Name: evaluating vascular hyperpermeability-inducing agents in the skin with the miles assay
Uploaded: 2018-06-19T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluating Vascular Hyperpermeability-inducing Agents in the Skin with the Miles Assay at JoVE.com

Laura Denti teşekkür ediyoruz, fare yetiştiriciliği ve Camille Charoy ile Valentina Senatore ve personel için Oftalmoloji UCL Enstitüsü biyolojik kaynakları birimi teknik destek için yardım et. Bu eser C. Ruhrberg ve bir İngiliz kalp Vakfı doktora öğrencilik J.T. küstah (FS/13/59/30649) için bir tıbbi araştırma Konseyi grant (Bay/N011511/1) tarafından desteklenmiştir.

Tüm hayvan iş İngiltere'de ev ofis ve kurumsal hayvan refahı ve etik İnceleme vücut (AWERB) yönergeleri izleyerek dışarı taşındı.
1. fare hazırlık
Not: en az 8 hafta-in yaş, yetişkin fareler üzerinde deneyler kadar yaş 6 ay için gerçekleştirin. Teknik tekrarlanabilirlik ve bu yordamın her adımında farklı hayvanlar arasında tutarlı zamanlamasını göstermek için deneysel her oturum için 2 en az ve en fazla 6 fare kullanın. Bir mutasyon genetik olarak değiştirilmiş farelerde geçirgenliği indükleyici madde üzerinde etkisini değerlendirmek için ideal olarak, 2 mutant fare ve deneyler başına 2 littermate kontrol kullanın.
<ol><li>24 saat önce uyarıcı vasküler hyperpermeability, anestezi uygun inhalasyon isoflurane gibi anestezik kullanarak fare. %3 isoflurane kadar iyileştiren refleks kayıp ve fare dış uyaranlara yanıt vermeyen anestezi indüksiyon için kullanın. % 1.5 isoflurane anestezi bakım için kullanın (fareyi sabit solunum oranları olduğundan emin olun). Anestezi altında dikkatli bir şekilde cilde yaralanmaları önleme bir elektrikli tıraş makinesi ile her iki yanları her fare tıraş ederim. Not: Anestezi için hayvan stres neden önlemek için ve cilt zarar görmesine neden tıraş sırasında hareket en aza indirmek için kullanılır.</li>
	<li>Traş fare için ev onun kafes dönmek. Erkek fareler için her erkek bireysel bir kafesin içine yerleştirin sonra anestezi kurtarma önlemek için mücadele ve bu nedenle, cilde zarar. Dişi fareler için onları ev onların kafes gruptaki döndürür. Not: mücadele bir davranış içinde belgili tanımlık kafes, Erkek fareler arasında gözlem yapılırsa yordamı önce bunları bireysel kafesler potansiyel Deri Hasari iyileşmek izin vermek için deneme önce 3 gün ayırın.</li>
	<li>(Genellikle birkaç saniye içinde) bilinç kurtarabilirsiniz ve kafes (genellikle içinde 1 dk) hareket kadar fareler izlemek.</li>
</ol>2. damar içi enjeksiyon Evans mavi boya
<ol><li>Bir laminar akış kabine içinde ayrı steril çözümleri histamin inhibitörü pyrilamine maleat (4 µg/µL % 0,9 serum içinde) ve Evans mavi boya (% %1 0,9 serum içinde w/v) hazırlayın. Çözümler 22 µm filtreden geçirilerek sterilize.</li>
	<li>Steril 1 mL şırınga 30 G iğne ile intraperitoneally her fare 10 µL pyrilamine maleat çözüm/gram ile vücut ağırlığı (Şekil 1A) enjekte etmek için kullanın. Enjeksiyon, ilk, scruff fare gerçekleştirmek ve sonra böylece kafa yere doğru yönlendirilir ve karın yukarı doğru yönlendirilir tilt için. Mesane isabet önlemek için orta hat uzak karın alt çeyrek dairelerin içinde enjekte. Not: Fare 8 hafta ve yaş 6 ay arasında ağırlığı genellikle aksi takdirde aracı test edilmesi için bağımsız olarak vasküler sızıntı tanıtmak endojen histamin serbest aralıkları arasında 15 ve 30 g. Pyrilamine maleat yapılmasını engeller.</li>
	<li>Vazodilatasyon tanıtmak 10 dk 37 ° C ısı odasında fareyi getirin. Alternatif olarak, eğer a ısı lamba kullanımı yerel etik kurallara izin verilir vazodilatasyon tanıtmak için kuyruk üzerinde odaklanmış bir uygun ısı lamba kullanın.</li>
	<li>Bir fare tek bir fare restrainer geçmek ve kuyruk enjeksiyon alanı temizleyin ve daha fazla vazodilatasyon desteklemek için % 70 etanol ile ovalayın.</li>
	<li>Steril 1 mL şırınga 30 G iğne ile 100 µL yönetmek için kullandığınız Evans mavi boya kuyruk ven (Şekil 1B) intravenöz aracılığıyla. Hemen basınç enjeksiyon siteye bir parmak ve başparmak kanama önlemek için arasında kuyruk tutarak Uygula. Not: Lamba ışığında enjeksiyon alana yönlendirerek görselleştirme kuyruk damarın geliştirilebilir. Yayımlanmış Protokolü18' fare kuyruğu ven içine İntravenöz enjeksiyon yapılması hakkında daha fazla ayrıntı bulunabilir.</li>
	<li>Boya için 30 dk dolaşmaya izin.</li>
</ol>3. damar Hyperpermeability teşvik
<ol><li>Steril çözümleri laminar akış kabine kullanarak, hacmi 20 µL teslim edilecek son doz sağlar bir konsantrasyon ilgi geçirgenliği indükleyici Ajan oranında seyreltin. Not: resim 1' -Şekil 2, VEGFA 2.5 ng/µL PBS içinde bir konsantrasyon, vasküler hyperpermeability uyarmak için kullanılır gösterilen örnek deneyinde toplam doz 50 ng ve PBS verimli bir araç denetimi kullanılır.</li>
	<li>Faiz ve araç denetimi geçirgenliği indükleyici Aracısı 31 G iğne ile 2 ayrı steril 300 µL şırınga yükleyin. Yük her fare nüsha çözümde 20 µL ile enjekte etmek için yeterli çözüm (yani hazır olun Ajan ve araç fare artı ek birim iğne ölü cilt için hesap için 60 µL).</li>
	<li>Birinci fare isoflurane (refleks keşfetmiş kaybolur ve fare dış uyaranlara yanıt vermeyen kadar anestezi indüksiyon için % 3 ve anestezi bakım, fareyi sabit solunum oranları olduğunu emin olmak için % 1.5) ile test edilecek anestezi.</li>
	<li>İntradermally 20 µL geçirgenliği teşvik aracının fare (Şekil 1 c) kanat enjekte. İğneyi cilde 15 ° açılı olduğundan emin olun. Başarılı bir enjeksiyon gösterir cilt içinde yükseltilmiş bir kabarcık oluşumu için kontrol edin. En az 1 cm arayla 2 ek sitelerdeki intradermal enjeksiyon yineleyin.</li>
