Hasta kaynaklı Ksenogreft Modelleri ve Primer Hücre Hatları ilaç gelişiminin ve tümör biyolojisi araştırmalarının başlatılması ve ilerlemesinin ayrılmaz bir parçası haline gelmektedir. Hasta kaynaklı Ksenogreft Modelleri kanser hücrelerinin histolojik görünümünü korur, intratümöral heterojeniteyi korur ve tümör mikroortamının ilgili insan bileşenlerini daha iyi yansıtır. Onun modelleri insan kanseri daha doğru temsilleri için daha sonra geleneksel kanser hücre hatları ve yeni antikanser tedavilerin preklinik değerlendirme geliştirmek için potansiyele sahip.
Buna ek olarak, bu modeller kanser hastalarının farklı alt grupları arasında moleküler özellikleri veya tümör imzaları karşılaştırarak yararlı olabilir. NSG fareler immünyonfik fare modeli olarak tavsiye edilir. Farelerin şiddetli immün yetmezlik nedeniyle, sterilite tüm deneylerde muhafaza edilmelidir.
Steril koşullar altında, dikkatle tümör dokuları incelemek ve birkaç küçük parçalar halinde onları trim için forceps ve makas kullanın. Fareyi anestezi ettikten sonra, her iki sırt yanlarında bir santimetrelik kesi yapmak için steril makas kullanın. Deri altı dokuyu bozmak için steril çalgılar kullanın.
Sonra, tümör dokusunun bir parçasını kırpın ve derin bölgeye yerleştirin. Cerrahi dikiş iğneleri ile deri altı sütür ile implant alanını kapatın. Yarayı iyotla sterilize et.
Bundan sonra, yavaşça göğüs recumbency korurken boş bir kafese fareler yerleştirin. Onlar uyanmak ve yaklaşık 3-4 dakika sonra yürümeye başlamak gerekir gibi fareler e çok dikkat edin. Ameliyat edilen fareleri ameliyata tabi tutulmayanlardan ayrılmış yeni bir kafese yerleştirin.
İmplantasyon bölgesinin palpasyonu ile tümör boyutunu değerlendirin ve haftada iki kez Vernier kaliper ile ölçün. Fareler ötenazi sonra, yavaş farelerden tümör izole etmek için steril forceps ve makas kullanın. DPBS'deki tümör dokularını 10 santimetrelik bir tabakta yıkayın.
Nekrotik bölgeleri, yağ dokusunu, kan pıhtılarını ve bağ dokusunu incelemek ve çıkarmak için makas ve makas kullanırsınız. Sonra, bir milimetre maksimum kalınlıkta tümör dokuları kesmek için bir kalıp kullanın. Tümör dilimlerini DPBS ile 10 santimetrelik bir tabakta yıkayın.
Vitrifikasyon işlemine başlamak için, dilimleri V1 tüpüne aktarmak için forseps kullanın ve dört dakika boyunca dört santigrat derecede kuluçkaya yatırın. Tüpü kısa bir süre ters çevirin ve dört derece daha dört dakika kuluçkaya yatırın. Daha sonra, V1 çözeltisini ve dilimleri 10 santimetrelik bir tabağa dökün ve dilimleri tüp V2'ye aktarmak için forseps kullanın. Dört dakika boyunca 4 santigrat derecede kuluçkaya yat.
Tüpü kısa bir süre ters çevirin ve dört derece daha kuluçkaya yatırın. Bundan sonra, 10 santimetrelik bir tabağa V2 çözeltisi ve dilimleri dökün. Dilimleri v3 tüpüne aktarın ve dört santigrat derecede beş dakika kuluçkaya yatırın.
Tüpü kısa bir süre ters çevirin ve beş dakika daha dört santigrat derecede kuluçkaya yatırın. Tüm dilimlerin tüpün dibine batdığından emin olun. Birkaç dilim yüzen kalırsa, rulo ve kısa bir süre tüp ters ve tüm dilimler tamamen battı kadar dört derece santigrat de kuluçka.
