وأيد هذا البحث من قبل المعاهد الوطنية للصحة (NIH) منحة R01 EB008268.

1. تصنيع رقاقة 12 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل اثنين من لويحات الكريات 690R Zeonex: توزيع 8-9 غرام الكريات Zeonex بالتساوي في وسط لوحة معدنية، سخن على الصحافة ساخنة C ° 198 لمدة 5 دقائق، ثم الضغط ببطء إلى 2،500 رطل لمدة 5 دقائق. لإكمال هذه الخطوة، استخدمنا الصحافة الساخنة كارفر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> زخرف قناة ميكروفلويديك في اللوحة مع العفن الايبوكسي. وترد تفاصيل عن تصنيع القالب في مكان آخر 12 (قناة التصميم في الشكل 2B): وضع واحد على لوحة القالب الايبوكسي؛ سخن لهم على الصحافة ساخنة عند 157 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة ومن ثم ممارسة الضغط ببطء إلى 1،000 رطل لمدة 10 دقيقة . إزالة البلاك من القالب باليد أو باستخدام ملقط قبل أن يبرد. (ملاحظة: ارتداء القفازات الحرارية خلال هذه الخطوة.) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حفر ثقوب في الشريحة تنقش على مدخل، منفذ النفايات، ومنفذ للقناة ميكروفلويديك. استخدمنا بقطر 1،25 ملمالعطر قمة الحفر لجعل الثقوب الثلاثة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السندات رقاقة تنقش مع آخر لوحة (في الأعلى): يغسل مع رقائق IPA، ريبونوكلياز بعيدا والماء منزوع الأيونات في تسلسل؛ على الصحافة تسخين الهواء الجاف وسخن لهم في C ° 131 لمدة 10 دقيقة ثم اضغط في 350 رطل لآخر 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق Nanoports في مدخل، والنفايات، وباستخدام المنافذ منفذ على حدة JB ولد الايبوكسي؛ علاج لمدة 15 إلى 24 ساعة وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف مع 50 قناة SPE بعيدا ريبونوكلياز ميكرولتر، ثم مع 100 ميكرولتر المياه نوكلياز مجانا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل قناة SPE مع 4 ميكرولتر من الحل تطعيم (ميثاكريلات الميثيل مع 3٪ ث / ت بينزفينون) ثم تشعبي في ميتاكريليت من احتضان لمدة 10 دقيقة في فرن 365 نانومتر الأشعة فوق البنفسجية تحت الطول الموجي للأشعة فوق البنفسجية و 2،000 ميغا جول 2 / سم. إزالة الحل المتبقية ترقيع مع الفراغ. كنا الجدار الفراغ. للحصول على أفضل النتائج، يجب استخدام حل الطازجة. فإنه عادة ما يكون مقبولا، ولكن، لتخزينأعد حل في C ° 4 لمدة تصل إلى أسبوع واحد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل الحل العمود SPE (جميع٪ V / V): 16٪ dimethacrylate الإيثيلين، 24٪ بوتيل ميتاكريليت، 42٪ 1-dodecanol، سيكلوهيكسانول 18٪، وإضافة 1٪ 2-dimethylamino-4-(ميثيل phenylamino)-الفينول كما البادئ الصور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إخراج نفس الحجم من السيليكا المجهرية الحل هو الحل العمود SPE (لجعل مزيج 1:1)، وذلك في يجف تماما 70 درجة مئوية خلال الليل في فرن الفراغ. تفريق بيليه بالنقر على أنبوب مع إغلاق الغطاء. إضافة الحل العمود SPE في أنبوب السيليكا المكروية المجففة ودوامة لخلط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل 4 ميكرولتر من الحل SPE في نفس القناة وتشعبي ثم من قبل أشعة فوق البنفسجية لمدة 2.5 دقيقة. ثم، والوجه أكثر من شريحة وأشرق لمدة دقيقة 2.5. يجب أن يكون العمود SPE بلمرة يكون صلبة غير شفافة بيضاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل القناة مع 500 ميكرولتر من الميثانول بنسبة 100٪ لشطف بعيدا المواد المتفاعلة الزائدة. هذا يغسل كما يزيل داخل البوليمر بوالمذيبات rogenic، وبالتالي خلق بنية المسام المفتوحة للعمود SPE عندما تجفف في الظروف المحيطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق اثنين الأغشية الرقيقة سخانات إلى الجزء السفلي من الشريحة مع الشريط ناقلة للحرارة. الجانبين من سخانات تحتاج إلى أن تتماشى مع حافة واسعة لقنوات تمسخ والصلب بشكل منفصل (انظر الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انتهت مكان خمس المزدوجات الحرارية في رقاقة من خلال قنوات القتلى الجانب المفتوح من كل رقاقة (انظر الشكل 2B). والمزدوجات الحرارية البقاء في هذه القنوات عبر الصحافة مناسبا. واستخدم الشريط لإصلاح مزيد من موقع المزدوجات الحرارية. </li></ol> 2. طريقة استخراج الصلبة المرحلة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 96 ميكرولتر من الايثانول 70٪ مع الماء DEPC المعالجة وتعقيمها (منزوع الأيونات أو تصفيتها ميليبور). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 4 ميكرولتر من 25X تأمين RNA إلى 96 ميكرولتر من الايثانول 70٪ في أنبوب واحد، وتكرار نفس الخليط مع الإيثانول بنسبة 100٪ في أنبوب منفصل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 300ميكرولتر من العازلة قناة عن طريق خلط ما يلي: 75 ميكرولتر من 6 ثيوسيانات الجوانيدين M (GuSCN)، 150 ميكرولتر من بروبانول-2، 63 ميكرولتر من المياه مجانا نوكلياز، و 12 ميكرولتر من 25X RNA الآمنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 312 ميكرولتر من العازلة تحلل من خلط: 100 ميكرولتر من GuSCN M 6، 200 ميكرولتر من بروبانول-2، و 12 ميكرولتر 25X RNA الآمنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسخين الايثانول 70٪، 100٪ الإيثانول العازلة القناة، ومخازن تحلل في C ° 60 لمدة 10-20 دقيقة لتنشيط الآمنة RNA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتتوازن قناة ميكروفلويديك، تشغيل المخزن المؤقت القناة من خلال قناة SPE بمعدل تدفق قدره 0.8 مل / ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ذوبان الجليد سريعة عينة الاختبار في VTM في C ° 37 في حمام مائي، وإزالة عينة فورا من الحمام المائي بمجرد إذابة ذلك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي في 13000 دورة في الدقيقة عينة لمدة 10 دقيقة، ونقل 100 ميكرولتر من طاف إلى 300 ميكرولتر من المخزن المؤقت تحلل. استكمال الخليط بإضافة 6 ميكرولتر من 1 ميكروغرام / ميكرولتر RNA الناقل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دوامة لخلط، وبعد زيادة ونقصان لل5 ثانية، تحميل المحللة بأكمله إلى حقنة سم مكعب بالتركيبة لوك 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل حلالة من خلال قناة SPE بمعدل تدفق قدره 0.8 مل / ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل قناة SPE مع 100 ميكرولتر من الايثانول 70٪، تليها الإيثانول ميكرولتر 100 of100٪ في 1 مل / ساعة. (هناك 50 قتيلا حجم ميكرولتر في الطرف المحاقن التي لن تحصل على دفع بها، في الواقع حتى بعد 50 ميكرولتر يمر القناة.) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع حقنة فارغة في علامة مل 0.5 و دفع الهواء من خلال قناة لتجف ذلك في 1 مل / ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل 67،5 ميكرولتر من نوكلياز خالية المياه من خلال القناة لأزل الأحماض النووية محددة عند 0.5 مل / ساعة، وجمع 13،5 ميكرولتر من nanoport في ميناء النفايات. (وفقدان السوائل ويرجع ذلك إلى حجم ميكرولتر 54 قتيلا في الطرف حقنة وقناة SPE). </li></ol> 3. RT-PCR <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 36،5 ميكرولتر من مزيج ماجستير RT-PCR خلال الخطوة الهواء الجاف (2.12) باستخدام الكواشف في مجموعات QIAGEN RT-PCR OneStep. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل RT-PCR الكاشف في nanoport في ميناء النفايات، وتخلط مع RNA للحصول على 50 ميكرولتر RT-PCR التالية رد فعل: 13.5 ميكرولتر مزال RNA في الماء مجانا نوكلياز، 4 ميكرولتر مزيج إنزيم RT-PCR، 10 ميكرولتر حل س، 10 μl1X 1 الخطوة العازلة، 2 ميكرولتر 25 ملم MgCl 2، 1 ميكرولتر التمهيدي 50 ميكرومتر إلى الأمام 5&#39;-GAC CRA TCC TGT CAC CTC TGA &#39;C-3، 1 ميكرولتر التمهيدي ميكرومتر 50 العكسي 5&#39;-AGG GCA TTY TGG ACA AAK CGT CTA-3 &quot;(2)، dNTP ميكرولتر، 0.75 ميكرولتر 1.0٪ W / V BSA، 0.73 ميكرولتر PEG8000 و5،02 المياه نوكلياز ميكرولتر مجانا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل الخليط RT-PCR في قناة RT من فراغ لطيف (كنا الفراغ الجدار) وختم Nanoport مع تركيب مغلقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق 35 V لسخان 1. الحفاظ على الكواشف في قناة RT لمدة 30 دقيقة بعد سخان 1 equilibrates في C. ° 50 الحفاظ على الكواشف في قناة RT لمدة 15 دقيقة بعد equilibrates 1 سخان في 95 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق V 27 إلى 1 و 50 سخان V لسخان 2، الانتظار حوالي ثلاث دقائق أو حتى equilibrates 1 سخان في 60 و ديز؛ C وسخان 2 equilibrates في 95 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دفع الكواشف في القناة PCR عند 0.5 ميكرولتر / دقيقة. وينبغي أن يستغرق حوالي 20 دقيقة لالكواشف لتدفق من خلال قناة اعوج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كما يجعل من العينة إلى نهاية القناة اعوج، وجمع المنتجات PCR عند مخرج باستخدام pipettor بحجم مناسب والإكراميات. </li></ol> 4. PCR المنتجات كشفها <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نحن استخدام DNA اجيلنت حساسية عالية في اختبار للكشف عن المنتجات. لتشغيل هذا الاختبار إخراج DNA اجيلنت حساسية عالية كيت من الثلاجة 30 دقيقة قبل إجراء الاختبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على Bioanalyzer وفتح البرنامج الخبراء 2100. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل ميكرولتر 1 من المنتجات PCR في الاختبار واتبع بروتوكول اجيلنت ( <a href="http://gcf.pbrc.edu/docs/Agilent/Agilent%20Manual.pdf" target="_blank">http://gcf.pbrc.edu/docs/Agilent/Agilent 20Manual.pdf٪</a> ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل وتسجيل البيانات. </li></ol>

