We thank the Animal House and the Integrated Microscopy Facilities of IGB-CNR. This work has benefited from research funding from the European Community's Seventh Framework Programme in the project ENDOSTEM (Activation of vasculature associated stem cells and muscle stem cells for the repair and maintenance of muscle tissue, grant agreement number 241440), the Italian Ministry of Education-University-Research (MIUR-PRIN2 010-2011) to G.M. and S.B. and PON Cluster IRMI to G.M., and the CARIPLO foundation to G.M. and S.B.

Bütün deneyler, hayvan araştırmaları için kurumsal talimatlarına göre yapılan ve Deney Hayvanları yasalara uygun Halk Sağlığı, Hayvan Sağlığı, Beslenme ve İtalyan Sağlık Bakanlığı Gıda Güvenliği Dairesi tarafından onaylanmıştır. Servikal dislokasyon prosedürleri IACUC veya eşdeğer gereksinimlerine göre kurumdan kuruma değişebilir. Tibialis anterior kas 1. Cardiotoxin Enjeksiyon <ol><li> işleme başlamadan önce, steril fosfat tamponlu tuz (PBS) içinde ya da su içinde cardiotoxin stok çözelti seyreltilerek cardiotoxin (CTX) çalışma çözeltisinin 10 uM hazırlayın. Not: CTX 1 mg / ml su içinde çözünür. 70 mcM stok solüsyonu hazırlayın. -20 ° C&#39;de kısım ve mağaza. Bu protokol için kullanılan CTX yaklaşık 7000 Da&#39;lık bir moleküler ağırlığa sahip cardiotoxins bir karışımıdır. Giymek tavsiye edilir: DİKKATçift ​​eldiven, bir hijyen maskesi ve koruyucu gözlük seyreltilmiş bile, ve çözümü ile herhangi bir teması önlemek için çok dikkatli olmak (alternatif olarak güvenlik gözlükleri için, bir başlık altında çalışmak için tavsiye edilir). </li><li> Ketamin ve ksilazin (80 mg / kg ve / kg vücut kütlesinin 10 mg) ya da diğer kabul uygun anestezik intraperitoneal enjeksiyonu ile farelere anestezi. </li><li> Fare yüzü yukarı gelecek şekilde,% 70 etanol ile arka bacaklarda sprey. Bir neşter yardımıyla Tibialis Anterior (TA) kas tam yerini, görselleştirmek için, diz altında, alt bacağın ön kısmında uzakta saçlarını kesti. Not: TA kas kemik yanal aşağı gidiş ve ayak bileğinde biten, tibianın proksimal gövde doğar. Onun uzun tendon (Şekil 1A bakınız) bileği boyunca ayak içine uzanır. </li><li> geri pistonu yavaşça çekerek enjektöre çözümün ~ 100 uL çizin. </li><li> (Hava kabarcıklarını çıkarmak dik şırınga tutaniğne ile yukarı doğru). Yavaşça aşağı pistonu çekerek tüpün iç kısmına bağlı herhangi bir hava kabarcıkları yukarı doğru gelip yardımcı olmak için şırınga tarafını hafifçe vurun. Yavaş yavaş büyük hava kabarcıkları serbest bırakmak için pistonu basın. sıvı birkaç damla iğne çıkacaktır. Bu noktada, cardiotoxin toksisitesi göz önüne alındığında, onu dağıtmak tüp içine tekrar sıvıyı almak ve emin olun. </li><li> Arzu edilen doz, ulaşılana kadar şırıngaya solüsyonu çekin. Her TA kas için CTX solüsyonu 20 mcL enjekte edilir. </li><li> diz doğru tendonu, rehberlik gibi Tibia kemiğinin pozisyonu takip ederek ta merkezinde iğne takın. TA ince doku olduğundan, (2/3 mm derinliğinde iğne, yaklaşık 10 ° ila 20 ° açı ekleyin) çok derin gitmeden enjeksiyon gerçekleştirmek ve kas kendisi (Şekil 1A) ötesine geçerek kaçının. </li><li> enjeksiyondan hemen sonra iğneyi çekin ama 2 beklemeyin - sızıntısı önlemek için 3 snCTX yaş kas düşer. </li><li> Fareler anestezi beri, uyanık ve kullanılan etanol vücut ısısını düşürmek kadar işlem sonrası, (37 ° C&#39;de) ısıtılmış bir plaka üzerinde kafes yerleştirin. </li></ol> 2. Tibialis Anterior İzolasyon Not: Kas deney ihtiyaçlarına göre cardiotoxin enjeksiyondan sonra farklı zaman noktalarında izole edilebilir. <ol><li> servikal dislokasyon ile fare Kurban. </li><li> % 70 etanol ile arka ayaklarının püskürtün. İşlem sırasında, hayvan aşağı tutmak için bir desteğe sabitlenebilir. </li><li> (Ayak üstü) proksimal tendon düzeyinde cilt kesmek, deri altında makas bıçaklarının birini takın ve diz yönünde yukarı doğru deriyi kesti. forseps yardımıyla, cilt yukarı çekin ve tamamen kas maruz kalmaktadır. Dikkatle deri ve ilgi alanından tüm saç kaldırın. </li><li> Th yavaş kısma veya keserek fasya (eleyincımbız ucu-veya tibia (Şekil 1B) ters tarafında) kasının aşırı çevresini makas