Bu eser Avusturya araştırma Tanıtım Ajansı (işe FFG; proje numarası 850681), (proje GlucoSTAR) Üniversitesi Uygulamalı Bilimler üst Avusturya temel finansman girişimi ve Merkezi tarafından Tıp (zamanlı Merkezi) teknolojik yenilik için finanse edildi temel finansman tarafından üst Avusturya eyaletinde yer alır.

Yönerge 2010/63/AB göre sigara yumurtadan kuş embriyo ilk üçte embriyonik gelişim sırasında ile deneyler izni bir Etik Komitesi tarafından gerek yoktur.
1. depolama ve damızlık yumurta
<ol><li>Döllenmiş tavuk yumurta (Tablo reçetesi) elde etmek--dan a yerel doğurmak. Not: Yumurta oksijen bir atmosferde 14 ° C'de deneyler için kullanmadan önce döşeme sonra 10 gün için saklanabilir.</li>
	<li>38 ° c ile 40-%60 10 için ortalama bir nem yumurtaları kuluçkaya veya bir kuluçka 11 günde sürekli yumurta döner.</li>
</ol>2. yumurta yelpazesi
<ol><li>Yumurta kuluçka 11 gün sonra gübreleme için kontrol edin. Kontrol bir ışık için bu adımı kullanın. Fringe kontrol lambası bir inkpad daldırma ve yumurta sivri tarafı mum.</li>
	<li>Hava kesesi belirlemek için üst kısmında yumurta parlaklık farklılıkları için kontrol. Not: ne zaman yumurta candled albümin koyu ise hava kesesi yuvarlak, daha şeffaf bölge olarak görüntülenir.</li>
	<li>Sonra hava kesesi tespiti, lamba biraz daha önce uygulanan mürekkep ile yumurta karşı basarak işaretlemek.</li>
	<li>Parlaklık albümin ve hava kesesi arasında bir fark gösterme sigara döllenmiş yumurta Bu adımda hariç.</li>
</ol>3. enjeksiyon maddelerin
<ol><li>Faiz (örneğin, bitkisel özü veya insülin) madde madde Hank'in dengeli tuz solüsyonu (HBSS) arabelleği istenen konsantrasyon sulandrarak hazırlayın. Örneğin, 3.3 U/mL ticari olarak mevcut insülin HBSS içinde analog.</li>
	<li>Seçili bileşik uygulama için yumurta kabuğu cımbız hava kesesi işaretli alanında sivri bir çifti ile dikkatli bir şekilde peck. Bir delik şırınga iğne çapı daha büyük oluşturmaz. Bir şırınga ile pecked alana ilgi madde içeren arabellek çözüm (300 µL) enjekte. Not: steril, 1 ml tek kullanımlık şırınga, pipet ipuçları ve kaplar kullanın. Eldiven ve önlük deneyler için giymek.</li>
	<li>Bir madde kan şekeri azaltarak etkisini belirlemek için yumurta geri kuluçka makinesi 60, 120 ve 180 dk, sırasıyla yerleştirin. Bazal kan şekeri düzeylerini belirlemek için en az 10-15 sigara tedavi kontrol yumurta ekleyin.</li>
</ol>4. toksisite testleri
<ol><li>Sonra uygulama seçili bahçedeki 24 h için yumurta kabuğu membran fosfat tamponlu tuz (PBS) arabellek (bütün yumurta kabuğu membran kapak için yeterli) ile en az 30 için equilibrate s.</li>
	<li>Aşırı PBS arabellek uzakta dökerek kaldırın.</li>
	<li>Yumurta kabuğu membran dikkatle cımbız sivri bir çift ile çek.</li>
	<li>Kan damarları lezyonlar için kontrol ve canlılık (örneğin, hareketi) civciv embriyo onayla. Not: Vital hayati embriyo karşı karşılaştırma için zehirli bir bitkisel özü uygulamadan sonra bkz. şekil 1 .</li>
</ol>5. kan glikoz değer ölçümü
<ol><li>İlgili zamanda noktada dikkatli hava kesesi yukarıda yumurta kabuğu kaldırmak ve yumurta kabuğu membran PBS arabellek (bütün yumurta kabuğu membran kapak için yeterli) ile equilibrate.</li>
	<li>Aşırı PBS arabellek uzakta dökerek kaldırın.</li>
	<li>Dikkatle yumurta kabuğu membran cımbız sivri bir çift ile çek.</li>
	<li>Kesme ve chorioallantoic membran ile mikro-uygun kan damarları iyi erişimi etkinleştirmek için makas, kaldırın. Membran kesmek en az 2-3 cm. Herhangi bir büyük gemilerin zarda kendisini embriyo istenmeyen kan kaybını önlemek için uygun değil.</li>
	<li>Embriyo karından kaynaklanan büyük gemi bulun. Bu gemi albümin kapalı mikro-makas ile dışarı kaldırın ve plastik bir pH-şerit yerleştirin. PH şerit mikro-makas ile düzenlenen geminin altında hareket ve geri mikro-makas uzakta dikkatlice çekin.</li>
	<li>1-2 mL sıvı kan sonraki adımda seyreltme önlemek için bir pipet ile chorioallantoic membran altında kaldırın. Gemi kesmeden önce gemi ve pH-şerit filtre kağıdı, Kuru.</li>
	<li>Bir tarafta kan damarı dikkatle mikro-makas ile kesti. Gemi ile tamamen işlevsel değil. Not: Yaklaşık 1 mm kalın gemisi. Yarısından fazlası gemi tamamen çıkarmak kayma ve hiçbir kan toplama mümkündür gibi kesme önlemek için gemi kesmeyin.</li>
	<li>Sızıntı Kan pH-bir pipet kullanarak Strip'te toplamak. On microliters kan kan şekeri ölçüm cihazı kullanarak glukoz düzeylerini belirlemek için gereklidir.</li>
</ol>6. istatistiksel değerlendirme
<ol><li>Her zaman noktası en az 10 bireysel yumurta ortalama değerini hesaplamak ve denetim yumurtaların (yumurta sigara - veya arabellek-tedavi) için bu değerleri normalize.</li>