<ol>
	<li>Nicholls, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pandemic+Influenza:+The+Inside+Story.">Pandemic Influenza: The Inside Story.</a> PLoS Biol. 4, (2006).</li><li>Wenzel, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analytical+performance+determination+and+clinical+validation+of+the+novel+roche+realtime+ready+influenza+A/H1N1+detection+set.">Analytical performance determination and clinical validation of the novel roche realtime ready influenza A/H1N1 detection set.</a> Journal of Clinical Microbiology. 48, 3088-3094 (2010).</li><li>Chan, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analytical+sensitivity+of+rapid+influenza+antigen+detection+tests+for+swine-origin+influenza+virus+(H1N1.">Analytical sensitivity of rapid influenza antigen detection tests for swine-origin influenza virus (H1N1.</a> Journal of Clinical Virology: the. 45, 205-207 (2009).</li><li>Ginocchio, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+multiple+test+methods+for+the+detection+of+the+novel+2009+influenza+A+(H1N1)+during+the+New+York+City+outbreak.">Evaluation of multiple test methods for the detection of the novel 2009 influenza A (H1N1) during the New York City outbreak.</a> Journal of. 45, 191-195 (2009).</li><li>Aeron, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+influenza+rapid+point-of-care+tests+in+the+detection+of+swine+lineage+A(H1N1)+influenza+viruses.">Performance of influenza rapid point-of-care tests in the detection of swine lineage A(H1N1) influenza viruses.</a> Influenza and Other Respiratory Viruses. 3, 171-176 (2009).</li><li>Takahashi, H., Otsuka, Y., Patterson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+tests+for+influenza+and+other+respiratory+viruses:+determining+performance+specifications+based+on+clinical+setting.">Diagnostic tests for influenza and other respiratory viruses: determining performance specifications based on clinical setting.</a> Journal of Infection and Chemotherapy. 16, 155-161 (2010).</li><li>Selvaraju, S. B., Selvarangan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+Three+Influenza+A+and+B+Real-Time+Reverse+Transcription-PCR+Assays+and+a+New+2009+H1N1+Assay+for+Detection+of+Influenza+Viruses.">Evaluation of Three Influenza A and B Real-Time Reverse Transcription-PCR Assays and a New 2009 H1N1 Assay for Detection of Influenza Viruses.</a> Journal of Clinical Microbiology. 48, 3870-3875 (2009).</li><li>Northrup, M. A., Ching, M. T., White, R. M., Watson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Transducer'93, seventh international conference on solid state sensors and actuators. , 924-926 (1993).</li><li>Bhattacharyya, A., Klapperich, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermoplastic+microfluidic+device+for+on-chip+purification+of+nucleic+acids+for+disposable+diagnostics.">Thermoplastic microfluidic device for on-chip purification of nucleic acids for disposable diagnostics.</a> Analytical Chemistry. 78, 788-792 (2006).</li><li>Cao, Q., Kim, M. -. C., Klapperich, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plastic+microfluidic+chip+for+continuous-flow+polymerase+chain+reaction:+Simulations+and+experiments.">Plastic microfluidic chip for continuous-flow polymerase chain reaction: Simulations and experiments.</a> Biotechnology Journal. 6, 177-184 (1002).</li><li>Cao, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+Chip+for+Molecular+Amplification+of+Influenza+A+RNA+in+Human+Respiratory+Specimens.">Microfluidic Chip for Molecular Amplification of Influenza A RNA in Human Respiratory Specimens.</a> PLoS ONE. 7, e33176 (2012).</li><li>R&#229;dstr&#246;m, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+Characterization+of+PCR-Inhibitory+Components+in+Blood+Cells.">Purification and Characterization of PCR-Inhibitory Components in Blood Cells.</a> J. Clin. Microbiol. 39, 485-493 (2001).</li><li>Boddinghaus, B., Wichelhaus, T. A., Brade, V., Bittner, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Removal+of+PCR+Inhibitors+by+Silica+Membranes:+Evaluating+the+Amplicor+Mycobacterium+tuberculosis+Kit.">Removal of PCR Inhibitors by Silica Membranes: Evaluating the Amplicor Mycobacterium tuberculosis Kit.</a> J. Clin. Microbiol. 39, 3750-3752 (2001).</li><li>Andreasen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+microRNA+quantification+in+total+RNA+from+clinical+samples.">Improved microRNA quantification in total RNA from clinical samples.</a> Methods. 50, S6-S9 (2010).</li></ol>

