Name: harvesting venom toxins from assassin bugs and other heteropteran insects
Uploaded: 2018-04-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Harvesting Venom Toxins from Assassin Bugs and Other Heteropteran Insects at JoVE.com

Mali anıyoruz Avustralya Ulusal Sağlık ve tıbbi araştırma Konseyi (asıl araştırma bursu Avustralya Araştırma Konseyi (hibe DP130103813 ve LP140100832 G.F.K., DECRA bursu DE160101142 için EABU için), destek APP1044414 G.F.K. için) ve Queensland Üniversitesi (doktora sonrası bursu A.A.W. için).

Bu iletişim kuralı sorumlu bakım ve hayvanların kullanımı öğretim ve araştırma (PPL 4.20.11) yanı sıra ulusal sağlık ve tıbbi araştırma Konseyi Avustralya şifre için kaygı ve kullanımı içinde yola University in Queenslands İlkesi ile uyumludur. hayvanların bilimsel amaçlar için (8th Edition 2013).
Dikkat: envenomated assassin hataları işlerken olmaması için dikkat ediniz. Zehir savunma tükürmek türler işlerken gözleri korumak için özen gösterin. Kendine iyi bak boyunca deneysel hayvan incitmek değil. Bu bağlar gibi lastik bantlar üzerinde baskı izleme ve hortum kırık değil sağlanması içerir.
Not: İsteğe bağlı olarak, CO2 0,5-2 için maruz hayvanlar uyuşturan min veya içinde zehir hasat öncesi 4-10 ° C'ye soğutma güvenli aktarımı ve kısıtlama kolaylaştırmak için 1-3 amaçlamaktadır. Anestezi kesinlikle gerekli değildir ancak güvenli kısıtlama çevik veya güçlü örneklerin kolaylaştırabilir. Ancak, hayvan zehir hasat izin vermek için uyanık olması gerekir. Aşağı akım uygulamaları proteaz inhibitörleri eklemek olup olmadığını karar verirken göz önünde bulundurun.
1. hasat zehir toksin elektrostimülasyon tarafından
<ol><li>Toksinler hasat edilecek canlı örnekleri edinin.</li>
	<li>Kullanım önceden hazırlanmış plastik cımbız pozitif ve negatif elektrotlar ile her iki ucuna monte. Elektrikli cımbız bir electrostimulator veya gerilim ayarlanmasını sağlar sabit voltaj kaynağı bağlanın.<ol>
<li>Küçük (~ 10 mm) ve büyük (~ 25 mm) katil böcekler için en yüksek voltaj 15 ve 25 V sırasıyla kullanın.</li>
		<li>Dev su böcekleri gibi daha büyük heteropterans için 40 V kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Canlı hata onlara göğüs üzerinde bir lastik bant kullanarak bir platforma şeritleme dizginlemek.</li>
	<li>Hortum ucu uygun bir toplama ucu yerleştirin. Assassin hatalar için P200 pipet ipucu kullanın. Dev su böcekleri için kapalı diyafram boyutunu artırmak için P200 bahşiş ekstremite kesti.<ol>
<li>Yavaşça hortum temiz cımbız kapalı bir çift ile Asansör ve hortum sonunda üzerinde toplama ucu açık diyafram itin.</li>
		<li>İstenirse, hortum toplama içine yerleştirerek önce µL ultrasaf su alımını ~ 5 ipucu. Hasat zehir seyreltilmiş rağmen bu ipucu içinde kalan zehir kayıplarını azaltır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Elektrostimülasyon uygulanır. 2.5 M NaCl/50% gliserol gibi iletken jel uyarıcı elektrotlar daldırma. Elektrotlar Toraks için geçerlidir. Belostomatids için iki elektrot başın arka dorsal yüzeye uygulanır.</li>
	<li>Autodegradation önlemek için zehir saklayın. Hızlı bir şekilde zehir kalıptan çekilmiş sonra bir tüp-20 ° C veya-60 ° C veya proteaz inhibitörü kokteyl içeren bir tüp aktarın.</li>
	<li>1,5 ve 1,6 yeterli zehir kazanılır veya başka hiçbir zehir gelecek kadar yineleyin.</li>
</ol>2. zehir toksin tarafından taciz hasat
<ol><li>Hayvanlar zehir hasat için hazırlamak ve alt bölümleri 1.1 ve 1.3-1.4 açıklandığı gibi bir koleksiyon giriş hortum ucu yerleştirin.</li>
	<li>Zehir kendiliğinden kalıptan çekilmiş, 2.3 adıma gidin. Eğer değilse, hayvanların zehiri üretilen kadar yavaşça bu bacaklar, karın ve anten cımbız ile dokunmak tarafından taciz.</li>
	<li>Hızlı bir şekilde zehir bir tüp-20 ° C-60 ° C veya bir tüp içeren proteaz inhibitörü kokteyl, istenirse aktarın.</li>
</ol>3. hasat tarafından taciz "Türler tükürme" Venom zehir toksinlerin
<ol><li>Uyuşturan veya kısmen uyuşturan, böcek herhangi bir erken savunma tükürme önlemek için onun muhafaza--dan çıkarmadan önce.</li>
	<li>Davranış tükürme zehir kışkırtmak. İçeren ve bir standart 90 x 16 mm Petri kabına derin kapağını kullanarak böcek yeniden konumlandırmak. Kapak biraz arka ve 1-4 cm uçuş önlemek için böcek yukarıda tutun. Çoğu böcek birkaç kez, genellikle hızlı bir şekilde tükürmek. Tüm zehir çanak alt toplanan emin olun.</li>
	<li>Venom 10 µL ultrasaf su ile durulama tarafından Petri kabına alt toplamak. Hızlı bir şekilde bir tüp-20 ° C veya-60 ° C veya proteaz inhibitörü kokteyl içeren bir tüp aktarın.</li>
</ol>4. hasat zehir toksin bezi diseksiyon tarafından
<ol><li>Hayvanlar kurban. Ağır uyuşturan veya öldürmek kullanarak Hayvanlar > 5 dk pozlama CO2. Saf CO2 doğrudan air-deliklere hayvanın konut bariyer boru.</li>
	<li>Diseksiyon tepsi için PIN böcek. Assassin hatalar için menfez yüzey (4.3) incelemek. Dev su böcekleri için sırt yüzey (4.4) incelemek.</li>
	<li>Ventral diseksiyon<ol>
<li>Üç pimleri böcek zehiri bezleri Delme olmadan basılı posterior karın içine takın.</li>
		<li>Kısa bir ensizyon minyatür neşter kullanarak karın ventral yüzeyde kesti. Minyatür makas Ensizyon exoskeleton sadece kesip iç yapıları zarar vermemeye dikkat çekici kafaya anteriorly genişletmek için kullanın.</li>
		<li>İç yapıları ortaya çıkarmak için Ensizyon böcek tarafına uzanan birden çok yan kesim yapmak. Sonra her flep iç yapıları ortaya çıkarmak için ventral ezilecektir pin.</li>
		<li>Büyük katil böcekler için dört yan kesik, orta Karin, ön karın, birinci ve ikinci bacak arasına ve ilk ayağı önünde olun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Dorsal diseksiyon<ol>