	<li>Daha sonra azalma yüzdesini belirleyin. Buna ek olarak, insülin olumlu bir denetimi kullanın. Not: her deney en az üç kere tekrar edin.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Defronzo, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Banting+Lecture.+From+the+triumvirate+to+the+ominous+octet:+a+new+paradigm+for+the+treatment+of+type+2+diabetes+mellitus.">Banting Lecture. From the triumvirate to the ominous octet: a new paradigm for the treatment of type 2 diabetes mellitus.</a> Diabetes. 58 (4), 773-795 (2009).</li><li>American_Diabetes_Association. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+classification+of+diabetes+mellitus.">Diagnosis and classification of diabetes mellitus.</a> Diabetes Care. 37, S81-S90 (2014).</li><li>Han Cho, N., Cavan, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> IDF Diabetes Atlas. 7, (2015).</li><li>Bailey, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Individualized+glycaemic+targets+and+pharmacotherapy+in+type+2+diabetes.">Individualized glycaemic targets and pharmacotherapy in type 2 diabetes.</a> Diabetes &amp; vascular disease research. 10 (5), 397-409 (2013).</li><li>Maruthur, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetes+Medications+as+Monotherapy+or+Metformin-Based+Combination+Therapy+for+Type+2+Diabetes:+A+Systematic+Review+and+Meta-analysis.">Diabetes Medications as Monotherapy or Metformin-Based Combination Therapy for Type 2 Diabetes: A Systematic Review and Meta-analysis.</a> Annals of internal medicine. 164 (11), 740-751 (2016).</li><li>Aleman-Gonzalez-Duhart, D., Tamay-Cach, F., Alvarez-Almazan, S., Mendieta-Wejebe, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Advances+in+the+Biochemical+and+Physiological+Aspects+of+the+Treatment+of+Type+2+Diabetes+Mellitus+with+Thiazolidinediones.">Current Advances in the Biochemical and Physiological Aspects of the Treatment of Type 2 Diabetes Mellitus with Thiazolidinediones.</a> PPAR research. , 7614270 (2016).</li><li>Cohen, F. J., Neslusan, C. A., Conklin, J. E., Song, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+antihyperglycemic+prescribing+trends+for+US+privately+insured+patients+with+type+2+diabetes.">Recent antihyperglycemic prescribing trends for US privately insured patients with type 2 diabetes.</a> Diabetes care. 26 (6), 1847-1851 (2003).</li><li>Desai, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+medication+initiation+in+newly+diagnosed+diabetes+mellitus:+quality+and+cost+implications.">Patterns of medication initiation in newly diagnosed diabetes mellitus: quality and cost implications.</a> The American journal of medicine. 125 (3), e301-e307 (2012).</li><li>Martel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-obesogenic+and+antidiabetic+effects+of+plants+and+mushrooms.">Anti-obesogenic and antidiabetic effects of plants and mushrooms.</a> Nature reviews. Endocrinology. , (2016).</li><li>Lanzerstorfer, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+novel+insulin+mimetic+drugs+by+quantitative+total+internal+reflection+fluorescence+(TIRF)+microscopy.">Identification of novel insulin mimetic drugs by quantitative total internal reflection fluorescence (TIRF) microscopy.</a> British journal of pharmacology. 171 (23), 5237-5251 (2014).</li><li>Onur, S., St&#246;ckmann, H., Zenthoefer, M., Piker, L., D&#246;ring, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Plant+Extract+Collection+Kiel+in+Schleswig-Holstein+(PECKISH)+Is+an+Open+Access+Screening+Library.">The Plant Extract Collection Kiel in Schleswig-Holstein (PECKISH) Is an Open Access Screening Library.</a> Journal of Food Research. 2 (4), (2013).</li><li>Haselgrubler, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gluc-HET,+a+complementary+chick+embryo+model+for+the+characterization+of+antidiabetic+compounds.">Gluc-HET, a complementary chick embryo model for the characterization of antidiabetic compounds.</a> PloS one. 12 (8), e0182788 (2017).</li><li>Stadlbauer, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomolecular+Characterization+of+Putative+Antidiabetic+Herbal+Extracts.">Biomolecular Characterization of Putative Antidiabetic Herbal Extracts.</a> PloS one. 11 (1), e0148109 (2016).</li><li>Greywe, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applicability+and+robustness+of+the+hen's+egg+test+for+analysis+of+micronucleus+induction+(HET-MN):+results+from+an+inter-laboratory+trial.">Applicability and robustness of the hen's egg test for analysis of micronucleus induction (HET-MN): results from an inter-laboratory trial.</a> Mutation research. 747 (1), 118-134 (2012).</li><li>Manakova, E., Hubickova, L., Kostalova, J., Zemanova, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryotoxicity+of+mirtazapine:+a+study+using+Chick+Embryotoxicity+Screening+Test.">Embryotoxicity of mirtazapine: a study using Chick Embryotoxicity Screening Test.</a> Neuro endocrinology letters. 31, 8-10 (2010).</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+embryo+chorioallantoic+membrane+as+a+useful+tool+to+study+angiogenesis.">Chick embryo chorioallantoic membrane as a useful tool to study angiogenesis.</a> International review of cell and molecular biology. 270, 181-224 (2008).</li><li>Yoshiyama, Y., Sugiyama, T., Kanke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+diabetes+model+in+chick+embryos+treated+with+streptozotocin.">Experimental diabetes model in chick embryos treated with streptozotocin.</a> Biological &amp; pharmaceutical bulletin. 28 (10), 1986-1988 (2005).</li><li>Wolf, T., Niehaus-Rolf, C., Luepke, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+new+methodological+aspects+of+the+hen's+egg+test+for+micronucleus+induction+(HET-MN).">Some new methodological aspects of the hen's egg test for micronucleus induction (HET-MN).</a> Mutation research. 514 (1-2), 59-76 (2002).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

