Yazarlar gönüllü katılımlarını bu çalışmalar ve yağ doku biyopsisi sağlamak için Boston Tıp Merkezi cerrahi personel için teşekkür etmek istiyorum. Dr. Gökçe Ulusal Enstitüleri (NIH) sağlık hibe HL081587, HL114675 ve HL126141 tarafından desteklenir. Dr. Farb NIH tarafından desteklenmektedir K23 HL135394 verin.

protokolü ve burada anlatılan örnekler Boston Üniversitesi okul tıp kurumsal inceleme kurulu'nin (IRB, iletişim kuralı #H-25644) kabul edildi ve Helsinki Deklarasyonu uygun olarak yapılmıştır. Tüm konularda yazılı Onam önce katılım sağlanan.
 1. hazırlık çözümler ve mikro-cam Kanüller <ol><li>hazırla 4-2-hydrosyethyl-1-piperazineethanesulfonic asidik solüsyon (HEPES) çözüm. 1 L için 8.059 g NaCl, 0,298 g KCl, 0,296 g MgSO 4 dissolve &#8226; 7 H 2 O, 0.235 g CaCl 2 &#8226; 2 H 2 O, 0,16 g KH 2 PO 4, 0,01 g EDTA, 1.081 g D-glukoz ve 2.383 g HEPES asit 950 ml deiyonize su. Sesini için 1 L deiyonize su ile olun. PH 7.4 NaOH kullanarak için ayarlayın. HEPES tampon saklanabilir için 7 gün 4 ° C.</li>
	<li>20 x Salt arabellek hisse senedi hazırlayın. 143,8 g NaCl, 7.0 g KCl, 5.9 g MgSO 4 ve 7.4 g CaCl 2 1 L için ekleyin &#8226; 2 H 2 O 900 mL distile su içine. •Ses yükseltme için 1 L deiyonize su ile olun. Saat 4'te hazır çözüm depolamak ° C.</li>
	<li>20 x arabellek hisse senedi hazırlayın. 1 L için 26.8 g NaHCO 3 ve 0.2 g EDTA·2H 2 O 900 mL deiyonize su içine ekleyin. •Ses yükseltme için 1 L deiyonize su ile olun. Saat 4'te hazır çözüm depolamak ° C.</li>
	<li>Çözüm KREBS fizyolojik deneyler sırasında kullanılmak üzere hazırlayın. 1 L için 900 mL deiyonize su, 20 arabellek hisse senedi x 50 mL, 20 tuz tampon solüsyonu, 0,99 g D-glukoz ve 0,16 g KH 2 PO 4 x 50 mL ekleyin. PH HCl kullanarak 7.4 için ayarlayın. Tamponunun pH korumak için sürekli karıştırın ve kapak ile parafin veya sürekli kabarcık.
	<ol><li>Onay pH her 20 dk. KREBS çözüm taze olun günlük.</li>
	</ol></li> <li>Yapmak mikro-cam Kanüller 40-240 µm bir piyasada bulunan iğne/pipet çektirmenin kullanarak bir iç çapı ile. Cam Kanüller boyutunu izole kan damarları (50-350 µm) iç çapını boyutu tarafından belirlenir. Alternatif olarak, mikro-cam Kanüller önceden belirlenmiş büyüklükte satın.</li>
</ol> 2. Reaktifler hazırlanması <ol><li>hazırla asetilkolin (Ach, 10 -2 M, hisse senedi çözüm). 10 mL deiyonize su 18.29 g geçiyoruz. 1 mL aliquots hisse senedi çözüm (10 -2 M)-80 ° C'de depolayın Aşağıdaki çalışma konsantrasyonları elde etmek için seri olarak seyreltik deneme günü: 10 -5, 10 -6, 10 -7, 10 -8, 10 -9 M.</li>
	<li>(2 x 10 -2 M, hisse senedi çözüm) papaverin hazırlayın. 10 mL deiyonize su 0.07517 g geçiyoruz. 10 µL aliquots hisse senedi çözüm ve-80 mağazasında hazırlamak ° C. seri olarak sulandırmak 10 -4, 10 -5, 10 -6, 10 -7, 10 -8 M denemenin gün almak için.</li>
	<li>Endotelin-1 (ET-1, 2 x 10 -5 M, hisse senedi çözüm) hazırlayın. 50 µg endotelin-1 1 mL % 1'dağıtılması BSA/PBS. 1 mL aliquots hisse senedi çözüm (2 x 10 -5 M)-80 ° C'de depolayın 10 -10 M çalışma konsantrasyonu deney gününde elde etmek için seyreltik deneme günü.</li>
	<li>Ya-20 ° C'de reaktifler depolamak veya ile-80 ° C arasında derin dondurucu türüne bağlı olarak kullanılabilir, ama 6 aydan uzun olmayan.</li>
</ol> 3. Yağ dokusu toplama ve gemi hazırlık <ol><li>askere obez erkekler ve kadınlar (vücut kitle indeksi (VKİ) &#8805; 35 kg/m², yaş &#8805; 18 yaşındaki) bariatrik cerrahi programı, Boston Tıp Merkezi (BMC) kayıtlı. Toplam 40 konuların bu deneylerde katıldı.</li>
	<li>Toplamak subkutan ve viseral yağ doku örnekleri planlı bariatrik cerrahi sırasında operasyonu cerrah tarafından.
	<ol><li>Hasat subkutan yağ dokuları alt karın duvarından ve viseral sırasıyla büyük Omentumun, şişko. Tipik yağ dokusu örnek boyutu değişir doku 3-10 mg.</li>
		<li>Yer dokulara hemen soğuk HEPES tampon çözüm pH 7,4 ve mağaza 4 ° c ilâ 24 h için 
		Not: Ayrıca, adipose arteriyoller yalın bireylerin de cerrahi fıtık onarım veya plastik cerrahi gibi diğer türleri sırasında elde edilebilir ve aynı zamanda biyopsi trans-Kutanöz karın yağ yastığı biyopsi ile subkutan depo dan olabilir 6.</li>
	</ol></li> <li>Bir doku diseksiyon mikroskop, mikro-makas ve mikro-forseps kullanarak, dikkatle çevreleyen bağ dokusu ve yağ küçük adipose arteriyoller (50-350 µm intraluminal çapı, 2-3 mm uzunluğunda) kaldırın.</li>
