Bu yöntem, farmasötik bilimler alanında intranazal yönetim, farmakokinetik ve ilgili ilaçların farmakolojisi ile ilgili anahtar soruların cevapverilmesine yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, burun-to-beyne doğum ilaç adaylarının kantitatif değerlendirilmesi ve hayvanlara en az stres ile inhalasyon anestezisi için kullanılabilir olmasıdır. Bu tekniğin etkileri, burundan beyne yol ile ilaç dağıtım teknolojilerinin gelişmesine katkıda olarak merkezi sinir sistemi hastalıklarının tedavisine kadar uzanır.
Prosedürü gösteren Mitsuyoshi Fukuda, benim laboratuvar bir doktora öğrencisi olacaktır. İzole radyo izotop tesisinde mikropipet ile intranazal doğum için. Bant ve supine pozisyonda bir mantar tahtası fare anestezik ve karbon-14 inulin çözeltisi 25 mikrolitre bir ila iki mikrolitre dozda, alternatif olarak, hayvanın sağ ve sol burun delikleri içine uygulayın.
Yemek borusundan hava yolu kenarından ters kanülasyon iletimi için, anestezili fareyi bir diseksiyon mikroskobunun altına yerleştirin ve boğaz üzerinde 1,5 santimetrelik deri kesisi yapın. Trakea açığa çıkana kadar kesiği genişletmek için forceps kullanın ve maruz kalan trakeada bir milimetrelik kesi yapın. Kesiye önceden işaretlenmiş konuma 1,2 santimetre lik bir kanül yerleştirin ve kanülün ters ucunu bir teneffüs maskesinin içine takın.
Bundan sonra, nefes borusu altından yemek borusu ortaya çıkarmak için forceps kullanın. Yemek borusunda bir milimetrelik kesi yapmak için makas kullanın ve burun boşluğunun arka ucuna doğru önceden işaretlenmiş pozisyona 1.4 santimetre ikinci bir kanül yerleştirin. Deney hayvanının ağırlığına göre kanülün uygun bir uzunluğa yerleştirilmesi ve diğer hayvanların kanül uzunluğunun ayarlanması önemlidir.
Özofagus kanüllerini inşekle ve programlanabilir bir mikroşite pompasına bağlı bir uygulama çözeltisi ile dolu bir mililitrelik şırınga27-gauge iğne takın. Daha sonra tüm çözelti hacmi uygulanana kadar dakikada sabit beş mikrolitre hızda 25 mikrolitre karbon-14 inülin sunun. Yavaş ama sürekli difüzyon hızı burun boşluğu içinde mümkün olduğunca çok ilaç çözeltisi tutulması için önemlidir.
Inulin uygulamasından 30 dakika sonra kan-beyin bariyerini geçen karbon-14 inülin miktarını ölçmek için, medulla oblongata tarafından deneysel olarak tedavi edilen her hayvanın kafatasını dikkatlice açmak için makas kullanın ve beyni dikkatlice çıkarmak için bir mikrospatula kullanın. Her beyni, hasat edilirken buz üzerinde bir Petri kabına tuzlu nemlendirilmiş filtre kağıdının üzerine yerleştirin. Ve her beynin yüzeyindeki kanı temizlemek için tuzlu suyla ıslatılmış pamuklu bir bez kullanın.
Sonra, hızlı ama dikkatli, koku ampul içine beyin incelemek, serebrum, ve medulla oblongata, artı pons bölümleri. Ve beyin örneklerini 50 santigrat derecede bir saat boyunca doku solubilizerine yerleştirin ve ardından 10 mikrolitre sıvı sintilasyon kokteyli ilave edin. Uygulanan çözeltinin radyoaktivitesini belirlemek için, sintillasyon kokteylinde çözünmüş 25 mikrolitrelik bir uygulama çözeltisini bir sintillasyon vialine aktarın ve beyin numunesi içindeki karbon-14 radyoaktivitesinin dakika başına parçalanmasını ve uygulanan çözeltiyi sıvı bir sintillasyon sayacına aktarın.
İnhalasyon anestezisi altında intranasally-ilaç ile doğum eden hayvanlar arasında deneysel bir varyasyon gözlenmez. Özofagus ters kanül burun kavitesi uygulama yöntemi kullanıldığında, koku ampulü, serebrum ve medulla oblongata'da mikropipet teslimine göre önemli ölçüde daha yüksek karbon-14 inülin düzeyleri gözlenir. Ayrıca, yüksek karbon-14 inulin koku ampul ve medulla oblongata tespit edilir, her ikisi de belirgin burun-beyin yolu gelişmiş, beyin daha.
Bu teknik, geliştirilmesinden sonra, merkezi sinir sisteminde ki büyük molekül terapötik ajanların biyoaktivitesini araştırmak için burundan beyne doğum alanında araştırmacıların önünü açtı.
