Dr. Wei Qi He (Soochow Üniversitesi, Suzhou, Çin) ve Dr. Yan Ning Qiao (Shaanxi Normal Üniversitesi, Xi'an, Çin Halk Cumhuriyeti) Teknik yardım için teşekkür ederiz. Bu eser Ulusal Doğa Bilimleri Foundation of China (Grant 31272311, 81373295 ve 81473420) ve proje finanse öncelik Akademik Program geliştirme, Jiangsu Yükseköğretim kurumlarının (Grant No tarafından desteklenmiştir ysxk-2016).

Hayvan manipülasyonlar kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) modeli hayvan araştırma merkezi Nanjing Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.
1. çözüm hazırlık
<ol><li>137.0 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5.6 mM D-glukoz ve 10 mM HEPES, kullanarak HEPES Tyrode solüsyonu (H-T) hazırlamak pH 7.3 7.4.</li>
	<li>Kalsiyum olmadan HEPES Tyrode çözüm hazırlamak (Ca2 +-H-T ücretsiz) 140.6 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5.6 mM D-glukoz ve 10 mM HEPES, pH 7.3 7.4 kullanarak.</li>
	<li>124 mM 15.7 mM NaCl, 124,0 mM KCl, 1.8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5.6 mM D-glukoz ve 10 mM HEPES, pH kullanarak KCl (yüksek K+) kullanarak HEPES Tyrode solüsyonu hazırlayın 7.3 7.4.</li>
</ol>2. deney hazırlık
<ol><li>H-T ve 37 ° C su banyosu kullanarak yüksek-K+ çözümler onceden.</li>
	<li>Myograph sistem, veri edinme donanım ve bilgisayarı açın.</li>
	<li>Dikkatle tüm myograph odaları 5 mL H-T çözeltisi ile doldurun.</li>
	<li>Petri tabağı 4 ° C H-T ve Ca2 +20 mL ile doldurulması-H-T çözümleri, sırasıyla ücretsiz ve depolamak buzda.</li>
	<li>10 cm boyalı Petri kabına 20 mL H-T çözeltisi ile doldurun ve oda sıcaklığında korumak.</li>
</ol>3. fare mezenterik arter diseksiyonu
<ol><li>8-12-hafta-yaşlı C57BL/6J kadın ya da erkek fare tarafından servikal çıkığı ötenazi. Fare yukarı bakacak şekilde, karın ile pin.</li>
	<li>Karın % 70 etanol ile nemlendirin. O zaman, cilt makas ile ventral orta çizgi boyunca kasığından ve kesikler ilk kesik başından itibaren aşağıya doğru bacaklar her iki tarafta yapın. Cilt her iki tarafta çek; Karın zarını açmaya benzer insizyon olun.</li>
	<li>Makas kullanarak, özofagus, iki nokta üst üste ve tamamen damarlara vücuttan beslenme ile gastrointestinal sistem izole etmek için diğer bağ dokusu kesmek.</li>
	<li>Forseps ile izole segment kanı yıkamak için H-T 2.4 adımda hazırlanan ve yavaşça doku birkaç kez H-T çözümde Durulama soğuk içeren çanak içine taşıyın.</li>
	<li>İzole segment içine 2.5 adımda hazırlanan kuşe Petri kabına aktarmak ve mezenterik arter diseksiyonu oda sıcaklığında gerçekleştirin.</li>
	<li>Mide, değişir, ileum ve caecum yönünde düzeltmek ve mide ve caecum sırasıyla sol ve sağ tarafında, pin.</li>
	<li>Mezenterik damarlara yatak germek ve bağırsak disseke mezenterik arterler ortaya çıkarmak için pin ile düzeltin. Not: Bu koşullar altında üstüne damar damar vardır.</li>
	<li>Stereoskopik mikroskop iletim ışık kaynağında açmak ve arterler mikroskop altında incelemek. Tüm doku çözümde dalmış emin olun.</li>
	<li>Forseps ile arterlerin çevresinde yağ dokuları klamp ve diseksiyon makasla keserek bağ dokusu arterler yalıtmak. Damarların yaralanmasına kaçının.</li>
</ol>4. arteryel montaj
<ol><li>Aktarım ve mezenterik arter ağaç soğuk Ca2 +sokmak-ücretsiz (2.4 adımda hazırlanan) H-T çözüm forseps ile aşırı arterler sıkma tarafından.</li>
	<li>Arter 1.4 mm kısmı bir mezenterik arcade Bağırsak duvarına proksimal kesmek ve iki forseps bu arter parçasının her iki dikkatlice açın.</li>
	<li>Paslanmaz çelik tel 2,5 cm uzunluğunda iki kesimi hazırlamak ve onları aynı çanak yerleştirin.</li>
	<li>Forseps kullanarak atardamara bir ucunu yavaşça kelepçe ve dikkatlice iki tel, başka bir forseps yardımıyla tek tek arter lümen yerleştirin. Teller düz tutulur ve endotel dokunmayın emin olun.</li>
	<li>İki forseps kullanarak, iki çelik teller dişli geminin dışında aynı anda kelepçe ve dikkatle gemi daha önce H-T çözüm (adım 2.3) ile dolu bir myograph odasına Petri kabına aktarın.</li>
	<li>Jaws ayrı montaj için yer açmak için canı cehenneme. Her iki tarafında iki forseps kullanarak iki eklenen kablolardan biri klamp ve taşıyıcıyı çene boşluğu (Şekil 1A) koyun.</li>
	<li>Her iki vidayı mikrometre (Şekil 1B) bağlı çene etrafında klempe tel sarın.</li>
	<li>Sol taraftaki vidayı saat yönünde büküm tarafından tamir. Sağ forseps kullanarak Tel düzeltmek, daha sonra saat yönünde (Şekil 1 c) büküm sağ taraftaki vidayı düzeltmek. Gemi her zaman çene boşluğu içinde olduğundan emin olun, ama zarar görmemesi için çene dokunmayın.</li>
	<li>Mikrometre (Şekil 1 d) kullanarak iki jaws kapatın. Onlar birbirleriyle ve sabitlenmemiş tel üst kısmında sabit tel olduğunu dokunma ama bu iki jaws yeterince yakın olduğundan emin olun.</li>
	<li>Sağ taraftaki forseps kullanarak, dikkatle unscrewed Tel Dönüştürücü zorlamak için bağlı çene köşesinde katlayın ve sağdaki vida (Şekil 1E) etrafında saat yönünde kaydırmak. O zaman, vida saptamak. Tel sol tarafında bu adımı yineleyin ve sol taraftaki vidayı (Şekil 1F) düzeltin.</li>