	<li>Fare 2 kanat ortaya çıkarmak ve kontrol araç çözümü ile onaylatılacak enjeksiyonları tekrar açmak. Kağıt üzerinde kendi kimlik sonraki deri örnekleri topluluğu için kolaylaştırmak için her enjeksiyon yeri konumunu kaydeder. Not: Bu aşamada fare cilt dikkatle ele; Örneğin, cilt intradermal enjeksiyon işlemi sırasında pinching kaçının.</li>
	<li>Enjekte fare için ev onun kafes dönmek ve bilinç (genellikle birkaç saniye içinde) kurtarır ve kafes taşır kadar fareyi izlemek.</li>
	<li>Birinci fare kurtarır iken hemen 3.3 ikinci fare ile 3.5 ve benzeri (en fazla 6 fareler sonuna kadar oturum başına) aygıtlarından. Her fare bir sonraki adıma geçin için zaman ayarlamak için enjekte zaman bir kaydını tutmak.</li>
</ol>4. miktar birikmiş Evans mavi dermisin içinde
<ol><li>Hangi farelere enjekte edildi aynı sırada gözlemleyerek intradermal enjeksiyon aldıktan sonra her fare servikal çıkık 20 dk itlaf. Not: Vasküler sızıntı süresi kullanılan geçirgenliği indükleyici Ajan göre değişebilir ve bu nedenle, zaman intradermal enjeksiyon ve yüzey kaldırma arasında en iyi duruma getirme gerekebilir.</li>
	<li>Her yer fare üstünde onun sırt ve ayakta mantar pano üzerine temiz bir doku (Şekil 1 d) ile sarılmış PIN itlaf.</li>
	<li>Künt makas kullanırken, yaklaşık 3-4 cm alt karın üzerinden bir dikey kesi ölü fare göğüs kadar olun. Forseps ve neşter ile uzak dermis iç tarafında ve siteleri Evans mavi birikimi (Şekil 1E) ortaya çıkarmak için her iki yanları deriden tease. Gevşek cilt pin ve bölgelerden bir neşter ile kaçak site çevresinde yağ çıkarmak. Gerekirse, deri içine Evans mavi sızıntı büyüklüğünü göstermek için temsil edici bir fotoğraf çekmek.</li>
	<li>Bir neşter ve forseps kullanarak, özel tüketim cilt bölgeleri sızdırılmış Evans mavi boya her site için oluşan geçirgenliği indükleyici Ajan veya araç ile enjekte. Not: benzer şekilde ölçekli sonraki adım 4.7 formamide biriminin benzer bir bölümünü kalan formamide benzer bir birim içinde seyreltilmiş ayıklanan boya izin her deri örneği tarafından adsorbe, emin olmak için deri bölgelerinde tüketim için özen . 3.5. adımda kaydedilen enjeksiyon harita alanı eksize tanımlamak yardımcı olur.</li>
	<li>Her örnek bir 1,5 mL tüp içine yerleştirin ve buna göre etiketli, her örnek emin tüpün dibinde duruyor. Örnekleri, - 20 ° C kadar kullanmaya devam etmenize saklayın. Hemen işleme varsa, aşağıdaki adımları izleyin.</li>
	<li>Kuru deri örnekleri gecede açık tüpler bir fırın veya 55 ° C'de Isıtma bloğunun içine yerleştirerek</li>
	<li>Evans mavi boya ayıklamak için bir duman hood örneklerinde deiyonize suyla formamide 250 µL eklemek, tüpler kapatın. Deri örnekleri tüm formamide tarafından karşılanmaktadır ve gecede bir fırın veya Isıtma blok 55 ° C'de kuluçkaya emin olun</li>
	<li>Santrifüj kapasitesi maksimum hızda benchtop santrifüj örnekleri (> 10.000 x g) 40 dk için.</li>
	<li>Bir duman başlık, boya içeren süpernatant ile 100 µL her örnekten bir şeffaf, düz alt 96-şey plaka (Şekil 2A) ayrı bir kuyunun içine aktarın.</li>
	<li>Ölçü tepe Evans mavi absorbans 620 nm bir başvuru okuma ile 740 nm bir spektrofotometre üzerinde. Not: 620 nm olduğunu Evans zirve mavi absorbans, 740 iken nm Evans mavi tarafından tarafından emilir değildir ve başvuru dalga boyu davranır.</li>
	<li>Aynı ajan veya her fare için araç teknik değişkenliği (Şekil 2B) hesabınıza onaylatılacak enjeksiyonlari absorbans okuma ortalama.</li>
	<li>Araç kontrol (Şekil 2C) karşı geçirgenliği indükleyici aracısından okumalar kat sayısı hesaplama.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Nagy, J. A., Benjamin, L., Zeng, H. Y., Dvorak, A. M., Dvorak, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+permeability,+vascular+hyperpermeability+and+angiogenesis.">Vascular permeability, vascular hyperpermeability and angiogenesis.</a> Angiogenesis. 11, 109-119 (2008).</li><li>Engelhardt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+blood-brain+barrier.">Development of the blood-brain barrier.</a> Cell and Tissue Research. 314, 119-129 (2003).</li><li>Ruhrberg, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growing+and+shaping+the+vascular+tree:+multiple+roles+for+VEGF.">Growing and shaping the vascular tree: multiple roles for VEGF.</a> Bioessays. 25, 1052-1060 (2003).</li><li>Risau, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+Endothelium.">Differentiation of Endothelium.</a> FASEB Journal. 9, 926-933 (1995).</li><li>Strbian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blood-brain+barrier+is+continuously+open+for+several+weeks+following+transient+focal+cerebral+ischemia.">The blood-brain barrier is continuously open for several weeks following transient focal cerebral ischemia.</a> Neuroscience. 153, 175-181 (2008).</li><li>Weis, S. M., Cheresh, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiological+consequences+of+VEGF-induced+vascular+permeability.">Pathophysiological consequences of VEGF-induced vascular permeability.</a> Nature. 437, 497-504 (2005).</li><li>Campochiaro, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathogenesis+of+retinal+and+choroidal+vascular+diseases.">Molecular pathogenesis of retinal and choroidal vascular diseases.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 49, 67-81 (2015).