JoVE Logo

Sign In

7.16 : اعادة تركيب محدد بالمواقع المحافظة و اختلاف الاطوار

نظراً لأنه يتم قطع أجزاء الحمض النووي وإعادة تنظيمها بطريقة محددة الاتجاه، فقد ظهرت إعادة التركيب الخاصة بالموقع كطريقة فعالة للهندسة الوراثية. إعادة اتحاد فليباز و التشكيل الحلقي أو Flp و Cre، على التوالي، هما عضوان في إنزيم التيروزين ريكومبيناز عائلة مشتقة من عاثيات البكتيريا، والتي تُستخدم للتوسط في عمليات إدخال الحمض النووي الخاصة بالموقع وحذفه والتعبير المستهدف للبروتينات في خطوط خلايا الثدييات.

يبلغ طول مواقع التعرف على ريكومبيناز Cre التي تسمى مواقع LoxP حوالي 34 زوجاً أساسياً. تحتوي مواقع LoxP على 13 تسلسلًا متناظراً قبل الميلاد، مما يعني أن تسلسل النوكليوتيدات يقرأ نفس الشيء في كل من الاتجاهات من 5’؛ إلى 3’؛ ومن 3’؛ إلى 5’؛. تعد إعادة التركيب الخاصة بالموقع بوساطة إعادة التركيب المترابطة من أكثر الطرق شيوعاً المستخدمة في إنشاء الفئران المعدلة وراثياً ذات الطفرات المكتسبة. يسمح استخدام المتغيرات القابلة للحرارة من ريكومبيناز مع محفزات معينة للأنسجة بالتحكم المكاني في تعبير وأفعال Cre ريكومبيناز. على سبيل المثال، يسمح وضع محفز كادرين الخاص بالكلى في بداية جين Cre بالتعبير عن الإنزيم فقط في أنسجة الكلى. من أجل التحكم الزمني في نشاط إعادة التركيب الكيميائي لـ Cre، يتم دمج جين الإنزيم مع مجال ربط يجند بحيث يتم التعبير عن الإنزيم فقط في وجود ligand محدد.

يتمثل أحد القيود الرئيسية في استخدام إعادة التركيب الخاصة بالموقع كأداة لتعديل الجينوم في أنه يجب إدخال موقع أو مواقع هدف إعادة التركيب أولاً أو يجب أن تكون موجودة عن طريق الصدفة. إذا كان من الممكن تحديد موقع الجينوم المتطابق مع موقع التعرف على الإنزيم مسبقاً، فيمكن استخدام إعادة التركيب مع “؛ حسب الطلب ”؛ الهدف المحدد. استخدمت الدراسات الحديثة الطفرات وخلط الجينات لتصميم متغيرات Flp التي يمكنها التعرف وظيفيًا على المواقع ذات الطفرات التوافقية. النتائج واعدة للتكرارات المستقبلية لخلط الجينات التي يمكن أن تسفر عن متغيرات Flp أكثر تحديداً ويمكن استخدامها تجارياً كأداة جزيئية لهندسة الجينومات الكبيرة.

Tags

Conservative Site specific RecombinationPhase VariationGenetic ExchangeSite specific RecombinasesDNA SectionsSequence HomologySymmetric SequencesSerine RecombinaseTyrosine RecombinaseEnzyme MechanismsSynaptic ComplexCrossover SitesStrand ExchangeCovalent BondingHolliday Junction IntermediateCleaved DNA Strands

From Chapter 7:

article

Now Playing

7.16 : اعادة تركيب محدد بالمواقع المحافظة و اختلاف الاطوار

DNA Repair and Recombination

5.9K Views

article

7.1 : نظرة عامة على اصلاح الحمض النووى الريبوزى منزوع الاكسجين

DNA Repair and Recombination

29.7K Views

article

7.2 : الاصلاح بإستئصال قاعدة

DNA Repair and Recombination

21.8K Views

article

7.3 : الاصلاح بإستئصال عدد من القواعد

DNA Repair and Recombination

6.9K Views

article

7.4 : الاصلاح بإستئصال نيوكليتيدات

DNA Repair and Recombination

11.1K Views

article

7.5 : بوليميراز توليف الحمض النووى الريبوزى منزوع الاكسجين

DNA Repair and Recombination

9.7K Views

article

7.6 : اصلاح التلف مزدوج الشريط

DNA Repair and Recombination

11.9K Views

article

7.7 : التلف الحادث فى الحمض النووى الريوزى يمكن ان يعطل دورة الخلية

DNA Repair and Recombination

9.0K Views

article

7.8 : اعادة التركيب المتماثل

DNA Repair and Recombination

49.9K Views

article

7.9 : اعادة تشغيل شوكة الاستنساخ المتوقفة

DNA Repair and Recombination

5.7K Views

article

7.10 : التحول الجينى

DNA Repair and Recombination

9.6K Views

article

7.11 : نظرة عامة على انتقال واعادة تركيب

DNA Repair and Recombination

15.1K Views

article

7.12 : الجين القافز فقط على الحمض النووى الريبوزى منزوع الاكسجين

DNA Repair and Recombination

14.3K Views

article

7.13 : الفيروس المرتد

DNA Repair and Recombination

12.1K Views

article

7.14 : القافزات الارتدادية للمتكررات الطويلة الطرفية

DNA Repair and Recombination

17.3K Views

See More

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved