Funding for the production of this manuscript was provided by Nottingham Trent University. The authors wish to thank the University yard manager, Anna Gregory for the use of her horses and provision of fecal samples for use in the protocol. Thanks also to Chester Zoo Wildlife Endocrinology Laboratory for use of their facilities.

بيان الأخلاق: الإجراءات التي تنطوي على أخذ العينات الميدانية والحيوان موضوعات تم اعتمادها من قبل مدرسة الحيوان، الريفية والعلوم البيئية (آريس) في جامعة نوتنغهام ترنت. 1. جمع عينات البراز ملاحظة: يجب ارتداء القفازات عند التعامل مع العينات البرازية والميثانول. إذا كان هناك شكوك قوية بأن حيوان يمكن أن يعاني من مرض حيواني المنشأ، ملابس واقية مثل وينبغي أيضا أن ترتديه معطف المختبر. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع العينات البرازية في أقرب وقت ممكن (في غضون دقائق إلى بضع ساعة) بعد التغوط ووضعها في كيس من العينة. أخذ 3-5 العينات الفرعية من أي عينة يتبرز مع الوزن الكلي حوالي 10 غرام. تسمية حقيبة مع الوقت والتاريخ من جمع وهوية الأفراد، وتجميد العينة في -20 درجة مئوية حتى التحليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتقليل الخطأ، وتجميد جميع العينات في -20 درجة مئوية حتى الدراسة كاملة ثم جمع عينات معا للتحليل كما دفعة واحدة. &lt;/ لى&gt; </ol> 2. برازي هرمون استخراج <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترك عينات البراز لذوبان الجليد في RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضمان أن العينات والمتجانس عن طريق خلط كل عينة يدويا في كيس عينة الخاصة بها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل عينة تزن 0.50 (± 0.003 ز) من المواد البرازية على توازن دقيق في وزن القارب ثم نقل البراز إلى قارورة زجاج 8 مل. استخدام تزن قارب جديد لكل عينة وتنظيف ملاقط مع 30٪ الميثانول بين كل عينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الجمع بين 0.5 غرام من المواد البرازية مع 5 مل من 90٪ ميثانول: الماء، ويهز O / N على شاكر المداري في RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في صباح اليوم التالي، دوامة العينة ومن ثم الطرد المركزي لمدة 20 دقيقة في 600 غرام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صب جزء الميثانول في أنبوبة زجاجية 16 × 125 مم 2 ومكان في رف في حمام مائي لتعيين درجة حرارة 37 درجة مئوية. تتبخر إلى جفاف باستخدام الهواء في خزانة الدخان. شطف القارورة استخراج ووضع بيليه البراز المتبقية في كيس النفايات الطبية للتخلص منها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعادة تعليق مقتطفات البرازية في 100٪، 1 مل الميثانول ونقل إلى أنبوب البولي بروبلين 12 × 75 مم 2. على الفور سقف ومخزن في -20 درجة مئوية حتى التحليل. </li></ol> 3. تحليل هرمون <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء التحليل مع انزيم مرتبط-المناعية (EIA) باستخدام بولكلونل مصل كورتيزون CJM006. ملاحظة: تم وتقييم الأثر البيئي الثاني اختبار (الكورتيزول R4866 مصل، ولكن هذا فشل في تحقيق خطوة التحقق من صحة البيوكيميائية (انظر القسم 4.1) يتم توفير الأمصال المضادة بولكلونل كورتيزون CJM006 والكورتيزول R4866 مصل والتي تخصها، برنامج الصحة الإنجابية التي كتبها CJ مونرو، جامعة كاليفورنيا، ديفيس، كاليفورنيا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع مصل في 1: 15،000 في المخزن طلاء (0.05 M NaHCO3، ودرجة الحموضة 9.6) باستخدام ماصة المتكررة و50 ميكرولتر ماصة، تحميل لوحة التلازن 96-جيدا مع 50 ميكرولتر / جيد. تغطية لوحة مع سداده لوحة واحتضان O / N عند 4 درجات مئوية. ترك بئرين غير المصقول لتمثيل الآبار غير الملزمة محددة (NSB). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مباشرة قبل الاستعمال تغسل الصحون التلازن خمس مرات باستخدام الآلي غسالة لوحة التلازن (محلول الغسيل، 0.15 م كلوريد الصوديوم، 0.05٪ توين 20). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل لوحات مع 50 ميكرولتر لكل بئر لفي جهاز الأمن القومي والآبار [عازلة تقييم الأثر البيئي (0.1 M نابو 4، 0.149 M كلوريد الصوديوم، 0.1٪ زلال المصل البقري، ودرجة الحموضة 7.0) فقط] &quot;صفر&quot;، ومعايير (كورتيزون، 3.9 - 1000 جزء من الغرام / أيضا) أو استخراج عينات البراز (مخفف بشكل مناسب في 1:20 عازلة تقييم الأثر البيئي، انظر القسم 4.1). يجب تشغيل المعايير والأصفار في ثلاث نسخ وquadruplicate، على التوالي. يجب تشغيل المخفف استخراج عينات البراز وفي جهاز الأمن القومي في نسختين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتبع هذا على الفور مع اضافة 50 ميكرولتر جيدا / التسمية الفجل البيروكسيديز المترافقة ᵻ المخفف في المخزن EIA إلى 1: 70000. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان أطباق التلازن في الظلام لمدة 2 ساعة على RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل أطباق التلازن مع محلول الغسيل 5 مرات، واحتضان لوحات في RT في الظلام مع 100 ميكرولتر / أهلا وسهلالتر من RT الركيزة [0.4 ملي 2،2&#39;-azino-DI- (3-ethylbenzthiazoline السلفونيك حمض) ملح ثنائي الأمونيوم، 1.6 مم H 2 O 2، 0.05 M سترات، ودرجة الحموضة 4.0]. إعداد الركيزة مباشرة قبل الاستعمال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام spectrophometer عند طول موجي 405 نانومتر لقراءة لوحات التلازن. تعتبر حضانة لوحات كاملة عندما الكثافة البصرية من الآبار الصفر تصل 0،8-1،0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لضمان التكرار، استخدام عناصر التحكم [معايير تقييم الأثر البيئي أو عينة بيولوجية المخفف في المخزن تقييم الأثر البيئي للربط في ما يقرب من 30٪ (EIA قياسي) و 50٪ (عينة على سبيل