وقد أعلن الكتاب لا المصالح المتنافسة المالية.

قدم طريقة التشخيص هنا أثبتت قدرة على شريحة متكاملة من البلاستيك ميكروفلويديك لتضخيم أنفلونزا A RNA من عينات المرضى مع خصوصية عالية وحد اكتشاف أدنى مستوى في 13 قمنا بتصميم هذه الشريحة لنقطة المحتملة للتجارب الرعاية: (أ) درجة الحرارة وfluidic تم تبسيط السيطرة، (ب) هو رق?...

تم الإبلاغ عن حالة وفاة الملايين من خلال أوبئة الأنفلونزا ثلاثة من القرن 20th 1. وعلاوة على ذلك، أعلن وباء أنفلونزا أحدث من منظمة الصحة العالمية (WHO) 2 في عام 2009، واعتبارا من أغسطس 1، 2010، 18449 حالة وفاة تم الإبلاغ من قبل منظمة الصحة العالمية 3. أظهرت هذا الوباء مرة أخرى عبء ارتفاع الأمراض المعدية، والحاجة إلى الكشف السريع والدقيق للأنفلونزا لتمكين سريع تأكيد المرض، حسب استجابة الصحة العامة والعلاج الفعال 4. هناك العديد من الطرق المستخدمة على نطاق واسع لتشخيص الأنفلونزا، وتشمل هذه المناعية السريع، اختبار مستضد مباشرة الفلورسنت (DFA) وأساليب الثقافة الفيروسية. المناعية السريع تفتقر بشكل كبير حساسية 5-8، في حين أن الآخر طريقتين هي كثيفة العمالة وتستغرق وقتا طويلا 9. الاختبارات الجزيئية توفر مزايا متعددة بما في ذلك دورانها قصيرة sensit، الأوانivity، وأعلى نوعية. وقد تم العديد من الكيانات التجارية تعمل من أجل الاختبارات الجزيئية بسرعة (وتسمى أيضا اختبارات الحامض النووي أو ناتس) للأمراض المعدية، ويكون عدة فحوصات الانفلونزا في خطوط الأنابيب الخاصة بهم. لكن معظمها تتطلب خارج رقاقة إعداد العينات. أي من التعديلات مختبر تحسن سريري (CLIA) تنازلت الاختبارات الجزيئية دمج إعداد العينات في خرطوشة الفحص أو وحدة نمطية. المختبر على واحد في رقاقة التكنولوجيا تلعب دورا هاما في تطوير أجهزة اختبار نقطة من الرعاية. بعد إدخال شريحة PCR الأولى في 1993 10، وقد وضعت العديد من الجهود في تطوير رقائق النووي اختبار الحمض. ومع ذلك، سوى عدد قليل من هذه دمجت إعداد العينات الخام مع التضخيم المصب. لقد أثبتنا سابقا التصغير من عمود مرحلة استخراج الصلبة (SPE) في رقاقة ميكروفلويديك البلاستيك 11 و تطويرمنة وتعظيم الاستفادة من شريحة تدفق مستمر PCR 12. هنا، ونحن تمديد العمل السابق لدمج SPE مع RT PCR والخطوات في شريحة واحدة لإثبات التشخيص السريري وقدرتها على تضخيم الأحماض النووية من مريض مسحات (NP) والبلعوم aspirates.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف / المواد </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td></tr><tr><td> 1-dodecanol </td><td> سيغما الدريخ، سانت لويس، MO </td><td> 443816-500G </td></tr><tr><td> 2،2-Dimethoxy-2-phenylacetophenone </td><td> سيغما الدريخ، سانت لويس، MO </td><td> 196118-50G </td></tr><tr><td> 2100 Bioanalyzer </td><td> اجيلنت تكنولوجيز، سانتا كلارا، كاليفورنيا </td><td> G2943CA </td></tr><tr><td> 2-بروبانول </td><td> سيغما الدريخ، سانت لويس، MO </td><td> 19516 </td></tr><tr><td> بينزفينون </td><td> سيغما الدريخ، سانت لويس، MO </td><td> 239852-50G </td></tr><tr><td> BSA </td><td> الحرارية فيشر العلمية، pittsburge، PA </td><td> A7979-50ML </td></tr><tr><td> بوتيل ميتاكريليت </td><td> سيغما الدريخ، سانت لويس، MO </td><td> 235865-100 مل </td></tr><tr><td> الناقل RNA </TD&gt; <td> QIAGEN، فالنسيا، CA </td><td> 1017647 </td></tr><tr><td> سيكلوهيكسانول </td><td> سيغما الدريخ، سانت لويس، MO </td><td> 105899-1L </td></tr><tr><td> الإيثانول </td><td> سيغما الدريخ، سانت لويس، MO </td><td> E7023 </td></tr><tr><td> الاثيلين dimethacrylate </td><td> سيغما الدريخ، سانت لويس، MO </td><td> 335861 </td></tr><tr><td> جلايكول الإثيلين dimethacrylate </td><td> سيغما الدريخ، سانت لويس، MO </td><td> 335681-100ML </td></tr><tr><td> الزجاج حقنة 250 ميكرولتر </td><td> هاملتون، رينو، NV </td><td> 81127 </td></tr><tr><td> الجوانيدين ثيوسيانات </td><td> سيغما الدريخ، سانت لويس، MO </td><td> 50981 </td></tr><tr><td> عالية الحساسية كيت DNA </td><td> اجيلنت تكنولوجيز، سانتا كلارا، كاليفورنيا </td><td> 5067-4626 </td></tr><tr><td> الصحافة الساخنة </td><td> كارفر، اباش، IN </td><td> 4386 </td></tr><tr><td> JB ولد إيبوكسى </td><td> ماكماستر-CARR، إلمهورست، IL </td><td> 7605A11 </td></tr><tr><td> بالتركيبة-لوك المحاقن </td><td> BD-الطبية، فرانكلين البحيرات، NJ </td><td> 309628 </td></tr><tr><td> المغنيسيوم كلوريد </td><td> الحرارية فيشر العلمية، pittsburge، PA </td><td> AB-0359 </td></tr><tr><td> الميثانول </td><td> سيغما الدريخ، سانت لويس، MO </td><td> 494437 </td></tr><tr><td> ميتاكريليت الميثيل </td><td> سيغما الدريخ، سانت لويس، MO </td><td> M55909 </td></tr><tr><td> Nanoport </td><td> أبتشيرتش العلمية </td><td> N-333-01 </td></tr><tr><td> Nanoport تركيب </td><td> أبتشيرتش العلمية </td><td> F-120x </td></tr><tr><td> نوكلياز مجانا الماء </td><td> الحرارية فيشر العلمية، pittsburge، PA </td><td> PR-P1193 </td></tr><tr><td> OneStep RT-PCR عدة </td><td> QIAGEN، فالنسيا، CA </td><td> 210210 </td></tr><tr><td> PEG8000 </td><td> سيغما الدريخ، سانت لويس، MO </td><td> 41009 </td></tr&gt; <tr><td> إمدادات الطاقة </td><td> VWR، رادنور، PA </td><td> 300V </td></tr><tr><td> ريبونوكلياز بعيدا </td><td> سيغما الدريخ، سانت لويس، MO </td><td> 83931-250ML </td></tr><tr><td> RNASecure </td><td> النظم البيولوجية التطبيقية، فوستر سيتي، كاليفورنيا </td><td> AM7005 </td></tr><tr><td> السيليكا المجهرية </td><td> Polysciences، ارينغتون، PA </td><td> 24324-15 </td></tr><tr><td> حقنة مضخة </td><td> جهاز هارفارد، Holliston، MA </td><td> HA2000P/10 </td></tr><tr><td> ناقلة للحرارة الشريط </td><td> ماكماستر، كار، إلمهورست، IL </td><td> 6838A11 </td></tr><tr><td> المزدوجة الحرارية </td><td> أوميغا الهندسية، ستامفورد، CT </td><td> 5SRTC-TT-J-40-36 </td></tr><tr><td> الأغشية الرقيقة سخانات </td><td> مينكو، مينيابوليس، MN </td><td> HK5166R529L12A </td></tr><tr><td> الأشعة فوق البنفسجية Crosslinker </td><td> UPV، اليابسة، CA </td><td> CL-1000 </td></tr><tr><td> Zeonex </td> &lt;TD&gt; زيون المواد الكيميائية، لويزفيل، KY </td><td> 690R </td></tr></tbody></table>