	<li>Biraz ayrı jaws dikkatle mikrometre (Şekil 1G) döndürerek hareket ettirin. Gemi germe kaçının. Forseps tel tel dönüştürücü yan yatay düzlemde de mikrometre tarafından taşımak için kullanın. Dikkatle iki çene arasındaki boşluğu sadece iki kablo ağırlayacak mikrometre döndürür.</li>
	<li>Arterler diğer odaları üzerine takmak için 4.2-4.11 adımları yineleyin. Tüm odalar için RGB sinyali, odaları kapsar, % 100 oksijen kaynağı ve sıcaklık probu takın ve 37 ° C'ye ısınma başlangıç Grafik yazılımı açık ve kayıt işlemini başlatmak için Grafiği görünümü penceresinde Başlat düğmesine basın.</li>
	<li>Yaklaşık 20 dk equilibrate.</li>
</ol>5. normalleştirme
Not: deneysel koşullar standartlaştırmak amacıyla ve gemilerin güvenilir fizyolojik yanıt elde etmek için bir normalleştirme yordam gerekli15' tir. Aktif güç ve geminin iç çevresi arasındaki ilişkiyi göre Tel myograph sistemi takılı gemi5,8iç çevresi (IC) değerlendirmek için bir standart normalleştirme program vardır, 9. Kısaca, IC (µm) hesapladığınızda, mikrometre okumak ve değeri X değeri ve dönüştürücü giriş çıkış için kuvvet, duvar gerilimi (mN/mm), dinlenme Yani, Y değeri olarak kullanılır. Program ile donatılmış bir eğri (x, Y) dönmek ve 100 mmHg (IC100) transmural basınç için karşılık gelen IC hesaplamak. Gemi normalleştirilmiş iç çevresi (IC1) için küme etkin yanıt maksimal ne zaman.
<ol><li>Kuvvetleri tüm kanallar için sıfıra küme aygıtta ve başka bir 1-2 min için equilibrate.</li>
	<li>Normalleştirme ayarları seçin "DMT menüve parametreleri aşağıdaki gibi ayarlayın: Mercek kalibrasyon (mm/div): 0,36; Hedef basınç (kPa): 13,3; IC1/IC100: 0.9; Online ortalama süre (saniye): 2; Gecikme süresi (saniye): 60. DMT normalleştirme ayarları penceresini kapatmak için Tamam düğmesini tıklatın.</li>
	<li>Kanal ilgi DMT menü bir DMT normalleştirme karşılık gelen kanal penceresini seçin. Sabit değerleri penceresine aşağıdaki gibi girin: doku endpoints a1: 0.1; Doku endpoints a2: 4; Tel çapı (µm): 40. Pencerenin 1,40 mm hesaplanan gemi uzunluğu görüntüler.</li>
	<li>Uygun doku odası mikrometre okuyun. Mikrometre okuma kutusuna değer girin ve Noktası Ekle düğmesini tıklatın. Bu değer ilk (X0) X değeridir. Sonra 60 s gecikme süresi, kuvvet ve etkili basınç (ERTP) bu mikrometre değerine karşılık gelen pencerede görüntülenir. Aynı anda, mikrometre okuma kutusunu etkin hale gelir.</li>
	<li>Saat yönünün tersi yönde mikrometre çevirerek normalleştirilmiş gemi germek. Mikrometre değer mikrometre okuma kutusuna girin ve Noktası Ekle düğmesini tıklatın. 60 dinleme için bekleyin tekrar s.</li>
	<li>Adımları yineleyin 5.5, gemi germek ve pencere "onun IC1gemi germek için gereken hesaplanan mikrometre ayardır mikrometre X1" değerini görüntüler kadar ölçüm değerleri eklemek devam edin.</li>
	<li>Mikrometre X1 değeri ayarlayın. Not: Normalleştirilmiş gerilim genellikle 1-2 mN olduğunu.</li>
</ol>6. arter daralma kayıt
Not: H-T ve yüksek-K+ çözüm bu bölümde kullanılan da dahil olmak üzere tüm çözümler adım 2.1 hazırlanmıştır.
<ol><li>Normalleştirme sonra 15-20 dk odasında gemi equilibrate. Not: Bu çözüm bu adımda değiştirmenize gerek yoktur.</li>
	<li>Gemi yüksek-K+ çözüm ile iki kez meydan.<ol>
<li>Gemi meydan okumak için 5 mL daralma 10 dk, 3 - 4 kez 5 mL H-T çözeltisi ile yıkayarak takip için ikna etmek için yüksek-K+ çözeltisi ile H-T çözüm değiştirin. Not: Tipik daralma 3 mN ve 2.5 mN12etrafında sabit bir sürekli güç üzerinde bir maksimal kuvvet sahiptir. İlk challenge 2.5 mN aşağıda bir maksimal güç üretir veya sürekli gücü zamanla azalır veya ikinci sorun ilk doz daha daha daha düşük bir kuvvet oluşturur, gemi atılır ve daha fazla araştırma yapılması için kullanılmaz.</li>
	</ol>
</li>
	<li>5 mL daralma ikna etmek için yüksek-K+ çözeltisi ile gemi meydan. 5 dk sonra 0.5 µL neoliensinine hisse senedi çözüm (DMSO 10 mM)14 gemi 1 µM neoliensinine son bir konsantrasyon, dinlenmek için odasına ekleyin.</li>
	<li>Kuvvet ne zaman istikrarlı (Bu genellikle birkaç dakika sürer), t oluşturmak için 4, 6, 8 ve 10 µM için konsantrasyonu artırmak için hisse senedi çözüm her zaman konsantrasyonu için 2 µM. eklemek 1 µL artırmak için odasına neoliensinine hisse senedi çözümü başka bir 0.5 µL Ekle o doz-yanıt eğrisi. Not: Stok ve çalışma konsantrasyonları ilaçlar arasında değişir.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Bevan, J. A., Osher, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+direct+method+for+recording+tension+changes+in+the+wall+of+small+blood+vessels+in+vitro.">A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro.</a> Agents and Actions. 2 (5), 257-260 (1972).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260 (5552), 617-619 (1976).