المثال البيولوجي، مجموعة من الحصان المحلي استخراج البراز) و 70٪ (EIA قياسي) ] لإثبات وجود داخل وبين فحص معاملات الاختلاف من &lt;10٪ و &lt;15٪ على التوالي. </li></ol> 4. انزيم مرتبط-المناعي: التحقق من صحة لنوع الدراسة والجنس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الكيمياء الحيوية التحقق (التوازي) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام عازلة تقييم الأثر البيئي، إجراء تخفيف تسلسلي على تجميع البراز خارجط م، والتي اتخذت من الناحية المثالية من يشتبه عينات تركيز الهرمون العالية والمنخفضة من عدة أفراد (المدى: أنيق، 1: 2-1: 8192)، وتعمل على تقييم الأثر البيئي كما هو موضح في القسم 3. ملاحظة: يعتبر تحقيق التوازي عند التخفيفات المسلسل من مقتطفات البرازية تسفر عن بالتوازي منحنى النزوح الى نتائج منحنى الانحدار الخطي والقياسية تظهر R2&gt; 0.90، منحدر&gt; 0.50 و p &lt;0.05. ينبغي النظر في استخراج البراز المخفف التسلسلي الذي يربط حوالي 50٪ على المنحنى القياسي لتخفيف المثالي لتشغيل جميع مقتطفات برازي (على سبيل المثال، 1:20). ليس هناك تدخل النظر فيها على الفحص عندما تظهر نتائج الانحدار الخطي R2&gt; 0.90 و p &lt;0.05. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الكيمياء الحيوية التحقق (التدخل) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ارتفاع 200 ميكرولتر من المعايير تخفيفه بشكل متسلسل (صفر، 3،9-1٬000 نانوغرام / جيد كورتيزون) مع 200 ميكرولتر من استخراج البراز بشكل مناسب المخفف المجمعة [المخفف في 50٪ ملزمة تحددها paralleliخ (01:20)] وتعمل على تقييم الأثر البيئي كما هو الحال في الجزء 3. بعد مؤامرة تحليل تقييم الأثر البيئي تركيز لاحظ ناقص الخلفية (تركيز العينة صفر) مقابل تركيز المتوقع. ملاحظة: إذا كان إضافة المخفف استخراج البراز المجمعة لمعايير لا يغير كثيرا من المتوقع كمية خطية نتائج الانحدار ينتج R 2&gt; 0.90، منحدر بالقرب 1.0 و p &lt;0.05. لم يتم إحراز أي تدخل في تقييم الأثر البيئي. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التحقق البيولوجي: ملاحظة: مظاهرة أن الادارة اختارت لديه القدرة على قياس التغييرات ذات الصلة بيولوجيا من هرمون الفائدة [على سبيل المثال، ارتفاع تركيزات القشرية السكرية بعد الدوائية (ACTH في كثير من الأحيان إجراء مرخص) أو التحدي البيولوجي (على سبيل المثال، نفسية و / أو للبيئة، من المرجح أن يكون حدثا غير المنظم الانتهازية)]. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختيار، واستخراج وتحليل عينات البراز لتركيزات المستقلب القشرية السكريةباستخدام عملية بالتفصيل في القسمين 1-3 قبل وبعد الحدث تحديا. ملاحظة: سوف الحدث تحديا تكون أنواع محددة. يتم توفير وسيلة المثال أدناه للحصول على الحصان المحلي. وقد نشرت أمثلة كاملة من الأحداث الصعبة للخيول سابقا بما في ذلك استخدام إدارة 9 و تربية الإجراءات 16. ارتفاع كبير في تركيزات المستقلب القشرية السكرية في أعقاب الحدث تحديا يجب مراعاتها وأكد باستخدام التحليل الإحصائي. هذا يجب أن تتضمن حيثما كان ذلك مناسبا، وتأثير التدابير المتكررة، تاريخ العينة والفرد. ومن ثم يعتبر تحقيق التحقق البيولوجي. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Morm&#232;de, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploration+of+the+hypothalamic-pituitary-adrenal+function+as+a+tool+to+evaluate+animal+welfare.">Exploration of the hypothalamic-pituitary-adrenal function as a tool to evaluate animal welfare.</a> Physiology and Behaviour. 92 (3), 317-339 (2007).</li><li>Lane, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+non-invasive+glucocorticoid+measures+be+used+as+reliable+indicators+of+stress+in+animals?.">Can non-invasive glucocorticoid measures be used as reliable indicators of stress in animals?.</a> Animal Welfare. 15 (4), 331-342 (2006).</li><li>Morgan, K. N., Tromborg, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sources+of+stress+in+captivity.">Sources of stress in captivity.</a> Applied Animal Behaviour Science. 102, 262-302 (2007).</li><li>Nelson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> An introduction to behavioural endocrinology (3rd Ed). , 670-671 (2005).</li><li>Sapolsky, R. M., Romero, L. M., Munck, A. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+Do+Glucocorticoids+Influence+Stress+Responses?+Integrating+Permissive,+Suppressive,+Stimulatory,+and+Preparative+Actions.">How Do Glucocorticoids Influence Stress Responses? Integrating Permissive, Suppressive, Stimulatory, and Preparative Actions.</a> Endocrine Reviews. 21 (1), 55-89 (2000).</li><li>Macdonald, K. M., Macdonald, I. A., Bokkenheuser, V. D., Winter, J., McLernon, A. M., Mosbach, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Degradation+of+steroids+in+the+human+gut.">Degradation of steroids in the human gut.</a> Journal of Lipid Research. 24, 675-700 (1983).</li><li>Young, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+monitoring+of+adrenocortical+activity+in+carnivores+by+fecal+glucocorticoid+analysis.">Non-invasive monitoring of adrenocortical activity in carnivores by fecal glucocorticoid analysis.</a> General and Comparative Endocrinology. 137, 148-165 (2004).</li><li>Merl, S., Scherzer, S., Palme, R., Mostl, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pain+causes+increased+concentrations+of+glucocorticoid+metabolites+in+horse+faeces.">Pain causes increased concentrations of glucocorticoid metabolites in horse faeces.