<li>Kanatları üssü yakınlarında kaldırın. Üç pimleri böcek zehiri bezleri Delme olmadan basılı posterior karın içine takın.</li>
		<li>Bir ensizyon baş minyatür makas ve neşter, exoskeleton sadece kesip iç yapıları zarar vermemeye dikkat çekici kullanarak karın kesme.</li>
		<li>Böcek iki yarısını ayrı zorlamak. Yanal iç boşluğu maruz bırakmak böcek uzunluğu boyunca birkaç iğne yerleştirin.</li>
		<li>Cımbız kullanarak uçuş kasları kaldırın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Diseksiyon tepsi sel. Hata iç yapıları yukarı yüzer ve olmak izin vermek için batık kadar PBS daha kolayca görselleştirildiği ekleyin.</li>
	<li>Cımbız ve mikro-makas kullanarak, bağ ve sinir dokusu ve trakea dikkatli bir şekilde çıkarın. Zehir bezleri, yarı saydam yapıları kurbanın kanal her kenarı boyunca uzanan uzamış gibi görünür.<ol>
<li>Ana bezi tarafından anterior ve posterior LOB ve iki kanalları hilus toplantı ile karakteristik görünümünü tanımlayın.</li>
		<li>İstenirse, Aksesuar bezi kanal üzerinden hilus izini sürerek tanımlayın. Ana bezi hilus yayılan iki boru kesim tarafından ücretsiz.</li>
	</ol>
</li>
	<li>İstenen bezi Lümen hasat. Bezinin bir microcentrifuge için PBS veya PBS 30 µL içeren buza aktarım proteaz inhibitörü kokteyl artı. Temiz keskin iğne ile bezleri lance.<ol>
<li>10 s ve bezi Lümen boşaltmak için santrifüj (1 dk, 5000 × g, 4 ° C) için girdap. Glandüler doku cımbız kullanarak kaldırın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Toksin özü netleştirmek. Santrifüj (5 dk, 17.000 × g, 4° C) süpernatant istinat ve Pelet atarak herhangi bir katı parçacıkları kaldırmak için. -20 ° C veya autoproteolytic yıkımı önlemek için-60 ° C saklayın.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Walker, A. A., Weirauch, C., Fry, B. G., King, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Venoms+of+heteropteran+insects:+A+treasure+trove+of+diverse+pharmacological+toolkits.">Venoms of heteropteran insects: A treasure trove of diverse pharmacological toolkits.</a> Toxins. 8 (2), 43 (2016).</li><li>Ribeiro, J. M. C., Assump&#231;&#227;o, T. C., Francischetti, I. M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+insight+into+the+sialomes+of+bloodsucking+Heteroptera.">An insight into the sialomes of bloodsucking Heteroptera.</a> Psyche (Stuttg). 2012, 1-16 (2012).</li><li>Ambrose, D. P., Maran, S. P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+protein+content+and+paralytic+potential+of+saliva+of+fed+and+prey+deprived+reduviid+Acanthaspis+pedestris+St&#229;l+(Heteroptera:+Reduviidae:+Reduviinae).">Quantification protein content and paralytic potential of saliva of fed and prey deprived reduviid Acanthaspis pedestris St&#229;l (Heteroptera: Reduviidae: Reduviinae).</a> Indian Journal of Environmental Science. 3 (1), 11-16 (1999).</li><li>Edwards, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+action+and+compostion+of+the+saliva+of+an+assassin+bug+Platymeris+rhadamanthus+Gaerst.+(Hemiptera,+Reduviidae).">The action and compostion of the saliva of an assassin bug Platymeris rhadamanthus Gaerst. (Hemiptera, Reduviidae).</a> Journal of Experimental Biology. 38, 61-77 (1961).</li><li>Zerachia, T., Bergmann, F., Shulov, A., Kaiser, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Animal and Plant Toxins. , 143-146 (1973).</li><li>Walker, A. A., Hern&#225;ndez-Vargas, M. J., Corzo, G., Fry, B. G., King, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Giant+fish-killing+water+bug+reveals+ancient+and+dynamic+venom+evolution+in+Heteroptera.">Giant fish-killing water bug reveals ancient and dynamic venom evolution in Heteroptera.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. , (2018).</li><li>Walker, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Giant+fish-killing+water+bug+reveals+ancient+and+dynamic+venom+evolution+in+Heteroptera.">Giant fish-killing water bug reveals ancient and dynamic venom evolution in Heteroptera.</a> Cell. Mol. Life Sci. , (2018).</li><li>Walker, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+assassin+bug+Pristhesancus+plagipennis+produces+two+distinct+venoms+in+separate+gland+lumens.">The assassin bug Pristhesancus plagipennis produces two distinct venoms in separate gland lumens.</a> Nature Communications. 9 (1), 755 (2018).</li><li>Hern&#225;ndez-Vargas, M. J., Santib&#225;&#241;ez-L&#243;pez, C. E., Corzo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+insight+into+the+triabin+protein+family+of+American+hematophagous+reduviids:+Functional,+structural+and+phylogenetic+analysis.">An insight into the triabin protein family of American hematophagous reduviids: Functional, structural and phylogenetic analysis.</a> Toxins. 8 (2), 44 (2016).</li><li>Dan, A., Pereira, M. H., Pesquero, J. L., Diotaiuti, L., Beirao, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action+of+the+saliva+of+Triatoma+infestans+(Heteroptera:+Reduviidae)+on+sodium+channels.">Action of the saliva of Triatoma infestans (Heteroptera: Reduviidae) on sodium channels.</a> Journal of Medical Entomology. 36 (6), 875-879 (1999).</li><li>Corzo, G., Adachi-Akahane, S., Nagao, T., Kusui, Y., Nakajima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+peptides+from+assassin+bugs+(Hemiptera:+Reduviidae):+isolation,+chemical+and+biological+characterization.">Novel peptides from assassin bugs (Hemiptera: Reduviidae): isolation, chemical and biological characterization.</a> FEBS Letters. 499 (3), 256-261 (2001).