microfluidic chip fabrication and method to detect influenza

التشخيص السريع والفعال يلعب دورا هاما في السيطرة على الأمراض المعدية من خلال تمكين الإدارة الفعالة للمريض والعلاج. هنا، نقدم متكاملة رقاقة ميكروفلويديك بالحرارة مع القدرة على تضخيم الأنفلونزا الناجمة عن الفيروس في مسحات المريض (NP) والبلعوم aspirates. عند تحميل عينة المريض، الجهاز ميكروفلويديك يحمل بالتسلسل من على الرقاقة تحلل الخلايا وتنقية RNA والخطوات تركيز في المرحلة الصلبة استخراج (SPE)، النسخ العكسي (RT) وتفاعل البلمرة سلسلة (PCR) في RT-PCR الدوائر، على التوالي. يتم تنفيذ نقطة النهاية الكشف باستخدام Bioanalyzer خارج رقاقة (اجيلنت تكنولوجيز، سانتا كلارا، كاليفورنيا). للأجهزة الطرفية، استخدمنا مضخة محقنة واحدة لدفع كاشف والعينات، في حين تم استخدام جهازي سخانات رقيقة مثل مصادر الحرارة لRT PCR والغرف. تم تصميم رقاقة لتكون طبقة واحدة ومناسبة لتصنيع إنتاجية عالية للحد من fabricatiفي الوقت المحدد والتكلفة. رقاقة ميكروفلويديك توفر منصة لتحليل طائفة واسعة من الفيروسات والبكتيريا، وقلة فقط من التغييرات في التصميم كاشف اللازمة لكشف مسببات الأمراض جديد لسعر الفائدة.

<html> ويرد نتيجة نموذجية في الشكل 3 لأنفلونزا A المصابة عينة غسل البلعوم. نظرا لكميات مختلفة من فيروس الانفلونزا في كل عينة مريض، فإن تركيز النهائي من الناتج PCR تختلف. وينبغي أن يكون نتيجة جيدة لديك انخفاض مستوى الضجيج، واثنين من قمم واضحة سلم (35 و10380 سنة مضت) وذر?...

Watch this Scientific Journal Video about Microfluidic Chip Fabrication and Method to Detect Influenza at JoVE.com

Microfluidic Chip Fabrication and Method to Detect Influenza

وقد تم تطوير رقاقة متكاملة بالحرارة ميكروفلويديك لاستخدامها بوصفها التشخيص الجزيئي. رقاقة يؤدي استخلاص الحمض النووي، الناسخ العكسي، وPCR. يتم وصف طرق لانتاج وتشغيل الشريحة.

ميكروفلويديك تصنيع المعالج وطريقة للكشف عن الأنفلونزا

Fast  and effective diagnostics play an important role in controlling infectious  disease by enabling effective patient management and treatment. Here, we ...

microfluidic-chip-fabrication-and-method-to-detect-influenza

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Bioengineering

14.9K Views.  Boston University. وقد تم تطوير رقاقة متكاملة بالحرارة ميكروفلويديك لاستخدامها بوصفها التشخيص الجزيئي. رقاقة يؤدي استخلاص الحمض النووي، الناسخ العكسي، وPCR. يتم وصف طرق لانتاج وتشغيل الشريحة.

Video: Microfluidic Chip Fabrication and Method to Detect Influenza

Fluorescence detection methods for microfluidic droplet platforms

The development of microfluidic platforms for performing chemistry and biology has in large part been driven by a range of potential benefits that accompany system miniaturisation. Advantages include the ability to efficiently process nano- to femoto- liter volumes of sample, facile integration of functional components, an intrinsic predisposition towards large-scale multiplexing, enhanced analytical throughput, improved control and reduced instrumental footprints.1
In recent years much interest has focussed on the development of droplet-based (or segmented flow) microfluidic systems and their potential as platforms in high-throughput experimentation.2-4 Here water-in-oil emulsions are made to spontaneously form in microfluidic channels as a result of capillary instabilities between the two immiscible phases. Importantly, microdroplets of precisely defined volumes and compositions can be generated at frequencies of several kHz. Furthermore, by encapsulating reagents of interest within isolated compartments separated by a continuous immiscible phase, both sample cross-talk and dispersion (diffusion- and Taylor-based) can be eliminated, which leads to minimal cross-contamination and the ability to time analytical processes with great accuracy. Additionally, since there is no contact between the contents of the droplets and the channel walls (which are wetted by the continuous phase) absorption and loss of reagents on the channel walls is prevented.
Once droplets of this kind have been generated and processed, it is necessary to extract the required analytical information. In this respect the detection method of choice should be rapid, provide high-sensitivity and low limits of detection, be applicable to a range of molecular species, be non-destructive and be able to be integrated with microfluidic devices in a facile manner. To address this need we have developed a suite of experimental tools and protocols that enable the extraction of large amounts of photophysical information from small-volume environments, and are applicable to the analysis of a wide range of physical, chemical and biological parameters. Herein two examples of these methods are presented and applied to the detection of single cells and the mapping of mixing processes inside picoliter-volume droplets. We report the entire experimental process including microfluidic chip fabrication, the optical setup and the process of droplet generation and detection.

Droplet-based microfluidic platforms are promising candidates for high throughput experimentation since they are able to generate picoliter, self-compartmentalized vessels inexpensively at kHz rates. Through integration with fast, sensitive and high resolution fluorescence spectroscopic methods, the large amounts of information generated within these systems can be efficiently extracted, harnessed and utilized.

طرق الكشف عن منصات مضان الحبرية ميكروفلويديك

The development of microfluidic platforms for performing chemistry and biology has in large part been driven by a range of potential benefits that ...

Microfluidic Picoliter Bioreactor for Microbial Single-cell Analysis: Fabrication, System Setup, and Operation

In this protocol the fabrication, experimental setup and basic operation of the recently introduced microfluidic picoliter bioreactor (PLBR) is described in detail. The PLBR can be utilized for the analysis of single bacteria and microcolonies to investigate biotechnological and microbiological related questions concerning, e.g.&#160;cell growth, morphology, stress response, and metabolite or protein production on single-cell level. The device features continuous media flow enabling constant environmental conditions for perturbation studies, but in addition allows fast medium changes as well as oscillating conditions to mimic any desired environmental situation. To fabricate the single use devices, a silicon wafer containing sub micrometer sized SU-8 structures served as the replication mold for rapid polydimethylsiloxane casting. Chips were cut, assembled, connected, and set up onto a high resolution and fully automated microscope suited for time-lapse imaging, a powerful tool for spatio-temporal cell analysis. Here, the biotechnological platform organism Corynebacterium glutamicum&#160;was seeded into the PLBR and cell growth and intracellular fluorescence were followed over several hours unraveling time dependent population heterogeneity on single-cell level, not possible with conventional analysis methods such as flow cytometry. Besides insights into device fabrication, furthermore, the preparation of the preculture, loading, trapping of bacteria, and the PLBR cultivation of single cells and colonies is demonstrated. These devices will add a new dimension in microbiological research to analyze time dependent phenomena of single bacteria under tight environmental control. Due to the simple and relatively short fabrication process the technology can be easily adapted at any microfluidics lab and simply tailored towards specific needs.

In this protocol the fabrication, setup and basic operation of a microfluidic picoliter bioreactor (PLBR) for single-cell analysis of prokaryotic microorganisms is introduced. Industrially relevant microorganisms were analyzed as proof of principle allowing insights into growth rate, morphology, and phenotypic heterogeneity over certain time periods, hardly possible with conventional methods.

In this protocol the fabrication, experimental setup and basic operation of the recently introduced microfluidic picoliter bioreactor (PLBR) is described ...

A Microfluidic Chip for the Versatile Chemical Analysis of Single Cells

We present a microfluidic device that enables the quantitative determination of intracellular biomolecules in multiple single cells in parallel. For this purpose, the cells are passively trapped in the middle of a microchamber. Upon activation of the control layer, the cell is isolated from the surrounding volume in a small chamber. The surrounding volume can then be exchanged without affecting the isolated cell. However, upon short opening and closing of the chamber, the solution in the chamber can be replaced within a few hundred milliseconds. Due to the reversibility of the chambers, the cells can be exposed to different solutions sequentially in a highly controllable fashion, e.g. for incubation, washing, and finally, cell lysis. The tightly sealed microchambers enable the retention of the lysate, minimize and control the dilution after cell lysis. Since lysis and analysis occur at the same location, high sensitivity is retained because no further dilution or loss of the analytes occurs during transport. The microchamber design therefore enables the reliable and reproducible analysis of very small copy numbers of intracellular molecules (attomoles, zeptomoles) released from individual cells. Furthermore, many microchambers can be arranged in an array format, allowing the analysis of many cells at once, given that suitable optical instruments are used for monitoring. We have already used the platform for proof-of-concept studies to analyze intracellular proteins, enzymes, cofactors and second messengers in either relative or absolute quantifiable manner.

In this article we present a microfluidic chip for single cell analysis. It allows the quantification of intracellular proteins, enzymes, cofactors, and second messengers by means of fluorescent assays or immunoassays.&#160;

رقاقة ميكروفلويديك للتحليل الكيميائي للخلايا متعددة الاستخدامات واحدة

We present a microfluidic device that enables the quantitative determination of intracellular biomolecules in multiple single cells in parallel. For this ...

Microfluidic Fabrication of Polymeric and Biohybrid Fibers with Predesigned Size and Shape

A &#8220;sheath&#8221; fluid passing through a microfluidic channel at low Reynolds number can be directed around another &#8220;core&#8221; stream and used to dictate the shape as well as the diameter of a core stream.&#160;Grooves in the top and bottom of a microfluidic channel were designed to direct the sheath fluid and shape the core fluid.&#160;By matching the viscosity and hydrophilicity of the sheath and core fluids, the interfacial effects are minimized and complex fluid shapes can be formed.&#160;Controlling the relative flow rates of the sheath and core fluids determines the cross-sectional area of the core fluid.&#160;Fibers have been produced with sizes ranging from 300 nm to ~1 mm, and fiber cross-sections can be round, flat, square, or complex as in the case with double anchor fibers. Polymerization of the core fluid downstream from the shaping region solidifies the fibers.&#160;Photoinitiated click chemistries are well suited for rapid polymerization of the core fluid by irradiation with ultraviolet light.&#160;Fibers with a wide variety of shapes have been produced from a list of polymers including liquid crystals, poly(methylmethacrylate), thiol-ene and thiol-yne resins, polyethylene glycol, and hydrogel derivatives. Minimal shear during the shaping process and mild polymerization conditions also makes the fabrication process well suited for encapsulation of cells and other biological components.

