Bu protokol, zebra balığı embriyolarının radyasyona dayalı tarama deneyleri için kullanılmasına yönelik ayrıntılı adımları ve farklı ilaçların ve radyasyonun tedavisini değerlendirmek için bazı gözlemsel yaklaşımları açıklar. Bu, okuyucuların, radyotoksisitenin ve kullanılan farklı ilaçların etkinliğinin değerlendirilmesinde rehberlik edecek, zebra balığı embriyolarını kullanarak x-ışınına maruz kalmayı içeren yarı yüksek verimli bir ilaç taraması ayarlamasına yardımcı olacaktır. Bu prosedür, kanser radyoterapisi veya radyobiyoloji alanında daha fazla araştırılabilen veya kullanılabilen potansiyel radyosensitizatörler veya koruyucular olarak farklı ilaçları taramak ve doğrulamak veya değerlendirmek için kullanılabilir.
Başlamak için, büyüyen embriyoları diseksiyon mikroskobu altında izleyin. Uygun aşamayı belirleyin ve ölü veya sağlıksız embriyoları çıkarın. Yeterli embriyo evrelemesinin radyasyon olduğundan emin olun ve ilaç dozları belirli bir gastrulasyon aşamasında verilecektir.
Deneye başlamadan önce deney plaklarındaki sağlıklı embriyoları Pasteur pipeti yardımıyla dikkatlice dağıtın. Her deney grubu için 15 ila 20 embriyo alın. Bir radyasyon deneyi kurarken, ışınlanmamış bir kontrol ve yalnızca radyasyon grubu ekleyin.
Radyasyon kalkanları ekstra kuyucukları radyasyondan koruyabiliyorsa, diğer kuyucuklar belirli bir radyasyon dozuna maruz kalırken embriyoları bir kuyu plakasına dağıtın. Aksi takdirde, radyasyon dozu başına embriyoları görmek için ayrı plakalar veya diskler kullanın. X-ışını ışınlayıcı makinesini açın ve makinenin başlatılmasını ve ısınmasını başlatın.
Deney plakasını ışınlayıcının altına, makinenin içine ortada yerleştirin ve plakanın doğrudan x-ışını kaynağının altında olduğundan emin olun. Sonra dozu ayarlayın ve röntgeni başlatın. Işınlama tamamlandıktan sonra plakaları çıkarın, makine programını kapatın, makineyi kapatın ve radyasyondan hemen sonra plakaları mikroskop altında kontrol edin.
Ölü embriyoları çıkarın ve diseksiyon mikroskobu altında değerlendirdikten sonra sayılarını kaydedin. Plakaları 28,5 santigrat derecede inkübatöre geri koyun. Radyasyon verildikten sonra önceden belirlenmiş zaman aralıklarında veri toplayın.
Sağkalım, kuluçka verimliliği, gelişim aşaması, kalp atışı sayısı, vücut ve kuyruk eğriliği, perikardiyal ödem ve yumurta sarısı kesesinin uzaması, mikrosefali, yüzme kesesi gelişimi, genel hareketlilik veya aktivite vb. gibi tüm olası gözlemleri kaydedin. Görüntüleri yakalamak için, temiz bir slaytta temsili embriyoları seçin. Embriyoları mikroskop altında kontrol edin, belirli bir yöne yönlendirin.
Döllenmeden altı saat sonra ışınlanan embriyolar için hayatta kalma eğrisi, kontrol grubunda ve 2 gri ve 5 griye maruz kalan embriyolarda embriyolarda önemli bir ölüm olmadığını gösterdi. Dakikadaki kalp atışı sayısı, artan x-ışını radyasyonu dozları ile kalp atış hızının büyük ölçüde azaldığını gösterdi. Kontrol grubunda her 24 saatlik aralıklarla kalp hızının arttığı görüldü.
Kalp atışı büyük ölçüde düştüğü için 15 gri ve 20 gri radyasyona maruz kalan embriyolarda ciddi kardiyovasküler deformasyondan şüpheleniliyor. Farklı zaman noktalarında farklı dozlarda radyasyona maruz kalan embriyolar için farklı fenotipik ve gelişimsel kusurlar tasvir edilir ve değerlendirilir. Omurga veya kuyruk bükülmesi, baş malformasyonu ve mikrosefali, gelişim kusurları, perikardiyal ödem, yolk kesesi deformiteleri, yüzme kesesi deformiteleri ve göz yapısındaki değişiklikler için morfolojik gözlemler de yapıldı Gösterdiğimiz protokol için sağlıklı embriyoların seçilmesi, embriyoların ışınlayıcıya uygun şekilde yerleştirilmesi ve çapraz anormalliklerin uygun şekilde değerlendirilmesi bu prosedürün anahtarıdır.