diseksiyon ince mikro. Bir kez kırık, yavaşça ince uçlu cımbız yardımı ile fasya kaldırmak; Altta yatan kas zarar vermemek. Not: diğer kasların ve organların olduğu gibi, TA fasya (bacağın derin fasya), derin cilt altına yatıyor ve kolayca altta yatan kas izole etmek kaldırılması gerekiyor bağ dokusu ince bir tabaka ile kaplıdır. </li><li> Distal TA tendonu ve yan yana olan ayak yukarıda Ekstansör Digitorum tendonu, gözünüzde canlandırın. Extensor digitorum longus (EDL) kas tendonu biraz TA tendonun altında yer almaktadır. Yetişkin farelerin Tendonlar çıplak gözle görebilir. </li><li> İki aşağıdaki tekniklerden biri aşağıdaki TA kas kaldırın: <ol><li> holdin, ince mikro makas diseksiyon hem tendonları kesin ve yakın tarafına doğru çeking forseps ile tendonların. İki tendonları ayrı kasları ayırmak için farklı yönlerde nazikçe çekerek. </li><li> Ince uçlu cımbız yardımıyla, tendon kendisi (Şekil 1C, üst resim) altında ucu geçerek Ekstansör Digitorum tendonunun distal TA tendon ayırın. Yavaşça altta yatan kasları (Şekil 1C, alt resim) ayırmak için ta aşağıda cımbız kaydırın. </li><li> , Hafifçe yükseltilmiş tutmak ta tendonuna kesmek için kas altında cımbız tutun ve yavaşça diz (Şekil 1D, sol resim) bağlı altında sadece bölgede kadar yukarı doğru çekin. Makas (Şekil 1D, sağ resim) ile kas kenarında izleyen, diz altında TA kesti. Not: kas hafifçe yanlara bağlı kalırsa, bunu ayırmak yardımcı olmak için diseksiyon makas ince mikro kullanın. Not: forseps kolayca ta aşağıda sığmayan,fasya tamamen kaldırıldı edilmediğini mümkündür, ve hala kas üstünde görünür olabilir. Bu durumda, devam etmeden önce iyice kaplamasını çıkarın. </li></ol></li></ol> 3. Taze Donmuş kas Tekniği <ol><li> Tragasant zamkı ya da mantar, bir dilim benzer bir yapışkan dondurma bileşik (örneğin, optimal kesme ısısı (OCT) bileşiği) küçük bir miktar. Dondurmadan önce arka tarafındaki Cork&#39;ın dilim etiket, gerekli (Şekil 2A) eğer. </li><li> Kas enine bölümleri elde etmek için, mantar göre bir dik bir pozisyonda kas var emin distal tendon ekleme ve dışında yaklaşık 3/4 kas bırakarak kitre zamkı içine TA lavabo (Şekil Şekil 2A). </li><li> bir alüminyum kutu doldurun (alternatif bir metal bardak veya bir cam kap) izopentan ile. Bir Dewar içeren Liqui izopentanın can Askıyad azot, sıvı azot teneke kutu içine girmek için izin vermiyor. Not: İzopentan doku uygun dondurma (-150 arasında -160 ° C) uygun bir sıcaklığa ulaşması gerekir. bazı beyaz bir katı parçacıklar kutunun altındaki oluşturmaktadır ve izopentan hafif viskoz olduğunda doğru sıcaklığa ulaşılır. Not: dondurma eserler yol açabilir olarak, katı parçacıkların oluşturulmasından önce örneği donma etmeyin. izopentan tamamen katı hale gelirse o çözülene kadar Öte yandan, bazı beyaz parçacıklar hala mevcut emin, oda sıcaklığında bekletin. </li><li> Mixter forseps kullanarak hızla kas yerleştirilmiş aşağı doğru tutarak, izopentan içine kas ile mantar daldırın ve tamamen sıvıya batırılmış zaman mantar serbest bırakmak için emin olun. örnek yüzen ise bu şekilde, mantar sadece ters tarafı sıvı içinde görünür olmalıdır. </li><li> sa bırakın1 dakika için izopentan içinde yapıldığı Örnek. </li><li> Mixter forseps (ya da benzer bir forseps) kullanılarak, kas almak ve en az 2 dakika süreyle sıvı nitrojen içine daldırın. </li><li> Bir saklayabilirsiniz -80 ° C derin dondurucuda doğrudan etiketli alüminyum folyo ile ayrı ayrı numuneler sarın ve hemen kuru buz (-70 ° C) koyun, ya da. Not: süreci boyunca, adım 3.4 3.7, doğru sıcaklık korumak için ve (. ° C derin dondurucuda -80 transferi sırasında, örneğin) çözülme gelen örnekleri önlemek için son derece önemlidir. kontrolsüz çözülme ve doku içinde mevcut olan ve sonunda eşya oluşumunu veya kas liflerinin bozulmasına sebep olur, su mikrokristallerinin soğutulmasından yükselen sıcaklığı sonuçları (lifin merkezinde büyük beyaz delikler doku bölümleri üzerinde görülebilmektedir). </li></ol> Dondurulmuş Kaslar 4. Kriyostat Kesit <ol><li> Kriyostat odası sıcaklığı t SetO -20 -22 ° C arasındadır. </li><li> en az 30 dakika boyunca dengeye kavuşmaları için izin numune