HET-CAM tahlil hayvan içinde sanayi12test için yaygın olarak kullanılan alternatif test sistemidir. Burada açıklanan ovo sistem HET-CAM tahlil değiştirilmiş bir sürümü temsil eder. Orijinal biçiminde iken, HET-CAM deneyler bileşikler ve formülasyon rahatsız edici özelliklerini veya angiogenez14,15,16analizi eğitimi için gerçekleştirilir, test etmek için yaklaşım adapte olması sözde insülin mimetic özellikleri12bileşikler. Bu deneylerin hayvan deneyleri kabul edilmez bu yana yönergesi 2010/63/AB göre izni bir Etik Komitesi tarafından ilk üçte embriyonik gelişim sırasında sigara yumurtadan kuş embriyo ile deneyler gerek. Son yıllarda yapılan çalışmalarda ovo GLUT4 translocation-tabanlı birincil ekran10' kan şekeri azaltmak için tespit edilen seçili bitkisel özler etkinliğini karakterize sisteme uygunluğu kanıtlanmış insülin12,13yokluğunda. Ovo sistem iyi bir performans için kritik noktalar şunlardır: ilk, döllenmiş yumurta teslim güvenilir a doğurmak. Lohmann klasik kahverengi Tavuk doğurmak iyi bir seçimdir. İkinci olarak, toksisite uygulanması bileşik incelenen yapılması gereken toksik etkileri dışlamak için sınar. Buna ek olarak, kan toplama için uygun bir kan damarı hazırlanması önemlidir. Bu tercih bir kan kaybına yol açabilir gibi büyük gemilerin chorioallantoic zarda kendisi, kesme önlemek önemlidir. Gemi pH şerit kesmeden önce Ayrıca, bu okşadı zorunda kuru seyreltme toplanan kan önlemek için filtre kağıdı kullanarak. Son olarak, deneyler yeterli sayıda önemli gibi görünüyor. Her zaman noktası ve ilgili deney üç kat bir tekrarı için en az 10 yumurta kullanmanızı öneririz.
Doğal olarak, bu ovo yaklaşımın bazı sınırlamalar vardır. Maddelerin yumurta kabuğu membran emilir ve chorioallantoic membran ile yakın temas haline gelir kadar 30 dakika alır bu yana, embriyo hızlı bir yanıt uygulanan bileşiği ölçmek mümkün değildir. Ayrıca, bazı bileşikler lezyonlar chorioallantoic zarda kan damarlarının sık sonuçlanır uygulanan konsantrasyon toksik olabilir. Böylece, sitotoksisite bileşikleri uzun vadeli kuluçka yaklaşık 24 saat dayalı test makul görünür. Son olarak, bulduk bileşiklerin uygulama için kullanılan arabellek sistem tahlil performans üzerinde önemli bir etkisi vardır. 12 embriyo kan glikoz düzeyleri en küçük etkisi sonucunda çünkü şu anda, HBSS arabellek kullanılır.
Gelecekteki uygulamalarda, HBSS alternatif olarak ek arabellek sistemlerinin test. Ayrıca, kolesterol, trigliserid ve lipoproteinler gibi ek kan parametreleri bitkisel özler etkisi çekici bir soru olabilir.
Yeni ovo sistemimiz bir hayvan deney, gerek kalmadan yaşayan bir organizma olarak insülin mimetic özelliklere sahip maddelerin test etmek için umut verici ve önemli bir araçtır. Bu nedenle, in-vitro ve ın-vivo yaklaşımlar arasındaki boşluğu doldurur. Varolan ovo model sistemleri17 ile karşılaştırıldığında diyabet streptozotocin (STZ) tedavi tarafından ikna etmek için gerek yoktur biz gün 10 ya da 11, kuluçka embriyo kullanmak gibi. Bu aşamada, insülin üretim başlatılmamış olması, ama embriyo zaten insülin duyarlı. Ayrıca, 14-17 gün yaşlı embriyo kullanılan17iseniz izni bir Etik Komitesi tarafından gerekli olabilir. Ayrıca, alternatif stratejileri18için bileşik uygulama burada açıklandığı gibi daha az zararlı ve zahmetli, deneysel aracılığıyla yerine oranları artan karşılaştırılır.
Kan azalan etkisi insülin mimetic madde yaşayan bir organizma test edilmesi gerekiyorsa birlikte, bu ovo alınan yaklaşım bir çekici sistemidir.

Diabetes mellitus hiperglisemi tarafından karakterize metabolik bir hastalık ve kusurları insülin salgılanması veya insülin eylem1neden olur. Tüm diyabet vakaların % 90'ı Kategori tip 2 diabetes mellitus (T2DM), insülin direnci ve insülin eksikliği2çoğunlukla nerede bireyler göstermek vardır. Çeşitli faktörler yaşam tarzı, özellikle de overnutrition, yaşlanma ve fiziksel hareketsizlik ile ilgili değişiklikler de dahil olmak üzere T2DM, küresel insidansı artırmak için bilinir. Yaklaşık 400 milyon kişinin diyabet uluslararası diyabet Federasyonu (IDF) göre dünya çapında var. Bu sayı 600 milyon gelecek 20 yıl3içinde ulaşması bekleniyor.
Diyabetik komplikasyonlar hiperglisemi ve insülin direnci, hipertansiyon, dislipidemi, glukoz intoleransı, koroner kalp hastalığı ve beyin damar hastalıkları gibi nedeniyle önemli ölçüde azaltılmış yaşam süresi ve kalitesi4kurşun. Etkilenen bireylerin glukoz düşürücü farmakoterapi gerektirir; Ancak, metformin5 gibi ilaçların kullanımı sık sık dramatik yan etkiler6,7,8ile ilişkilidir. Bu nedenle, daha güvenli, yaygın olarak kullanılabilir ve ucuz antidiyabetik yaklaşımlar gereklidir.
Farklı bitkisel bileşikleri, özleri, bitkiler ve nutraceuticals özellik insülin mimetic özellikler için çeşitli hücresel işlevlerini oransal tarafından atfedilen. Önemli bir özelliği hücre içi depolama bölmeleri, glikoz kas ve yağ dokusu olarak bilinen insülin yokluğunda artan bir alımını sonuçlanan plazma zarı uyarılması glikoz taşıyıcı 4 (GLUT4) translocation olduğunu insülin mimetic özellikleri9. Daha önce biz GLUT410translocation sürecinin ölçmek için Floresans mikroskobu dayalı yaklaşım hayata. Bu tahlil kullanarak bir özü Kütüphane11 çok sayıda bitki özleri analiz umut verici adaylar tanımlaması içinde sonuçlandı. Ancak, daha fazla canlı organizmalar testlerinde gereklidir. Ayrıntılı bu kağıt, değiştirilmiş civciv embriyo manken olarak açıklanan yaklaşım maddeler ile insülin mimetic özelliklerini tanımlamak için umut verici bir model olduğu ispatlanmıştır. In vitro ve ın-vivo çalışmalar arasında geniş boşluk doldurma bir çekici araç temsil eder ve kabul edilebilir maliyeti, basit işleme yordamlarını ve yeterli hızlarındaki gibi mevcut sistemleri ile karşılaştırıldığında birçok avantaj sunar. Buna ek olarak, izni bir Etik Komitesi tarafından gerekli değildir.