	<li>Cam kapiller Pipetler cannulating önce küçük naylon veya ipek dikiş kullanarak arteriyoller bütün dallarda kapalı kravat. Arteriyol duvardaki bile ufak hasar önemli bir işlev değişikliğine neden olur bu yana dikkatle incelemek arteriyoller.
	Işık ve ısı olarak <ol><li>simge durumuna Küçült gemi maruz vazodilatasyon neden olabilir. Bazen arteriyoller venüller ayırt etmek zor olabilir bu yana, damarları boyutu ve düz kas tonu damarlarının ipuçları kesme tarafından tanımlayın. Arteriyoller genellikle daha küçük olan ve büyük sesi venüller için karşılaştırıldığında gösteren.</li>
	</ol></li> <li>Organ odası hazırlamak. Yavaş yavaş cam kapiller Pipetler ve kauçuk tüp 10 mL kullanarak KREBS solüsyonu ile doldurmak.</li>
	<li>Kez alıpkendi doldurulur ve cam kapiller Pipetler KREBS çözüm içinde organ odası sular altında arteriyoller güvenli Pipetler üzerinde güvenli bir şekilde cannulate ve her iki ucunda da arteriyol naylon ile kravat veya dikiş knot dikkatle ipek.</li>
	<li>Organ odası KREBS çözüm ile doldurmak 2 mL.</li>
	<li>Organ odası bir sahneye ters mikroskopla (büyütme 10 X / 0,25 amaç) güvenli ve video kamera.</li>
	<li>İçinde akış kenar algılama yazılımı 1 kHz örnekleme hızında gerçek zamanlı açın (1 kare/sn).</li>
	Kabarcıklar deneysel hata tanıtmak gibi <li>bir basınçlı boru dolu basınç rezervuar microbubbles ücretsiz KREBS çözüm bağlamak. Diğer basınçlı boru organ odasına bağlamak.</li>
	<li>Temiz boru ile basınç detektörler KREBS dolu çözüm basınç rezervuar bağlanmak.</li>
	<li>Kontrol bu iki rezervuarlar yüksekliğini düzenleyerek içi luminal akışı; Yani, ne zaman rezervuarlar içi luminal hiçbir akışı ortaya çıkar aynı yükseklikte yer alır.</li>
	Tüm bu işlemler tamamlandıktan sonra <li>dönüş sıcaklığı 37 korumak için blok ve yazılım programı Isıtma ° C. sürekli KREBS çözüm ile gemi sıvı ve % 5 CO 2, % 21 O 2 ve % 74'ü N gaz karışımı ile havalandırmak 2 bütün deneysel prosedür boyunca 7 , 8.</li>
	İstenilen basınç insin ulaşmak için <li>de izole kaplar Lümen yavaş yavaş artırın intraluminal basınç (5 mmHg, her 5 dk) yolu ile endotel tabakası zarar görmemesi için yavaş bir hızla böylece basınç kontrol ünitesi myo-arabirimi Masası ' nda. 
	Not: basınç 60 mmHg ulaştığında, bir 20-30 dk denge süre gemi stabilize etmek gereklidir. Tüm vasküler işlevi çalışmaları 60 mmHg ve pH 7.4 37 ° C'de gerçekleştirilir. 7</li></ol> 4. Adipose mikrovasküler işlevi değerlendirilmesi Not: genel olarak, yağ arteriyol endotel bağımlı vazodilatasyon yanıt olarak fizyolojik (akış kaynaklı) elicited ve farmakolojik uyaranlara (Ach kaynaklı).
<ol><li>Akışı aracılı, endotel bağımlı vazodilatasyon <ol><li>basıncını, istirahat (Di) yağ arteriyol çapını kaydetmek. Bu dinlenme temel çapı adlandırılır.</li>
		<li>Kan damarlarının dinlenme temel çapı (Dp) ~ %55 1 µL endotelin-1 ekleyerek önceden daraltır (ET-1, 10 &#8722; 10 M) banyo ve etkisi 5 dk bekle. İstenen ~ %55 ulaşan devlet önceden dar kadar bu işlemi yineleyin.</li>
		<li>Ortalama intraluminal basınç değiştirmeden gemi arasında basınç farkı geliştirilebilir böylece öncesi daralma sürekli akışı yağ dokusu arteriyoller, eşit ve zıt yönde intraluminal uzaya ikna etmek 60 mmHg,. 
		Not: bir rezervuar 10 cm yüksekliğinde hareket ederse, örneğin, diğeri 10 cm kadar basınç gradyanları değiştirebilir ve böylece intraluminal akış hızını değiştirmek için taşınması gerekiyor. Daha doğru akış hızı ölçümleri istenirse, deneysel set-up bir nicel debimetre sistemi uygulanabilir.</li>
		<li>Ölçmek akışı aracılı dilatasyon akışı indüksiyon başlanmasından sonra 3-5 dak. İntraluminal akışı (basınç gradyanları) düzeyde olabilir aralığın 0 - 100 cmH 2 O. artırmak her artış basınç geçişin Δ10 cmH 2 tarafından O en çok 100 cmH 2 O. her 5-6 min 
		Not: lümen istikrarlı laminar akışı ikna etmek için her iki mikro cam kanül ucu boyutları çok arteriyoller iç çap yakın olmak gerekir; Aksi takdirde, türbülanslı akış içinde Lümen üretmek ve istenmeyen ölçüm hataları neden.</li>
		<li>Akış-aracılı dilatasyon değerlendirme, aynı yükseklikte (60 mmHg) basınç rezervuar iade.</li>
		<li>Sonra yıkama arteriyol ve odası hemen odasından çözüm kaldırarak ve taze KREBS çözüm ile değiştirin. Bu odanın içinde askıya alınmış arteriyol bozmak değil olarak dikkatle yapılır.</li>
		<li>20-30 dk için 3 - 4 kez veya izole kap dinlenme temel çapı dönünceye kadar bu işlemi tekrarlayın.</li>