</li><li>Sahayaraj, K., Kumar, S. M., Anandh, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+milking+and+electric+shocks+for+venom+collection+from+hunter+reduviids.">Evaluation of milking and electric shocks for venom collection from hunter reduviids.</a> Entomon. 31 (1), 65-68 (2006).</li><li>Silva-Cardoso, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paralytic+activity+of+lysophosphatidylcholine+from+saliva+of+the+waterbug+Belostoma+anurum.">Paralytic activity of lysophosphatidylcholine from saliva of the waterbug Belostoma anurum.</a> Journal of Experimental Biology. 213 (19), 3305-3310 (2010).</li><li>Noeske-Jungblut, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triabin,+a+highly+potent+exosite+inhibitor+of+Thrombin.">Triabin, a highly potent exosite inhibitor of Thrombin.</a> Journal of Biological Chemistry. 270 (48), 28629-28634 (1995).</li><li>Noeske-Jungblut, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inhibitor+of+collagen-induced+platelet+aggregation+from+the+saliva+of+Triatoma+pallidipennis.">An inhibitor of collagen-induced platelet aggregation from the saliva of Triatoma pallidipennis.</a> Journal of Biological Chemistry. 269 (7), 5050-5053 (1994).</li><li>Sahayaraj, K., Borgio, J. F., Muthukumar, S., Anandh, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial+activity+of+Rhynocoris+marginatus+(Fab.)+and+Catamirus+brevipennis+(Servile)+(Hemiptera:+Reduviidae)+venoms+against+human+pathogens.">Antibacterial activity of Rhynocoris marginatus (Fab.) and Catamirus brevipennis (Servile) (Hemiptera: Reduviidae) venoms against human pathogens.</a> Journal of Venomous Animals and Toxins Including Tropical Diseases. 12 (3), 487-496 (2006).</li><li>Haridass, E. T., Ananthakrishnan, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+morphology+of+the+salivary+system+in+some+reduviids+(Insecta-Heteroptera-Reduviidae).">Functional morphology of the salivary system in some reduviids (Insecta-Heteroptera-Reduviidae).</a> Proceedings of the Indian Academy of Sciences. Animal Sciences. 90 (2), 145-160 (1981).</li><li>Maran, S. P. M., Ambrose, D. P., Ignacimuth, A., Sen, A., Janarthanan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biotechnological Applications for Integrated Pest Management. , 125-131 (2000).</li><li>Maran, S. P. M., Selvamuthu, K., Rajan, K., Kiruba, D. A., Ambrose, D. P., Ambrose, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Insect Pest Management, A Current Scenario. , 346-361 (2011).</li><li>Pereira, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anticoagulant+activity+of+Triatoma+infestans+and+Panstrongylus+megistus+saliva+(Hemiptera/Triatominae).">Anticoagulant activity of Triatoma infestans and Panstrongylus megistus saliva (Hemiptera/Triatominae).</a> Acta Tropica. 61, 255-261 (1996).</li><li>Ribeiro, J. M., Marinotti, O., Gonzales, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+salivary+vasodilator+in+the+blood-sucking+bug,+Rhodnius+prolixus.">A salivary vasodilator in the blood-sucking bug, Rhodnius prolixus.</a> British Journal of Pharmacology. 101 (4), 932-936 (1990).</li><li>Ribeiro, J. M., Schneider, M., Guimar&#227;es, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+characterization+of+prolixin-S+(nitrophorin+2),+the+salivary+anticoagulant+of+the+blood-sucking+bug+Rhodnius+prolixus.">Purification and characterization of prolixin-S (nitrophorin 2), the salivary anticoagulant of the blood-sucking bug Rhodnius prolixus.</a> Biochem Journal. 308 (1), 243-249 (1995).</li><li>Swart, C. C., Deaton, L. E., Felgenhauer, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+salivary+gland+and+salivary+enzymes+of+the+giant+waterbugs+(Heteroptera;+Belostomatidae).">The salivary gland and salivary enzymes of the giant waterbugs (Heteroptera; Belostomatidae).</a> Comparative Biochemistry and Physiology A Molecular &amp; Integrative Physiology. 145 (1), 114-122 (2006).</li><li>Rasmussen, S., Young, B., Krimm, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+'spitting'+behaviour+in+cobras+(Serpentes:+Elapidae).">On the 'spitting' behaviour in cobras (Serpentes: Elapidae).</a> Journal of Zoology. 237 (1), 27-35 (1995).</li><li>Fink, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Venom+spitting+by+the+green+lynx+spider,+Peucetia+viridans+(Araneae,+Oxyopidae).">Venom spitting by the green lynx spider, Peucetia viridans (Araneae, Oxyopidae).</a> Journal of Arachnology. 12, 372-373 (1984).</li><li>Herzig, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogenesis,+gender,+molting+influence+the+venom+yield+in+the+spider+Coremiocnemis+tropix+(Araneae,+Theraphosidae).">Ontogenesis, gender, molting influence the venom yield in the spider Coremiocnemis tropix (Araneae, Theraphosidae).</a> Journal of Venomous Research. 1, 76-83 (2010).</li><li>Sahayaraj, K., Subramanium, M., Rivers, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+electrophoretic+analyses+of+saliva+from+the+predatory+reduviid+species+Rhynocoris+marginatus+(Fab).">Biochemical and electrophoretic analyses of saliva from the predatory reduviid species Rhynocoris marginatus (Fab).</a> Acta Biochimica Polonica. 60 (1), 91-97 (2013).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Assassin böcek zehiri hasat en kritik adımı uygun yönteme bağlı olarak çalışma amacı seçmektir. Heteropteran zehirlerini hasat için sunulan üç yöntemlerinden her birinin avantajları ve dezavantajları bağlı olarak aşağı akım uygulamaları vardır.
Böcek zehri gelen hortum (protokoller 1-3) sınırdışı inducing zehir kirlenme tarafından glandüler doku önler. Buna ek olarak, bu yöntemleri öldürücü olmayan ve birçok kez bir böceğin yaşamı boyunca tekrar edil...