</a> Journal of Equine Veterinary Science. 20, 586-590 (2000).</li><li>Yarnell, K., Hall, C., Royle, C., Walker, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Domesticated+horses+differ+in+their+behavioural+and+physiological+responses+to+isolated+and+group+housing.">Domesticated horses differ in their behavioural and physiological responses to isolated and group housing.</a> Physiology and Behaviour. 143, 51-57 (2015).</li><li>Wielebnowski, N., Watters, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applying+fecal+endocrine+monitoring+to+conservation+and+behaviour+studies+of+wild+mammals:+important+considerations+and+preliminary+tests.">Applying fecal endocrine monitoring to conservation and behaviour studies of wild mammals: important considerations and preliminary tests.</a> Israel journal of ecology and evolution. 53, 439-460 (2007).</li><li>Palme, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+fecal+steroids:+guidelines+for+a+practical+application.">Measuring fecal steroids: guidelines for a practical application.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1046, 75-80 (2005).</li><li>Uden, P., Rounsaville, G. R., Wiggans, G. R., Van Soest, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+measurement+of+liquid+and+solid+digesta+retention+in+ruminants,+equines+and+rabbits+given+timothy+hay.">The measurement of liquid and solid digesta retention in ruminants, equines and rabbits given timothy hay.</a> British Journal of Nutrition. 48, 329-339 (1982).</li><li>Goymann, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+monitoring+of+hormones+in+bird+droppings:+biological+validations,+sampling,+extraction,+sex+differences+and+the+influence+of+diet+on+hormone+metabolite+levels.">Non-invasive monitoring of hormones in bird droppings: biological validations, sampling, extraction, sex differences and the influence of diet on hormone metabolite levels.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1046, 35-53 (2005).</li><li>Touma, C., sachser, N., Mostl, E., Palme, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+sex+and+time+of+day+on+metabolism+and+excretion+of+corticosterone+in+urine+and+feces+of+mice.">Effects of sex and time of day on metabolism and excretion of corticosterone in urine and feces of mice.</a> General and comparative Endocrinology. 130, 267-278 (2003).</li><li>Rattenbacher, S., Mostl, E., Hackl, R., Ghareeb, K., Palme, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+corticosterone+metabolites+in+chicken+droppings.">Measurement of corticosterone metabolites in chicken droppings.</a> British Poultry Science. 45, 704-711 (2004).</li><li>Yarnell, K., Hall, C., Billett, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+assessment+of+the+aversive+nature+of+an+animal+management+procedure+using+behavioural+and+physiological+measures.">An assessment of the aversive nature of an animal management procedure using behavioural and physiological measures.</a> Physiology &amp; Behaviour. 118, 32-39 (2013).</li><li>Goymann, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+use+of+non-invasive+hormone+research+in+uncontrolled,+natural+environments:+the+problem+with+sex,+diet,+metabolic+rate+and+the+individual.">On the use of non-invasive hormone research in uncontrolled, natural environments: the problem with sex, diet, metabolic rate and the individual.</a> Methods in Ecology and Evolution. 3, 757-765 (2012).</li><li>Sheriff, M. J., Dantzer, B., Delehanty, B., Palme, R., Boonstra, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+stress+in+wildlife:+techniques+for+quantifying+glucocorticoids.">Measuring stress in wildlife: techniques for quantifying glucocorticoids.</a> Oecologia. 166, 614-619 (2011).</li><li>Watson, R., Munro, C. J., Edwards, K. L., Norton, V., Brown, J. L., Walker, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+versatile+enzyme+immunoassay+for+non-invasive+assessment+of+glucocorticoid+metabolites+in+a+diversity+of+taxonomic+species.">Development of a versatile enzyme immunoassay for non-invasive assessment of glucocorticoid metabolites in a diversity of taxonomic species.</a> General Comparative Endocrinology. 186, 16-24 (2013).</li><li>Touma, C., Palme, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+fecal+glucocorticoid+metabolites+in+mammals+and+birds:+the+importance+of+validation.">Measuring fecal glucocorticoid metabolites in mammals and birds: the importance of validation.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1046, 54-74 (2005).</li><li>Millspaugh, J. J., Washburn, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+fecal+glucocorticoid+metabolite+measures+in+conservation+biology+research:+considerations+for+application+and+interpretation.">Use of fecal glucocorticoid metabolite measures in conservation biology research: considerations for application and interpretation.</a> General and Comparative Endocrinology. 138, 189-199 (2004).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