	</ol></li> <li>Asetilkolin-aracılı, endotel bağımlı, vazodilatasyon <ol><li>adipose arteriyol dinlenme temel çapı döndüğünde önceden sıkmak endotelin-1 (ET-1, 10 yönetmek gemi ~ %55 &#8722; 10 M) doğrudan Bath, 4.1.2 bölümünde yukarıda açıklandığı gibi.</li>
		<li>Öncesi daralma artan dozlarda (2 µL) sırayla bir reseptör aracılı, nitrik oksit agonist (Ach, 10 -9 10 -5 M için) doğrudan banyo için olan asetilkolin yönetmek. Değişikliği arterioler çapı 5 dk sonra her doz yönetim kaydetmek.</li>
		Gemi yönetimi son Ach doz takip bir plato ulaşmıştır sonra <li>gemi 3 - 4 kez KREBS çözüm ile yıkayın. 20-30 dk geminin yeniden elde etmek ve temel çapı istirahat için dönmek izin. KREBS çözüm her 15 dk. organ kamber pH korumaya yardımcı olmak için değiştirmek</li>
	</ol></li> <li>Kuluçkaya arteriyol ile N w - nitro - l-arginin metil ester (L-NAME, 10 -4 M), bir 30 dk, nitrik oksit sentaz inhibitörü ve sonra tekrar 4.2.1 ve göreli katkısını karakterize 4.2.2 nitrik oksit Ach-aracılı vazodilatasyon.</li>
	<li>Endotel bağımsız vazodilatasyon (vasküler düz kas fonksiyonu) ve gemi canlılığı papaverin (10 -8 10 -4 M için) doğrudan banyo için artan dozlarda sıralı bir yönetim tarafından değerlendirmek. Damar çapı değil dönmek veya aşması papaverin (Yani uygun vazodilatasyon) yanıt olarak dinlenme temel (Di) çapı, gemi uygun olmayan düşünün ve veri noktaları atın.</li>
</ol> 5. Veri analizi ve hesaplama <ol><li>Hesaplama vasküler reaktivite. Temel farklılıklar damar çapı hesabı ve aşağıdaki denklemi kullanarak hesaplamak için veri ifade için yüzde vazodilatasyon kullanın: % vazodilatasyon = (DT-Dp/Di-Dp) × 100 DT verilen zamanda noktada (en yüksek derece kaydedilen çapı nerede çapı), Dp vazokonstriksiyona ajan (i.e. eklenmesinden sonra kaydedilen çapı olduğunu. ET-1 indüklenen daralma çapı), ve Di hemen vazokonstriksiyona ajan (dinlenme temel çapı) toplamadan önce kaydedilen çapı. 9</li> <li>vazodilatasyon ve vazokonstriksiyona duyarlılığı (doz-yanıt) için bir agonist Ach, papaverin veya ET-maksimal yanıt (EC 50) % 50'si aydınlığa çıkartıyor tarafından tanımlanan 1 konsantrasyon olarak tanımlamak bir sigmoidal parametre ve çizilen, daha önce açıklandığı gibi. 10 Not: yağ yüzdeki vazodilatasyon arası gözlemci tekrarlanabilirlik çalışmalar vardır 0,99 yüksek bir korelasyon katsayısı (CC) (n = 10 gemi deneyler) bizim laboratuvar.</li></ol>
 6. istatistiksel analiz ± SEM anlamına <ol><li>Express sürekli ölçümler Bunlar normal dağıldığı eğilimindedir. Vasküler reaktivite tarafından tekrarlanan ölçüler iki yönlü ANOVA adipose arteriyoller analiz.</li>
	<li>Alternatif olarak, arsa için doz-yanıt tedavi grupları arasında için toplu vazodilatasyon (AUC) eğri altındaki alan incelemenizi öneririz. Her durumda, P düşünün &#60; 0,05 istatistiksel olarak anlamlı.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Schubert, R., Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+myogenic+response:+established+facts+and+attractive+hypotheses.">The myogenic response: established facts and attractive hypotheses.</a> Clin Sci (Lond). 96 (4), 313-326 (1999).</li><li>Jadeja, R. N., Rachakonda, V., Bagi, Z., Khurana, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+Myogenic+Response+and+Vasoactivity+In+Resistance+Mesenteric+Arteries+Using+Pressure+Myography.">Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography.</a> J Vis Exp. (101), e50997 (2015).</li><li>Gutterman, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Human+Microcirculation:+Regulation+of+Flow+and+Beyond.">The Human Microcirculation: Regulation of Flow and Beyond.</a> Circ Res. 118 (1), 157-172 (2016).</li><li>Fuster, J. J., Ouchi, N., Gokce, N., Walsh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity-Induced+Changes+in+Adipose+Tissue+Microenvironment+and+Their+Impact+on+Cardiovascular+Disease.">Obesity-Induced Changes in Adipose Tissue Microenvironment and Their Impact on Cardiovascular Disease.</a> Circ Res. 118 (11), 1786-1807 (2016).</li><li>Farb, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+adipose+tissue+inflammation+represents+an+intermediate+cardiometabolic+phenotype+in+obesity.">Reduced adipose tissue inflammation represents an intermediate cardiometabolic phenotype in obesity.</a> J Am Coll Cardiol. 58 (3), 232-237 (2011).</li><li>Farb, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WNT5A-JNK+regulation+of+vascular+insulin+resistance+in+human+obesity.">WNT5A-JNK regulation of vascular insulin resistance in human obesity.