</li><li>Aman, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+Treatment+of+Edema+and+Endothelial+Barrier+Dysfunction+with+Imatinib.">Effective Treatment of Edema and Endothelial Barrier Dysfunction with Imatinib.</a> Circulation. , 126 (2012).</li><li>Claesson-Welsh, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+permeability-the+essentials.">Vascular permeability-the essentials.</a> Upsala J Med Sci. 120, 135-143 (2015).</li><li>Schulte, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stabilizing+the+VE-cadherin-catenin+complex+blocks+leukocyte+extravasation+and+vascular+permeability.">Stabilizing the VE-cadherin-catenin complex blocks leukocyte extravasation and vascular permeability.</a> Embo Journal. 30, 4157-4170 (2011).</li><li>Heinolainen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGFR3+Modulates+Vascular+Permeability+by+Controlling+VEGF/VEGFR2+Signaling.">VEGFR3 Modulates Vascular Permeability by Controlling VEGF/VEGFR2 Signaling.</a> Circulation Research. 120, (2017).</li><li>Eliceiri, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+requirement+for+Src+kinases+during+VEGF-induced+angiogenesis+and+vascular+permeability.">Selective requirement for Src kinases during VEGF-induced angiogenesis and vascular permeability.</a> Molecular Cell. 4, 915-924 (1999).</li><li>Sun, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGFR2+induces+c-Src+signaling+and+vascular+permeability+in+vivo+via+the+adaptor+protein+TSAd.">VEGFR2 induces c-Src signaling and vascular permeability in vivo via the adaptor protein TSAd.</a> Journal of Experimental Medicine. 209, 1363-1377 (2012).</li><li>Fantin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF165-induced+vascular+permeability+requires+NRP1+for+ABL-mediated+SRC+family+kinase+activation.">VEGF165-induced vascular permeability requires NRP1 for ABL-mediated SRC family kinase activation.</a> Journal of Experimental Medicine. 214, 1049-1064 (2017).</li><li>Li, X. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGFR2+pY949+signalling+regulates+adherens+junction+integrity+and+metastatic+spread.">VEGFR2 pY949 signalling regulates adherens junction integrity and metastatic spread.</a> Nat Commun. 7, (2016).</li><li>Senger, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+cells+secrete+a+vascular+permeability+factor+that+promotes+accumulation+of+ascites+fluid.">Tumor cells secrete a vascular permeability factor that promotes accumulation of ascites fluid.</a> Science. 219, 983-985 (1983).</li><li>Miles, A. A., Miles, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+Reactions+to+Histamine,+Histamine-Liberator+and+Leukotaxine+in+the+Skin+of+Guinea-Pigs.">Vascular Reactions to Histamine, Histamine-Liberator and Leukotaxine in the Skin of Guinea-Pigs.</a> J Physiol-London. 118, 228-257 (1952).</li><li>Radu, M., Chernoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vivo+Assay+to+Test+Blood+Vessel+Permeability.">An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability.</a> Jove-J Vis Exp. , e50062 (2013).</li><li>Roth, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropilin-1+mediates+vascular+permeability+independently+of+vascular+endothelial+growth+factor+receptor-2+activation.">Neuropilin-1 mediates vascular permeability independently of vascular endothelial growth factor receptor-2 activation.</a> Sci Signal. 9, (2016).</li><li>Acevedo, L. M., Barillas, S., Weis, S. M., Gothert, J. R., Cheresh, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Semaphorin+3A+suppresses+VEGF-mediated+angiogenesis+yet+acts+as+a+vascular+permeability+factor.">Semaphorin 3A suppresses VEGF-mediated angiogenesis yet acts as a vascular permeability factor.</a> Blood. 111, 2674-2680 (2008).</li><li>Teesalu, T., Sugahara, K. N., Kotamraju, V. R., Ruoslahti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C-end+rule+peptides+mediate+neuropilin-1-dependent+cell,+vascular,+and+tissue+penetration.">C-end rule peptides mediate neuropilin-1-dependent cell, vascular, and tissue penetration.</a> P Natl Acad Sci USA. 106, 16157-16162 (2009).</li><li>Ho, V. C., Duan, L. J., Cronin, C., Liang, B. T., Fong, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+Vascular+Endothelial+Growth+Factor+Receptor-2+Abundance+Contributes+to+Increased+Angiogenesis+in+Vascular+Endothelial+Growth+Factor+Receptor-1-Deficient+Mice.">Elevated Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Abundance Contributes to Increased Angiogenesis in Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-1-Deficient Mice.</a> Circulation. 126, (2012).</li><li>Chislock, E. M., Pendergast, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abl+Family+Kinases+Regulate+Endothelial+Barrier+Function+In+Vitro+and+in+Mice.">Abl Family Kinases Regulate Endothelial Barrier Function In Vitro and in Mice.</a> PLoS ONE. 8, e85231 (2013).</li><li>Busch, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+ketamine+on+hypoxic+pulmonary+vasoconstriction+in+the+isolated+perfused+lungs+of+endotoxaemic+mice.">Effects of ketamine on hypoxic pulmonary vasoconstriction in the isolated perfused lungs of endotoxaemic mice.</a> Eur J Anaesth. 27, 61-66 (2010).</li><li>Sinclair, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+physiological+effects+of+alpha2-agonists+related+to+the+clinical+use+of+medetomidine+in+small+animal+practice.">A review of the physiological effects of alpha2-agonists related to the clinical use of medetomidine in small animal practice.</a> Can Vet J. 44, 885-897 (2003).</li></ol>