saplama, bıçak ve kriyostat bölmesinde örnek koyun. </li><li> Örnek saplama donma bileşik (örn Ekim bileşik) küçük bir miktar koyun ve dondurma bileşik katılaşır önce numune ile mantar batırmayın. Bu arada, bıçak tutucu bıçağı yerleştirin. </li><li> Bıçak tutucu (Şekil 2B) ile numune tutucu yönlendirmek için verilen vidaları kullanarak numune ve bıçak hizalayın. </li><li> 10 um bölüm kalınlığı ayarlayın. doku kesmek için devam edin. Tahrik tekerleğinin her fırsatta için, numune tutucu bıçak doğru kontrollü bir mesafe ilerler. </li><li> Kutuplaşmış slayt (slayt başına 8 ila 10 bölüm) (Şekil 2C) ile ilgili bölümleri yerleştirin. </li><li> Kesit sonra, -80 ° C slaytlar saklayın. Not: Örnek -80 ° C dondurucu içinde depolanır ve ilave edilen yeniden kullanılabilirgerei ve depolandığı takdirde r, kesit. </li></ol> 5. Rutin histolojik Boyama (Hematoksilen &amp; Eosin Lekeleri) Not: Çeşitli histolojik lekeleri analizine uygun olarak kas kesitleri üzerinde gerçekleştirilebilir. morfolojik ve morfometrik analizi için bir rutin histolojik leke Hematoksilen &amp; Eosin (H &amp; E) bichromic leke. Hematoksilen çekirdekler derin mor lekeler. Nükleer boyanma eozin ile zıt böyle sitoplazmada myofibers olarak eozinofilik yapıları, lekeleri (pembe / kırmızı). <ol><li> Tamamen hava-kuru 10 bölümleri ile dondurulmuş slaytlar - oda sıcaklığında 15 dakika, bir boyama tepsi slaytlar Köşkü ve boyama teknesine tepsiyi koydu. </li><li> hematoksilen ile 1 dakika boyunca Leke. </li><li> 10 dk hematoksilin yıkamak için oldukça zayıf bir musluk su jeti altında boyama çukur yatıyordu. </li><li> eozin bir alkolik bir çözüm kullanılacaksa t atlayın (5 dk 95% etanol için slaytlar daldırınsulu eosin solüsyonu halinde onun aşaması). </li><li> eozin çözeltisi ile 1 dakika boyunca karşıt. </li><li> Aşırı eozin çözümü ortadan kaldırmak için su ile durulayın. Not: hematoksilin ve eosin ile ya boyama optimal süresi, her yeni bir partisi için tanımlanmalıdır. </li><li> sınıflandırılmış etanol serileri örnekleri kurutmak:% 50 ve% 70 (bir kaç saniye) ekstrakte edildi. Hızla% 100 etanol içinde 2 değişiklik, her biri 5 dakika, ardından% 95 etanol içinde bırakın. </li><li> ksilen 2 değişiklikler, her 5 dakika veya daha uzun temizleyin. Bu adım, bir kimyasal başlık altında gerçekleştirilmelidir. </li><li> slayt montaj orta ve bir lamel ile kaplama birkaç damla uygulayarak, bir ksilen bazlı montaj orta slaytlar monte edin. montaj orta da lamel ve slayt koymak lamel uygulanabilir. <ol><li> slayt ve lamel arasındaki hava kabarcıkları oluşturarak kaçının. , Hava kabarcıklarını ortadan kaldırmak (montaj sonra) dikey slayt tutmak ve fazla mo dışarı sıkmakyavaşça künt forseps (ya da benzer bir künt bir araç) ile lamel basarak unting orta ve hava kabarcıkları. </li></ol></li><li> ksilen analizine geçmeden önce tamamen buharlaşması izin gecede birkaç saat için kaputun altında slaytlar tutun ya da. </li><li> fare başına en az bir tam kas bölümünün örtüşmeyen seri görüntüleri kullanarak H &amp; E boyalı yenileyici kas bölümlerinin morfolojik ve morfometrik analizi yapın. 20X büyütme ile, parlak alan mikroskobu ile görüntü yakalama. Not: 5 fareler en az sayıda ölçümleri istatistiksel önemi alınması tavsiye edilir. Not: Görüntü analiz yazılımı gibi (http://imagej.nih.gov/ij/) ücretsiz indir yazılım ImageJ olarak, bu amaç için kullanılabilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Morgan, J. E., Partridge, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+satellite+cells.">Muscle satellite cells.</a> Int J Biochem Cell Biol. 35 (8), 1151-1156 (2003).</li><li>Roca, I., Requena, J., Edel, M. J., Alvarez-Palomo, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myogenic+Precursors+from+iPS+Cells+for+Skeletal+Muscle+Cell+Replacement+Therapy.">Myogenic Precursors from iPS Cells for Skeletal Muscle Cell Replacement Therapy.</a> J Clin Med. 4 (2), 243-259 (2015).</li><li>Cheung, T. H., Rando, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulation+of+stem+cell+quiescence.">Molecular regulation of stem cell quiescence.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 14 (6), 329-340 (2013).