</a> Vasc Med. 21 (6), 489-496 (2016).</li><li>Durand, M. J., Phillips, S. A., Widlansky, M. E., Otterson, M. F., Gutterman, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vascular+renin-angiotensin+system+contributes+to+blunted+vasodilation+induced+by+transient+high+pressure+in+human+adipose+microvessels.">The vascular renin-angiotensin system contributes to blunted vasodilation induced by transient high pressure in human adipose microvessels.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 307 (1), H25-H32 (2014).</li><li>Farb, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclooxygenase+inhibition+improves+endothelial+vasomotor+dysfunction+of+visceral+adipose+arterioles+in+human+obesity.">Cyclooxygenase inhibition improves endothelial vasomotor dysfunction of visceral adipose arterioles in human obesity.</a> Obesity (Silver Spring). 22 (2), 349-355 (2014).</li><li>Park, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+age+on+the+vasodilatory+function+of+human+skeletal+muscle+feed+arteries.">Impact of age on the vasodilatory function of human skeletal muscle feed arteries.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 310 (2), H217-H225 (2016).</li><li>Ives, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skeletal+muscle+feed+arteries+studied+in+vitro:+the+effect+of+temperature+on+alpha(1)-adrenergic+responsiveness.">Human skeletal muscle feed arteries studied in vitro: the effect of temperature on alpha(1)-adrenergic responsiveness.</a> Exp Physiol. 96 (9), 907-918 (2011).</li><li>Grizelj, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+flow-and+acetylcholine-induced+dilations+in+visceral+compared+to+subcutaneous+adipose+arterioles+in+human+morbid+obesity.">Reduced flow-and acetylcholine-induced dilations in visceral compared to subcutaneous adipose arterioles in human morbid obesity.</a> Microcirculation. 22 (1), 44-53 (2015).</li><li>Farb, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arteriolar+function+in+visceral+adipose+tissue+is+impaired+in+human+obesity.">Arteriolar function in visceral adipose tissue is impaired in human obesity.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (2), 467-473 (2012).</li><li>Tanner, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamin-Related+Protein+1+Mediates+Low+Glucose-Induced+Endothelial+Dysfunction+in+Human+Arterioles.">Dynamin-Related Protein 1 Mediates Low Glucose-Induced Endothelial Dysfunction in Human Arterioles.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. , (2016).</li><li>Ives, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=alpha1-Adrenergic+responsiveness+in+human+skeletal+muscle+feed+arteries:+the+impact+of+reducing+extracellular+pH.">alpha1-Adrenergic responsiveness in human skeletal muscle feed arteries: the impact of reducing extracellular pH.</a> Exp Physiol. 98 (1), 256-267 (2013).</li><li>Dharmashankar, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+synthase-dependent+vasodilation+of+human+subcutaneous+arterioles+correlates+with+noninvasive+measurements+of+endothelial+function.">Nitric oxide synthase-dependent vasodilation of human subcutaneous arterioles correlates with noninvasive measurements of endothelial function.</a> Am J Hypertens. 25 (5), 528-534 (2012).</li><li>Truran, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+and+leptomeningeal+arteriole+endothelial+dysfunction+induced+by+beta-amyloid+peptide:+a+practical+human+model+to+study+Alzheimer's+disease+vasculopathy.">Adipose and leptomeningeal arteriole endothelial dysfunction induced by beta-amyloid peptide: a practical human model to study Alzheimer's disease vasculopathy.</a> J Neurosci Methods. 235, 123-129 (2014).</li><li>Karki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forkhead+box+O-1+modulation+improves+endothelial+insulin+resistance+in+human+obesity.">Forkhead box O-1 modulation improves endothelial insulin resistance in human obesity.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (6), 1498-1506 (2015).</li><li>Shahid, M., Buys, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+murine+resistance+artery+function+using+pressure+myography.">Assessing murine resistance artery function using pressure myography.</a> J Vis Exp. (76), (2013).</li></ol>

Yazarlar hiçbir açıklamaları ya da rapor için çıkar çatışması var.

Diseksiyon ve dokuları çevreleyen dan adipose arteriyoller yalıtım dikkat detay ve teknik iletişim kuralı ile zaman alıcı ve emek yoğun bir işlem olabilir. Mikrodiseksiyon yordam titiz beceri ve düz kas ve endotel olabilecek hasarları önlemek için özel diseksiyon mutfak eşyaları microvasculature katmanları hücre gerektirir. Arterioler duvardaki bile küçük yanlışlıkla delikler intraluminal basınçlandırma ve başarısız bir deney sonuçlarında engelleyebilirsiniz. Ayrıca, cannulation dikiş k...

Videomicroscopy küçük arteriyoller yaşayan insan denekler ex vivokaldırıldı vasomotor işlevini incelemek için kullanılan yararlı bir tekniktir. Bizim laboratuvar microvasculature çeşitli yağ microenvironments etkilerini karakterize etmek için farklı yağ dokusu bölmeleri gelen küçük yüzdeki dışarı dissekan odaklanmıştır. Bu teknik önemli bir avantajı kan damarları insan vücudundan kaldırıldı işlevsel kalır ve kolayca dakika ile biyopsi takip saat içinde incelenebilir var. Fizyolojik şartlarda taklit ve birçok vivo içinde özellikleri özetlemek mikro-cam Kanüller üzerinden intraluminal uzayda tutulan transmural basınç sabit. 1 , 2 Ayrıca, güvenilir videomicroscopy kurulum otomatik kenar algılama yazılımı ile endotel bağımlı ve - bağımsız vazodilatör ve vasoconstrictor kapasitesini izole hem nitel hem de nicel değerlendirmesi için sağlar. Gemi gerçek zamanlı, izin hızlı fizyolojik değerlendirme fiziksel ve farmakolojik uyaranlara yanıt olarak. 3 diğer mikrovasküler teknikleri de daha az zaman alıcı ve bir güç çevirici tarafından çeşitli agonistler yanıtlarını gerilim ölçmek eğilimindedir tel myography gibi mevcuttur.
Bizim laboratuvar videomicroscopy obezite ve vasküler disfonksiyon, damarlara farklı yağ dokusu etki alanları etkilerini odaklanan arasındaki ilişkiyi incelemek için başvurdu. İntra abdominal visseral yağ birikimi ile Merkezi obezite en yakın adipocytokine üretim, metabolik fonksiyon bozukluğu ve kardiyometabolik risk bağlantılı olmuştur. Bu yağ doku disfonksiyon aşırı üretim pro aterojenik sitokinler ve adipokine bozukluk olan kuvvetle bu işlemlerde karıştığı, ancak belirli yasal moleküller ve tedavi hedefleri büyük ölçüde kalır öne keşfedilmemiş. 4 Ayrıca, yerel yağ doku düzeyinde, kapiller rarefaction ve Engelli perfüzyon yağ dokusu pseudohypoxia ve metabolik bozukluk bağlantılı. Kardiyovasküler hastalık yağ doku disfonksiyon sonucu olabilir hipotez gelişmektedir. Pro aterojenik arabulucu yağ, özellikle orta/visseral obezite, büyük olasılıkla işbirliğiyle piyasaya teşvik endotel disfonksiyonu ve -ebilmek var olmak patojenik vasküler değişiklikler yerel olarak tezahür adipose damarlara ve kullanarak tespit Burada açıklanan yöntemi. 5
İzole yağ dokusu arteriyoller işlevsel değerlendirme patofizyolojisi ve insan obezite vasküler disfonksiyon katkıda moleküler mekanizmalar anlamak için yararlı bir yaklaşımdır. Yağ depo özel disfonksiyon katkıda mekanizmaları araştırmak için endotel bağımlı incelemek için yöntemler geliştirdik ve - microvasculature bağımsız vasodilatory yanıtları ve çeşitli düzenleyici ifade değerlendirmek obez bir konu bariatrik cerrahi anda elde eşleştirilmiş visseral ve subkutan (SC) yağ dokusu örnekleri aday.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Chemical Name&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acetylcholine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A6625</td><td></td></tr><tr><td>Calcium chloride (CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>223506</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Glucose</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G5767</td><td></td></tr><tr><td>Endothelin-1</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E7764</td><td></td></tr><tr><td>Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N&amp;rsquo;,N&amp;rsquo;-tetra acetic acid (EGTA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>Ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E9884</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H3784</td><td></td></tr><tr><td>N&lt;sub&gt;&lt;em&gt;w&lt;/em&gt;&lt;/sub&gt;-nito-L-arginine methyl ester hydrochloride</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N5751</td><td></td></tr><tr><td>Magnesium sulfate (MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M7506</td><td></td></tr><tr><td>Potassium chloride (KCL)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>Potassium phosphate (KH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5655</td><td></td></tr><tr><td>Papaverine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3510</td><td></td></tr><tr><td>Sodium bicarbonate (NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt; )</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S6014</td><td></td></tr><tr><td>Sodium chloride (NaCl)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>Sodium phosphate monobasic monohydrate (NaH2Po4)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S9638</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Name&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Company&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Catalog Number&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Comments&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Equipment&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>Finescience tools</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>Inverted microscope</td><td>Zeiss Achromat</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laboratory tubing</td><td>Euro-Pharm</td><td>250100306F999</td><td></td></tr><tr><td>Needle/pippette puller</td><td>David kopf instruments</td><td>720</td><td></td></tr><tr><td>Ophthalmic monofilament nylon suture</td><td>Surgical specialties</td><td>A7756N</td><td></td></tr><tr><td>Scissors</td><td>Finescience tools</td><td>150000-08</td><td></td></tr><tr><td>Vessel Chamber</td><td>DMT</td><td>VAS v.2.1</td><td></td></tr></tbody></table>

assessment of human adipose tissue microvascular function using videomicroscopy

Obezite yakından metabolik ve kardiyovasküler hastalık gelişimine bağlı iken az bu süreçleri yöneten mekanizmaları hakkında bilinir. Özellikle merkez/visseral obezite işbirliğiyle yağlı doku serbest pro aterojenik arabulucu yerel ve sistemik patojenik vasküler değişiklikler tanıtmak ve kavramı o kardiyovasküler hastalık olabilir onaylanmadığına karar yağ doku disfonksiyon sonucu gelişmeye devam ediyor. Burada, analiz olduğu gibi küçük insan arteriyoller yaşayan insan denekler yağ deposundan kaldırıldı vazodilatör ve vasoconstrictor tepkilerin içerir videomicroscopy benzersiz bir yöntem açıklanmaktadır. Videomicroscopy farmakolojik veya fizyolojik uyaranlar vivo içinde koşulları taklit eden bir baskı sistemi kullanarak yanıt olarak izole yüzdeki fonksiyonel özelliklerini incelemek için kullanılır. Teknik patofizyolojisi ve vasküler disfonksiyon yağ dokusu ortamın içinde yerel olarak katkıda moleküler mekanizmalar anlamak için yararlı bir yaklaşımdır. Ayrıca, yağ dokusu microvasculature anormallikleri de sistemik hastalıklarla bağlantılı olmuştur. Biz depo özel vasküler yanıt obez bireylerde incelemek için bu tekniği uygulanır. Endotel bağımlı vazodilatasyon yüksek akış ve asetilkolin adipose arteriyoller (50-350 µm iç çapı, 2-3 mm uzunluğunda) aynı birey bariatrik cerrahi sırasında iki farklı yağ depoları izole olarak değerlendirildi. Visseral yağ arteriyoller subkutan perondan izole kaplar kıyasla Özürlüler endotel bağımlı vazodilatasyon sergi gösterdi. Bulgular visseral microenvironment klinik gözlem artan visseral obezite sistemik hastalik mekanizmaları için bağlama ile ilgili olabilecek vasküler endotel disfonksiyonu ile ilişkili olduğunu göstermektedir. Videomicroscopy tekniği farklı yağ depoları gelen vasküler fenotipleri incelemek gibi bulgular farklı derecelerde obezite ve metabolik fonksiyon bozukluğu olan bireyler arasında karşılaştırmak için kullanılabilir. Yöntem damar yanıtlarında boyuna yanıt-e doğru klinik müdahaleler incelemek için kullanılabilir.