Yazarlar bildirmek için çakışan hiçbir ilgi alanlarına sahip.

195217ilk açıklamasını beri mil tahlil araştırmacılar ile vasküler hyperpermeability moleküler mekanizmaları eğitim için nispeten hızlı, basit ve güvenilir bir yöntem sağlamıştır. Örneğin, mil tahlil yeteneği ve/veya farklı ajanlar potens hyperpermeability19,20,21 ikna etmek için veya hyperpermeability engelleme ajanlar8 etkinliğini test etmek için test etmek için kullanılan ,22,23. Başka bir örnek olarak, vasküler geçirgenliği neden ajanları genetik fareler ve onların littermate denetimleri belirli reseptörleri ve sinyal proteinleri ligand kaynaklı hyperpermeability transducing gereksinimlerini belirlemek için test edilmiştir Yanıt-e doğru10,11,12,13,14,15,20,23. Değiştirilmiş sürümlerini birkaç mil tahlil beri örneğin kullanılan izleme ile ilgili olarak kullanılmaktadır. Böylece, Evans mavi floresans etiketli dextrans farklı boyutlarda veya mikroküreler11,13ile bazı çalışmalarda değiştirdi.
Vasküler hyperpermeability mekanizmaları araştıran için diğer deneyleri ana avantajı mil testin bu gerçekleştirmek nispeten kolay ve pahalı ekipman gerektirmez olmasıdır. Akı deneyleri veya trans endotel elektrik direnci (Trans iyi gibi olarak sızıntı ile ölçme için karşı vitro Ayrıca, bu tahlil modelleri vasküler sızıntı olduğu gibi kan damarlarının bağlamda bir vivo içinde Teknik olarak deneyi Sadece, endotel monolayer üzerinde odaklanmak aylarının) deneyleri. Vasküler hyperpermeability alternatif vivo deneyleri farklı teslim yolu hyperpermeability-inducing Aracısı kullanan veya farklı sitelerdeki vasküler sızıntı için analiz burada açıklanan mil tahlil farklı olabilir bir ajan vasküler sızıntı sınavı-akciğerler ve nefes borusu11,13,15ardından kuyruk ven yoluyla sistemik teslim tarafından örneği. Belirli intradermal enjeksiyon ilke olarak, kan basıncı ve akışı yanı sıra endotel bariyer bozulma da etkiler ve bu nedenle, vasküler geçirgenliği de dolaylı etkisi olduğunu, mil testin bir kısıtlamadır. Yine de, bu tahlil son zamanlarda vasküler geçirgenliği tarafından indüklenen ölçmek için gösterilmiştir VEGF-A bağımsız olarak sistemik kan basıncı15üzerindeki etkileri. Başka bir mil testin farklı dokularda damar yataklar için farklı ajanlar geçirgenliği teşvik ve deride bir mil tahlil ile elde edilen sonuçlar bu nedenle, olabilir temsilcisi, örneğin, ne oluşur yanıt verebilir kısıtlamadır akciğer veya beyin.
Hayvanın yaşı ve kilosu mil assay olarak gözlenen sızıntı etkileyebilir. Bu değişkenler etkisini en aza indirmek için araştırmacılar littermates kullanmalısınız veya benzer şekilde boy ve fare denetimleri olarak yaşlı. Fare mutantlar için belirli bir gen ilgi değerlendirirken, fareler Heterozigoz Heterozigoz üreme stratejisi ve wildtype kaldırmak littermates denetimleri kullanılan karşı aracılığıyla oluşturulan. Ayrıca, hızlı bir şekilde ters çevrilebilir gaz anestezikler, isoflurane gibi parenteral enjeksiyonları24,25yönetilen bir anestezik ilaç için açıklanan vazokonstriksiyona önlemek için kullanılması önerilir. Evans mavi boya fare yan kuyruk ven içine enjeksiyon bu protokolü kritik bir adımdır ve deney ve veri kalitesini büyük ölçüde etkileyebilir. Bu nedenle, araştırmacılar kuyruk ven enjeksiyonları gerçekleştirmek için yetkili olması gerekir ve olacak büyük olasılıkla var deneme önce deneyimi veya uygulama mil tahlil başlamadan. Alternatif olarak, araştırmacılar intravenöz diğer yolları Evans mavi ile deneyimli olmaları durumunda retro-orbital enjeksiyon gibi sunmak için kullanabilirsiniz. Geçirgenliği teşvik intradermal enjeksiyon çözümleri cilt Ajan bağımsız zarar neden olabilir. Bu nedenle, intradermal enjeksiyon hacmi 20 µl geçmemelidir, her zaman olmalı histamin inhibitörü huzurunda yapılan ve araç kontrol enjeksiyonu için normalleştirilmiş.
Vasküler geçirgenliği VEGF A bağlı kanser hastaları16 ve vizyon kararlar almanı ödemi birkaç neovasküler asit nedeniyle mil tahlil pek çok araştırmacı tarafından VEGF-bir sinyal yolu, örneğin, bileşenleri değerlendirmek için kullanılmıştır göz hastalığı7. Bu nedenle, biz ve diğerleri mil tahlil VEGF-A indüklenen vasküler sızıntı VEGF-bir sinyal art arda sıralı12,13,14, , belirli bileşenlerini eksikliği için genetik olarak değiştirilmiş farelerde karşılaştırmak için kullanılan 15 , 20 , 23. bu yaklaşımı kullanarak bizim yeni çalışma ana patolojik VEGF-A izoformu, VEGF165, VEGFR2 ve NRP1, NRP1 sitoplazmik etki alanı SRC aile kinaz ABL kinaz-aracılı aktivasyonu teşvik bir kompleks sinyalleri ortaya bir hyperpermeability yanıt14uyandırmak için. VEGFA de kan damarı büyümesini destekler ve bu nedenle, tedavi amaçlı hyperpermeability faaliyetlerini özel olarak inhibe iskemik dokulara kan akışını geri için kullanılan olabilir. Araştırma VEGF-A yanıt karşı damar hyperpermeability damar endotel hücreleri, ederek, moleküler mekanizması elucidating bu nedenle, seçmeli olarak patolojik VEGF-A bağlı ödem etkisizleştirmek için manipüle edilebilir yollar tanımlayabilir hastalıklar, kanser veya iskemik göz hastalığı gibi. Mil tahlil şüphesiz bunlar ve diğer birçok türde moleküler düzenleyiciler ve vasküler hyperpermeability effectors aydınlatmak için fonksiyonel çalışmaları desteklemek için yararlı bir yöntem olmaya devam edecektir.