</li><li>Dumont, N. A., Wang, Y. X., Rudnicki, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+and+extrinsic+mechanisms+regulating+satellite+cell+function.">Intrinsic and extrinsic mechanisms regulating satellite cell function.</a> Development. 142 (9), 1572-1581 (2015).</li><li>Hawke, T. J., Garry, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myogenic+satellite+cells:+physiology+to+molecular+biology.">Myogenic satellite cells: physiology to molecular biology.</a> J Appl Physiol. 91 (1985), 534-551 (1985).</li><li>Saclier, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentially+activated+macrophages+orchestrate+myogenic+precursor+cell+fate+during+human+skeletal+muscle+regeneration.">Differentially activated macrophages orchestrate myogenic precursor cell fate during human skeletal muscle regeneration.</a> Stem Cells. 31 (2), 384-396 (2013).</li><li>Pillon, N. J., Bilan, P. J., Fink, L. N., Klip, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-talk+between+skeletal+muscle+and+immune+cells:+muscle-derived+mediators+and+metabolic+implications.">Cross-talk between skeletal muscle and immune cells: muscle-derived mediators and metabolic implications.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 304 (5), E453-E465 (2013).</li><li>Bentzinger, C. F., Wang, Y. X., Dumont, N. A., Rudnicki, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+dynamics+in+the+muscle+satellite+cell+niche.">Cellular dynamics in the muscle satellite cell niche.</a> EMBO Rep. 14 (12), 1062-1072 (2013).</li><li>Costamagna, D., Costelli, P., Sampaolesi, M., Penna, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Inflammation+in+Muscle+Homeostasis+and+Myogenesis.">Role of Inflammation in Muscle Homeostasis and Myogenesis.</a> Mediators Inflamm. 2015, (2015).</li><li>Charge, S. B., Rudnicki, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+regulation+of+muscle+regeneration.">Cellular and molecular regulation of muscle regeneration.</a> Physiol Rev. 84 (1), 209-238 (2004).</li><li>Arnold, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+monocytes+recruited+after+skeletal+muscle+injury+switch+into+antiinflammatory+macrophages+to+support+myogenesis.">Inflammatory monocytes recruited after skeletal muscle injury switch into antiinflammatory macrophages to support myogenesis.</a> J Exp Med. 204 (5), 1057-1069 (2007).</li><li>Chang, C. C., Chuang, S. T., Lee, C. Y., Wei, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+cardiotoxin+and+phospholipase+A+in+the+blockade+of+nerve+conduction+and+depolarization+of+skeletal+muscle+induced+by+cobra+venom.">Role of cardiotoxin and phospholipase A in the blockade of nerve conduction and depolarization of skeletal muscle induced by cobra venom.</a> Br J Pharmacol. 44 (4), 752-764 (1972).</li><li>Meng, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+triage+and+freezing+for+models+of+skeletal+muscle+disease.">Tissue triage and freezing for models of skeletal muscle disease.</a> J Vis Exp. (89), (2014).</li><li>Mann, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aberrant+repair+and+fibrosis+development+in+skeletal+muscle.">Aberrant repair and fibrosis development in skeletal muscle.</a> Skelet Muscle. 1 (1), (2011).</li><li>Pessina, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+and+optimized+strategies+for+inducing+fibrosis+in+vivo:+focus+on+Duchenne+Muscular+Dystrophy.">Novel and optimized strategies for inducing fibrosis in vivo: focus on Duchenne Muscular Dystrophy.</a> Skelet Muscle. 4 (1), 7 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Burada, iskelet kasında (yani, CTX kas içi enjeksiyon) akut hasara yol için bir protokol açıklar. Bu yaygın in vivo iskelet kası yenilenme dinamiklerini incelemek için güçlü bir araç olarak kullanılmaktadır. CTX enjeksiyon sarcolemma bir depolarizasyon ve elyaf 12 kasılması neden olur kas lifleri, yozlaşmasına neden olur ve kas yenilenme yol açan olaylar zincirini tetikler. İskelet kas deney ihtiyaçlarına göre, enjeksiyon ve yaralanma sonrası istenen zaman noktaların...