Bizim laboratuvar videomicroscopy endotel bağımlı incelemek için kullanılan ve - bağımsız vazodilatasyon, aynı zamanda yağ dokusu arteriyoller vasocontractile fonksiyonu obez insanların subkutan ve viseral yağ izole. Karakteristik deneysel set-up şekil 1A' görüntülenir. Yağ dokusu arteriyoller iki cam kapiller Pipetler arasında askıya ve yerde dikiş içinde şekil 1Badımında gösterildiği gibi organ odası ...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy at JoVE.com

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

İnsan yağ dokusu mikrovasküler işlevini kullanarak Videomicroscopy değerlendirilmesi

Videomicroscopy sistemleri izole yağ dokusu arteriyoller fizyolojik ve farmakolojik uyaranlara yanıt olarak fonksiyonel özelliklerini incelemek için kullanılır. Bu teknik obez insanlarda farklı yağ dokusu etki alanlarındaki mikrovasküler fenotipleri incelemek için kullanılabilir.

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

assessment-human-adipose-tissue-microvascular-function-using

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

7.4K Görüntüleme.  Boston University School of Medicine. Videomicroscopy sistemleri izole yağ dokusu arteriyoller fizyolojik ve farmakolojik uyaranlara yanıt olarak fonksiyonel özelliklerini incelemek için kullanılır. Bu teknik obez insanlarda farklı yağ dokusu etki alanlarındaki mikrovasküler fenotipleri incelemek için kullanılabilir.

Video: Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

Non-invasive Assessment of Microvascular and Endothelial Function

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of cardiovascular disease. Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. Percent capillary recruitment is assessed by dividing the increase in capillary density induced by postocclusive reactive hyperemia (postocclusive reactive hyperemia capillary density minus baseline capillary density), by the maximal capillary density (observed during passive venous occlusion). Percent perfused capillaries represents the proportion of all capillaries present that are perfused (functionally active), and is calculated by dividing postocclusive reactive hyperemia capillary density by the maximal capillary density. Both percent capillary recruitment and percent perfused capillaries reflect the number of functional capillaries. The forearm blood flow (FBF) technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function: The ratio FBFmax/FBFbase is computed as an estimate of vasodilation, by dividing the mean of the four FBFmax values by the mean of the four FBFbase values. Forearm vascular resistance at maximal vasodilation (FVRmax) is calculated as the mean arterial pressure (MAP) divided by FBFmax. Both the capillaroscopy and forearm techniques are readily acceptable to patients and can be learned quickly.
The microvascular and endothelial function measures obtained using the methodologies described in this paper may have future utility in clinical patient cardiovascular risk-reduction strategies. As we have published reports demonstrating that microvascular and endothelial dysfunction are found in initial stages of hypertension including prehypertension, microvascular and endothelial function measures may eventually aid in early identification, risk-stratification and prevention of end-stage vascular pathology, with its potentially fatal consequences.

Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. The forearm blood flow technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function.

Mikrovasküler ve Endotel Fonksiyonu Noninvaziv Değerlendirilmesi

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of ...

Tıp

Intravital Video Microscopy Measurements of Retinal Blood Flow in Mice

Alterations in retinal blood flow can contribute to, or be a consequence of, ocular disease and visual dysfunction. Therefore, quantitation of altered perfusion can aid research into the mechanisms of retinal pathologies. Intravital video microscopy of fluorescent tracers can be used to measure vascular diameters and bloodstream velocities of the retinal vasculature, specifically the arterioles branching from the central retinal artery and of the venules leading into the central retinal vein. Blood flow rates can be calculated from the diameters and velocities, with the summation of arteriolar flow, and separately venular flow, providing values of total retinal blood flow. This paper and associated video describe the methods for applying this technique to mice, which includes 1) the preparation of the eye for intravital microscopy of the anesthetized animal, 2) the intravenous infusion of fluorescent microspheres to measure bloodstream velocity, 3) the intravenous infusion of a high molecular weight fluorescent dextran, to aid the microscopic visualization of the retinal microvasculature, 4) the use of a digital microscope camera to obtain videos of the perfused retina, and 5) the use of image processing software to analyze the video. The same techniques can be used for measuring retinal blood flow rates in rats.

Intravital microscopy can be used in animals to visualize and measure retinal vascular diameters, bloodstream velocities, and total retinal blood flow.

Alterations in retinal blood flow can contribute to, or be a consequence of, ocular disease and visual dysfunction. Therefore, quantitation of altered ...

A Methodological Approach to Non-invasive Assessments of Vascular Function and Morphology

The endothelium is the innermost lining of the vasculature and is involved in the maintenance of vascular homeostasis. Damage to the endothelium may predispose the vessel to atherosclerosis and increase the risk for cardiovascular disease. Assessments of peripheral endothelial function are good indicators of early abnormalities in the vascular wall and correlate well with assessments of coronary endothelial function. The present manuscript details the important methodological steps necessary for the assessment of microvascular endothelial function using laser Doppler imaging with iontophoresis, large vessel endothelial function using flow-mediated dilatation, and carotid atherosclerosis using carotid artery ultrasound. A discussion on the methodological considerations for each of the techniques is also presented, and recommendations are made for future research.

The present article describes the methodological considerations for several non-invasive assessments of vascular function and morphology that are commonly used in medical research to assess different stages of atherosclerosis.