يوفر تحليل البراز كورتيزون وسيلة لتقييم أنماط طويلة المدى لنشاط الغدة الكظرية في الخيول. طبيعة غير الغازية من طريقة تتغلب على آثار الخلط من طرق أخذ العينات الأخرى المستخدمة لتقييم نشاط الغدة الكظرية بما في ذلك اللعاب والبلازما تحليل 9. وبالإضافة إلى ذلك الأسلو...

أهداف الطريقة الموصوفة لتحليل تركيز الكورتيزون في البراز الخيول من أجل توفير تقييم غير الغازية للنشاط الغدة الكظرية. قياس النشاط (HPA) محور الغدة النخامية، الغدة الكظرية هو نهج قبولهم للدراسة الاستجابة لحالات يحتمل أن تكون مكره في كل من الأنواع في الأسر والمحلية. تقنية الإشارة وطريقة الأكثر استخداما هو استخدام بلازما الدم 1 ومع ذلك، الطرق البديلة مثل تحليل البراز وضعت من أجل التغلب على الإجهاد الناجم عن اخذ عينات من الدم نفسها والسماح القدرة على رصد الأنواع الطليقة. أثناء وضع مكره، تعطل التوازن الفيزيولوجي. منطقة ما تحت المهاد في الدماغ النشرات المنمية القشرية الافراج عن هرمون (CRH) الذي يعمل على الغدة النخامية الأمامية ويحفز الافراج عن الهرمون الموجه لقشر الكظر (ACTH). ACTH يدخل مجرى الدم، ويحفز قشرة الغدة الكظرية لإفراز مسكوكةق السكرية محددة (GC). ترتبط ارتباطا وثيقا السكرية الأحداث المجهدة بدلا من أن تنتج باستمرار في جميع ولايات الطاقة المتزايدة ولذا غالبا ما يتم قياسها في تفضيل اكثر من غيرها من الإجهاد ترتبط الهرمونات 2. السكرية هي المسؤولة عن العديد من الآثار التكيف في الخيول. وحشدت الطاقة بسرعة من مواقع التخزين في الجسم في شكل من الأحماض الدهنية والجلوكوز، وزيادة كمية الأوكسجين، مما يعزز وظيفة حسية (3) وانخفاض تدفق الدم الى مناطق غير الضرورية لحركة 4. وكذلك بوصفها آلية التعامل، وارتفاع التوتر الناجم في السكرية قد يساعد أيضا على إعداد الحيوان للالضغوطات المقبل 5. تقييم مستويات الهرمون في البلازما واللعاب ينطوي على قياس هرمون تعميم الفعلي ومع ذلك، وقياس نواتج الأيض في التدابير البراز المنتج النهائي التمثيل الغذائي للهرمون. وcatabolized المنشطات المتداولة في لترإيفر قبل الإفراز في لالصفراء حيث أنها تخضع لتغييرات أخرى بتسهيل من الأنشطة الإنزيمية من النباتات البكتيرية داخل مسار الأمعاء 6. لذلك، المناعية الموجهة نحو السكرية في الدم قد لا تكون مناسبة لتحليل نواتج الأيض جلايكورتيكود البرازية 7. كما يمكن أن يتم جمع البراز من دون أي إزعاج للحصان، وتحليل البراز للكورتيزون، وقد استخدم على نطاق واسع لمراقبة نشاط HPA في عدد من الظروف. تم الإبلاغ عن كورتيزون ارتفاع في البراز من الخيول استجابة لحالات يحتمل أن تكون مكره بما في ذلك أثناء العلاج البيطري بعد العملية 8 وفي السكن تقييدا ​​9. تعكس أخذ العينات البرازية مستوى جلايكورتيكود المجمعة مع مرور الوقت بدلا من نقطة في أخذ العينات في الوقت التي تقدمها البلازما واللعاب مما يجعله مناسبا لرصد المدى الطويل المزمن أو الأنماط الموسمية 10. ويرجع ذلك إلى غير الغازيةطبيعة الأسلوب، والعينات ويمكن جمع مرارا وتكرارا للفرد دون الحاجة إلى التقاط أو ضبط النفس 11. ومع ذلك، يجب أن تؤخذ أنواع محددة وقت عبور القناة الهضمية في الاعتبار عند التخطيط لبروتوكول أخذ العينات. في الخيول، والوقت الأمعاء عبور حوالي 18 ساعة 12 وبالتالي، يمكن الكشف عن استجابة الغدة الكظرية والأيض كورتيزون لاحقة في البراز بعد يوم واحد تفعيل الأولي للمحور HPA. عندما تستخدم تقنيات المناعية غير الغازية التحقق من صحة دقيق لهذه الأنواع يجري التحقيق ضروري 13. وبالإضافة إلى ذلك، تم الإبلاغ عن الفروق بين الجنسين في هرمون الأيض إفراز ربما بسبب الاختلافات في معدل الأيض ونوع الأيض كورتيزون تفرز في مختلف الأنواع بما في ذلك الفئران 14، والدجاج (15). ولذلك كان من المهم كجزء من هذا الأسلوب الذي تم التحقق من صحة فحص للاستخدام في كل من الذكور والإناث الخيول المحلية كما هو مفصل في البروتوكول البريد. هذا الاختلاف في عملية الأيض الهرموني بين الجنسين له عواقب على نوعية البيانات إلا أنه نادرا ما يتم معالجتها وتضمينها كجزء من التحقق من صحة الفحص. وتسمح هذه الطريقة غير الغازية تقييم المدى الطويل من النشاط الغدة الكظرية في الخيول المحلية. تفاصيل البروتوكول كل من المصادقة على فحص وتقنية فحص نفسها.