Memeli yetişkin iskelet kas kasılması için özel olan çok çekirdekli kas hücreleri (myofibers) arasında fasiküller grupları ile oluşturulmaktadır. Her myofiber düzenli ve sürekli olarak düzenlenen kontraktil proteinlerin (aktin ve myosin filamanların) oluşur sarcolemma (plazma membran) içeren ve myofibrils çevrili bir ince uzun sinsityum vardır. Erişkin yaşamda ve dinlenme koşullarında, iskelet kasları kendi myonuclei 1 çok düşük bir ciro var; Gerçekten, sarcolemma altında, myofiber çevresinde yer almaktadır myonuclei, hücre döngüsünün G0 fazında tutuklandı ve 1,2 çoğalırlar edemiyoruz vardır. İskelet kasları, zarar aşağıdaki sıkıca birbirleriyle ilişkili olan doku yeniden birkaç olaylardan sonra homeostazisini ulaşan yeniden özgü yeteneği var. akut yaralanma veya travma sonrasında dejenerasyon, indüklenir yenilenmesi işlemleri ve ardındankas hücrelerinin bir yerleşik nüfusun dahil olmak üzere farklı hücre popülasyonu, içerdiğini, uydu hücreleri (SC&#39;ler). Gerçekten de, bir çevresel uyarıcılar olmadan uydu hücreleri, hareketsiz bir durumda olan sarkolemma ve bazal lamina 3,4 arasında bir niş yer almaktadır. Bir yaralanma ya da hastalık, aktif, yeni şekillendirme myofibers 5 sebebiyet veren, hasar görmüş alanlara göç ve sonunda ayırt çoğaltacak haline AVM ardından. Aktif SC&#39;ler travma 6-8 sitesinde işe farklı hücre popülasyonlarının, temel olarak iltihap hücreleri ile çapraz-kurulması. Bu cross-talk hücreleri sonunda 9 homeostazı lider, moleküler sinyaller yapısal değişiklikler hangi sürücü tarafından düzenlenmiş bir paradigma izlemenizi sağlar. AVM, inflamatuar ve interstisyel hücreler, anjiyojenik süreçler ve yeniden innervasyon etkinliklerin yanı sıra, aynı zamanda bu son derece organize ve s onarmak için koordineli bir şekilde hareket ederek, söz konusupecialized yapısı. kas fizyolojisini anlamak için değil, aynı zamanda tüm sürecin derin bilgi gerektiren tedavi stratejileri geliştirmek için değil sadece, iskelet kası yenilenme farklı yönlerini inceleyerek büyük ilgi var. Çeşitli deneysel yaklaşımlar günümüzde farklı hücre popülasyonlarının, sinyal yolları ve ilgili moleküler mekanizmaların kimliğini ve işlevini incelemek için kullanılabilir. Akut yaralanma Fare modelleri bu sürecin pek çok yönünü araştırmak için güçlü bir araç temsil etmektedir. Farklı yaygın akut kas hasarı araştırmacılar sürecinin sonuna kadar çok erken aşamalarında, in vivo rejenerasyon sürecini takip etmesine izin ikna etmek için teknikler kullanılır. Bu protokol myolysis uyarır ve doku örneklerinin analizine kadar yenilenme sürecini tetikleyen yılan zehiri türevi cardiotoxin intramüsküler enjeksiyon (CTX), gelen adımları açıklar. CTX enjeksiyonundan sonra, mice deney koşullarına bağlı olarak, farklı zaman noktalarında feda edilebilir ve iskelet kasları parçalara ayrıldı ve daha fazla analiz için işlenebilir. Son olarak, biz morfolojik gözlemler ve temel kantitatif analizleri yapmak için doku bölümleri boyama protokol açıklar. Bu protokol, yüksek ölçüde tekrarlanabilir biçimde 10 in vivo akut iskelet kas rejenerasyon çalışma sağlar.