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractile+Properties+of+Small+Arterial+Resistance+Vessels+in+Spontaneously+Hypertensive+and+Normotensive+Rats.">Contractile Properties of Small Arterial Resistance Vessels in Spontaneously Hypertensive and Normotensive Rats.</a> Circulation Research. 41 (1), 19-26 (1977).</li><li>Mulvany, M. J., Nyborg, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+increased+calcium+sensitivity+of+mesenteric+resistance+vessels+in+young+and+adult+spontaneously+hypertensive+rats.">An increased calcium sensitivity of mesenteric resistance vessels in young and adult spontaneously hypertensive rats.</a> British Journal of Pharmacology. 71 (2), 585-596 (1980).</li><li>Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Procedures for investigation of small vessels using small vessel myograph. , (2004).</li><li>Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+smooth+muscle+cells+in+the+walls+of+arterial+resistance+vessels.">Mechanical properties of smooth muscle cells in the walls of arterial resistance vessels.</a> The Journal of Physiology. 275, 88-101 (1978).</li><li>Michael, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+blood+pressure+arising+from+a+defect+in+vascular+function.">High blood pressure arising from a defect in vascular function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (18), 6702-6707 (2008).</li><li>Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenteric+artery+contraction+and+relaxation+studies+using+automated+wire+myography.">Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography.</a> Journal of Visualized Experiments. (55), (2011).</li><li>del Campo, L., Ferrer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Wire Myography to Study Vascular Tone and Vascular Structure of Isolated Mouse Arteries. , (2015).</li><li>Fisher, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+smooth+muscle+phenotypic+diversity+and+function.">Vascular smooth muscle phenotypic diversity and function.</a> Physiological Genomics. 42 (3), 169-187 (2010).</li><li>Crowley, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+roles+for+the+kidney+and+systemic+tissues+in+blood+pressure+regulation+by+the+renin-angiotensin+system.">Distinct roles for the kidney and systemic tissues in blood pressure regulation by the renin-angiotensin system.</a> The Journal of Clinical Investigation. 115 (4), 1092-1099 (2005).</li><li>Qiao, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin+phosphatase+target+subunit+1+(MYPT1)+regulates+the+contraction+and+relaxation+of+vascular+smooth+muscle+and+maintains+blood+pressure.">Myosin phosphatase target subunit 1 (MYPT1) regulates the contraction and relaxation of vascular smooth muscle and maintains blood pressure.</a> The Journal of Biological Chemistry. 289 (32), 22512-22523 (2014).</li><li>He, W. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+myosin+light+chain+kinase+in+regulation+of+basal+blood+pressure+and+maintenance+of+salt-induced+hypertension.">Role of myosin light chain kinase in regulation of basal blood pressure and maintenance of salt-induced hypertension.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301 (2), H584-H591 (2011).</li><li>Yang, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+identification+of+a+tribenzylisoquinoline+alkaloid+from+Nelumbo+nucifera+Gaertn,+a+novel+potential+smooth+muscle+relaxant.">Isolation and identification of a tribenzylisoquinoline alkaloid from Nelumbo nucifera Gaertn, a novel potential smooth muscle relaxant.</a> Fitoterapia. 124, 58-65 (2018).</li><li>Slez&#225;k, P., Waczul&#237;kov&#225;, I., Bali&#353;, P., P&#250;zserov&#225;, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accurate+Normalization+Factor+for+Wire+Myography+of+Rat+Femoral+Artery.">Accurate Normalization Factor for Wire Myography of Rat Femoral Artery.</a> Physiological Research. 59 (6), 1033-1036 (2010).</li><li>Kearney, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+burden+of+hypertension:+analysis+of+worldwide+data.">Global burden of hypertension: analysis of worldwide data.</a> The Lancet. 365 (9455), 217-223 (2005).</li><li>Good, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogen+Ion+Buffers+for+Biological+Research.">Hydrogen Ion Buffers for Biological Research.</a> Biochemistry. 5 (2), 467-477 (1966).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Hipertansiyon ciddi komplikasyonlar kardiyovasküler dahil olmak üzere ve böbrek hastalıkları16nedeniyle yaygın halk sağlığı mücadeledir. Hipertansiyon patogenezinde anlama ve keşfetmek daha fazla Anti-Hipertansif İlaçlar Bu alandaki acil bir görev haline gelmiştir. Kan basıncı oluşturulur ve dolaşım periferik direnç tarafından yapılmaktadır. Poiseuille'nın kanunen nispeten küçük arterlerin dolaşım direnci büyük bir kısmı oluşturmak ve kan basıncı<sup class="xr...

