in telomerase activity in the various female and male mouse brain region.

Telomerase Activity in the Various Regions of Mouse Brain: Non-Radioactive Telomerase Repeat Amplification Protocol TRAP Assay

Telomerase is expressed in the neonatal brain and also in distinct regions of the adult brain. We present a non-toxic time saving TRAP assay for the analysis of telomerase activity in various regions of the mouse brain and detection of differences in telomerase activity between male and female mouse brains.

نشاط التيلوميراز في مناطق مختلفة من الدماغ ماوس: التيلوميراز غير المشعة كرر بروتوكول التضخيم (TRAP) الفحص

Telomerase, a ribonucleoprotein, is responsible for maintaining the telomere length and therefore promoting genomic integrity, proliferation, and ...

Receptor Autoradiography Protocol for the Localized Visualization of Angiotensin II Receptors

This protocol describes receptor binding patterns for Angiotensin II (Ang II) in the rat brain using a radioligand specific for Ang II receptors to perform receptor autoradiographic mapping.
Tissue specimens are harvested and stored at -80 &#176;C. A cryostat is used to coronally section the tissue (brain) and thaw-mount the sections onto charged slides. The slide-mounted tissue sections are incubated in 125I-SI-Ang II to radiolabel Ang II receptors. Adjacent slides are separated into two sets: &#39;non-specific binding&#39; (NSP) in the presence of a receptor saturating concentration of non-radiolabeled Ang II, or an AT1 Ang II receptor subtype (AT1R) selective Ang II receptor antagonist, and &#39;total binding&#39; with no AT1R antagonist. A saturating concentration of AT2 Ang II receptor subtype (AT2R) antagonist (PD123319, 10 &#181;M) is also present in the incubation buffer to limit 125I-SI-Ang II binding to the AT1R subtype. During a 30 min pre-incubation at ~22 &#176;C, NSP slides are exposed to 10 &#181;M PD123319 and losartan, while &#39;total binding&#39; slides are exposed to 10 &#181;M PD123319. Slides are then incubated with 125I-SI-Ang II in the presence of PD123319 for &#39;total binding&#39;, and PD123319 and losartan for NSP in assay buffer, followed by several &#39;washes&#39; in buffer, and water to remove salt and non-specifically bound radioligand. The slides are dried using blow-dryers, then exposed to autoradiography film using a specialized film and cassette. The film is developed and the images are scanned into a computer for visual and quantitative densitometry using a proprietary imaging system and a spreadsheet. An additional set of slides are thionin-stained for histological comparisons.
The advantage of using receptor autoradiography is the ability to visualize Ang II receptors in situ, within a section of a tissue specimen, and anatomically identify the region of the tissue by comparing it to an adjacent histological reference section.

Here we present a protocol to describe the localization of angiotensin II Type 1 receptors in the rat brain by quantitative, densitometric, in vitro receptor autoradiography using an iodine-125 labeled analog of angiotensin II.

بروتوكول تصوير الإشعاع الذاتي مستقبلات للالتصور المترجمة من أنجيوتنسين الثاني المستقبلات

This protocol describes receptor binding patterns for Angiotensin II (Ang II) in the rat brain using a radioligand specific for Ang II receptors to ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the molecular and cellular basis of higher brain functions. A whole-mount preparation of adult brains with well-preserved morphology is critical for such whole brain-based studies, but can be technically challenging and time-consuming. This protocol describes an easy-to-learn, one-step dissection approach of an adult fly head in less than 10 s, while keeping the intact brain attached to the rest of the body to facilitate subsequent processing steps. The procedure helps remove most of the eye and tracheal tissues normally associated with the brain that can interfere with the later imaging step, and also places less demand on the quality of the dissecting forceps. Additionally, we describe a simple method that allows convenient flipping of the mounted brain samples on a coverslip, which is important for imaging both sides of the brains with similar signal intensity and quality. As an example of the protocol, we present an analysis of dopaminergic (DA) neurons in adult brains of WT (w1118) flies. The high efficacy of the dissection method makes it particularly useful for large-scale adult brain-based studies in Drosophila.

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

The adult Drosophila brain is a valuable system for studying neuronal circuitry, higher brain functions, and complex disorders. An efficient method to dissect whole brain tissue from the small fly head will facilitate brain-based studies. Here we describe a simple, one-step dissection protocol of adult brains with well-preserved morphology.

وبسيطة خطوة واحدة بروتوكول تشريح لجبل لالجامع إعداد الكبار<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; أدمغة

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

A Protocol for the Administration of Real-Time fMRI Neurofeedback Training

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control neuroplastic processes and correct abnormal function, or even shift functions from damaged tissue to physiologically healthy brain regions, hold the potential to dramatically improve overall health. Of the current neuroplastic interventions in development, neurofeedback training (NFT) from functional Magnetic Resonance Imaging (fMRI) has the advantages of being completely non-invasive, non-pharmacologic, and spatially localized to target brain regions, as well as having no known side effects. Furthermore, NFT techniques, initially developed using fMRI, can often be translated to exercises that can be performed outside of the scanner without the aid of medical professionals or sophisticated medical equipment. In fMRI NFT, the fMRI signal is measured from specific regions of the brain, processed, and presented to the participant in real-time. Through training, self-directed mental processing techniques, that regulate this signal and its underlying neurophysiologic correlates, are developed. FMRI NFT has been used to train volitional control over a wide range of brain regions with implications for several different cognitive, behavioral, and motor systems. Additionally, fMRI NFT has shown promise in a broad range of applications such as the treatment of neurologic disorders and the augmentation of baseline human performance. In this article, we present an fMRI NFT protocol developed at our institution for modulation of both healthy and abnormal brain function, as well as examples of using the method to target both cognitive and auditory regions of the brain.

The ability to induce and/or control neural plasticity may be critical in future treatments for neurologic disorders and the recovery from brain injury. In this paper, we present a protocol on the use of neurofeedback training with functional magnetic resonance imaging to modulate human brain function.

بروتوكول "الإدارة في الوقت الحقيقي" في الرنين المغناطيسي الوظيفي Neurofeedback التدريب

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control ...