<table><tbody><tr><td>Cardiotoxin from&amp;nbsp;&lt;em&gt;Naja mossambica mossambica&lt;/em&gt;</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>C9759</td><td></td></tr><tr><td>Syringe For Insulin BD Micro-Fine+ Needle 30 G x 8 mm - Da 0.3 mL</td><td>BD</td><td>324826</td><td></td></tr><tr><td>Tragacanth Gum</td><td>MP BIOMEDICALS,LLC</td><td>104792</td><td></td></tr><tr><td>2-Methylbutane (Isopentane)</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>78-78-4.</td><td></td></tr><tr><td>OCT Killik Solution For Inclusion Cryostat</td><td>Bio-optica</td><td>&amp;nbsp;05-9801</td><td></td></tr><tr><td>Feather Microtome Blade S35</td><td>Bio-optica</td><td>&amp;nbsp;01-S35</td><td></td></tr><tr><td>Glass Slide Superfrost Plus</td><td>Menzel-Gl&amp;auml;ser</td><td>09-OPLUS</td><td></td></tr><tr><td>Dumon #5 Mirror Finish Forceps&amp;nbsp;</td><td>2BIOLOGICAL INSTRUMENTS</td><td>11251-23</td><td></td></tr><tr><td>Scissors Straight Sharp/Sharp</td><td>2BIOLOGICAL INSTRUMENTS</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>Scissors Noyes Straight</td><td>2BIOLOGICAL INSTRUMENTS</td><td>15012-12</td><td></td></tr><tr><td>Fine Iris Scissors Straight Sharp/Sharp 10.5 cm</td><td>2BIOLOGICAL INSTRUMENTS</td><td>14094-11</td><td></td></tr><tr><td>Eukitt</td><td>Bio-optica</td><td>09-00100</td><td></td></tr><tr><td>Slide Coverslip</td><td>BIOSIGMA</td><td>VBS651</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>214736</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol 100%</td><td>sigma-Aldrich</td><td>02860-2.5L</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxyline</td><td>J.T. BAKER</td><td>3873</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>HT110116</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>LEICA</td><td>CM3050 S</td><td></td></tr></tbody></table>