<table><tbody><tr><td>Corticosterone antibody &amp;amp; HRP kit</td><td>Coralie Munro - UC Davis</td><td></td><td>No longer available through UC Davis - please see Arbor Assays</td></tr><tr><td>Cortisol antibody &amp;amp; HRP kit</td><td>Coralie Munro - UC Davis</td><td></td><td>No longer available through UC Davis - please see Arbor Assays</td></tr><tr><td>Corticosterone synthetic standard hormone</td><td>Sigma Aldrich</td><td>50-23-7</td><td>Harnful if ingested or with skin contact. Use in fume cupboard</td></tr><tr><td>Cortisol synthetic standard hormone</td><td>Sigma Aldrich</td><td>15087-01-1</td><td>Harmful if ingested or with skin contact. Use in fume cupboard</td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>67-56-1</td><td>Irritant. Use in fume cupboard</td></tr><tr><td>Sodium Bicarbonate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>144-55-8</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>Sodium Carbonate Anhydrous</td><td>Sigma Aldrich</td><td>497-19-8</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>Sodium Phosphate Dibasic</td><td>Sigma Aldrich</td><td>7558-79-4</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>Sodium Phosphate Monobasic</td><td>Sigma Aldrich</td><td>10049-21-5</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>9048-46-8</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>9005-64-5</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>Citric Acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>77-92-9</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>ABTS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>30931-67-0</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>Hydrogen Peroxide 30%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>7722-84-1</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>Sodium Chloride</td><td>Sigma Aldrich</td><td>7647-14-5</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>Buffer capsules - pH 4</td><td>VWR</td><td>332732B</td><td></td></tr><tr><td>Buffer capsules - pH 7</td><td>VWR</td><td>332742D</td><td></td></tr><tr><td>Buffer capsules - pH 10</td><td>VWR</td><td>332762H</td><td></td></tr><tr><td>Hydrochloric Acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>435570</td><td>Irritant. Use in fume cupboard</td></tr><tr><td>Sodium Hydroxide</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5881</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>Analytical balance</td><td>Fisher Scientific</td><td>BFS-525-010A</td><td></td></tr><tr><td>Air compressor</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Computer +printer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>fridge-freezer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Drying apparatus</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>+tubing</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flammable liquid storagecabinet</td><td>VWR</td><td>649-002</td><td></td></tr><tr><td>Fume cupboard</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hot-plate stirrer</td><td>VWR</td><td>640-282</td><td></td></tr><tr><td>Microplate reader</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microplate washer</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pH meter</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research&amp;reg; pipettes - multipack option 2</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette - 1,000 &amp;micro;l</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette - 200 &amp;micro;l</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette - 20 &amp;micro;l</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Repeater pipette</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette filler</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Orbital shaker</td><td>Progen Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sonicator</td><td>Hilsonic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Warm water bath</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Water purification system</td><td>Millipore</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fecal glucocorticoid analysis: non-invasive adrenal monitoring in equids

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, corticotrophin releasing hormone (CRH) is released from the hypothalamus in the brain. This stimulates the release of adrenocorticotrophic hormone (ACTH) from the pituitary gland, which in turn stimulates release of glucocorticoids from the adrenal gland. In horses the glucocorticoid corticosterone is responsible for several adaptations needed to support equine flight behaviour and subsequent removal from the aversive situation. Corticosterone metabolites can be detected in the feces of horses and assessment offers a non-invasive option to evaluate long term patterns of adrenal activity. Fecal assessment offers advantages over other techniques that monitor adrenal activity including blood plasma and saliva analysis. The non-invasive nature of the method avoids sampling stress which can confound results. It also allows the opportunity for repeated sampling over time and is ideal for studies in free ranging horses. This protocol describes the enzyme linked immunoassay (EIA) used to assess feces for corticosterone, in addition to the associated biochemical validation.

الخيول المحلية (ن = 16، 8 الأفراس، 8 الحيوانات المخصية) تم تجميع مع متوسط ​​أعمارهم 15 عاما (± 3) وفقا لنوع الجنس وتعرض لأربعة تصاميم المساكن مع مستويات متزايدة من العزلة الاجتماعية (ن = 4 حصان / العلاج). الإسكان 1 تشارك الخيول الذين يعيشون في بيئة القطيع، م...

Watch this Scientific Journal Video about Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids at JoVE.com

Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. The method offers a non-invasive option to assess long term patterns in both domestic and free ranging horses. This protocol describes the enzyme linked immunoassay involved and the associated biochemical validation.

برازي تحليل جلايكورتيكود: رصد الغدة الكظرية غير الغازية في الخيليات

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, ...

fecal-glucocorticoid-analysis-non-invasive-adrenal-monitoring

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

9.6K Views.  Nottingham Trent University. Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. The method offers a non-invasive option to assess long term patterns in both domestic and free ranging horses. This protocol describes the enzyme linked immunoassay involved and the associated biochemical validation.

Video: Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

Cortisol Measurement in Koala (Phascolarctos cinereus) Fur

Optimal methods of hormone extraction used to measure stress in animals across sample types are not always the same. Australia&#39;s iconic marsupial species, the koala (Phascolarctos cinereus), faces prolonged exposure to anthropogenic-induced stressors and assessment of chronic stress in wild populations is urgently warranted. One of the most effective ways to measure chronic stress is through analyzing the glucocorticoid hormone cortisol in hair or fur, as it supports physiological and behavioral responses. This laboratory validation study aims to test current techniques to validate an optimal hormone extraction method to be used as a non-invasive measure of cortisol in koala fur. It is recognized that using non-invasive techniques to measure stress hormones is preferred over traditional, invasive techniques due to their ideal practical and ethical standpoints. Additionally, it is comparatively easier to acquire fur from koalas than it is to acquire samples of their blood. This study used samples of koala fur acquired from the Adelaide Koala and Wildlife Hospital to run a number of hormone extraction techniques in an attempt to validate an optimal cortisol extraction method. Results showed that 100% methanol provided the most optimal solvent extraction compared to 100% ethanol or 100% isopropanol based on parallelism results. In conclusion, this method of cortisol extraction from koala fur provided a reliable non-invasive assay that could be used to study chronic stress in koalas.

Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur

We present a protocol to determine the optimal extraction solvent to measure cortisol from koala fur. The solvents used in this protocol are methanol, ethanol and isopropanol. Determining an optimal extraction solvent will aid in reliably measuring fur to determine the impact of chronic stress on koalas.

قياس الكورتيزول في كوالا(فيسكولارتوس سينيريوس)الفراء

Optimal methods of hormone extraction used to measure stress in animals across sample types are not always the same. Australia&#39;s iconic marsupial ...