<table><tbody><tr><td>Phosphate buffered saline (PBS)</td><td>Biochrom</td><td>L1825</td><td></td></tr><tr><td>Hank&amp;rsquo;s balanced salt solution (HBSS)</td><td>Thermo Scientific</td><td>SH30268.02</td><td></td></tr><tr><td>NovoRapid</td><td>Novo Nordisk</td><td>8-0905-82-304-6</td><td></td></tr><tr><td>Hens eggs (Lohmann classic brown chicken)</td><td>Local Breeder</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Accu-check performa</td><td>Roche</td><td>6454011</td><td></td></tr><tr><td>Accu-check Inform II Teststreifen</td><td>Roche&amp;nbsp;</td><td>5942861</td><td></td></tr><tr><td>Incubator&amp;nbsp; HEKA- Turbo 288</td><td>HEKA Brutger&amp;auml;te</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Syringe Omnican F 1 mL</td><td>Braun</td><td>09161502S&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Extracts</td><td>PEKISH extract library</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lamp Tempo Nr. 119</td><td>ORBAN</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

an in ovo model for testing insulin-mimetic compounds

Yüksek kan şekeri düzeyleri de tip 2 diyabet (T2DM), karmaşık ve multifaktöriyel bir metabolik hastalığı, insülin direnci ve β-hücre hatasından kaynaklanır. İnsülin enjeksiyon veya insülin duyarlılığı ilaçların kullanımı da dahil olmak üzere çeşitli stratejileri T2DM tedavi etmek ya da en azından semptomları azaltmak takip. Buna ek olarak, uygulama bitkisel bileşiklerin artan dikkat çekti. Böylece, tanımlamak ve insülin mimetic bileşikler karakterize için verimli test sistemleri bulmak gereklidir. Burada sentetik bileşikler ve insülin mimetic özellikleri ile bitkisel özler test sağlar değiştirilmiş civciv embriyo modeli geliştirdik. Plazma zarı için glikoz taşıyıcı 4 (Glut4) translocation quantifies, bir Floresans mikroskobu tabanlı birincil ekranı kullanarak bileşikler, hücre içi glikoz bir artış için kurşun çoğunlukla bitkisel özler tanımlamak başardık adiposit konsantrasyonlarda. Ancak, bu maddelerin etkinliği daha da canlı bir organizma doğrulama gerektirir. Böylece, bir ovo yaklaşım kan şekeri azaltarak özelliklerini tanımlamak için kullanılır. Tavuk bebekleri ilk üçte embriyonik gelişim sırasında kullanımı hayvan deney olarak kabul edilmez beri bir Etik Komitesi tarafından onay gerekli değildir. Burada, uygulamanın bu modelin ayrıntılı olarak açıklanmıştır.

Gluc-HET yaklaşım açıklaması:
Faiz maddeler ile kuluçka sonra döllenmiş yumurta açtı ve kan toplama için yumurta kabuğu (Şekil 2) Temizleme tarafından hazırladı. Daha fazla hazırlık denge ve chorioallantoic membran erişmek için yumurta kabuğu membran kaldırılmasını içerir. Bu zar dikkatle kan koleksiyonu için uygun bir kan damarı erişim sağlamak için kesilir. Tercihen, embriyo karından kaynaklanan büyük gemi bir plastik pH-şerit üzerinde yer alıyor. Toplama sırasında kan seyreltme önlemek için gemi ve pH-striptiz okşadı kuru filtre kağıdı ile. Kan damarı sonra kesilir ve kan pH-şerit sızıntı bir pipet kullanarak analiz için toplanır.
Kan glikoz düzeyleri üzerine etkisi seçili bitkisel özler:
Bir yeni kurulan GLUT4-translocation Nefelometri tabanlı birincil ekran ile maddeler bir insülin mimetic karakteristik10ile tespit edebiliyoruz. Tarama, suda çözünebilen bitkisel özler yüzlerce birden fazla bulunan tanımlaması içinde sonuçlandı. Bu özler bizim içinde -ovo modeli test edildi. Özler Combretum indicum (Rangoon sarmaşık) hazırlanan ve (özü 0845 denir) bir sigara ifşa özü bu deneyler için kullanılmıştır. Özler HBSS tampon 300 mg/L, önceki çalışmalar12,13' te uygun olduğu ortaya çıktı bir konsantrasyon, dağıldı. Madde 11 gün boyunca inkübe embriyolar için uygulandı. Şekil 3' te gösterildiği gibi Rangoon sarmaşık ayıklamak içinde bir önemli kan şekeri azaltma ovosonuçlanmamıştır. Ancak, kan glikoz konsantrasyonu başarıyla özü 0845, 60 dk sonra küçük bir düşüş ile ile olan ticari olarak mevcut insülin analog kullanarak gözlenen etkisi karşılaştırılabilir düşürüldü. Önemli bir etkisi ne zaman yumurtaların kuluçka süresi uzamış gözlendi.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57237/57237fig1.jpg"> Şekil 1: toksik bileşiklerin etkisi embriyo canlılık. Yumurta (A ve C) 11 gün boyunca inkübe veya toksik bir bitkisel özü başka bir 24 h için günde 10 ile tedavi (B ve D). Uygulama ekstresinin chorioallantoic membran (D) ve (B)embriyo kan damarlarının ağır lezyonlar yol açtı.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57237/57237fig2.jpg"> Resim 2: Ovo modelinin açıklaması. Soldan sağa: açılış ve yumurta kabuğu kaldırılması (1 - 2); denge ve yumurta kabuğu membran chorioallantoic membran ile kaldırılması (3)maruz; pH-şerit (4)hazırlanan gemide; Kan ve bir glikoz metre (5)kullanarak glikoz konsantrasyonu ölçümü topluluğu. Haselgruebler ve arkuyarlanmıştır., 201712. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57237/57237fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57237/57237fig3.jpg"> Şekil 3: tedavi edilmemiş veya insülin tedavi yumurta için karşılaştırıldığında kan şekeri düzeyleri üzerinde bitkisel özler etkisi. Yumurta 11 gün boyunca inkübe ve belirtilen maddelerle tedavi (ticari olarak mevcut insülin analog: 3.3 U/mL; özleri: 300 mg/L) 3 h. kan şekeri bir kan şekeri ölçüm cihazı kullanarak tespit HBSS arabellek (300 µL cilt) çözünmüş. Sonuçları arabellek etkisi gösterilir. Hata çubukları standart hata ortalamaya temel alır. * P < 0,05 ve *** P < 0,0001, önemli azaltmak HBSS tedavi yumurta aynı kuluçka süresi ile ilgili. Haselgruebler ve arkuyarlanmıştır., 201712. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57237/57237fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about An In Ovo Model for Testing Insulin-mimetic Compounds at JoVE.com