Burada kullanılan küçük gemi myograph sistem ölçmek için küçük direniş damarlarının iç çapı 100 400 µm. izole küçük gemiler için (yaklaşık 2 mm uzun) arasında değişen izometrik kasılma iki 40-µm çapı kablo tarafından eklenmiş ve o zamanlar oldu mikrometre tarafı ve dönüştürücü tarafı jaws sıralı olarak monte edilmiş. Bu myograph teknik ilk 19721 ' önerdi ve öncelikle Mulvany ve onun meslektaşları2,3,4,5,6tarafından geliştirildi. Şimdi kararlı donanımları, kolay performans ve bir standart normalleştirme yordamı7,8,9ile olgun bir tekniktir. Biz bazı değişikliklerle bu yöntem için fare mezenterik arter ölçümlerde kullanılan.
Vasküler düz kas hemen hemen tüm kan damarlarının duvarlarında hatları. Temel işlevleri çeşitli uyaranlara yanıt olarak Kuvvetleri kasılması ile oluşturmaktır. Vasküler düz kas normal contractility için kan basıncı düzenleme esastır ve beslenme ek10. Anormal kan basıncı sonuçları hastalıkları, hipertansiyon, kalp yetmezliği ve iskemisi. de dahil olmak üzere çeşitli Yönetmeliği Çeşitli çalışmalarda anormal kan basıncı her zaman işlevsel olmayan vasküler düz kas contractility7,11,12,13ile ilişkili olduğunu düşündürmektedir. Myograph yöntemi izometrik contractility vasoconstrictors, inhibitörleri ve ilaçlar da dahil olmak üzere çeşitli uyaranlara tarafından indüklenen fare damarlarının incelenmesi sağlar. Başarılı ölçümleri daralma kan basıncı bakım ve yeni tedavi yaklaşımları keşfetmek için ve vasküler düz kas ilişkili hastalıkların patogenezinde mekanizmaları anlamamıza yardımcı olacaktır.
Birçok Çince otlar yaygın damar hastalıkları klinik tedavisi için kullanılmıştır; Ancak, onların etkili maddeler genellikle bilinmeyen kalır. Böylece, yalıtım ve etkili bileşenleri kimliği roman uyuşturucu gelişimi için çok önemli. Çoklu tel myograph teknoloji otlar aktif bileşenleri süzmek için basit bir yaklaşım sunmaktadır. Biz fare mezenterik arter daralma araştırmak için küçük gemi myograph sistemini kullanarak çeşitli çalışmalarda bildirdi ve doğal bileşikler ile Anti-hipertansiyon etkinlik12,13,14tespit. Burada, biz ayrıntılı tarif protokol için myograph yöntemi ve lotus tohum (Nelumbo nucifera Gaertn.) embriyolar izole neoliensinine gevşetici etkisini değerlendirmek 14.