Biochemistry

Cortisol Extraction from Sturgeon Fin and Jawbone Matrices

The aims of this study were to develop a technique for the extraction of cortisol from sturgeon fins using two washing solvents (water and isopropanol) and quantify any differences in fin cortisol levels among three main sturgeon species. Fins were harvested from 19 sacrificed sturgeons including seven beluga (Huso huso), seven Siberian (Acipenser baerii), and five sevruga (A. stellatus). The sturgeons were raised in Iranian farms for 2 years (2017-2018), and cortisol extraction analysis was conducted in South Korea (January-February 2019). Jawbones from five H. huso were also used for cortisol extraction. Data were analyzed using the general linear model (GLM) procedure in the SAS environment. The intra- and inter-assay coefficients of variation were 14.15 and 7.70, respectively. Briefly, the cortisol extraction technique involved washing the samples (300 &#177; 10 mg) with 3 mL of solvent (ultrapure water and isopropanol) twice, rotation at 80&#160;rpm for 2.5 min, air-drying the washed samples at room temperature (22-28 &#176;C) for 7 days, further drying the samples using a bead beater at 50 Hz for 32 min and grinding them into powder, applying 1.5 mL methanol to the dried powder (75 &#177; 5 mg), and slow rotation (40 rpm) for 18 h at room temperature with continuous mixing. Following extraction, samples were centrifuged (9,500 x g for 10 min), and 1 mL supernatant was transferred into a new microcentrifuge tube (1.5 mL), incubated at 38 &#176;C to evaporate the methanol, and analyzed via enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). No differences were observed in fin cortisol levels among species or in fin and jawbone cortisol levels between washing solvents. The results of this study demonstrate that the sturgeon jawbone matrix is a promising alternative stress indicator to solid matrices.

In this study, we present a protocol for cortisol extraction from the fin and jawbone of sturgeon species. Fin and jawbone cortisol levels were further examined by comparing two washing solvents followed by ELISA assays. This study piloted the feasibility of jawbone cortisol as a novel stress indicator.

استخراج الكورتيزول من زعانف سمك الحفش ومصفوفات عظم الفك

The aims of this study were to develop a technique for the extraction of cortisol from sturgeon fins using two washing solvents (water and isopropanol) ...

Environment

Measuring Biophysical and Psychological Stress Levels Following Visitation to Three Locations with Differing Levels of Nature

Visitation to natural environments has been linked to psychological stress reduction. Although most stress-related research has relied on self-report formats, a growing number of studies now incorporate biological stress-related hormones and catalysts, such as cortisol and &#945;-amylase, to measure levels of stress. Presented here is a protocol to examine the effects on levels of biophysical and psychological stress following visitation to three different locations with differing levels of nature. Biophysical and self-reported psychological stress levels are measured immediately upon entering the selected locations and just prior to the visitors leaving the site. Using a &#34;drool&#34;&#160;method, the biophysical measure consists of 1-2 mL samples of saliva provided by study subjects upon entry to one of three study locations. As prescribed by extant literature, the saliva is collected within a 45 minute time frame following the end of the visitor&#8217;s engagement at the location. Following saliva collection, the samples are labeled and transported to a biological lab. Cortisol is the biophysical variable of interest in this study and measured using an ELISA process with a TECAN plate reader. To measure self-reported stress, the Perceived Stress Questionnaire (PSQ), which reports levels of worry, tension, joy, and perceived demands. Data are collected at all three sites in the late afternoon through early evening. When compared across all three settings, stress levels, as measured by both the biological markers and self-reports, are significantly lower after visitation to the most natural setting.

The purpose of this paper is to identify changes in stress levels after visitation to three different settings and to describe the methods used in identifying stress levels based on measures of salivary cortisol, &#945;-amylase, and a psychological self-report instrument.&#160;

قياس مستويات الإجهاد البيوفيزيائي والنفسي بعد الزيارة إلى ثلاثة مواقع ذات مستويات مختلفة من الطبيعة

Visitation to natural environments has been linked to psychological stress reduction. Although most stress-related research has relied on self-report ...

Behavior

Providing Meaningful Environmental Enrichment and Measuring Saliva Cortisol in Pigs Housed on Slatted Flooring

As pork is the most consumed meat worldwide, the welfare of animals in the swine industry has increasingly become a major public concern, which imposes a substantial pressure coming from customers, legislators and other stakeholders, to make management changes to improve the well-being of these animals. Several studies have demonstrated that providing environmental enrichment to pigs allows them to express their natural behavior, such as rooting and exploring, as well as nesting prior to farrowing, and is associated with reduced stress and improved production and welfare. However, many considerations should be taken into account when providing environmental enrichment, such as the type of floor, drainage and sewage systems, the pigs&#39; stage in life, the material, as well as its hanging method, height and location within the pen. The objectives of this paper are (1) to give methodologic information on how to provide a relatively simple and practical meaningful environmental enrichment for pigs which are housed on slatted floors during the different stages of their life, and (2) to demonstrate how to collect saliva samples for the measurement of cortisol concentrations, as a biomarker for acute stress. Protocols include information regarding the use of jute, cotton ropes, straw in racks, as well as chewable silicone sticks devices as environmental enrichment in pens of farrowing and lactation, weaners and finishers. In addition, the use of cotton rope for a non-invasive saliva samples collection for cortisol concentrations analysis is detailed. The protocols provided are relevant for professionals aiming to improve and monitor animal welfare, in both research and industrial swine farming.

This protocol demonstrates how to provide practical meaningful environmental enrichment for pigs which are housed on slatted flooring during the different stages of their lives, and how to collect saliva samples in a non-invasive manner for the measurement of cortisol concentrations, as a biomarker for acute stress.