Heteropteran zehirlerini kuvvetli biyoaktif maddeler1vardır. Örneğin, kan besleme Heteroptera kissing böcekler (Triatominae) ve yatak hata (Cimicidae) gibi zehir/tükürük salgılarını kolaylaştırır hemostaz2kesintiye tarafından besleme. Bu zehirlerini toksinler koagülasyon, trombosit toplama ve vazokonstriksiyona yanı sıra ağrı da dahil olmak üzere birden çok yolları hedef ve yolları kaşınıyor. Diğer çoğu heteropteran tür zehirlerini kan besleme yerine predasyona kolaylaştırmak için uyarlanmış. Onların zehirlerini felç, ölüm ve omurgasızlar3,4enjekte edildiğinde doku الرسالة neden. Omurgalılar enjekte edildiğinde onların venom aynı zamanda ciddi etkileri olabilir. Örneğin, omurgalıların içine assassin hata Holotrichius innesi zehir enjeksiyonu, ağrı, kas felci ve kanama neden olur; Fareler envenomated bu hata nedeniyle solunum felci5hızlı bir şekilde ölür.
Transcriptomic ve proteomik çalışmalar bazı heteropteran zehirlerini protein bileşimi ortaya çıkardı. Predaceous türlerin zehirlerini proteaz, diğer enzimler, peptidler ve proteinler bilinmeyen yapısı ve işlevi6,7,8de zengindir. Kissing böcek zehiri üyeleri derinden etkileyen koagülasyon, trombosit toplama ve vazokonstriksiyona2,9triabin protein ailesinden, zengindir. Ancak, hangi toksinler zehir çoğu bioactivities altında yatan bilinmemektedir. Örneğin, Triatoma infestans öpüşme böcek zehiri analjezik ve sodyum kanalları10inhibe bildirilmiştir, ama aydınlatılmamıştır için bileşenleri sorumlu kalır. Aynı şekilde, ne bileşenleri assassin böcek zehiri, felç veya ağrı neden bilinmemektedir. Belirli zehir bioactivities ve yapısı ve fonksiyonu romanı zehir toksinlerin karakterize sorumlu toksinler tanımlamak için bir ön koşul zehir almaktır.
Heteropterans elektrostimülasyon5,6,7,8,11,12,13tarafından savunma araçları provokasyon zehir elde edilen yanıt-e doğru4,8mekanik zehir bezleri8,17 dissekan Toraks12,14,15,16, sıkma, ,18,19,20,21,22ve23muscarinic asetilkolin reseptör agonistleri uygulanması. Potansiyel avantajları ve dezavantajları, herhangi bir yöntemin yargılamak karmaşık morfolojisi ile iki ayrı lümen, ön ana bezi (AMG) ve posterior ana bezi (PMG), ana bir bezi oluşur heteropteran zehir bezleri tarafından yanı sıra bir Aksesuar bezi (AG) ilişkili. Bu farklı bezi bölmeleri av yakalama, savunma ve ekstra oral sindirim8,17gibi farklı biyolojik işlevi için özelleştirilmiş farklı protein salgıları üretmek. Peiratine ve ectrichodiine assassin hataları, AMG av yakalama ve ekstra oral sindirim17ile PMG ile ilişkili olduğu düşünülmektedir. AMG savunma zehir8salgılaması için olan ise ancak, içinde harpactorine hata Pristhesancus plagipennis PMG av yakalama ve sindirim için uzmanlaşmıştır. AG assassin hata8 ' küçük salgı işleve sahip veya proteaz depolama dev su böcekleri23yılında büyük bir site olarak tarif edilmiştir. Açıkçası, daha fazla çalışma çeşitli heteropteran alt gruplar arasında her bezi bölmesi işlevini açıklığa kavuşturmak ve en zehir zehirli işlevini belirlemek için gereklidir. Bu raporu heteropterans bu hedefe doğru toksinlerin zehir hasat için protokolleri açıklamak.