Vasküler Fonksiyon ve Morfoloji Non-invaziv Değerlendirmelerine Bir Metodolojik Yaklaşım

The endothelium is the innermost lining of the vasculature and is involved in the maintenance of vascular homeostasis.  Damage to the endothelium may ...

Combined Intravital Microscopy and Contrast-enhanced Ultrasonography of the Mouse Hindlimb to Study Insulin-induced Vasodilation and Muscle Perfusion

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate postprandial delivery of nutrients and hormones to insulin-sensitive tissues. We here describe a technique for combining intravital microscopy (IVM) and contrast-enhanced ultrasonography (CEUS) of the adductor compartment of the mouse hindlimb to simultaneously visualize muscle resistance arteries and perfusion of the microcirculation in vivo. Simultaneously assessing insulin's effect at multiple levels of the vascular tree is important to study relationships between insulin's multiple vasoactive effects and muscle perfusion. Experiments in this study were performed in mice. First, the tail vein cannula is inserted for the infusion of anesthesia, vasoactive compounds and ultrasound contrast agent (lipid-encapsulated microbubbles). Second, a small incision is made in the groin area to expose the arterial tree of the adductor muscle compartment. The ultrasound probe is then positioned at the contralateral upper hindlimb to view the muscles in cross-section. To assess baseline parameters, the arterial diameter is assessed and microbubbles are subsequently infused at a constant rate to estimate muscle blood flow and microvascular blood volume (MBV). When applied before and during a hyperinsulinemic-euglycemic clamp, combined IVM and CEUS allow assessment of insulin-induced changes of arterial diameter, microvascular muscle perfusion and whole-body insulin sensitivity. Moreover, the temporal relationship between responses of the microcirculation and the resistance arteries to insulin can be quantified. It is also possible to follow-up the mice longitudinally in time, making it a valuable tool to study changes in vascular and whole-body insulin sensitivity.

Insulin-induced vasodilation regulates muscle perfusion and increases the microvascular surface area (microvascular recruitment) available for solute exchange between blood and tissue interstitium. Combined intravital microscopy and contrast-enhanced ultrasonography is presented to simultaneously assess insulin&#39;s action at the larger vessels and the microcirculation in vivo.

Intravital mikroskobu ve kontrast-artırılmış Ultrasonografi fare Hindlimb, insülin kaynaklı vazodilatasyon ve kas perfüzyon çalışmaya kombine

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate ...

Co-staining Blood Vessels and Nerve Fibers in Adipose Tissue

Recent studies have highlighted the critical role of angiogenesis and sympathetic innervation in adipose tissue remodeling during the development of obesity. Therefore, developing an easy and efficient method to document the dynamic changes in adipose tissue is necessary. Here, we describe a modified immunofluorescent approach that efficiently co-stains blood vessels and nerve fibers in adipose tissues. Compared to traditional and recently developed methods, our approach is relatively easy to follow and more efficient in labeling the blood vessels and nerve fibers with higher densities and less background. Moreover, the higher resolution of the images further allows us to accurately measure the area of the vessels, amount of branching, and length of the fibers by open source software. As a demonstration using our method, we show that brown adipose tissue (BAT) contains higher amounts of blood vessels and nerve fibers compared to white adipose tissue (WAT). We further find that among the WATs, subcutaneous WAT (sWAT) has more blood vessels and nerve fibers compared to epididymal WAT (eWAT). Our method thus provides a useful tool for investigating adipose tissue remodeling.

New blood vessel formation and sympathetic innervation play pivotal roles in adipose tissue remodeling. However, there remain technical issues in visualizing and quantitatively measuring adipose tissue. Here we present a protocol to successfully label and quantitatively compare the densities of blood vessels and nerve fibers in different adipose tissues.

Kan damarları ve sinir lifleri yağ dokusu içinde Co boyama

Recent studies have highlighted the critical role of angiogenesis and sympathetic innervation in adipose tissue remodeling during the development of ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Three-Dimensional Culture of Vascularized Thermogenic Adipose Tissue from Microvascular Fragments

Engineering thermogenic adipose tissue (e.g., beige or brown adipose tissues) has been investigated as a potential therapy for metabolic diseases or for the design of personalized microtissues for health screening and drug testing. Current strategies are often quite complex and fail to accurately fully depict the multicellular and functional properties of thermogenic adipose tissue. Microvascular fragments, small intact microvessels comprised of arteriole, venules, and capillaries isolated from adipose tissue, serve as a single autologous source of cells that enable vascularization and adipose tissue formation. This article describes methods for optimizing culture conditions to enable the generation of three-dimensional, vascularized, and functional thermogenic adipose tissues from microvascular fragments, including protocols for isolating microvascular fragments from adipose tissue and culture conditions. Additionally, best practices are discussed, as are techniques for characterizing the engineered tissues, and sample results from both rodent and human microvascular fragments are provided. This approach has the potential to be utilized for the understanding and development of treatments for obesity and metabolic disease.

Here, we present a detailed protocol outlining the use of microvascular fragments isolated from rodent or human fat tissue as a straightforward approach to engineer functional, vascularized beige adipose tissue.

Mikrovasküler Fragmanlardan Vaskülarize Termojenik Yağ Dokusunun Üç Boyutlu Kültürü

Engineering thermogenic adipose tissue (e.g., beige or brown adipose tissues) has been investigated as a potential therapy for metabolic diseases or for ...