Two adjacent fluids passing through a grooved microfluidic channel can be directed to form a sheath around a prepolymer core; thereby&#160;determining both shape and cross-section. Photoinitiated polymerization, such as thiol click chemistry, is well suited for rapidly solidifying the core fluid into a microfiber with predetermined size and shape.

تصنيع ميكروفلويديك من الألياف البوليمرية والحيوية مع الحجم والشكل المصمم مسبقا

A &#8220;sheath&#8221; fluid passing through a microfluidic channel at low Reynolds number can be directed around another &#8220;core&#8221; stream and ...

A Microfluidic Chip for ICPMS Sample Introduction

This protocol discusses the fabrication and usage of a disposable low cost microfluidic chip as sample introduction system for inductively coupled plasma mass spectrometry (ICPMS). The chip produces monodisperse aqueous sample droplets in perfluorohexane (PFH). Size and frequency of the aqueous droplets can be varied in the range of 40 to 60 &#181;m and from 90 to 7,000&#160;Hz, respectively. The droplets are ejected from the chip with a second flow of PFH and remain intact during the ejection. A custom-built desolvation system removes the PFH and transports the droplets into the ICPMS. Here, very stable signals with a narrow intensity distribution can be measured, showing the monodispersity of the droplets. We show that the introduction system can be used to quantitatively determine iron in single bovine red blood cells. In the future, the capabilities of the introduction device can easily be extended by the integration of additional microfluidic modules.

We present a discrete droplet sample introduction system for inductively coupled plasma mass spectrometry (ICPMS). It is based on a cheap and disposable microfluidic chip that generates highly monodisperse droplets in a size range of 40&#8722;60 &#181;m at frequencies from 90 to 7,000 Hz.

رقاقة ميكروفلويديك لICPMS مقدمة عينة

This protocol discusses the fabrication and usage of a disposable low cost microfluidic chip as sample introduction system for inductively coupled plasma ...

Image-guided, Laser-based Fabrication of Vascular-derived Microfluidic Networks

This detailed protocol outlines the implementation of image-guided, laser-based hydrogel degradation for the fabrication of vascular-derived microfluidic networks embedded in PEGDA hydrogels. Here, we describe the creation of virtual masks that allow for image-guided laser control; the photopolymerization of a micromolded PEGDA hydrogel, suitable for microfluidic network fabrication and pressure head-driven flow; the setup and use of a commercially available laser scanning confocal microscope paired with a femtosecond pulsed Ti:S laser to induce hydrogel degradation; and the imaging of fabricated microfluidic networks using fluorescent species and confocal microscopy. Much of the protocol is focused on the proper setup and implementation of the microscope software and microscope macro, as these are crucial steps in using a commercial microscope for microfluidic fabrication purposes that contain a number of intricacies. The image-guided component of this technique allows for the implementation of 3D image stacks or user-generated 3D models, thereby allowing for creative microfluidic design and for the fabrication of complex microfluidic systems of virtually any configuration. With an expected impact in tissue engineering, the methods outlined in this protocol could aid in the fabrication of advanced biomimetic microtissue constructs for organ- and human-on-a-chip devices. By mimicking the complex architecture, tortuosity, size, and density of in vivo vasculature, essential biological transport processes can be replicated in these constructs, leading to more accurate in vitro modeling of drug pharmacokinetics and disease.

This protocol outlines the implementation of image-guided, laser-based hydrogel degradation to fabricate vascular-derived, biomimetic microfluidic networks embedded in poly(ethylene glycol) diacrylate (PEGDA) hydrogels. These biomimetic microfluidic systems may be useful for tissue engineering applications, generation of in vitro disease models, and fabrication of advanced "on-a-chip" devices.

صورة موجهة، التصنيع القائم على الليزر من شبكات ميكروفلويديك المستمدة الأوعية الدموية.

This detailed protocol outlines the implementation of image-guided, laser-based hydrogel degradation for the fabrication of vascular-derived microfluidic ...

Fabrication of Three-dimensional Paper-based Microfluidic Devices for Immunoassays

Paper wicks fluids autonomously due to capillary action. By patterning paper with hydrophobic barriers, the transport of fluids can be controlled and directed within a layer of paper. Moreover, stacking multiple layers of patterned paper creates sophisticated three-dimensional microfluidic networks that can support the development of analytical and bioanalytical assays. Paper-based microfluidic devices are inexpensive, portable, easy to use, and require no external equipment to operate. As a result, they hold great promise as a platform for point-of-care diagnostics. In order to properly evaluate the utility and analytical performance of paper-based devices, suitable methods must be developed to ensure their manufacture is reproducible and at a scale that is appropriate for laboratory settings. In this manuscript, a method to fabricate a general device architecture that can be used for paper-based immunoassays is described. We use a form of additive manufacturing (multi-layer lamination) to prepare devices that comprise multiple layers of patterned paper and patterned adhesive. In addition to demonstrating the proper use of these three-dimensional paper-based microfluidic devices with an immunoassay for human chorionic gonadotropin (hCG), errors in the manufacturing process that may result in device failures are discussed. We expect this approach to manufacturing paper-based devices will find broad utility in the development of analytical applications designed specifically for limited-resource settings.

We detail a method to fabricate three-dimensional paper-based microfluidic devices for use in the development of immunoassays. Our approach to device assembly is a type of multilayer, additive manufacturing. We demonstrate a sandwich immunoassay to provide representative results for these types of paper-based devices.

تصنيع أجهزة ميكروفلويديك ثلاثي الأبعاد على الورق ليمونواسايس

Paper wicks fluids autonomously due to capillary action. By patterning paper with hydrophobic barriers, the transport of fluids can be controlled and ...