<table><tbody><tr><td>Electostimulator</td><td>Grass Technologies</td><td>S48 Square Pulse Stimulator</td><td>Electrostimulator allowing pulsed electrostimulation</td></tr><tr><td>Featherlight tweezers</td><td>Australian Entomological Supplies</td><td>E122B</td><td>For handling live venomous insects</td></tr><tr><td>Protease inhibitor cocktail</td><td>Sigma</td><td>4693124001</td><td>For preventing autoproteolytic digestion of venom</td></tr><tr><td>Dissection equipment</td><td>Australian Entomological Supplies</td><td>E152Micro</td><td>For fine dissections</td></tr><tr><td>Insect pins</td><td>Australian Entomological Supplies</td><td>E162</td><td>For fine dissections</td></tr></tbody></table>

harvesting venom toxins from assassin bugs and other heteropteran insects

Heteropteran böcekler katil böcekler (Reduviidae) ve dev su böcekleri (Belostomatidae) gibi ortak bir predaceous ve zehirli atadan soyundan ve trofik bu strateji kaybolmamış heteropterans çoğunluğu korumak. Bazı heteropterans omurgalı kanıyla beslemeye geçiş (kissing hataları, Triatominae; gibi ve tahtakurusu, Cimicidae) diğerleri bitkiler (en Pentatomomorpha) beslemeye yayıncısıysanız iken. Ancak, kan besleme, küçük kolaylaştırmak için kissing böcek tarafından kullanılan tükürük dışında örümcekler, Akrep ve yılan zehirlerini karşılaştırıldığında heteropteran zehirlerini hakkında bilinir.
Yapısı ve fonksiyonu olan hem morfolojik karmaşık ve birden fazla biyolojik rolü (Savunma, av yakalama ve ekstra oral sindirim) gerçekleştirmek venom/Labyal bezlerinin heteropteran zehir toksin karakterizasyonu için bir engeldir. Bu makalede, biz başarılı bir şekilde heteropteran zehirlerini toplamak için kullanılan üç yöntem açıklanmaktadır. İlk olarak, biz mevcut elektrostimülasyon kez içine enjekte edildiğinde öldürücü zehir toplamak için kullanışlı bir yol av hayvanları ve hangi tarafından glandüler doku kirlenme namussuz. İkinci olarak, hayvanların nazik taciz hortum ve/veya heteropterans bazı gruplar halinde tükürük venom zehir ekstrüzyon üretmek için yeterli olduğunu göstereceğiz. Üçüncü olarak, zehir toksin zehir bezleri elde etmek için anaesthetized hayvanlar diseksiyon tarafından hasat yöntemleri açıklanmaktadır. Bu yöntem diğer yöntemler için tamamlayıcı olduğu takson elektrostimülasyon ve taciz etkisiz neden olan toksinlerin hasat izin verebilir. Bu protokoller araştırmacılar heteropteran böcekler yapı-fonksiyon karakterizasyonu ve olası uygulamaları tıp ve tarım için toksinlerin hasat için olanak sağlar.

Harpactorine P. plagipennis ve reduviine Platymeris rhadamanthus, bazı heteropteran türlerin büyük miktarlarda (5-20 µL) zehir elektrostimülasyon (Tablo 1) karşılık olarak, güvenilir bir şekilde verim. Genel olarak, çoğu peiratine, reduviine ve harpactorine böcek zehiri yanıt olarak bu yöntem verim. Stenopodaine böcek arasında elektrostimülasyon zehir Oncocephalus sp. ama sp Thodelmus elde edildi. Örnek holoptiline v...

Watch this Scientific Journal Video about Harvesting Venom Toxins from Assassin Bugs and Other Heteropteran Insects at JoVE.com

Harvesting Venom Toxins from Assassin Bugs and Other Heteropteran Insects

Her ne kadar alt Heteroptera içinde birçok böcekler (Insecta: Hemiptera) zehirli, onların venom kompozisyon ve onların venom toksinleri işlevleri vardır çoğunlukla bilinmeyen. Bu iletişim kuralı heteropteran zehirlerini elektrostimülasyon, taciz ve bezi diseksiyon kullanarak daha fazla karakterizasyonu için hasat yöntemleri açıklar.

Venom toksinlerin Assassin böcek ve diğer Heteropteran böcekler hasat

Heteropteran insects such as assassin bugs (Reduviidae) and giant water bugs (Belostomatidae) descended from a common predaceous and venomous ancestor, ...

harvesting-venom-toxins-from-assassin-bugs-other-heteropteran

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Environment

13.0K Görüntüleme.  The University of Queensland. Her ne kadar alt Heteroptera içinde birçok böcekler (Insecta: Hemiptera) zehirli, onların venom kompozisyon ve onların venom toksinleri işlevleri vardır çoğunlukla bilinmeyen. Bu iletişim kuralı heteropteran zehirlerini elektrostimülasyon, taciz ve bezi diseksiyon kullanarak daha fazla karakterizasyonu için hasat yöntemleri açıklar.