<table><tbody><tr><td>Multi wire myograph system</td><td>DMT</td><td>610-M</td><td></td></tr><tr><td>Stainless steel wire</td><td>DMT</td><td>400447</td><td></td></tr><tr><td>Geuder dissection scissor</td><td>DMT</td><td>400431</td><td></td></tr><tr><td>Dumont forceps</td><td>DMT</td><td>300413</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab/8SP</td><td>ADInstruments</td><td>ML785</td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td>ADInstruments</td><td>LabChart 5</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5886</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>P5405</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>SigmaAldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&amp;middot;6H2O</td><td>SigmaAldrich</td><td>M2393</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>SigmaAldrich</td><td>G6152</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sangon Biotech</td><td>A100511-0250</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>SigmaAldrich</td><td>S8045</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>SigmaAldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr></tbody></table>

isometric contractility measurement of the mouse mesenteric artery using wire myography

Telli myograph teknik vasküler düz kaslar yanıt-e doğru depolarization, GPCR agonistler/inhibitörleri ve uyuşturucu. contractility değerlendirmek için kullanılır Vasküler düz kas fizyolojik fonksiyonları, vasküler hastalıklar hipertansiyon gibi patogenezi ve düz kas gevşetici ilaçlar gelişimi üzerinde birçok çalışma yaygın olarak kullanılır. Yaygın olarak kullanılan model hayvan hastalık modelleri ve genetiği değiştirilmiş suşları büyük bir havuz faredir. Biz fare mezenterik arter ayrıntılı izometrik kasılma ölçmek için bu yöntem tanıttı. Fare mezenterik direnç arter 1.4 mm segmentinin izole ve onun Lümen ile iki çelik tel geçirerek myograph odası üzerinde monte edilmiş. Denge ve normalleştirme adımlardan sonra gemi kesimi tarafından iki kez önce daralma tahlil bir yüksek-K+ çözüm potentiated. Bu yöntemde ilaç geliştirme uygulama örneği, fare mezenterik bir Çin bitki, lotus tohum (Nelumbo nucifera Gaertn.) embriyolar izole bir roman doğal madde, neoliensinine, gevşetici etkisi ölçülen arterler. Myograph odası üzerinde monte edilmiş gemi kesimleri ile a yüksek-K+ eriyik teşvik. İstikrarlı bir sürekli faz güç gerilim ulaştığı zaman toplu neoliensinine doz odasına eklenmiştir. Biz o neoliensinine düz kas kasılması, bir doz bağımlı gevşetici etkisi vardı böylece hipertansiyon karşı potansiyel etkinlik ayılar düşündüren bulundu. Buna ek olarak, gemi segment montaj sonra en az 4 saat hayatta kalmak ve çoğu zaman, biz önermek için yüksek-K+ çözüm tarafından indüklenen contractility korumak gibi tel myograph sistem uyuşturucu tarama zaman alan işlem için kullanılabilir.

Biz bir çok tel myograph sistemi kullanarak fare mezenterik arter izometrik contractility ölçülen ve lotus tohum (Nelumbo nucifera Gaertn.) embriyo saf neoliensinine gevşetici etkisi değerlendirildi 14. fare mezenterik direnç arter izole, bağ dokuların temizlenmesi ve 1.4 mm parça halinde kesilmiş. Arter segment Ca2 +iki çelik teller tarafından eklenmiş-ücretsiz bir petri çözümde H-T ve sonra segment myograph odası (<strong cl...

Watch this Scientific Journal Video about Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography at JoVE.com

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

Telli myograph teknik vasküler düz kas fonksiyonları ve ekran yeni ilaçlar araştırmak için kullanılır. Biz fare mezenterik arter izometrik contractility ölçme ve vasküler düz kas yeni gevşetici süzmek için detaylı bir protokol raporu.

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

isometric-contractility-measurement-mouse-mesenteric-artery-using

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

14.6K Görüntüleme.  Nanjing University. Telli myograph teknik vasküler düz kas fonksiyonları ve ekran yeni ilaçlar araştırmak için kullanılır. Biz fare mezenterik arter izometrik contractility ölçme ve vasküler düz kas yeni gevşetici süzmek için detaylı bir protokol raporu.

Video: Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Myo-mechanical Analysis of Isolated Skeletal Muscle

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force generation and fatigability in treated muscle. We describe a detailed approach to evaluating myo-mechanical properties in freshly explanted hindlimb muscle from the mouse. We describe the atraumatic harvest of mouse extensor digitorum longus muscle, mounting the muscle in a muscle strip myograph (Model 820MS; Danish Myo Technology), and the measurement of maximal twitch and tetanic tension, contraction time, and half-relaxation time, using a square pulse stimulator (Model S48; Grass Technologies). Using these measurements, we demonstrate the calculation of specific twitch and tetanic tension normalized to muscle cross-sectional area, the twitch-to-tetanic tension ratio, the force-frequency relationship curve and the low frequency fatigue curve 4. This analysis provides a method for quantitative comparison between therapeutic interventions in mouse models of muscle disease 1,2,3,5, as well as comparison of the effects of genetic modification on muscle function 6,7,8,9.