Kardiyovasküler sistem birincil dolaşım ve dokularda tüm organları arasında gaz, besin ve atık ürünlerin transferini sağlamak amacıyla işlevidir. Kan damarlarının bazal geçirgenliği böyle değişimleri1izin vermek için organ özgü seviyeleri var. Örneğin, sıkı, son derece delinmez arabirimi2,3,4kan beyin bariyerini oluşturur iken kan damarları böbrek aşırı geçirgen. Kan damarlarının iç astar formu endotel hücreleri dolaşım ve temel alınan dokular arasında fiziksel bir engeli sağlamak ve vasküler geçirgenliği bir organ özgü şekilde düzenler. Ancak, belirli uyaranlara endotel bariyer üstündeki bazal düzeyleri1interstitium dolaşıma gelen sıvı ekstravazasyonu artırmak için kısmi bir arıza neden. Doku iskemi bir kontur veya miyokard infarktüsü, nedeniyle sırasıyla ortaya çıktığında böyle hyperpermeability, örneğin, doku travması, iltihap, tümör, siteleri, sepsis, neovasküler hastalığı olan veya beyin ve kalp, gözler sırasında görülmektedir 5 , 6 , 7 , 8. ne zaman kronik olarak yüksek, hyperpermeability ödem, sırayla göz hastalığı9görme kaybı gibi doku hasarına neden olan yol açar. Böylece, vasküler hyperpermeability yanıt modelleme endotel geçirgenlik artışı mekanizmaları anlamak için ve bu etkisizleştirmek için tasarlanmış ajanların etkinliğini test etmek için arzu edilir.
Mil tahlil vasküler sızıntı vivo içinde vasküler hyperpermeability vekil ölçüsü ölçer köklü, yaygın olarak kullanılan ve nispeten basit bir tekniktir. Bağımsız olarak endotel bariyer yönetmelik, kan basıncı veya kan akımı, gibi vasküler sızıntı artıran faktörler bileşik dikkate almaz olsa bile mil tahlil değerlendirmek için güvenilir bir yöntem sağlamak için genel olarak düşünülmektedir geçirgenliği oransal etkinlik maddelerin ve faaliyetlerini teşvik sinyal arabulucu tanımlamak. Buna göre mil tahlil vasküler hyperpermeability arabulucu ve mekanizmaları eylem10,11,12,13, belirledik çok sayıda çalışma ayrılmaz oldu 14,15, gibi vasküler endotelyal büyüme faktörü VEGF-A Bu aslında vasküler geçirgenliği faktör VPF16olarak belirlendi.
Aslında mil ve mil eskiden şiling şimdi pigs17vasküler geçirgenliği çalışmaya tarafından geliştirilen, onların tahlil daha sonra vasküler geçirgenliği moleküler mekanizmaları aydınlatmak için seçtiğiniz model organizma şimdi olan fare kullanarak için uyarlanmıştır Yönetmelik genetik manipülasyon için mükemmel uygunluk nedeniyle. Kısaca, Evans mavi boya intravenöz yetişkin fareler enjekte ve 30 dakikadır (Şekil 1) dolaşmaya izin. Araç kontrol karşı geçirgenliği indükleyici ajanlar sonra intradermally karşıt yanları vasküler sızıntı (Şekil 1) teşvik için fare üzerinde birçok sitede enjekte edilir. Sonuç olarak, albümin bağlı Evans mavi boya extravasates ve dermiste (Şekil 1) birikir. İnsanca fare yüzey kaldırma sonra Evans mavi dermis çıkarılan ve vasküler sızıntı düzeyini test madde ve araç indüklenen bir oranı olarak optik yoğunluk (Şekil 2) hesaplanır.

<table><tbody><tr><td>Pyrilamine maleate salt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5514-5G</td><td>Resuspend in PBS</td></tr><tr><td>Deionised Formamide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4117</td><td>Use in fume cupboard</td></tr><tr><td>Microlance Needles 30g x 0.5&quot;</td><td>BD&amp;nbsp;</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Plastipak 1ml Luer</td><td>BD&amp;nbsp;</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>Sterile MicroFine syriinges 0.3 ml - 8 mm - 30G&amp;nbsp;</td><td>BD&amp;nbsp;</td><td>324826</td><td></td></tr><tr><td>Evans blue</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E2129</td><td></td></tr><tr><td>Mouse restrainer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heat chamber</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hair clippers</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Merial</td><td>ap/drugs/220/96</td><td></td></tr><tr><td>Scalpal&amp;nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Blunt scissor</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf tubes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heatblock</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cork board</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Benchtop refrigerated centrifuge</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Vascular Endothelial Growth Factor 165</td><td>Reliatech</td><td>M30-004</td><td></td></tr></tbody></table>

evaluating vascular hyperpermeability-inducing agents in the skin with the miles assay

Omurgalı organizmalarda vasküler endotel birincil işlevi kan ve mademki endotel kan hücreleri, plazma oluştururlar ve Su geçirgenliği göre adapte edilebilir vücudun her doku arasında bir engel olarak hizmet etmektir fizyolojik gerek. Bazı hastalıklar, sitokinler ve büyüme faktörleri geçici damar geçirgenliği artırmak için endotel bariyer hedefleyen serbest bırakılır; Ancak, uzun süre varlıklarını kronik vasküler hyperpermeability ve ödem böylece doku zarar neden olabilir. Mil tahlil araştırmacılar damar hyperpermeability damar sızıntı proxy ölçümü ile çalışmaya olanak sağlayan bir vivo içinde tekniğidir. Burada, memeli fizyolojisi ve patoloji çalışmaya en yaygın olarak kullanılan model organizmadır fareyi, bu yordamı gerçekleştirme hakkında ayrıntılı bir protokol sağlar. Yordamı Evans mavi boya geçirgenliği indükleyici ajanlar ve araç kontrol çözümleri birden çok intradermal enjeksiyon tarafından içine karşıt yanları fare takip dolaşımdaki albümin etiketlemek için İntravenöz enjeksiyon içerir. Sonuç olarak, Evans mavi boya yavaş yavaş nerede birikir ve miktar olarak kaçak araç göre geçirgenliği indükleyici aracı tarafından indüklenen için çıkarılan dermise sızdırıyor. Mil tahlil vahşi yazıyla gerçekleştirilen yeniden ya da genetik olarak fare modelleri değişiklik ve aracıları/hedefleri inducing veya engelleme yeteneğine sahip tanımlamak ve vasküler geçirgenliği düzenleyen moleküler mekanizmaları incelemek için ilaç idaresi ile kombine edilebilir hyperpermeability.