Video: Harvesting Venom Toxins from Assassin Bugs and Other Heteropteran Insects

Helminth Collection and Identification from Wildlife

Wild animals are commonly parasitized by a wide range of helminths. The four major types of helminths are &#34;roundworms&#34; (nematodes), &#34;thorny-headed worms&#34; (acanthocephalans), &#34;flukes&#34; (trematodes), and &#34;tapeworms&#34; (cestodes). The optimum method for collecting helminths is to examine a host that has been dead less than 4-6 hr since most helminths will still be alive. A thorough necropsy should be conducted and all major organs examined. Organs are washed over a 106 &#956;m sieve under running water and contents examined under a stereo microscope. All helminths are counted and a representative number are fixed (either in 70% ethanol, 10% buffered formalin, or alcohol-formalin-acetic acid). For species identification, helminths are either cleared in lactophenol (nematodes and small acanthocephalans) or stained (trematodes, cestodes, and large acanthocephalans) using Harris&#39; hematoxylin or Semichon&#39;s carmine. Helminths are keyed to species by examining different structures (e.g. male spicules in nematodes or the rostellum in cestodes). The protocols outlined here can be applied to any vertebrate animal. They require some expertise on recognizing the different organs and being able to differentiate helminths from other tissue debris or gut contents. Collection, preservation, and staining are straightforward techniques that require minimal equipment and reagents. Taxonomic identification, especially to species, can be very time consuming and might require the submission of specimens to an expert or DNA analysis.

Wild animals are commonly parasitized by a wide range of helminths.&#160; The four major types of helminths are &#8220;roundworms&#8221; (nematodes), &#8220;thorny-headed worms&#8221; (acanthocephalans), &#8220;flukes&#8221; (trematodes), and &#8220;tapeworms&#8221; (cestodes).&#160; Here we describe how helminths are collected from a vertebrate animal and how they are preserved and taxonomically identified.&#160;

Wild animals are commonly parasitized by a wide range of helminths. The four major types of helminths are &#34;roundworms&#34; (nematodes), ...

Çevre

Quantification of Heavy Metals and Other Inorganic Contaminants on the Productivity of Microalgae

Increasing demand for renewable fuels has researchers investigating the feasibility of alternative feedstocks, such as microalgae. Inherent advantages include high potential yield, use of non-arable land and integration with waste streams. The nutrient requirements of a large-scale microalgae production system will require the coupling of cultivation systems with industrial waste resources, such as carbon dioxide from flue gas and nutrients from wastewater. Inorganic contaminants present in these wastes can potentially lead to bioaccumulation in microalgal biomass negatively impact productivity and limiting end use. This study focuses on the experimental evaluation of the impact and the fate of 14 inorganic contaminants (As, Cd, Co, Cr, Cu, Hg, Mn, Ni, Pb, Sb, Se, Sn, V and Zn) on Nannochloropsis salina growth. Microalgae were cultivated in photobioreactors illuminated at 984 &#181;mol m-2 sec-1 and maintained at pH 7 in a growth media polluted with inorganic contaminants at levels expected based on the composition found in commercial coal flue gas systems. Contaminants present in the biomass and the medium at the end of a 7 day growth period were analytically quantified through cold vapor atomic absorption spectrometry for Hg and through inductively coupled plasma mass spectrometry for As, Cd, Co, Cr, Cu, Mn, Ni, Pb, Sb, Se, Sn, V and Zn. Results show N. salina is a sensitive strain to the multi-metal environment with a statistical decrease in biomass yieldwith the introduction of these contaminants. The techniques presented here are adequate for quantifying algal growth and determining the fate of inorganic contaminants.

Integration of microalgal cultivation with industrial flue gas will ultimately introduce heavy metals and other inorganic compounds into the growth media. This study presents a procedure used to determine the end fate and impact of heavy metals and inorganic contaminants on the growth of Nannochloropsis salina grown in photobioreactors.

Ağır Metal ve Mikroalglerden Verimlilik Diğer İnorganik Bulaşanlar Kantitasyonu

Increasing demand for renewable fuels has researchers investigating the feasibility of alternative feedstocks, such as microalgae. Inherent advantages ...

Assaying Predatory Feeding Behaviors in Pristionchus and Other Nematodes

This protocol provides multiple methods for the analysis and quantification of predatory feeding behaviors in nematodes. Many nematode species including Pristionchus pacificus display complex behaviors, the most striking of which is the predation of other nematode larvae. However, as these behaviors are absent in the model organism Caenorhabditis elegans, they have thus far only recently been described in detail along with the development of reliable behavioral assays 1. These predatory behaviors are dependent upon phenotypically plastic but fixed mouth morphs making the correct identification and categorization of these animals essential. In P. pacificus there are two mouth types, the stenostomatous and eurystomatous morphs 2, with only the wide mouthed eurystomatous containing an extra tooth and being capable of killing other nematode larvae. Through the isolation of an abundance of size matched prey larvae and subsequent exposure to predatory nematodes, assays including both "corpse assays" and "bite assays" on correctly identified mouth morph nematodes are possible. These assays provide a means to rapidly quantify predation success rates and provide a detailed behavioral analysis of individual nematodes engaged in predatory feeding activities. In addition, with the use of a high-speed camera, visualization of changes in pharyngeal activity including tooth and pumping dynamics are also possible.