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for muscle disease, methods are needed to quantitate force generation and fatigability in treated muscle. We detail an approach to evaluating myo-mechanical properties in explanted mouse hindlimb muscle. This analysis provides a robust approach to quantitating the effects of genetic modification on muscle function, as well as comparison of therapies in mouse models of muscle disease.

İzole İskelet Kası Myo-mekanik Analizi

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force ...

Tıp

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to develop suitable animal models to study the events that unfold during ischemic insult. These techniques include transient or permanent, focal or global ischemia models using many different animal models, with the most common being rodents.
The permanent MCA ligation method which is also referred as pMCAo in the literature is used extensively as a focal ischemia model in rodents 1-6. This method was originally described for rats by Tamura et al. in 1981 7. In this protocol a craniotomy was used to access the MCA and the proximal regions were occluded by electrocoagulation. The infarcts involve mostly cortical and sometimes striatal regions depending on the location of the occlusion. This technique is now well established and used in many laboratories 8-13. Early use of this technique led to the definition and description of &#x201C;infarct core&#x201D; and &#x201C;penumbra&#x201D; 14-16, and it is often used to evaluate potential neuroprotective compounds 10, 12, 13, 17. Although the initial studies were performed in rats, permanent MCA ligation has been used successfully in mice with slight modifications 18-20 .
This model yields reproducible infarcts and increased post-survival rates. Approximately 80% of the ischemic strokes in humans happen in the MCA area 21 and thus this is a very relevant model for stroke studies. Currently, there is a paucity of effective treatments available to stroke patients, and thus there is a need for good models to test potential pharmacological compounds and evaluate physiological outcomes. This method can also be used for studying intracellular hypoxia response mechanisms in vivo. 
Here, we present the MCA ligation surgery in a C57/BL6 mouse. We describe the pre-surgical preparation, MCA ligation surgery and 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining for quantification of infarct volumes.

Middle cerebral artery (MCA) ligation is a technique to study focal cerebral ischemia in animal models. In this method, the middle cerebral artery is exposed by craniotomy and ligated by cauterization. This method gives highly reproducible infarct volumes and increased post-operative survival rates compared to other methods available.

Fare Daimi Orta Serebral Arter ligasyon Of Uygulama

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between 100-400 &mu;m in diameter function primarily in directing blood flow to various organs according to the overall requirements of the body. The rat mesenteric artery has a diameter greater than 100 &mu;m. The myography technique, first described by Mulvay and Halpern1, was based on the method proposed by Bevan and Osher2. The technique provides information about small vessels under isometric conditions, where substantial shortening of the muscle preparation is prevented. Since force production and sensitivity of vessels to different agonists is dependent on the extent of stretch, according to active tension-length relation, it is essential to conduct contraction studies under isometric conditions to prevent compliance of the mounting wires. Stainless steel wires are preferred to tungsten wires because of oxidation of the latter, which affects recorded responses3.The technique allows for the comparison of agonist-induced contractions of mounted vessels to obtain evidence for normal function of vascular smooth muscle cell receptors.
We have shown in several studies that isolated mesenteric arteries that are contracted with phenylyephrine relax upon addition of cumulative concentrations of extracellular calcium (Ca2+e). The findings led us to conclude that perivascular sensory nerves, which express the G protein-coupled Ca2+-sensing receptor (CaR), mediate this vasorelaxation response. Using an automated wire myography method, we show here that mesenteric arteries from Wistar, Dahl salt-sensitive(DS) and Dahl salt-resistant (DR) rats respond differently to Ca2+e. Tissues from Wistar rats showed higher Ca2+-sensitivity compared to those from DR and DS. Reduced CaR expression in mesenteric arteries from DS rats correlates with reduced Ca2+e-induced relaxation of isolated, pre-contracted arteries. The data suggest that the CaR is required for relaxation of mesenteric arteries under increased adrenergic tone, as occurs in hypertension, and indicate an inherent defect in the CaR signaling pathway in Dahl animals, which is much more severe in DS.
The method is useful in determining vascular reactivity ex vivo in mesenteric resistance arteries and similar small blood vessels and comparisons between different agonists and/or antagonists can be easily and consistently assessed side-by-side6,7,8.

An automated myography method for force measurements in isolated mesenteric arteries is described. It employs a Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myograph 510A to determine responses to phenylephrine and extracellular calcium. The method allows consistent determination of isometric responses to agonists in small vessels of diameters of 60 - 300 &mu;m, independently.

Otomatik Tel kasılmaların kâğıda çizilmesi Yüklü daralma ve Rahatlama Çalışmaları

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic response is a key regulator of local blood flow. In isobaric conditions small resistance arteries develop sustained constriction known as myogenic tone (MT), which is a major determinant of systemic vascular resistance (SVR). Hence, ex vivo&#160;pressurized preparations of small resistance arteries are major tools to study microvascular function in near-physiological states. To achieve this, a freshly isolated intact segment of a small resistance artery (diameter ~260 &#956;m) is mounted onto two small glass cannulas and pressurized. These arterial preparations retain most in vivo characteristics and permit assessment of vascular tone in real-time. Here we provide a detailed protocol for assessing vasoactivity in pressurized small resistance mesenteric arteries from rats; these arteries develop sustained vasoconstriction - approximately 25% of maximal diameter - when pressurized at 70 mmHg. These arterial preparations may be used to study the effect of investigational compounds on relationship between intra-arterial pressure and vasoactivity and determine changes in microvascular function in animal models of various diseases.