An In Ovo Model for Testing Insulin-mimetic Compounds

Bu çalışmada, insülin mimetic bileşikler yaşayan bir organizma test etmek için umut verici bir araç olarak bir ovo sistemi açıklanmaktadır. Ana avantajı yeterli üretilen iş hızları ve fitokimyasallar insülin mimetic özelliklere sahip kimliği etkinleştirme kabul edilebilir maliyeti içerir.

İnsülin mimetic bileşikler test etmek için bir Ovo içinde modeli

Elevated blood glucose levels in type 2 diabetes mellitus (T2DM), a complex and multifactorial metabolic disease, are caused by insulin resistance and ...

an-in-ovo-model-for-testing-insulin-mimetic-compounds

Universidad de Cartagena UDEC

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Neuroscience

Unit 1

An In Ovo Model for Testing Insulin-mimetic Compounds

Insulin and Hypoglycemic Drugs

SCIENTISTS IN ACTION

9.7K Görüntüleme.  University of Applied Sciences Upper Austria. Bu çalışmada, insülin mimetic bileşikler yaşayan bir organizma test etmek için umut verici bir araç olarak bir ovo sistemi açıklanmaktadır. Ana avantajı yeterli üretilen iş hızları ve fitokimyasallar insülin mimetic özelliklere sahip kimliği etkinleştirme kabul edilebilir maliyeti içerir.

Video: An In Ovo Model for Testing Insulin-mimetic Compounds

Sustained Administration of &#946;-cell Mitogens to Intact Mouse Islets Ex Vivo Using Biodegradable Poly(lactic-co-glycolic acid) Microspheres

The development of biomaterials has significantly increased the potential for targeted drug delivery to a variety of cell and tissue types, including the pancreatic &#946;-cells. In addition, biomaterial particles, hydrogels, and scaffolds also provide a unique opportunity to administer sustained, controllable drug delivery to &#946;-cells in culture and in transplanted tissue models. These technologies allow the study of candidate &#946;-cell proliferation factors using intact islets and a translationally relevant system. Moreover, determining the effectiveness and feasibility of candidate factors for stimulating &#946;-cell proliferation in a culture system is critical before moving forward to in vivo models. Herein, we describe a method to co-culture intact mouse islets with biodegradable compound of interest (COI)-loaded poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) microspheres for the purpose of assessing the effects of sustained in situ release of mitogenic factors on &#946;-cell proliferation. This technique describes in detail how to generate PLGA microspheres containing a desired cargo using commercially available reagents. While the described technique uses recombinant human Connective tissue growth factor (rhCTGF) as an example, a wide variety of COI could readily be used. Additionally, this method utilizes 96-well plates to minimize the amount of reagents necessary to assess &#946;-cell proliferation. This protocol can be readily adapted to use alternative biomaterials and other endocrine cell characteristics such as cell survival and differentiation status.

Here, we present methodology to generate and administer compound of interest-loaded poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) microspheres to intact mouse islets in culture with subsequent immunofluorescence analysis of &#946;-cell proliferation. This method is suitable for determining the efficacy of candidate &#946;-cell mitogens.

Bozulmamış Fare Adacık için β-hücre mitogenlerin Sürekli İdaresi<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Biyolojik olarak parçalanabilir poli (laktik-ko-glikolik asit) mikro kullanılması

The development of biomaterials has significantly increased the potential for targeted drug delivery to a variety of cell and tissue types, including the ...

Biyomühendislik

Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster

Conserved nutrient sensing mechanisms exist between mammal and fruit fly where peptides resembling mammalian insulin and glucagon, respectively function to maintain glucose homeostasis during developmental larval stages 1,2. Studies on largely post-mitotic adult flies have revealed perturbation of glucose homeostasis as the result of genetic ablation of insulin-like peptide (ILP) producing cells (IPCs) 3. Thus, adult fruit flies hold great promise as a suitable genetic model system for metabolic disorders including type II diabetes. To further develop the fruit fly system, comparable physiological assays used to measure glucose tolerance and insulin sensitivity in mammals must be established. To this end, we have recently described a novel procedure for measuring oral glucose tolerance response in the adult fly and demonstrated the importance of adult IPCs in maintaining glucose homeostasis 4,5. Here, we have modified a previously described procedure for insulin injection 6 and combined it with a novel hemolymph extraction method to measure peripheral insulin sensitivity in the adult fly. Uniquely, our protocol allows direct physiological measurements of the adult fly's ability to dispose of a peripheral glucose load upon insulin injection, a methodology that makes it feasible to characterize insulin signaling mutants and potential interventions affecting glucose tolerance and insulin sensitivity in the adult fly.

Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster

Conserved insulin signaling pathways found in the fruit fly Drosophila melanogaster make this organism a potential tool for modeling metabolic disorders including type II diabetes. To this end, it is critical to establish physiological assays to effectively measure systemic insulin action in peripheral glucose disposal in the adult fly.

İnsülin Enjeksiyon ve Yetişkin İnsülin Hassasiyet Tedbir hemolimf Ekstraksiyon Drosophila melanogaster</em

Conserved nutrient sensing mechanisms exist between mammal and fruit fly where peptides resembling mammalian insulin and glucagon, respectively function ...

Biyoloji

A Quantitative Assay for Insulin-expressing Colony-forming Progenitors

The field of pancreatic stem and progenitor cell biology has been hampered by a lack of in vitro functional and quantitative assays that allow for the analysis of the single cell. Analyses of single progenitors are of critical importance because they provide definitive ways to unequivocally demonstrate the lineage potential of individual progenitors. Although methods have been devised to generate "pancreatospheres" in suspension culture from single cells, several limitations exist. First, it is time-consuming to perform single cell deposition for a large number of cells, which in turn commands large volumes of culture media and space. Second, numeration of the resulting pancreatospheres is labor-intensive, especially when the frequency of the pancreatosphere-initiating progenitors is low. Third, the pancreatosphere assay is not an efficient method to allow both the proliferation and differentiation of pancreatic progenitors in the same culture well, restricting the usefulness of the assay.
To overcome these limitations, a semi-solid media based colony assay for pancreatic progenitors has been developed and is presented in this report. This method takes advantage of an existing concept from the hematopoietic colony assay, in which methylcellulose is used to provide viscosity to the media, allowing the progenitor cells to stay in three-dimensional space as they undergo proliferation as well as differentiation. To enrich insulin-expressing colony-forming progenitors from a heterogeneous population, we utilized cells that express neurogenin (Ngn) 3, a pancreatic endocrine progenitor cell marker. Murine embryonic stem (ES) cell-derived Ngn3 expressing cells tagged with the enhanced green fluorescent protein reporter were sorted and as many as 25,000 cells per well were plated into low-attachment 24-well culture dishes. Each well contained 500 &mu;L of semi-solid media with the following major components: methylcellulose, Matrigel, nicotinamide, exendin-4, activin &beta;B, and conditioned media collected from murine ES cell-derived pancreatic-like cells. After 8 to 12 days of culture, insulin-expressing colonies with distinctive morphology were formed and could be further analyzed for pancreatic gene expression using quantitative RT-PCR and immunoflourescent staining to determine the lineage composition of each colony.
In summary, our colony assay allows easy detection and quantification of functional progenitors within a heterogeneous population of cells. In addition, the semi-solid media format allows uniform presentation of extracellular matrix components and growth factors to cells, enabling progenitors to proliferate and differentiate in vitro. This colony assay provides unique opportunities for mechanistic studies of pancreatic progenitor cells at the single cell level.

A three-dimensional clonogenic assay that allows pancreatic-like progenitors to differentiate into insulin-expressing colonies is described. This method takes advantage of semi-solid media containing methylcellulose, Matrigel and growth factors, in which single progenitors proliferate and differentiate in vitro, permitting quantification of the number of functional progenitors in a population.

İnsülin ifade Koloni oluşturan atalarıdır için Kantitatif Testi

The field of pancreatic stem and progenitor cell biology has been hampered by a lack of in vitro functional and quantitative assays that allow for the ...

A High-content In Vitro Pancreatic Islet &#946;-cell Replication Discovery Platform

Loss of insulin-producing &#946;-cells is a central feature of diabetes. While a variety of potential replacement therapies are being explored, expansion of endogenous insulin-producing pancreatic islet &#946;-cells remains an attractive strategy. &#946;-cells have limited spontaneous regenerative activity; consequently, a crucial research effort is to develop a precise understanding of the molecular pathways that restrain &#946;-cell growth and to identify drugs capable of overcoming these restraints. Herein an automated high-content image-based primary-cell screening method to identify &#946;-cell replication-promoting small molecules is presented. Several, limitations of prior methodologies are surmounted. First, use of primary islet cells rather than an immortalized cell-line maximizes retention of in vivo growth restraints. Second, use of mixed-composition islet-cell cultures rather than a &#946;-cell-line allows identification of both lineage-restricted and general growth stimulators. Third, the technique makes practical the use of primary islets, a limiting resource, through use of a 384-well format. Fourth, detrimental experimental variability associated with erratic islet culture quality is overcome through optimization of isolation, dispersion, plating and culture parameters. Fifth, the difficulties of accurately and consistently measuring the low basal replication rate of islet endocrine-cells are surmounted with optimized immunostaining parameters, automated data acquisition and data analysis; automation simultaneously enhances throughput and limits experimenter bias. Notable limitations of this assay are the use of dispersed islet cultures which disrupts islet architecture, the use of rodent rather than human islets and the inherent limitations of throughput and cost associated with the use of primary cells. Importantly, the strategy is easily adapted for human islet replication studies. This assay is well suited for investigating the mitogenic effect of substances on &#946;-cells and the molecular mechanisms that regulate &#946;-cell growth.

A High-content In Vitro Pancreatic Islet &#946;-cell Replication Discovery Platform

Critical challenges for the diabetes research field are to understand the molecular mechanisms that regulate islet &#946;-cell replication and to develop methods for stimulating &#946;-cell regeneration. Herein a high-content screening method to identify and assess the &#946;-cell replication-promoting activity of small molecules is presented.

Bir Yüksek içerik<em&gt; İn Vitro</em&gt; Pankreas Adacık β-hücre çoğaltma Keşif Platformu

Loss of insulin-producing &#946;-cells is a central feature of diabetes. While a variety of potential replacement therapies are being explored, expansion ...

Tıp

Studying the Hypothalamic Insulin Signal to Peripheral Glucose Intolerance with a Continuous Drug Infusion System into the Mouse Brain

Insulin regulates systematic metabolism in the hypothalamus and the peripheral insulin response. An inflammatory reaction in peripheral adipose tissues contributes to type 2 diabetes mellitus (T2DM) development and appetite regulation in the hypothalamus. Chemokine CCL5 and C-C chemokine receptor type 5 (CCR5) levels have been suggested to mediate arteriosclerosis and glucose intolerance in type 2 diabetes mellitus (T2DM). In addition, CCL5 plays a neuroendocrine role in the hypothalamus by regulating food intake and body temperature, thus, prompting us to investigate its function in hypothalamic insulin signaling and the regulation of peripheral glucose metabolism.
The micro-osmotic pump brain infusion system is a quick and precise way to manipulate CCL5 function and study its effect in the brain. It also provides a convenient alternative approach to generating a transgenic knockout animal. In this system, CCL5 signaling was blocked by intracerebroventricular (ICV) infusion of its antagonist, MetCCL5, using a micro-osmotic pump. The peripheral glucose metabolism and insulin responsiveness was detected by the Oral Glucose Tolerance Test (OGTT) and Insulin Tolerance Test (ITT). Insulin signaling activity was then analyzed by protein blot from tissue samples derived from the animals.
After 7-14 days of MetCCL5 infusion, the glucose metabolism and insulin responsiveness was impaired in mice, as seen in the results of the OGTT and ITT. The IRS-1 serine302 phosphorylation was increased and the Akt activity was reduced in mice hypothalamic neurons following CCL5 inhibition. Altogether, our data suggest that blocking CCL5 in the mouse brain increases the phosphorylation of IRS-1 S302 and interrupts hypothalamic insulin signaling, leading to a decrease in insulin function in peripheral tissues as well as the impairment of glucose metabolism.

This protocol studies the role of chemokine (C-C motif) ligand 5 (CCL5) in the hypothalamus by delivering an antagonist, MetCCL5, into the mouse brain using a micro-osmotic pump brain infusion system. This transient inhibition of CCL5 activity interrupted hypothalamic insulin signaling, leading to glucose intolerance and peripheral systemic insulin sensitivity.

Hipotalamik insülin sinyal fare beyin içine sürekli uyuşturucu infüzyon sistemi ile periferik glikoz intoleransı için eğitim

Insulin regulates systematic metabolism in the hypothalamus and the peripheral insulin response. An inflammatory reaction in peripheral adipose tissues ...

Study of In Vivo Glucose Metabolism in High-fat Diet-fed Mice Using Oral Glucose Tolerance Test (OGTT) and Insulin Tolerance Test (ITT)

Obesity represents the most important single risk factor in the pathogenesis of type 2 diabetes, a disease which is characterized by a resistance to insulin-stimulated glucose uptake and a gross decompensation of systemic glucose metabolism. Despite considerable progress in the understanding of glucose metabolism, the molecular mechanisms of its regulation in health and disease remain under-investigated, while novel approaches to prevent and treat diabetes are urgently needed. Diet derived glucose stimulates the pancreatic secretion of insulin, which serves as the principal regulator of cellular anabolic processes during the fed-state and thus balances blood glucose levels to maintain systemic energy status. Chronic overfeeding triggers meta-inflammation, which leads to alterations in peripheral insulin receptor-associated signaling and thus reduces the sensitivity to insulin-mediated glucose disposal. These events ultimately result in elevated fasting glucose and insulin levels as well as a reduction in glucose tolerance, which in turn serve as important indicators of insulin resistance. Here, we present a protocol for the generation and metabolic characterization of high-fat diet (HFD)-fed mice as a frequently used model of diet-induced insulin resistance. We illustrate in detail the oral glucose tolerance test (OGTT), which monitors the peripheral disposal of an orally administered glucose load and insulin secretion over time. Additionally, we present a protocol for the insulin tolerance test (ITT) to monitor whole-body insulin action. Together, these methods and their downstream applications represent powerful tools to characterize the general metabolic phenotype of mice as well as to specifically assess alterations in glucose metabolism. They may be especially useful in the broad research field of insulin resistance, diabetes and obesity to provide a better understanding of pathogenesis as well as to test the effects of therapeutic interventions.

Study of In Vivo Glucose Metabolism in High-fat Diet-fed Mice Using Oral Glucose Tolerance Test OGTT and Insulin Tolerance Test ITT

The current article describes the generation and metabolic characterization of high-fat diet-fed mice as a model of diet-induced insulin resistance and obesity. It further features detailed protocols to perform the oral glucose tolerance test and the insulin tolerance test, monitoring whole-body alterations of glucose metabolism in vivo.

Vivo glikoz metabolizması farelerde Oral glukoz tolerans testi (OGTT) ve insülin tolerans testi (ITT) kullanarak yüksek yağlı diyet beslenen incelenmesi

Obesity represents the most important single risk factor in the pathogenesis of type 2 diabetes, a disease which is characterized by a resistance to ...

Homogeneous Time-resolved F&#246;rster Resonance Energy Transfer-based Assay for Detection of Insulin Secretion

The detection of insulin secretion is critical for elucidating mechanisms of regulated secretion as well as in studies of metabolism. Though numerous insulin assays have existed for decades, the recent advent of homogeneous time-resolved F&#246;rster Resonance Energy Transfer (HTRF) technology has significantly simplified these measurements. This is a rapid, cost-effective, reproducible, and robust optical assay reliant upon antibodies conjugated to bright fluorophores with long lasting emission which facilitates time-resolved F&#246;rster Resonance Energy Transfer. Moreover, HTRF insulin detection is amenable for the development of high-throughput screening assays. Here we use HTRF to detect insulin secretion in INS-1E cells, a rat insulinoma-derived cell line. This allows us to estimate basal levels of insulin and their changes in response to glucose stimulation. In addition, we use this insulin detection system to confirm the role of dopamine as a negative regulator of glucose-stimulated insulin secretion (GSIS). In a similar manner, other dopamine D2-like receptor agonists, quinpirole, and bromocriptine, reduce GSIS in a concentration-dependent manner. Our results highlight the utility of the HTRF insulin assay format in determining the role of numerous drugs in GSIS and their pharmacological profiles.