Biz mil tahlil VEGF-bir araç denetime (PBS) wildtype C57/Bl6 farelerde göre vasküler sızıntı ikna yeteneği değerlendirmek için kullanılır. İşte, wildtype fareler uyarılmış 50 içeren 20 µL çözüm intradermal enjeksiyon ile kullanarak bir temsilci deney göstermektedir ng VEGF-a PBS veya araç PBS sadece. Evans mavi boya sızıntı VEGF-A ile enjekte deri örnekleri net artış PBS'ye karşılaştırıldığında belirgin in situ (Şekil 1E) oldu ve formamide (Şekil 2A) boya çıkarma sonra. Miktar birden çok deneyler göstermektedir 50 ng VEGF-a daha fazla Evans PBS yalnız (Şekil 2B), ortalama daha mavi sızıntı 3-fold vasküler sızıntı araç (Şekil 2C) göre artış önemli ölçüde indükler.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57524/57524fig1.jpg"> Şekil 1: mil tahlil vasküler sızıntı indüksiyon. Şematik Gösterim (üst panelleri) ve karşılık gelen görüntüleri (alt paneller) mil tahlil fare gerçekleştirirken sıralı adımları. (A)Pyrilamine maleat enjekte edilir intraperitoneally endojen histamin yayımlanmasından önce (B) İntravenöz enjeksiyon 100 µl 1 Evans kuyruk mavi damar fare % 10-30 dakika önlemek için. (C) 30 dk sonra vasküler sızıntı aracı intradermal enjeksiyon tarafından indüklenen (50 ng VEGF-a; yeşil daireler) araç kontrol (PBS; beyaz daireler) karşı. (D, E) -E doğru giriş yer Evans mavi birikimi, fare toplandılar 20 dakika sonra intradermal enjeksiyon ve her iki yanları deri disseke ve aşağı tuş. IP: mayi; damar yolu: intravenöz; Kimlik: intradermal; ölçek çubukları, 1 cm. <a href="/files/ftp_upload/57524/57524fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57524/57524fig2.jpg"> Şekil 2: mil tahlil vasküler sızıntı Quantification. (A)Evans mavi boya formamide her intradermal enjeksiyon Şekil 1 ' deki elde edilen ve bir 96-şey plaka ile spektrofotometre okuma absorbans için yüklenen cilt örneklerinden elde edilir. (B, C) Her iki geçirgenliği indükleyici Aracısı ya da (B) normalleştirilmiş absorbans değerleri (optik yoğunluk, OD) komplo tarafından birden fazla deneyler üzerinden absorbans okuma grafik olarak gösterilmesi (VEGF-A; koyu yeşil daireler) ve araç (PBS; gri daireler), veya (C) kat aracı araç karşı OD içinde değiştirme (hata çubukları: SEM). Absorbans okumalar onaylatılacak PBS ve (A) gösterilen VEGF-A örnekler ortalama olarak ve sırasıyla (B, C) beyaz veya yeşil daireler olarak gösterilir. <a href="/files/ftp_upload/57524/57524fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Evaluating Vascular Hyperpermeability-inducing Agents in the Skin with the Miles Assay at JoVE.com

Evaluating Vascular Hyperpermeability-inducing Agents in the Skin with the Miles Assay

Burada, fare deri içine geçirgenliği teşvik ajanların intradermal yönetimi tarafından indüklenen vasküler sızıntı ölçmek için bir iletişim kuralı mevcut. Bu teknik yeteneği teşvik veya vasküler sızıntı engelleyen veya vasküler geçirgenliği düzenleyen moleküler mekanizmaları incelemek için moleküllerin belirlemek için kullanılabilir.

Vasküler Hyperpermeability indükleyici ajanlar cilt mil tahlil ile değerlendirilmesi

The primary function of the vascular endothelium in vertebrate organisms is to serve as a barrier between the blood and each tissue of the body, whereby ...

evaluating-vascular-hyperpermeability-inducing-agents-skin-with-miles

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

14.7K Görüntüleme.  University College London. Burada, fare deri içine geçirgenliği teşvik ajanların intradermal yönetimi tarafından indüklenen vasküler sızıntı ölçmek için bir iletişim kuralı mevcut. Bu teknik yeteneği teşvik veya vasküler sızıntı engelleyen veya vasküler geçirgenliği düzenleyen moleküler mekanizmaları incelemek için moleküllerin belirlemek için kullanılabilir.

Video: Evaluating Vascular Hyperpermeability-inducing Agents in the Skin with the Miles Assay

Assessing Tumor Microenvironment of Metastasis Doorway-Mediated Vascular Permeability Associated with Cancer Cell Dissemination using Intravital Imaging and Fixed Tissue Analysis

The most common cause of cancer related mortality is metastasis, a process that requires dissemination of cancer cells from the primary tumor to secondary sites. Recently, we established that cancer cell dissemination in primary breast cancer and at metastatic sites in the lung occurs only at doorways called Tumor MicroEnvironment of Metastasis (TMEM). TMEM doorway number is prognostic for distant recurrence of metastatic disease in breast cancer patients. TMEM doorways are composed of a cancer cell which over-expresses the actin regulatory protein Mena in direct contact with a perivascular, proangiogenic macrophage which expresses high levels of TIE2 and VEGF, where both of these cells are tightly bound to a blood vessel endothelial cell. Cancer cells can intravasate through TMEM doorways due to transient vascular permeability orchestrated by the joint activity of the TMEM-associated macrophage and the TMEM-associated Mena-expressing cancer cell. In this manuscript, we describe two methods for assessment of TMEM-mediated transient vascular permeability: intravital imaging and fixed tissue immunofluorescence. Although both methods have their advantages and disadvantages, combining the two may provide the most complete analyses of TMEM-mediated vascular permeability as well as microenvironmental prerequisites for TMEM function. Since the metastatic process in breast cancer, and possibly other types of cancer, involves cancer cell dissemination via TMEM doorways, it is essential to employ well established methods for the analysis of the TMEM doorway activity. The two methods described here provide a comprehensive approach to the analysis of TMEM doorway activity, either in na&#239;ve or pharmacologically treated animals, which is of paramount importance for pre-clinical trials of agents that prevent cancer cell dissemination via TMEM.

We describe two methods for assessing transient vascular permeability associated with tumor microenvironment of metastasis (TMEM) doorway function and cancer cell intravasation using intravenous injection of high-molecular weight (155 kDa) dextran in mice. The methods include intravital imaging in live animals and fixed tissue analysis using immunofluorescence.

Intravital görüntüleme ve sabit doku analizi kullanılarak kanserli hücre yaygınlaştırılması ile Ilişkili Metasküler kapı-aracılı vasküler geçirgenlik tümör Mikroortamının değerlendirilmesi

The most common cause of cancer related mortality is metastasis, a process that requires dissemination of cancer cells from the primary tumor to secondary ...

Kanser Araştırmaları

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under physiologic conditions the endothelium is impermeable to albumin, so Evans blue bound albumin remains restricted within blood vessels. In pathologic conditions that promote increased vascular permeability endothelial cells partially lose their close contacts and the endothelium becomes permeable to small proteins such as albumin. This condition allows for extravasation of Evans Blue in tissues. A healthy endothelium prevents extravasation of the dye in the neighboring vascularized tissues. Organs with increased permeability will show significantly increased blue coloration compared to organs with intact endothelium. The level of vascular permeability can be assessed by simple visualization or by quantitative measurement of the dye incorporated per milligram of tissue of control versus experimental animal/tissue. Two powerful aspects of this assay are its simplicity and quantitative characteristics. Evans Blue dye can be extracted from tissues by incubating a specific amount of tissue in formamide. Evans Blue absorbance maximum is at 620 nm and absorbance minimum is at 740 nm. By using a standard curve for Evans Blue, optical density measurements can be converted into milligram dye captured per milligram of tissue. Statistical analysis should be used to assess significant differences in vascular permeability.