Biyomühendislik

Adipo-Clear: A Tissue Clearing Method for Three-Dimensional Imaging of Adipose Tissue

Adipose tissue plays a central role in energy homeostasis and thermoregulation. It is composed of different types of adipocytes, as well as adipocyte precursors, immune cells, fibroblasts, blood vessels, and nerve projections. Although the molecular control of cell type specification and how these cells interact have been increasingly delineated, a more comprehensive understanding of these adipose-resident cells can be achieved by visualizing their distribution and architecture throughout the whole tissue. Existing immunohistochemistry and immunofluorescence approaches to analyze adipose histology rely on thin paraffin-embedded sections. However, thin sections capture only a small portion of tissue; as a result, the conclusions can be biased by what portion of tissue is analyzed. We have therefore developed an adipose tissue clearing technique, Adipo-Clear, to permit comprehensive three-dimensional visualization of molecular and cellular patterns in whole adipose tissues. Adipo-Clear was adapted from iDISCO/iDISCO+, with specific modifications made to completely remove the lipid stored in the tissue while preserving native tissue morphology. In combination with light-sheet fluorescence microscopy, we demonstrate here the use of the Adipo-Clear method to obtain high-resolution volumetric images&#160;of an entire adipose tissue.

Due to the high lipid content, adipose tissue has been challenging to visualize using traditional histological methods. Adipo-Clear is a tissue clearing technique that allows robust labeling and high-resolution volumetric fluorescent imaging of adipose tissue. Here, we describe the methods for sample preparation, pretreatment, staining, clearing, and mounting for imaging.

Adipo-Clear: Bir doku Yöntem yağ dokusu üç boyutlu görüntüleme için temizlenmesi

Adipose tissue plays a central role in energy homeostasis and thermoregulation. It is composed of different types of adipocytes, as well as adipocyte ...

Biyoloji

Visualization of 3D White Adipose Tissue Structure Using Whole-mount Staining

Adipose tissue is an important metabolic organ with high plasticity and is responsive to environmental stimuli and nutrient status. As such, various techniques have been developed to study the morphology and biology of adipose tissue. However, conventional visualization methods are limited to studying the tissue in 2D sections, failing to capture the 3D architecture of the whole organ. Here we present whole-mount staining, an immunohistochemistry method that preserves intact adipose tissue morphology with minimal processing steps. Hence, the structures of adipocytes and other cellular components are maintained without distortion, achieving the most representative 3D visualization of the tissue. In addition, whole-mount staining can be combined with lineage tracing methods to determine cell fate decisions. However, this technique has some limitations to providing accurate information regarding deeper parts of adipose tissue. To overcome this limitation, whole-mount staining can be further combined with tissue clearing techniques to remove the opaqueness of tissue and allow for complete visualization of entire adipose tissue anatomy using light-sheet fluorescent microscopy. Therefore, a higher resolution and more accurate representation of adipose tissue structures can be captured with the combination of these techniques.

The focus of the present study is to demonstrate the whole-mount immunostaining and visualization technique as an ideal method for 3D imaging of adipose tissue architecture and cellular component.

Bütün Dağı boyama kullanarak 3D beyaz yağ doku yapısı görselleştirme

Adipose tissue is an important metabolic organ with high plasticity and is responsive to environmental stimuli and nutrient status. As such, various ...

Assessment of Vascular Tone Responsiveness using Isolated Mesenteric Arteries with a Focus on Modulation by Perivascular Adipose Tissues

Altered vascular tone responsiveness to pathophysiological stimuli contributes to the development of a wide range of cardiovascular and metabolic diseases. Endothelial dysfunction represents a major culprit for the reduced vasodilatation and enhanced vasoconstriction of arteries. Adipose (fat) tissues surrounding the arteries play important roles in the regulation of endothelium-dependent relaxation and/or contraction of the vascular smooth muscle cells. The cross-talks between the endothelium and perivascular adipose tissues can be assessed ex vivo using mounted blood vessels by a wire myography system. However, optimal settings should be established for arteries derived from animals of different species, ages, genetic backgrounds and/or pathophysiological conditions.

The protocol describes the use of wire myography to evaluate the transmural isometric tension of mesenteric arteries isolated from mice, with special consideration of the modulation by factors released from endothelial cells and perivascular adipose tissues.

Perivasküler Adipose dokularında modülasyon odaklı Izole mezenterik arterlerin kullanıldığı vasküler ton tepkisini değerlendirmek

Altered vascular tone responsiveness to pathophysiological stimuli contributes to the development of a wide range of cardiovascular and metabolic ...

Exploring Adipose Tissue Structure by Methylsalicylate Clearing and 3D Imaging

Obesity is a major worldwide public health issue that increases the risk to develop cardiovascular diseases, type-2 diabetes, and liver diseases. Obesity is characterized by an increase in adipose tissue (AT) mass due to adipocyte hyperplasia and/or hypertrophia, leading to profound remodeling of its three-dimensional structure. Indeed, the maximal capacity of AT to expand during obesity is pivotal to the development of obesity-associated pathologies. This AT expansion is an important homeostatic mechanism to enable adaptation to an excess of energy intake and to avoid deleterious lipid spillover to other metabolic organs, such as muscle and liver. Therefore, understanding the structural remodeling that leads to the failure of AT expansion is a fundamental question with high clinical applicability. In this article, we describe a simple and fast clearing method that is routinely used in our laboratory to explore the morphology of mouse and human white adipose tissue by fluorescent imaging. This optimized AT clearing method is easily performed in any standard laboratory equipped with a chemical hood, a temperature-controlled orbital shaker and a fluorescent microscope. Moreover, the chemical compounds used are readily available. Importantly, this method allows one to resolve the 3D AT structure by staining various markers to specifically visualize the adipocytes, the neuronal and vascular networks, and the innate and adaptive immune cells distribution.

Here, we describe a simple, inexpensive and fast clearing method to resolve the 3D structure of both mouse and human white adipose tissue using a combination of markers to visualize vasculature, nuclei, immune cells, neurons, and lipid-droplet coat proteins by fluorescent imaging.

Metiyatisilin Temizleme ve 3D Görüntüleme ile Yağ Dokusu Yapısının Araştırılması

Obesity is a major worldwide public health issue that increases the risk to develop cardiovascular diseases, type-2 diabetes, and liver diseases. Obesity ...