Bu protokol, sıçan koroner arterlerinin lokalizasyonunu, ayrılmasını ve kas halkası fiksasyonunu ayrıntılı olarak tanıtmaktadır. Çeşitli kardiyovasküler hastalıkların mekanizmaları, eksplorasyonları ve tedavileri için yeni bir yöntem sağlamak. Sistem, in vitro arteriyel gerilimin dinamik değişikliklerinin kararlı bir şekilde kaydedilmesi, çapının 60 mikrometreden 10 milimetreye kadar okunması için uygundur.
Acemilerin öncelikle her bir damarın anatomik yerini doğru bir şekilde anlamaları gerektiğini ve torasik arter ve mezenterik arter gibi biraz daha büyük damarlarla başlayabileceklerini öneriyoruz. Kalbi ayırdıktan ve çıkardıktan sonra, tıbbi plastik forsepslerle hafifçe sıkarak tüm kalp odalarından kalan kanı boşaltarak başlayın. Önceden işlenmiş kalbi, pH değeri 7.40 olan dört santigrat derecede% 95 oksijen ve% 5 karbondioksit doymuş fizyolojik tuz çözeltisi içeren bir Petri kabına hızlı bir şekilde yerleştirin.
Koroner arterlerin anatomik pozisyonunu doğru bir şekilde tanımlamak için, ışık mikroskobu altında izole kalbin duruşunu şematik şemaya göre ayarlayın. İnterventriküler septum boyunca sol ve sağ ventrikül boşluklarını pulmoner arterin kökünden cerrahi makas ve cımbızla kesin. Sol ve sağ koroner arterleri miyokard dokusundan ayırmak için, sağ koroner arter dalını iyice ortaya çıkarmak için sağ ventrikülü optik anatomik mikroskop altında diseke edin.
Daha sonra kalp dokusunu saat yönünde 45 derece döndürerek sol koroner arterin konumunu tanımlayın. Çevreleyen yapışkan miyokard dokusunu çıkardıktan sonra, titreşen sol ve sağ koroner arterleri açıkça ayırt edin. Koroner arterleri hemen ortada ayırın ve dört santigrat derecede fizyolojik tuz çözeltisine tamamen daldırın.
Farklı uyaranlar altında vasküler gerginliği kaydetmek için ayrılmış arteri anatomik makasla dikey olarak keserek yaklaşık iki milimetrelik bir arteriyel halka elde edin. İki santimetre paslanmaz çelik tel hazırlayın ve% 95 oksijen ve% 5 karbondioksit ile doyurulmuş dört santigrat derece fizyolojik tuz çözeltisine önceden batırın. Her iki teli de arteriyel halkadan paralel olarak, optik anatomik mikroskop altında damarın yönüyle ve vasküler boşluğun her iki ucunda eşit uzunlukta teller açıkta olacak şekilde geçirin.
Arteriyel halkayı,% 95 oksijen ve% 5 karbondioksit içeren köpüren fizyolojik tuz çözeltisi ile doldurulmuş tel mikrografın banyosunda çelik tel ön ve arka ile sabitleyin. Uygun bir ön ve arka aralık için yatay vida düğmesini döndürün, böylece iki tel yatay olur ve arteriyel halka doğal bir gevşeme durumunda olur. DMT banyosunu termostatik cihaza kurduktan sonra, ilgili yol sinyalinin kaydedildiğinden emin olmak için veri toplama yazılımını açın.
Parametreleri ayarlayın. Geminin çapı boyunca makul bir gerginlik uygulayarak arteriyel halkanın optimal başlangıç gerginliğini elde edin. Bu noktada, görüntülenen vasküler gerilim değerini sıfıra ayarlayın.
Daha sonra, banyonun spiral eksenini döndürerek arteriyel halkaya üç mili Newton darbe uyaranı uygulayın. LCD panelini tıklatarak sıfır mili Newton'a ayarlayın ve bir saat boyunca koruyun. 37 santigrat derece pH 7.40'ta oksijene doymuş fizyolojik tuz çözeltisi tamponunda bir saat inkübasyondan sonra, tel mikrografın gerilim kontrol panelinde gerilim değerini tekrar sıfır mili Newton'a ayarlayın.
Tel miyograf tekniği ile koroner arter halkasının kasılma aktivitesini gerçekleştirin ve her biri 10 dakika boyunca 60 milimolar potasyum iyon çözeltisi ile uyararak üç ayrı operasyonda doğrulayın. Her stimülasyondan sonra, vasküler ton ilk durumuna dönene kadar banyoyu oksijene doymuş fizyolojik tuz çözeltisi ile yıkayın. Banyoya 0.3 mikromolar U46619 ekleyin ve 10 dakika boyunca gözlemleyin.
Bir mikromolar apigenin ekleyin ve vasküler etkileri gözlemleyin. Dilatasyon bir platoya ulaştığında, bir sonraki konsantrasyonu ekleyin. Vasküler etkiyi gözlemlemek için 60 milimolar potasyum ön büzülme çözeltisine bir mikromolar apigenin ekleyin.
Dilatasyon bir platoya ulaştığında, bir sonraki konsantrasyonu ekleyin. İstirahat eden vasküler halkaya 28 milimolar potasyum iyonu ekleyin. Kasılma bir platoya ulaştığında, bir sonraki konsantrasyonu ekleyin.
İstirahat eden vasküler halkaya 0.01 mikromolar U46619 ekleyin. Kasılma bir platoya ulaştığında, bir sonraki konsantrasyonu ekleyin. Arteriyel halkaya ilk üç mili Newton gerilimi uygulandıktan sonra, gerilimi üç kez paralel olarak 60 milimolar potasyum iyonu konsantrasyonu uygulayarak iki mili Newton'dan fazla aştı.
Böylece yukarıdaki prosedürler mükemmel fizyolojik aktiviteye sahip izole bir koroner halka ile sonuçlanmıştır. DMT620M banyosuna kümülatif potasyum iyonu konsantrasyonu veya U46619 eklendi ve bu da vitro vasküler tonda konsantrasyona bağlı bir artışa neden oldu. Bir sonraki potasyum iyonu veya U46619 konsantrasyonu, vazokonstriksiyon etkisi bir platoya ulaştığında eklendi.
Potasyum iyonu ve U46619 tarafından daraltılmış izole koroner halkalar için, test ilacı apigenin, şaşırtıcı bir şekilde konsantrasyona bağımlı bir şekilde vazodilatasyona neden oldu. Kalp, pulmoner arterin kökünden ventriküler septum boyunca diseke edilir, iki milimetrelik koroner kas halkasını açığa çıkarır ve ayırır. Bu prosedürü takiben, retinal mikrodamarlarda, böbrek fonksiyonunda, renal arterde ve orta serebral arterde vasküler gerginliği kaydedebiliriz.
60 mikrometreden 10 milimetreye kadar dinamik bir bölge.