Sonra, 10 santimetrelik bir çanak içine V3 çözeltisi ve dilimler dökün. Uygun uzunlukta doku tutucuları kesin ve steril gazlı bez üzerine yerleştirin. Dilimleri tutuculara aktarın.
Tutucuları gazlı bezle sarın. Forseps kullanarak, sıvı nitrojen tutucuları yerleştirin ve beş dakika kuluçkaya yatırın. Bundan sonra, doku bilgileri ile kriyojenik şişeleri etiket.
Doku dilimleri ile tutucuları sıvı nitrojende depolanacak şişelere aktarın. İlk olarak, rezeke edilen örneklerden veya hasat edilen PDX dokularından mide kanseri örnekleri alın. Buz üzerine dokular yerleştirin ve 10 santimetre steril kültür çanak aktarın.
Nekrotik alanları, yağ dokusunu, kan pıhtılarını ve bağ dokusunu çıkarmak için makas ve makas kullanın. 10 santimetrelik bir kapta penisilin ve streptomisin içeren DPBS ile tümör dokularını bir kez yıkayın. Sonra, çanak kapağında parçalar halinde tümör kesti.
Her parçanın maksimum kalınlığı bir milimetre olmalıdır. Parçaları, Tip 1 kollajenaz ve tripsin çözeltisinin yedi mililitresini içeren 50 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın. Karışımı kısa bir süre girdap.
37 santigrat derecede 30-40 dakika boyunca bir su banyosunda kuluçkaya yatarak karışımı her beş dakikada bir girdap layın. Bundan sonra, RPMI-1640 orta eşit hacimli ekleyin 10% FBS ve girdap iyice karışımı ile desteklenmektedir. 40 mikrolitrelik bir filtre ile yavaş filtrasyon ile yeni bir 50 mililitre santrifüj tüp içine bu karışımı aktarın.
Oda sıcaklığında 5-7 dakika 113 ve 163 kez g arasında bir hızda filifüj filifüj. Dikkatle bu supernatant çıkarın. PBS beş mililitre ile pelet yıkayın ve dikkatle supernatant çıkarın.
Pelet kırmızı ise, eritrositiçerir. 500 mikrolitre kırmızı kan hücresi lisis tamponu ile peleti yavaşça yeniden askıya alın ve oda sıcaklığında beş dakika kuluçkaya yatırın. Sonra, PBS beş mililitre ekleyin.
Oda sıcaklığında 5-7 dakika 113 ve 163 kez g arasında bir hızda santrifüj. Dikkatle supernatant çıkarın ve kültür orta ile pelet resuspend ve steril bir 10 santimetre çanak içine karışımı aktarın. Kültürü %5 karbondioksit le 37 derecede kuluçkaya yatırın ve her 2-3 günde bir ortamı serum içeren ortamla değiştirmeyi unutmayın.
Bu çalışmada mide kanseri PDX modelleri ve primer hücre hatları oluşturulmuştur. Birinci nesil tümörlerin daha sonraki nesillere göre daha yavaş büyümek için görülür, uygun boyuta ulaşmak için üç hafta veya daha uzun sürer. Birinci nesil deri altı tümör oluşumunun başarı oranı %80'in üzerinde PDX modellerinden kanser hücrelerinin kimliği PDX modellerinden H&E boyama ile doğrulanır.
Kriyopayrılmış tümör dokusundan tümör oluşumunun başarı oranı yaklaşık %95 olarak görülmektedir Tümör hücreleri morfoloji farklılıkları ile kolayca fark edilebilir. Birincil hücreler iki patolog tarafından mikroskop altında bağımsız olarak doğrulanır. Daha fazla doğrulama için, H & E boyama fiksasyon sonrası kanser hücresi morfolojisi gözlemlemek için kullanılır.
Primer hücre hatlarının başarılı izolasyon oranı yaklaşık %40 olup Bu modeller klinik sonuçların tahmin edici olduğu gösterilmiştir ve belirteç tanımlaması, biyolojik çalışmalar ve kişiselleştirilmiş tıp stratejileri ile klinik öncesi ilaç değerlendirmesi için kullanılmaktadır.