induction of acute skeletal muscle regeneration by cardiotoxin injection

İskelet kası yenilenmesi yaralanma ya da hastalık yanıt olarak, yetişkin iskelet kaslarının oluşan bir fizyolojik bir süreçtir. Akut yaralanma kaynaklı iskelet kası rejenerasyon kas rejenerasyonu yanı sıra mekanizmaları ve farklı oyuncular yer alan olayları incelemek için yaygın olarak kullanılan bir, güçlü modeli sistemidir. Gerçekten de, bu sürecin ayrıntılı bilgi, iskelet kas dejenerasyonu neden patolojik durumların daha iyi anlaşılması için gerekli olan ve yeni hedef tedavi stratejileri belirleme yardımcı olur. Bu çalışma cardiotoxin tek bir intramüsküler enjeksiyon (CTX) aracılığıyla farelerde akut iskelet kas rejenerasyonu ikna etmek için ayrıntılı ve tekrarlanabilir bir protokol açıklar. CTX yılan zehiri toksinler ailesine aittir ve sonunda rejenerasyon olaylarını tetikleyen myofibers bir myolysis neden olur. iskelet kası rejenerasyon dinamikleri, kas bölümleri histolojik analizi ile değerlendirilir. ayrıca protokol, Diseksiyon donma ve tibialis anterior kas yanı sıra yaygın sonraki morfolojik ve morfometrik analizi için kullanılan rutin Hematoksilen &amp; Eosin boyama kesmek için deneysel prosedürler göstermektedir.

H &amp; E boyama iskelet kası rejenerasyon sırasında belirli zaman noktalarında yenileme işleminin morfolojisinin değerlendirilmesi yapılır. Şekil 3, yabani tip farelerin yaralı ta kasları üzerinde gerçekleştirilen zaman süreci analizi gösterir. Şekil 3A&#39;da şematik olarak kaslar, CTX enjeksiyonundan sonra 3, 7, 15, ve 30 gün sonra izole edilmiştir. H &amp; E boyalı enine kesitler temsili görüntü (Şekil 3B-D),...

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Acute Skeletal Muscle Regeneration by Cardiotoxin Injection at JoVE.com

Induction of Acute Skeletal Muscle Regeneration by Cardiotoxin Injection

Bu yazıda, yetişkin farelerde ve diseksiyon olarak kasların sonraki manipülasyonlar, dondurma, kesme, rutin boyama ve myofiber kesit alanı analizi akut iskelet kas yenilenmesini meydana ayrıntılı bir protokol açıklamaktadır.

Cardiotoxin Enjeksiyonu ile Akut İskelet Kası Regeneration indüksiyon

Skeletal muscle regeneration is a physiological process that occurs in adult skeletal muscles in response to injury or disease. Acute injury-induced ...

induction-acute-skeletal-muscle-regeneration-cardiotoxin

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

21.9K Görüntüleme.  Institute of Genetics and Biophysics "A. Buzzati Traverso", CNR.  Bu yazıda, yetişkin farelerde ve diseksiyon olarak kasların sonraki manipülasyonlar, dondurma, kesme, rutin boyama ve myofiber kesit alanı analizi akut iskelet kas yenilenmesini meydana ayrıntılı bir protokol açıklamaktadır. 

Video: Induction of Acute Skeletal Muscle Regeneration by Cardiotoxin Injection

A Murine Model of Muscle Training by Neuromuscular Electrical Stimulation

Neuromuscular electrical stimulation (NMES) is a common clinical modality that is widely used to restore1, maintain2 or enhance3-5 muscle functional capacity. Transcutaneous surface stimulation of skeletal muscle involves a current flow between a cathode and an anode, thereby inducing excitement of the motor unit and the surrounding muscle fibers. 
NMES is an attractive modality to evaluate skeletal muscle adaptive responses for several reasons. First, it provides a reproducible experimental model in which physiological adaptations, such as myofiber hypertophy and muscle strengthening6, angiogenesis7-9, growth factor secretion9-11, and muscle precursor cell activation12 are well documented. Such physiological responses may be carefully titrated using different parameters of stimulation (for Cochrane review, see 13). In addition, NMES recruits motor units non-selectively, and in a spatially fixed and temporally synchronous manner14, offering the advantage of exerting a treatment effect on all fibers, regardless of fiber type. Although there are specified contraindications to NMES in clinical populations, including peripheral venous disorders or malignancy, for example, NMES is safe and feasible, even for those who are ill and/or bedridden and for populations in which rigorous exercise may be challenging. 
Here, we demonstrate the protocol for adapting commercially available electrodes and performing a NMES protocol using a murine model. This animal model has the advantage of utilizing a clinically available device and providing instant feedback regarding positioning of the electrode to elicit the desired muscle contractile effect. For the purpose of this manuscript, we will describe the protocol for muscle stimulation of the anterior compartment muscles of a mouse hindlimb.