Pressure myography is used to assess vasoactivity of small arteries that develop sustained constriction when pressurized. This manuscript provides a detailed protocol to assess in isolated segments of small mesenteric arteries from rats, vasoactivity and the effect of intraluminal pressure on vascular diameter.

Basınç myography kullanma Direnç Mezenterik Arter ise andMyogenic Tepkisi ve vazoaktiviteye Değerlendirilmesi

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

Combined Intravital Microscopy and Contrast-enhanced Ultrasonography of the Mouse Hindlimb to Study Insulin-induced Vasodilation and Muscle Perfusion

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate postprandial delivery of nutrients and hormones to insulin-sensitive tissues. We here describe a technique for combining intravital microscopy (IVM) and contrast-enhanced ultrasonography (CEUS) of the adductor compartment of the mouse hindlimb to simultaneously visualize muscle resistance arteries and perfusion of the microcirculation in vivo. Simultaneously assessing insulin's effect at multiple levels of the vascular tree is important to study relationships between insulin's multiple vasoactive effects and muscle perfusion. Experiments in this study were performed in mice. First, the tail vein cannula is inserted for the infusion of anesthesia, vasoactive compounds and ultrasound contrast agent (lipid-encapsulated microbubbles). Second, a small incision is made in the groin area to expose the arterial tree of the adductor muscle compartment. The ultrasound probe is then positioned at the contralateral upper hindlimb to view the muscles in cross-section. To assess baseline parameters, the arterial diameter is assessed and microbubbles are subsequently infused at a constant rate to estimate muscle blood flow and microvascular blood volume (MBV). When applied before and during a hyperinsulinemic-euglycemic clamp, combined IVM and CEUS allow assessment of insulin-induced changes of arterial diameter, microvascular muscle perfusion and whole-body insulin sensitivity. Moreover, the temporal relationship between responses of the microcirculation and the resistance arteries to insulin can be quantified. It is also possible to follow-up the mice longitudinally in time, making it a valuable tool to study changes in vascular and whole-body insulin sensitivity.

Insulin-induced vasodilation regulates muscle perfusion and increases the microvascular surface area (microvascular recruitment) available for solute exchange between blood and tissue interstitium. Combined intravital microscopy and contrast-enhanced ultrasonography is presented to simultaneously assess insulin&#39;s action at the larger vessels and the microcirculation in vivo.

Intravital mikroskobu ve kontrast-artırılmış Ultrasonografi fare Hindlimb, insülin kaynaklı vazodilatasyon ve kas perfüzyon çalışmaya kombine

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate ...

Assessing Murine Resistance Artery Function Using Pressure Myography

Pressure myograph systems are exquisitely useful in the functional assessment of small arteries, pressurized to a suitable transmural pressure. The near physiological condition achieved in pressure myography permits in-depth characterization of intrinsic responses to pharmacological and physiological stimuli, which can be extrapolated to the in vivo behavior of the vascular bed. Pressure myograph has several advantages over conventional wire myographs. For example, smaller resistance vessels can be studied at tightly controlled and physiologically relevant intraluminal pressures. Here, we study the ability of 3rd order mesenteric arteries (3-4 mm long), preconstricted with phenylephrine, to vaso-relax in response to acetylcholine. Mesenteric arteries are mounted on two cannulas connected to a pressurized and sealed system that is maintained at constant pressure of 60 mmHg. The lumen and outer diameter of the vessel are continuously recorded using a video camera, allowing real time quantification of the vasoconstriction and vasorelaxation in response to phenylephrine and acetylcholine, respectively.
	To demonstrate the applicability of pressure myography to study the etiology of cardiovascular disease, we assessed endothelium-dependent vascular function in a murine model of systemic hypertension. Mice deficient in the &alpha;1 subunit of soluble guanylate cyclase (sGC&alpha;1-/-) are hypertensive when on a 129S6 (S6) background (sGC&alpha;1-/-S6) but not when on a C57BL/6 (B6) background (sGC&alpha;1-/-B6). Using pressure myography, we demonstrate that sGC&alpha;1-deficiency results in impaired endothelium-dependent vasorelaxation. The vascular dysfunction is more pronounced in sGC&alpha;1-/-S6 than in sGC&alpha;1-/-B6 mice, likely contributing to the higher blood pressure in sGC&alpha;1-/-S6 than in sGC&alpha;1-/-B6 mice. 
	Pressure myography is a relatively simple, but sensitive and mechanistically useful technique that can be used to assess the effect of various stimuli on vascular contraction and relaxation, thereby augmenting our insight into the mechanisms underlying cardiovascular disease.

In pressure myography, an intact small segment of a vessel is mounted onto two small cannulas and pressurized to a suitable luminal pressure. Here, we describe the method to measure vasorelaxation response of the mouse 3rd order mesenteric arteries in c57 and sGC&alpha;1-/- mice using pressure myography.

Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak Murine Direnç Arter Fonksiyon değerlendirilmesi

Pressure myograph systems are  exquisitely useful in the functional assessment of small arteries, pressurized  to a suitable transmural pressure. The  ...

Biyoloji

Contractility Measurements on Isolated Papillary Muscles for the Investigation of Cardiac Inotropy in Mice

Papillary muscle isolated from adult mouse hearts can be used to study cardiac contractility during different physiological/pathological conditions. The contractile characteristics can be evaluated independently of external influences such as vascular tonus or neurohumoral status. It depicts a scientific approach between single cell measurements with isolated cardiac myocytes and in vivo studies like echocardiography. Thus, papillary muscle preparations serve as an excellent model to study cardiac physiology/pathophysiology and can be used for investigations like the modulation by pharmacological agents or the exploration of transgenic animal models. Here, we describe a method of isolating the murine left anterior papillary muscle to investigate cardiac contractility in an organ bath setup. In contrast to a muscle strip preparation isolated from the ventricular wall, the papillary muscle can be prepared in toto without damaging the muscle tissue severely. The organ bath setup consists of several temperature-controlled, gassed and electrode-equipped organ bath chambers. The isolated papillary muscle is fixed in the organ bath chamber and electrically stimulated. The evoked twitch force is recorded using a pressure transducer and parameters such as twitch force amplitude and twitch kinetics are analyzed. Different experimental protocols can be performed to investigate the calcium- and frequency-dependent contractility as well as dose-response curves of contractile agents such as catecholamines or other pharmaceuticals. Additionally, pathologic conditions like acute ischemia can be simulated.

Murine left ventricular papillary muscle can be used to investigate cardiac contractility in vitro. This article describes in detail the isolation and experimental protocols to study cardiac contractile characteristics.

Farelerde Kardiyak inotropiyi Soruşturma İzole papiller Kaslar kontraktilite Ölçümleri

Papillary muscle isolated from adult mouse hearts can be used to study cardiac contractility during different physiological/pathological conditions. The ...

Assessment of Vascular Tone Responsiveness using Isolated Mesenteric Arteries with a Focus on Modulation by Perivascular Adipose Tissues

Altered vascular tone responsiveness to pathophysiological stimuli contributes to the development of a wide range of cardiovascular and metabolic diseases. Endothelial dysfunction represents a major culprit for the reduced vasodilatation and enhanced vasoconstriction of arteries. Adipose (fat) tissues surrounding the arteries play important roles in the regulation of endothelium-dependent relaxation and/or contraction of the vascular smooth muscle cells. The cross-talks between the endothelium and perivascular adipose tissues can be assessed ex vivo using mounted blood vessels by a wire myography system. However, optimal settings should be established for arteries derived from animals of different species, ages, genetic backgrounds and/or pathophysiological conditions.

The protocol describes the use of wire myography to evaluate the transmural isometric tension of mesenteric arteries isolated from mice, with special consideration of the modulation by factors released from endothelial cells and perivascular adipose tissues.

Perivasküler Adipose dokularında modülasyon odaklı Izole mezenterik arterlerin kullanıldığı vasküler ton tepkisini değerlendirmek

Altered vascular tone responsiveness to pathophysiological stimuli contributes to the development of a wide range of cardiovascular and metabolic ...

Measurement of Endothelium-Dependent Vasorelaxation in the Mouse Thoracic Aorta Using Tensometric Small Volume Chamber Myography

Small volume chamber tensometric myography is a commonly used technique to evaluate the vascular contractility of small and large blood vessels in laboratory animals and small arteries isolated from human tissue. The technique allows researchers to maintain isolated blood vessels in a tightly controlled and standardized (near-physiological) setting, with the option of adjusting to various environmental factors, while challenging the isolated vessels with different pharmacological agents that can induce vasoconstriction or vasodilation. The myograph chamber also provides a platform to measure vascular reactivity in response to various hormones, inhibitors, and agonists that may impact the function of smooth muscle and endothelial layers separately or simultaneously. The blood vessel wall is a complex structure consisting of three different layers: the intima (endothelial layer), media (smooth muscle and elastin fibers), and adventitia (collagen and other connective tissue). To gain a clear understanding of the functional properties of each layer, it is critical to have access to an experimental platform and system that would allow for a combinational approach to study all three layers simultaneously. Such an approach demands access to a semi-physiological condition that would mimic the in vivo environment in an ex vivo setting. Small volume chamber tensometric myography has provided an ideal environment to evaluate the impact of environmental cues, experimental variables, or pharmacological agonists and antagonists on vascular properties. For many years, scientists have used the tensometric myograph technique to measure endothelial function and smooth muscle contractility in response to different agents. In this report, a small volume chamber tensometric myograph system is used to measure endothelial function in the isolated mouse aorta. This report focuses on how small volume chamber tensometric myography can be used to evaluate the functional integrity of the endothelium in small segments of a large artery such as the thoracic aorta.

The present protocol describes the concepts and technical application of the tensometric myograph technique using a multi-chamber myograph system in the experimental ex vivo assessment of mouse aortic endothelial function.