توفير الإثراء البيئي المجدي وقياس الكورتيزول اللعاب في الخنازير التي تقع علي الأرضيات المضلعة

As pork is the most consumed meat worldwide, the welfare of animals in the swine industry has increasingly become a major public concern, which imposes a ...

Thermal Imaging to Study Stress Non-invasively in Unrestrained Birds

Stress, a central concept in biology, describes a suite of emergency responses to challenges. Among other responses, stress leads to a change in blood flow that results in a net influx of blood to key organs and an increase in core temperature. This stress-induced hyperthermia is used to assess stress. However, measuring core temperature is invasive. As blood flow is redirected to the core, the periphery of the body can cool. This paper describes a protocol where peripheral body temperature is measured non-invasively in wild blue tits (Cyanistes caeruleus) using infrared thermography. In the field we created a set-up bringing the birds to an ideal position in front of the camera by using a baited box. The camera takes a short thermal video recording of the undisturbed bird before applying a mild stressor (closing the box and therefore capturing the bird), and the bird&#8217;s response to being trapped is recorded. The bare skin of the eye-region is the warmest area in the image. This allows an automated extraction of the maximum eye-region temperature from each image frame, followed by further steps of manual data filtering removing the most common sources of errors (motion blur, blinking). This protocol provides a time series of eye-region temperature with a fine temporal resolution that allows us to study the dynamics of the stress response non-invasively. Further work needs to demonstrate the usefulness of the method to assess stress, for instance to investigate whether eye-region temperature response is proportional to the strength of the stressor. If this can be confirmed, it will provide a valuable alternative method of stress assessment in animals and will be useful to a wide range of researchers from ecologists, conservation biologists, physiologists to animal welfare researchers.

There is a need for a non-invasive assessment of stress. This paper describes a simple protocol using thermal imaging to detect a significant response in eye-region temperature in wild blue tits to a mild acute stressor.

التصوير الحراري لدراسة الإجهاد غير جراحية في طيور بلا حدود

Stress, a central concept in biology, describes a suite of emergency responses to challenges. Among other responses, stress leads to a change in blood ...

Neuroscience

A Novel Method: Super-selective Adrenal Venous Sampling

Primary aldosteronism (PA) and subclinical Cushing&#39;s syndrome (SCS) are conditions in which the adrenal glands autonomously produce excessive amounts of aldosterone and cortisol, respectively. The conventional adrenal venous sampling (cAVS) method collects blood samples from both adrenal central veins and is useful for identifying the laterality of excess hormone production in a unilateral lesion(s), as documented in PA cases. In cAVS, plasma cortisol concentrations (PCCs) are used to normalize plasma aldosterone concentrations (PACs). A novel &#34;super-selective&#34; adrenal venous sampling (ssAVS) method was developed using a micro-catheter, which collects blood samples from adrenal tributary veins (TVs). PACs in ssAVS samples do not require PCC normalization because samples contain a limited amount of systemic venous blood, if any. The ssAVS method enabled segmental lesion(s) to be detected in both adrenal glands, which may be treated by bilateral adrenalectomy, thereby sparing lesion-free segment(s). Right and left adrenals typically have three TVs each, i.e., the superior, lateral, and inferior TVs in the right adrenal as well as the superior-median, superior-lateral, and lateral TVs in the left adrenal. In the ssAVS method, specific parent catheters and a technique to handle them are required, and have been described herein. Furthermore, ssAVS results from three cases of PA are presented: bilateral aldosterone-producing adenoma (APA) (Case #1), left APA and right possible cortisol-producing adenoma causing SCS (Case #2), and idiopathic hyperaldosteronism in which bilateral adrenal segments produced excessive amounts of aldosterone (Case #3). The ssAVS method is not difficult for expert angiographers, and, thus, is recommended worldwide to treat PA cases for which cAVS does not represent a viable surgical treatment option.

&#39;Super-selective&#39; adrenal venous sampling (ssAVS, also called segmental adrenal venous sampling: sAVS)&#160;was performed using a micro-catheter to identify adrenal segment(s) that produce excessive amounts of hormones. The ssAVS technique was described, cases in which adrenal segmental lesion(s) were identified by ssAVS were presented, and the usefulness of ssAVS in future adrenal research was discussed.

أسلوب رواية: انتقائية فائقة الغدة الكظرية وريدي أخذ العينات

Primary aldosteronism (PA) and subclinical Cushing&#39;s syndrome (SCS) are conditions in which the adrenal glands autonomously produce excessive amounts ...

Medicine

A Chemical Screening Procedure for Glucocorticoid Signaling with a Zebrafish Larva Luciferase Reporter System

Glucocorticoid stress hormones and their artificial derivatives are widely used drugs to treat inflammation, but long-term treatment with glucocorticoids can lead to severe side effects. Test systems are needed to search for novel compounds influencing glucocorticoid signaling in vivo or to determine unwanted effects of compounds on the glucocorticoid signaling pathway. We have established a transgenic zebrafish assay which allows the measurement of glucocorticoid signaling activity in vivo and in real-time, the GRIZLY assay (Glucocorticoid Responsive In vivo Zebrafish Luciferase activitY). The luciferase-based assay detects effects on glucocorticoid signaling with high sensitivity and specificity, including effects by compounds that require metabolization or affect endogenous glucocorticoid production. We present here a detailed protocol for conducting chemical screens with this assay. We describe data acquisition, normalization, and analysis, placing a focus on quality control and data visualization. The assay provides a simple, time-resolved, and quantitative readout. It can be operated as a stand-alone platform, but is also easily integrated into high-throughput screening workflows. It furthermore allows for many applications beyond chemical screening, such as environmental monitoring of endocrine disruptors or stress research.

We describe the procedure and data analysis of a chemical screening system for glucocorticoid stress hormone signaling using zebrafish larvae: the Glucocorticoid Responsive In vivo Zebrafish Luciferase activitY (GRIZLY) assay. The assay sensitively and specifically detects effects on glucocorticoid signaling by compounds that require metabolization or affect endogenous glucocorticoid production.