Assaying Predatory Feeding Behaviors in Pristionchus and Other Nematodes

Behavioral assays provide powerful tools for understanding neuronal function. Here we present several protocols for quantifying predatory feeding behavior found in the model nematode Pristionchus pacificus and its relatives. Additionally, we provide methods for analyzing predatory feeding adaptations including mouth structures and teeth.

içinde Yırtıcı Beslenme Davranışları tahlil<em&gt; Pristionchus</em&gt; Ve Diğer Nematodlar

This protocol provides multiple methods for the analysis and quantification of predatory feeding behaviors in nematodes. Many nematode species including ...

Extraction of Organochlorine Pesticides from Plastic Pellets and Plastic Type Analysis

Plastic resin pellets, categorized as microplastics (&#8804;5 mm in diameter), are small granules that can be unintentionally released to the environment during manufacturing and transport. Because of their environmental persistence, they are widely distributed in the oceans and on beaches all over the world. They can act as a vector of potentially toxic organic compounds (e.g., polychlorinated biphenyls) and might consequently negatively affect marine organisms. Their possible impacts along the food chain are not yet well understood. In order to assess the hazards associated with the occurrence of plastic pellets in the marine environment, it is necessary to develop methodologies that allow for rapid determination of associated organic contaminant levels. The present protocol describes the different steps required for sampling resin pellets, analyzing adsorbed organochlorine pesticides (OCPs) and identifying the plastic type. The focus is on the extraction of OCPs from plastic pellets by means of a pressurized fluid extractor (PFE) and on the polymer chemical analysis applying Fourier Transform-InfraRed (FT-IR) spectroscopy. The developed methodology focuses on 11 OCPs and related compounds, including dichlorodiphenyltrichloroethane (DDT) and its two main metabolites, lindane and two production isomers, as well as the two biologically active isomers of technical endosulfan. This protocol constitutes a simple and rapid alternative to existing methodology for evaluating the concentration of organic contaminants adsorbed on plastic pieces.

Microplastics act as vector of potentially toxic organic contaminants with unpredictable effects. This protocol describes an alternative methodology for assessing the levels of organochlorine pesticides adsorbed on plastic pellets and identifying the polymer chemical structure. The focus is on pressurized fluid extraction and attenuated total reflectance Fourier transform infrared spectroscopy.

Plastik Peletlerden Organochlorine Pestisitlerin Çıkarılması ve Plastik Tipi Analizi

Plastic resin pellets, categorized as microplastics (&#8804;5 mm in diameter), are small granules that can be unintentionally released to the environment ...

Extraction and Characterization of Surfactants from Atmospheric Aerosols

Surface-active compounds, or surfactants, present in atmospheric aerosols are expected to play important roles in the formation of liquid water clouds in the Earth&#39;s atmosphere, a central process in meteorology, hydrology, and for the climate system. But because specific extraction and characterization of these compounds have been lacking for decades, very little is known on their identity, properties, mode of action and origins, thus preventing the full understanding of cloud formation and its potential links with the Earth&#39;s ecosystems.
In this paper we present recently developed methods for 1) the targeted extraction of all the surfactants from atmospheric aerosol samples and for the determination of 2) their absolute concentrations in the aerosol phase and 3) their static surface tension curves in water, including their Critical Micelle Concentration (CMC). These methods have been validated with 9 references surfactants, including anionic, cationic and non-ionic ones. Examples of results are presented for surfactants found in fine aerosol particles (diameter &#60;1 &#956;m) collected at a coastal site in Croatia and suggestions for future improvements and other characterizations than those presented are discussed.

Methods are presented for the targeted extraction of surfactants present in atmospheric aerosols and the determination of their absolute concentrations and surface tension curves in water, including their Critical Micelle Concentration (CMC).

Atmosferik Aerosoller ekstraksiyonu ve Yüzey Aktif Karakterizasyonu

Surface-active compounds, or surfactants, present in atmospheric aerosols are expected to play important roles in the formation of liquid water clouds in ...

Trichogramma dendrolimi ve Venom Ekstraksiyonu ile Yapay Konak Parazitizasyonu

Extracting Venom from the Parasitoid Wasp Trichogramma dendrolimi Using an Artificial Host

Parasitoid wasps are a diverse group of hymenopteran insects that serve as invaluable resources for pest biocontrol. To ensure successful parasitism, parasitoid wasps inject venom into their hosts to suppress their hosts&#39; immunity, modulate hosts&#39; development, metabolism, and even behavior. With over 600,000 estimated species, the diversity of parasitoid wasps surpasses that of other venomous animals, such as snakes, cone snails, and spiders. Parasitoid wasp venom is an underexplored source of bioactive molecules with potential applications in pest control and medicine. However, collecting parasitoid venom is challenging due to the inability to use direct or electrical stimulation and the difficulty in dissection because of their small size. Trichogramma is a genus of tiny (~0.5 mm) egg parasitoid wasps that are widely used for the biological control of lepidopteran pests in both agriculture and forests. Here, we report a method for extracting venom from T. dendrolimi using artificial hosts. These artificial hosts are created with polyethylene film and amino acid solutions and then inoculated with Trichogramma wasps for parasitism. The venom was subsequently collected and concentrated. This method enables the extraction of large amounts of Trichogramma venom while avoiding contamination from other tissues caused by dissection, a common issue in venom reservoir dissection protocols. This innovative approach facilitates the study of Trichogramma venom, paving the way for new research and potential applications.

Yazar Spotlight: Trichogramma Parazitoid Yaban Arılarından Verimli Zehir Ekstraksiyon Yöntemi 

Here, we present a protocol for extracting venom from Trichogramma dendrolimi using an artificial host created with polyethylene film and amino acid solution.