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

We are presenting an in vivo assay to test blood vessel permeability. This assay is based on intravenous injection of a dye and subsequent visualization of its diffusion into interstitial spaces.

An<em&gt; In vivo</emKan Gemi Geçirgenlik Test&gt; Test

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under ...

Tıp

A Full Skin Defect Model to Evaluate Vascularization of Biomaterials In Vivo

Insufficient vascularization is considered to be one of the main factors limiting the clinical success of tissue-engineered constructs. In order to evaluate new strategies that aim at improving vascularization, reliable methods are required to make the in-growth of new blood vessels into bio-artificial scaffolds visible and quantify the results. Over the past couple of years, our group has introduced a full skin defect model that enables the direct visualization of blood vessels by transillumination and provides the possibility of quantification through digital segmentation. In this model, one surgically creates full skin defects in the back of mice and replaces them with the material tested. Molecules or cells of interest can also be incorporated in such materials to study their potential effect. After an observation time of one&#8217;s own choice, materials are explanted for evaluation. Bilateral wounds provide the possibility of making internal comparisons that minimize artifacts among individuals as well as of decreasing the number of animals needed for the study. In comparison to other approaches, our method offers a simple, reliable and cost effective analysis. We have implemented this model as a routine tool to perform high-resolution screening when testing vascularization of different biomaterials and bio-activation approaches.

A Full Skin Defect Model to Evaluate Vascularization of Biomaterials In Vivo

Vascularization is key to approaches in successful tissue engineering. Therefore, reliable technologies are required to evaluate the development of vascular networks in tissue-constructs. Here we present a simple and cost-effective method to visualize and quantify vascularization in vivo.

A Tam Cilt Hata Modeli Biyomateryallerin vaskülarizasyonunu değerlendirin<em&gt; In Vivo</em

Insufficient vascularization is considered to be one of the main factors limiting the clinical success of tissue-engineered constructs. In order to ...

Biyomühendislik

Measuring Local Anaphylaxis in Mice

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. Exposure to an allergen in a sensitized individual can result in clinical symptoms that vary from minor erythema to life threatening anaphylaxis. In the laboratory, various animal models have been developed to understand the mechanisms driving allergic responses. Herein, we describe a detailed method for measuring changes in vascular permeability to quantify localized allergic responses. The local anaphylaxis assay was first reported in the 1920s, and has been adapted from the technique published by Kojima et al. in 20071. In this assay, mice sensitized to OVA are challenged in the left ear with vehicle and in the right ear with OVA. This is followed by an intravenous injection of Evans Blue dye. Ten min after injecting Evans Blue, the animal is euthanized and the dye that has extravasated into the ears is extracted overnight in formamide. The absorbance of the extracted dye is then quantified with a spectrophotometer. This method reliably results in a visual and quantifiable manifestation of a local allergic response.

Allergic responses, characterized by the activation of mast cells and basophils, are driven by the cross-linking of IgE and release of proinflammatory mediators. A quantitative assessment of allergic responses can be achieved by using Evans Blue dye to monitor changes in vascular permeability after allergen challenge.

Farelerde Yerel Anafilaksi Ölçme

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that system. Changes in blood flow to the small intestine can result in effects on the absorptive functions of the organ. Particular interest in toxins liberated from feedstuffs through fermentative and digestive processes has developed in ruminants as an area where productive efficiencies could be improved. The video associated with this article describes an in vitro bioassay developed to screen compounds for vasoactivity in isolated cross-sections of bovine mesenteric artery and vein using a multimyograph. Once the blood vessels are mounted and equilibrated in the myograph, the bioassay itself can be used: as a screening tool to evaluate the contractile response or vasoactivity of compounds of interest; determine the presence of receptor types by pharmacologically targeting receptors with specific agonists; determine the role of a receptor with the presence of one or more antagonists; or determine potential interactions of compounds of interest with antagonists. Through all of this, data are collected real-time, tissue collected from a single animal can be exposed to a large number of different experimental treatments (an in vitro advantage), and represents vasculature on either side of the capillary bed to provide an accurate picture of what could be happening in the afferent and efferent blood supply supporting the small intestine.

The small intestine is frequently exposed to toxins that can influence blood flow and negatively impact nutrient absorption. Using a multimyograph and mesenteric artery and vein isolates, compounds or toxins of interest can be screened for vasoactivity.

Bir Biyoassay olarak Sığır Mezenterik Arter ve Ven Bölüm yalıtma ve kullanma İnce Barsak vazoaktiviteye için Test

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

A Methodological Approach to Non-invasive Assessments of Vascular Function and Morphology

The endothelium is the innermost lining of the vasculature and is involved in the maintenance of vascular homeostasis. Damage to the endothelium may predispose the vessel to atherosclerosis and increase the risk for cardiovascular disease. Assessments of peripheral endothelial function are good indicators of early abnormalities in the vascular wall and correlate well with assessments of coronary endothelial function. The present manuscript details the important methodological steps necessary for the assessment of microvascular endothelial function using laser Doppler imaging with iontophoresis, large vessel endothelial function using flow-mediated dilatation, and carotid atherosclerosis using carotid artery ultrasound. A discussion on the methodological considerations for each of the techniques is also presented, and recommendations are made for future research.

The present article describes the methodological considerations for several non-invasive assessments of vascular function and morphology that are commonly used in medical research to assess different stages of atherosclerosis.

Vasküler Fonksiyon ve Morfoloji Non-invaziv Değerlendirmelerine Bir Metodolojik Yaklaşım

The endothelium is the innermost lining of the vasculature and is involved in the maintenance of vascular homeostasis.  Damage to the endothelium may ...

Precision Implementation of Minimal Erythema Dose (MED) Testing to Assess Individual Variation in Human Inflammatory Response

Minimal erythema dose (MED) testing is frequently used in clinical settings for determining the smallest amount of ultraviolet (UV) irradiation necessary to produce erythema (inflammatory reddening) on the surface of the skin. In this context, the MED is regarded as a key factor in determining starting doses for UV phototherapy for common skin conditions such as psoriasis and eczema. In research settings, MED testing also has potential to be a powerful tool for assessing within- and between-persons variation in inflammatory responses. However, MED testing has not been widely adopted for use in research settings, likely owing to a lack of published guidelines, which is a barrier to obtaining reproducible results from this assay. Also, protocols and equipment for establishing MED vary widely, making it difficult to compare results across laboratories. Here, we describe a precise and reproducible method to induce and measure superficial erythema using newly designed protocols and methods that can easily be adapted to other equipment and laboratory environments. The method described here includes detail on procedures that will allow extrapolation of a standardized dosage schedule to other equipment so that this protocol can be adapted to any UV radiation source.