Glucocorticoid stress hormones and their artificial derivatives are widely used drugs to treat inflammation, but long-term treatment with glucocorticoids ...

Extraction and Analysis of Cortisol from Human and Monkey Hair

The stress hormone cortisol (CORT) is slowly incorporated into the growing hair shaft of humans, nonhuman primates, and other mammals. We developed and validated a method for CORT extraction and analysis from rhesus monkey hair and subsequently adapted this method for use with human scalp hair. In contrast to CORT &#34;point samples&#34; obtained from plasma or saliva, hair CORT provides an integrated measure of hypothalamic-pituitary-adrenocortical (HPA) system activity, and thus physiological stress, during the period of hormone incorporation. Because human scalp hair grows at an average rate of 1 cm/month, CORT levels obtained from hair segments several cm in length can potentially serve as a biomarker of stress experienced over a number of months.
In our method, each hair sample is first washed twice in isopropanol to remove any CORT from the outside of the hair shaft that has been deposited from sweat or sebum. After drying, the sample is ground to a fine powder to break up the hair&#39;s protein matrix and increase the surface area for extraction. CORT from the interior of the hair shaft is extracted into methanol, the methanol is evaporated, and the extract is reconstituted in assay buffer. Extracted CORT, along with standards and quality controls, is then analyzed by means of a sensitive and specific commercially available enzyme immunoassay (EIA) kit. Readout from the EIA is converted to pg CORT per mg powdered hair weight. This method has been used in our laboratory to analyze hair CORT in humans, several species of macaque monkeys, marmosets, dogs, and polar bears. Many studies both from our lab and from other research groups have demonstrated the broad applicability of hair CORT for assessing chronic stress exposure in natural as well as laboratory settings.

Cortisol (CORT) accumulates in the growing hair shaft of humans and nonhuman primates. We describe methods for extracting and analyzing hair CORT with high precision and sensitivity. Measurement of hair CORT is particularly well-suited for assessing chronic stress over periods of weeks to months.

استخراج وتحليل الكورتيزول من الإنسان والقرد الشعر

The stress hormone cortisol (CORT) is slowly incorporated into the growing hair shaft of humans, nonhuman primates, and other mammals. We developed and ...

Confocal Microscopy to Measure Three Modes of Fusion Pore Dynamics in Adrenal Chromaffin Cells

Dynamic fusion pore opening and closure mediate exocytosis and endocytosis and determine their kinetics. Here, it is demonstrated in detail how confocal microscopy was used in combination with patch-clamp recording to detect three fusion modes in primary culture bovine adrenal chromaffin cells. The three fusion modes include 1) close-fusion (also called kiss-and-run), involving fusion pore opening and closure, 2) stay-fusion, involving fusion pore opening and maintaining the opened pore, and 3) shrink-fusion, involving shrinkage of the fusion-generated &#937;-shape profile until it merges completely at the plasma membrane.
To detect these fusion modes, the plasma membrane was labeled by overexpressing mNeonGreen attached with the PH domain of phospholipase C &#948; (PH-mNG), which binds to phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate (PtdIns(4,5)P2) at the cytosol-facing leaflet of the plasma membrane; vesicles were loaded with the fluorescent false neurotransmitter FFN511 to detect vesicular content release; and Atto 655 was included in the bath solution to detect fusion pore closure. These three fluorescent probes were imaged simultaneously at ~20-90 ms per frame in live chromaffin cells to detect fusion pore opening, content release, fusion pore closure, and fusing vesicle size changes. The analysis method is described to distinguish three fusion modes from these fluorescence measurements. The method described here can, in principle, apply to many secretory cells beyond chromaffin cells.

This protocol describes a confocal imaging technique to detect three fusion modes in bovine adrenal chromaffin cells. These fusion modes include 1) close-fusion (also called kiss-and-run), involving fusion pore opening and closure, 2) stay-fusion, involving fusion pore opening and maintaining the opened pore, and 3) shrink-fusion, involving fused vesicle shrinkage.

المجهر البؤري لقياس ثلاثة أنماط من ديناميكيات مسام الانصهار في خلايا الكرومافين الكظرية

Dynamic fusion pore opening and closure mediate exocytosis and endocytosis and determine their kinetics. Here, it is demonstrated in detail how confocal ...

Primary Culture of Rat Adrenocortical Cells and Assays of Steroidogenic Functions

The hormone which the adrenal cortex secretes is vital for animals against stress and diseases. The method described here is the procedure of primary cultured rat adrenal cells and related functional assays (immunofluorescence staining of lipid droplet surface protein, as well as corticosterone analysis). Unlike an in vivo model, the variation of interexperiments in adrenal monolayer cultures is less and the experimental condition is easy to control. Besides, the source of rats is also more stable than other animals, like bovine ones. There are also several human adrenal cell lines (NCI-H295, NCI-H295R, SW13, etc.) that can be used in adrenal studies. However, the steroid production of these lines will still be influenced by numerous factors, which include serum lot number, passage number, mutant/loss of distinct genes, etc. Except for lacking 17&#945;-hydroxylase, the primary culture of rat adrenocortical cells is a better and more convenient technique for studying adrenal physiology. In summary, primary rat adrenal cultures could be a good in vitro platform for researchers to investigate the mechanisms of the reagent of interest in the adrenal gland system.

The hormone secreted by the adrenal cortex is vital for animals against stress and diseases. Here, we present a protocol to culture the primary rat adrenal cells. It could be a good in vitro platform for investigating the mechanisms of the reagent of interest in adrenal steroidogenesis and lipid biosynthesis.

الثقافة الأولية من خلايا الفئران البطاني وفحوصات لوظائف ستيرويدوجينيك

The hormone which the adrenal cortex secretes is vital for animals against stress and diseases. The method described here is the procedure of primary ...