Here, we present homogeneous time resolved FRET (HTRF) as an efficient method for rapid detection of insulin secreted from cells.

Homojen zaman çözüldü Förster rezonans enerji transferi tabanlı tahlil insülin salgılanması algılanması için

The detection of insulin secretion is critical for elucidating mechanisms of regulated secretion as well as in studies of metabolism. Though numerous ...

Acclimation Prior to an Intraperitoneal Insulin Tolerance Test to Mitigate Stress-Induced Hyperglycemia in Conscious Mice

The insulin tolerance test is commonly used in metabolic studies to assess whole body insulin sensitivity in rodents. It is a relatively simple test that involves measurement of blood glucose levels over time following a single intraperitoneal injection of insulin. Given that it is performed in the conscious state and blood is often collected via a tail snip, it has the potential to elicit a stress response from animals due to anxiety associated with handling and blood collection. As such, a stress-induced rise in blood glucose can occur, making it difficult to detect and interpret the primary endpoint measure, namely an insulin-mediated reduction in blood glucose. This has been seen in many mouse strains, and is quite common in diabetic db/db mice, where glucose levels can increase, rather than decrease, after insulin administration. Here, we describe a method of acclimating mice to handling, injections and blood sampling prior to performing the insulin tolerance test. We find that this lowers stress-induced hyperglycemia and results in data that more accurately reflects whole body insulin sensitivity.

Stress-induced elevations in glucose levels can confound interpretation of data derived from a conscious intraperitoneal insulin tolerance test in mice. In this article, we describe a method to acclimate the mice to handling, injections and blood sampling prior to performing the insulin tolerance test in order to limit stress-induced hyperglycemia.

The insulin tolerance test is commonly used in metabolic studies to assess whole body insulin sensitivity in rodents. It is a relatively simple test that ...

Glucose Uptake Measurement and Response to Insulin Stimulation in In Vitro Cultured Human Primary Myotubes

Skeletal muscle is the largest glucose deposit in mammals and largely contributes to glucose homeostasis. Assessment of insulin sensitivity of muscle cells is of major relevance for all studies dedicated to exploring muscle glucose metabolism and characterizing metabolic alterations. In muscle cells, glucose transporter type 4 (GLUT4) proteins translocate to the plasma membrane in response to insulin, thus allowing massive entry of glucose into the cell. The ability of muscle cells to respond to insulin by increasing the rate of glucose uptake is one of the standard readouts to quantify muscle cell sensitivity to insulin. Human primary myotubes are a suitable in vitro model, as the cells maintain many features of the donor phenotype, including insulin sensitivity. This in vitro model is also suitable for the test of any compounds that could impact insulin responsiveness. Measurements of the glucose uptake rate in differentiated myotubes reflect insulin sensitivity.
In this method, human primary muscle cells are cultured in vitro to obtain differentiated myotubes, and glucose uptake rates with and without insulin stimulation are measured. We provide a detailed protocol to quantify passive and active glucose transport rates using radiolabeled [3H] 2-deoxy-D-Glucose ([3H]2dG). Calculation methods are provided to quantify active basal and insulin-stimulated rates, as well as stimulation fold.

Glucose Uptake Measurement and Response to Insulin Stimulation in In Vitro Cultured Human Primary Myotubes

In this method, human primary muscle cells are cultured in vitro to obtain differentiated myotubes and glucose uptake rates are measured. We provide a detailed protocol to quantify rates in basal and insulin-stimulated states using radiolabeled [3H] 2-deoxy-D-Glucose.

Glikoz Alımı Ölçümü ve İnsülin Uyarıcısına Yanıt<em&gt; In vitro</em&gt; Kültürlü İnsan Primer Miyotları

Skeletal muscle is the largest glucose deposit in mammals and largely contributes to glucose homeostasis. Assessment of insulin sensitivity of muscle ...

Measuring Relative Insulin Secretion using a Co-Secreted Luciferase Surrogate

Performing antibody-based assays for secreted insulin post-sample collection usually requires a few hours to a day of assay time and can be expensive, depending on the specific assay. Secreted luciferase assays expedite results and lower the assay cost per sample substantially. Here we present a relatively underused approach to gauge insulin secretory activity from pancreatic &#946; cells by using Gaussia luciferase genetically inserted within the C-peptide. During proteolytic processing of proinsulin, the C-peptide is excised releasing the luciferase within the insulin secretory vesicle where it is co-secreted with insulin. Results can be obtained within minutes after sample collection because of the speed of luciferase assays. A limitation of the assay is that it is a relative measurement of insulin secretion and not an absolute quantitation. However, this protocol is economical, scalable, and can be performed using most standard luminescence plate readers. Analog and digital multichannel pipettes facilitate multiple steps of the assay. Many different experimental variations can be tested simultaneously. Once a focused set of conditions are decided upon, insulin concentrations should be measured directly using antibody-based assays with standard curves to confirm the luciferase assay results.

This protocol describes how to perform rapid low-cost luciferase assays at medium-throughput using an insulin-linked Gaussia luciferase as a proxy for insulin secretion from beta cells. The assay can be performed with most luminescence plate readers and multichannel pipettes.

Bir Co-salgılanmış luciferase Surrogate kullanarak bağıl Insülin salgılanmasını ölçme

Performing antibody-based assays for secreted insulin post-sample collection usually requires a few hours to a day of assay time and can be expensive, ...

İnsülin mimetic bileşikler test etmek için bir Ovo içinde modeli

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Bozulmamış Fare Adacık için β-hücre mitogenlerin Sürekli İdaresi

İnsülin Enjeksiyon ve Yetişkin İnsülin Hassasiyet Tedbir hemolimf Ekstraksiyon Drosophila melanogaster