Parazitoid Yaban Arısı Trichogramma dendrolimi'den Yapay Bir Konakçı Kullanarak Zehir Çıkarılması

Parasitoid wasps are a diverse group of hymenopteran insects that serve as invaluable resources for pest biocontrol. To ensure successful parasitism, ...

Biyokimya

Microdissection of Black Widow Spider Silk-producing Glands

Modern spiders spin high-performance silk fibers with a broad range of biological functions, including locomotion, prey capture and protection of developing offspring 1,2. Spiders accomplish these tasks by spinning several distinct fiber types that have diverse mechanical properties. Such specialization of fiber types has occurred through the evolution of different silk-producing glands, which function as small biofactories. These biofactories manufacture and store large quantities of silk proteins for fiber production. Through a complex series of biochemical events, these silk proteins are converted from a liquid into a solid material upon extrusion.
Mechanical studies have demonstrated that spider silks are stronger than high-tensile steel 3. Analyses to understand the relationship between the structure and function of spider silk threads have revealed that spider silk consists largely of proteins, or fibroins, that have block repeats within their protein sequences 4. Common molecular signatures that contribute to the incredible tensile strength and extensibility of spider silks are being unraveled through the analyses of translated silk cDNAs. Given the extraordinary material properties of spider silks, research labs across the globe are racing to understand and mimic the spinning process to produce synthetic silk fibers for commercial, military and industrial applications. One of the main challenges to spinning artificial spider silk in the research lab involves a complete understanding of the biochemical processes that occur during extrusion of the fibers from the silk-producing glands.
Here we present a method for the isolation of the seven different silk-producing glands from the cobweaving black widow spider, which includes the major and minor ampullate glands [manufactures dragline and scaffolding silk] 5,6, tubuliform [synthesizes egg case silk] 7,8, flagelliform [unknown function in cob-weavers], aggregate [makes glue silk], aciniform [synthesizes prey wrapping and egg case threads] 9 and pyriform [produces attachment disc silk] 10. This approach is based upon anesthetizing the spider with carbon dioxide gas, subsequent separation of the cephalothorax from the abdomen, and microdissection of the abdomen to obtain the silk-producing glands. Following the separation of the different silk-producing glands, these tissues can be used to retrieve different macromolecules for distinct biochemical analyses, including quantitative real-time PCR, northern- and western blotting, mass spectrometry (MS or MS/MS) analyses to identify new silk protein sequences, search for proteins that participate in the silk assembly pathway, or use the intact tissue for cell culture or histological experiments.

Here we describe an efficient strategy to remove the silk-producing glands from the abdomen of female black widow spiders. This procedure allows the rapid isolation of the seven distinct silk-producing glands in a highly purified fashion, an important process for investigators studying spider silk production and fiber assembly.

Black Widow Spider İpek üreten Bezler, Mikrodisseksiyon

Modern spiders spin high-performance silk fibers with a broad range of biological functions, including locomotion, prey capture and protection of ...

Biyoloji

Extraction of Venom and Venom Gland Microdissections from Spiders for Proteomic and Transcriptomic Analyses

Venoms are chemically complex secretions typically comprising numerous proteins and peptides with varied physiological activities. Functional characterization of venom proteins has important biomedical applications, including the identification of drug leads or probes for cellular receptors. Spiders are the most species rich clade of venomous organisms, but the venoms of only a few species are well-understood, in part due to the difficulty associated with collecting minute quantities of venom from small animals. This paper presents a protocol for the collection of venom from spiders using electrical stimulation, demonstrating the procedure on the Western black widow (Latrodectus hesperus). The collected venom is useful for varied downstream analyses including direct protein identification via mass spectrometry, functional assays, and stimulation of venom gene expression for transcriptomic studies. This technique has the advantage over protocols that isolate venom from whole gland homogenates, which do not separate genuine venom components from cellular proteins that are not secreted as part of the venom. Representative results demonstrate the detection of known venom peptides from the collected sample using mass spectrometry. The venom collection procedure is followed by a protocol for dissecting spider venom glands, with results demonstrating that this leads to the characterization of venom-expressed proteins and peptides at the sequence level.

This article provides a protocol for the extraction of venom from spiders using electrical stimulation in order to 1) conduct proteomic characterization, 2) stimulate venom gland gene expression, and 3) perform functional studies of venoms. This is followed by a description of venom gland microdissections for gene expression studies.

Venom toksinlerin Assassin böcek ve diğer Heteropteran böcekler hasat

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Helminth Collection and Identification from Wildlife

Ağır Metal ve Mikroalglerden Verimlilik Diğer İnorganik Bulaşanlar Kantitasyonu

içinde Yırtıcı Beslenme Davranışları tahlil

Plastik Peletlerden Organochlorine Pestisitlerin Çıkarılması ve Plastik Tipi Analizi

Atmosferik Aerosoller ekstraksiyonu ve Yüzey Aktif Karakterizasyonu

Parazitoid Yaban Arısı Trichogramma dendrolimi'den Yapay Bir Konakçı Kullanarak Zehir Çıkarılması

Parazitoid Yaban Arısı Trichogramma dendrolimi'den Yapay Bir Konakçı Kullanarak Zehir Çıkarılması

Parazitoid Yaban Arısı Trichogramma dendrolimi'den Yapay Bir Konakçı Kullanarak Zehir Çıkarılması

Black Widow Spider İpek üreten Bezler, Mikrodisseksiyon

Proteomik ve Transkriptomik Analizleri Spiderlardan Venom çıkarımı ve Venom Bezi Microdissections