Dry Film Photoresist-based Electrochemical Microfluidic Biosensor Platform: Device Fabrication, On-chip Assay Preparation, and System Operation

In recent years, biomarker diagnostics became an indispensable tool for the diagnosis of human disease, especially for the point-of-care diagnostics. An easy-to-use and low-cost sensor platform is highly desired to measure various types of analytes (e.g., biomarkers, hormones, and drugs) quantitatively and specifically. For this reason, dry film photoresist technology - enabling cheap, facile, and high-throughput fabrication - was used to manufacture the microfluidic biosensor presented here. Depending on the bioassay used afterwards, the versatile platform is capable of detecting various types of biomolecules. For the fabrication of the device, platinum electrodes are structured on a flexible polyimide (PI) foil in the only clean-room process step. The PI foil serves as a substrate for the electrodes, which are insulated with an epoxy-based photoresist. The microfluidic channel is subsequently generated by the development and lamination of dry film photoresist (DFR) foils onto the PI wafer. By using a hydrophobic stopping barrier in the channel, the channel is separated into two specific areas: an immobilization section for the enzyme-linked assay and an electrochemical measurement cell for the amperometric signal readout.
The on-chip bioassay immobilization is performed by the adsorption of the biomolecules to the channel surface. The glucose oxidase enzyme is used as a transducer for electrochemical signal generation. In the presence of the substrate, glucose, hydrogen peroxide is produced, which is detected at the platinum working electrode. The stop-flow technique is applied to obtain signal amplification along with rapid detection. Different biomolecules can quantitatively be measured by means of the introduced microfluidic system, giving an indication of different types of diseases, or, in regard to therapeutic drug monitoring, facilitating a personalized therapy.

A microfluidic biosensor platform was designed and fabricated using low-cost dry film photoresist technology for the rapid and sensitive quantification of various analytes. This single-use system allows for the electrochemical readout of on-chip-immobilized enzyme-linked assays by means of the stop-flow technique.

الفيلم الجافة على أساس مقاوم الضوء Biosensor موائع جزيئية الكهروكيميائية منصة: تصنيع الجهاز وإعداد مقايسة على شريحة، ونظام التشغيل

In recent years, biomarker diagnostics became an indispensable tool for the diagnosis of human disease, especially for the point-of-care diagnostics. An ...

Fabrication and Validation of an Organ-on-chip System with Integrated Electrodes to Directly Quantify Transendothelial Electrical Resistance

Organs-on-chips, in vitro models involving the culture of (human) tissues inside microfluidic devices, are rapidly emerging and promise to provide useful research tools for studying human health and disease. To characterize the barrier function of cell layers cultured inside organ-on-chip devices, often transendothelial or transepithelial electrical resistance (TEER) is measured. To this end, electrodes are usually integrated into the chip by micromachining methods to provide more stable measurements than is achieved with manual insertion of electrodes into the inlets of the chip. However, these electrodes frequently hamper visual inspection of the studied cell layer or require expensive cleanroom processes for fabrication. To overcome these limitations, the device described here contains four easily integrated electrodes that are placed and fixed outside of the culture area, making visual inspection possible. Using these four electrodes the resistance of six measurement paths can be quantified, from which the TEER can be directly isolated, independent of the resistance of culture medium-filled microchannels. The blood-brain barrier was replicated in this device and its TEER was monitored to show the device applicability. This chip, the integrated electrodes and the TEER determination method are generally applicable in organs-on-chips, both to mimic other organs or to be incorporated into existing organ-on-chip systems.

This publication describes the fabrication of an organ-on-chip device with integrated electrodes for direct quantification of transendothelial electrical resistance (TEER). For validation, the blood-brain barrier was mimicked inside this microfluidic device and its barrier function was monitored. The presented methods for electrode integration and direct TEER quantification are generally applicable.

تلفيق والتحقق من صحة نظام الجهاز على رقاقة مع أقطاب متكاملة لقياس المقاومة الكهربائية ترانسيندوثيليال مباشرة

Organs-on-chips, in vitro models involving the culture of (human) tissues inside microfluidic devices, are rapidly emerging and promise to provide useful ...

Scalable Fabrication of Stretchable, Dual Channel, Microfluidic Organ Chips

A significant number of lead compounds fail in the pharmaceutical pipeline because animal studies often fail to predict clinical responses in human patients. Human Organ-on-a-Chip (Organ Chip) microfluidic cell culture devices, which provide an experimental in vitro platform to assess efficacy, toxicity, and pharmacokinetic (PK) profiles in humans, may be better predictors of therapeutic efficacy and safety in the clinic compared to animal studies. These devices may be used to model the function of virtually any organ type and can be fluidically linked through common endothelium-lined microchannels to perform in vitro studies on human organ-level and whole body-level physiology without having to conduct experiments on people. These Organ Chips consist of two perfused microfluidic channels separated by a permeable elastomeric membrane with organ-specific parenchymal cells on one side and microvascular endothelium on the other, which can be cyclically stretched to provide organ-specific mechanical cues (e.g., breathing motions in lung). This protocol details the fabrication of flexible, dual channel, Organ Chips through casting of parts using 3D printed molds, enabling combination of multiple casting and post-processing steps. Porous poly (dimethyl siloxane) (PDMS) membranes are cast with micrometer sized through-holes using silicon pillar arrays under compression. Fabrication and assembly of Organ Chips involves equipment and steps that can be implemented outside of a traditional cleanroom. This protocol provides researchers with access to Organ Chip technology for in vitro organ- and body-level studies in drug discovery, safety and efficacy testing, as well as mechanistic studies of fundamental biological processes.

Here, we present a protocol that describes the fabrication of stretchable, dual channel, organ chip microfluidic cell culture devices for recapitulating organ-level functionality in vitro.

تصنيع قابلة المط ومزدوجة القناة، رقائق موائع جزيئية الجهاز

A significant number of lead compounds fail in the pharmaceutical pipeline because animal studies often fail to predict clinical responses in human ...