Precision Implementation of Minimal Erythema Dose MED Testing to Assess Individual Variation in Human Inflammatory Response

Minimal erythema dose (MED) testing is used to establish dosage schedules for ultraviolet radiation phototherapy. It can assess individual variation in inflammatory response but lacks methodology for achieving reproducible results. Here, we present a precision implementation of MED and demonstrate its ability to capture individual variation in inflammatory response.

İnsan İnflamatuar Yanıtında Bireysel Değişimi Değerlendirmek Için Minimal Eritem Dozu (MED) Testinin Hassas Uygulanması

Minimal erythema dose (MED) testing is frequently used in clinical settings for determining the smallest amount of ultraviolet (UV) irradiation necessary ...

Microperfusion Technique to Investigate Regulation of Microvessel Permeability in Rat Mesentery

Experiments to measure the permeability properties of individually perfused microvessels provide a bridge between investigation of molecular and cellular mechanisms regulating vascular permeability in cultured endothelial cell monolayers and the functional exchange properties of whole microvascular beds. A method to cannulate and perfuse venular microvessels of rat mesentery and measure the hydraulic conductivity of the microvessel wall is described. The main equipment needed includes an intravital microscope with a large modified stage that supports micromanipulators to position three different microtools: (1) a beveled glass micropipette to cannulate and perfuse the microvessel; (2) a glass micro-occluder to transiently block perfusion and enable measurement of transvascular water flow movement at a measured hydrostatic pressure, and (3) a blunt glass rod to stabilize the mesenteric tissue at the site of cannulation. The modified Landis micro-occlusion technique uses red cells suspended in the artificial perfusate as markers of transvascular fluid movement, and also enables repeated measurements of these flows as experimental conditions are changed and hydrostatic and colloid osmotic pressure difference across the microvessels are carefully controlled. Measurements of hydraulic conductivity first using a control perfusate, then after re-cannulation of the same microvessel with the test perfusates enable paired comparisons of the microvessel response under these well-controlled conditions. Attempts to extend the method to microvessels in the mesentery of mice with genetic modifications expected to modify vascular permeability were severely limited because of the absence of long straight and unbranched microvessels in the mouse mesentery, but the recent availability of the rats with similar genetic modifications using the CRISPR/Cas9 technology is expected to open new areas of investigation where the methods described herein can be applied.

The modified Landis technique enables paired measurement of the hydraulic conductivity of individual microvessels in the mesentery of normal and genetically modified rats under control and test conditions using microperfusion techniques. It provides a convenient method to evaluate mechanisms that regulate microvessel permeability and transvascular exchange under physiological conditions.

Şekilde, mikro Tekniği Sıçan mezenter mikrodamar geçirgenliği Yönetmelik Araştırma

Experiments to measure the permeability properties of individually perfused microvessels provide a bridge between investigation of molecular and cellular ...

Biyoloji

İnsanlarda Mikrovasküler Disfonksiyonun Yeni Mekanizmalarının İncelenmesi

Intradermal Microdialysis: An Approach to Investigating Novel Mechanisms of Microvascular Dysfunction in Humans

The cutaneous vasculature is an accessible tissue that can be used to assess microvascular function in humans. Intradermal microdialysis is a minimally invasive technique used to investigate mechanisms of vascular smooth muscle and endothelial function in the cutaneous circulation. This technique allows for the pharmacological dissection of the pathophysiology of microvascular endothelial dysfunction as indexed by decreased nitric oxide-mediated vasodilation, an indicator of cardiovascular disease development risk. In this technique, a microdialysis probe is placed in the dermal layer of the skin, and a local heating unit with a laser Doppler flowmetry probe is placed over the probe to measure the red blood cell flux. The local skin temperature is clamped or stimulated with direct heat application, and pharmacological agents are perfused through the probe to stimulate or inhibit intracellular signaling pathways in order to induce vasodilation or vasoconstriction or to interrogate mechanisms of interest (co-factors, antioxidants, etc.). The cutaneous vascular conductance is quantified, and mechanisms of endothelial dysfunction in disease states can be delineated.

Yazar Spotlight: Kardiyovasküler Hastalık Risk Popülasyonlarındaki Mekanizmaları Ortaya Çıkarmak İçin Bir Farmakodiseksiyon Yaklaşımı 

Intradermal microdialysis is a minimally invasive technique used to investigate microvascular function in health and disease. Both dose-response and local heating protocols can be utilized for this technique to explore mechanisms of vasodilation and vasoconstriction in the cutaneous circulation.

İntradermal Mikrodiyaliz: İnsanlarda Mikrovasküler Disfonksiyonun Yeni Mekanizmalarının Araştırılmasına Yönelik Bir Yaklaşım

The cutaneous vasculature is an accessible tissue that can be used to assess microvascular function in humans. Intradermal microdialysis is a minimally ...

Vasküler Hyperpermeability indükleyici ajanlar cilt mil tahlil ile değerlendirilmesi

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Intravital görüntüleme ve sabit doku analizi kullanılarak kanserli hücre yaygınlaştırılması ile Ilişkili Metasküler kapı-aracılı vasküler geçirgenlik tümör Mikroortamının değerlendirilmesi

An

A Tam Cilt Hata Modeli Biyomateryallerin vaskülarizasyonunu değerlendirin

Farelerde Yerel Anafilaksi Ölçme

Bir Biyoassay olarak Sığır Mezenterik Arter ve Ven Bölüm yalıtma ve kullanma İnce Barsak vazoaktiviteye için Test

Vasküler Fonksiyon ve Morfoloji Non-invaziv Değerlendirmelerine Bir Metodolojik Yaklaşım

İnsan İnflamatuar Yanıtında Bireysel Değişimi Değerlendirmek Için Minimal Eritem Dozu (MED) Testinin Hassas Uygulanması

Şekilde, mikro Tekniği Sıçan mezenter mikrodamar geçirgenliği Yönetmelik Araştırma

İntradermal Mikrodiyaliz: İnsanlarda Mikrovasküler Disfonksiyonun Yeni Mekanizmalarının Araştırılmasına Yönelik Bir Yaklaşım

İntradermal Mikrodiyaliz: İnsanlarda Mikrovasküler Disfonksiyonun Yeni Mekanizmalarının Araştırılmasına Yönelik Bir Yaklaşım