A murine model of neuromuscular electrical stimulation (NMES), a safe and inexpensive clinical modality, to the anterior compartment muscles is described. This model has the advantage of modifying a readily available clinical device for the purpose of eliciting targeted and specific muscle contractions in mice.

Nöromüsküler Elektriksel Stimülasyon tarafından Kas Eğitimi A Mürin Modeli

Neuromuscular electrical stimulation (NMES) is a common clinical modality that is widely used to restore1, maintain2 or enhance3-5 muscle functional ...

Tıp

Transplantation of Induced Pluripotent Stem Cell-derived Mesoangioblast-like Myogenic Progenitors in Mouse Models of Muscle Regeneration

Patient-derived iPSCs could be an invaluable source of cells for future autologous cell therapy protocols. iPSC-derived myogenic stem/progenitor cells similar to pericyte-derived mesoangioblasts (iPSC-derived mesoangioblast-like stem/progenitor cells: IDEMs) can be established from iPSCs generated from patients affected by different forms of muscular dystrophy. Patient-specific IDEMs can be genetically corrected with different strategies (e.g. lentiviral vectors, human artificial chromosomes) and enhanced in their myogenic differentiation potential upon overexpression of the myogenesis regulator MyoD. This myogenic potential is then assessed in vitro with specific differentiation assays and analyzed by immunofluorescence. The regenerative potential of IDEMs is further evaluated in vivo, upon intramuscular and intra-arterial transplantation in two representative mouse models displaying acute and chronic muscle regeneration. The contribution of IDEMs to the host skeletal muscle is then confirmed by different functional tests in transplanted mice. In particular, the amelioration of the motor capacity of the animals is studied with treadmill tests. Cell engraftment and differentiation are then assessed by a number of histological and immunofluorescence assays on transplanted muscles. Overall, this paper describes the assays and tools currently utilized to evaluate the differentiation capacity of IDEMs, focusing on the transplantation methods and subsequent outcome measures to analyze the efficacy of cell transplantation.

Induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived myogenic progenitors are promising candidates for cell therapy strategies to treat muscular dystrophies. This protocol describes transplantation and functional measurements required to evaluate the engraftment and differentiation of iPSC-derived mesoangioblasts (a type of muscle progenitors) in mouse models of acute and chronic muscle regeneration.

Kas Yenilenmesinin Fare Modellerinde İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücre türevi Mezoangioblast benzeri Miyojenik Progenitörlerin Nakli

Patient-derived iPSCs could be an invaluable source of cells for future autologous cell therapy protocols. iPSC-derived myogenic stem/progenitor cells ...

Biyomühendislik

Analyzing Satellite Cell Function During Skeletal Muscle Regeneration by Cardiotoxin Injury and Injection of Self-delivering siRNA In Vivo

Skeletal muscle possesses an enormous capacity to regenerate after injury. This process is mainly driven by muscle stem cells, also termed satellite cells. Satellite cells are characterized by the expression of the transcription factor Pax7 and their location underneath the basal lamina in the resting skeletal muscle. Upon injury, satellite cells get activated, undergo self-renewal or differentiation to either form new myofibers or to fuse with damaged ones. The functionality of satellite cells in vivo can be investigated using a cardiotoxin based injury model of skeletal muscle. To study the function of one gene during the regeneration of skeletal muscle, transgenic mouse models are mostly used. Here, we present an alternative method to transgenic mice, to investigate the gene function in satellite cells during regeneration, e.g., in cases where transgenic mice are not available. We combine the cardiotoxin mediated injury of a specific skeletal muscle with the injection of a self-delivering siRNA into the regenerating muscle which is then taken up by satellite cells among other cells. Thereby, we provide a method to analyze gene function in satellite cells during regeneration under physiological conditions without the need for transgenic mice.

We describe an in vivo method to investigate the functional loss of a specific gene in satellite cells by using a combination of cardiotoxin mediated injury of skeletal muscle and the injection of a self-delivering siRNA.

İskelet Kas Rejenerasyonu Sırasında Kardiyotoksin Yaralanması ve Kendi Kendine Teslim SiRNA In Vivo Enjeksiyonu Sırasında Uydu Hücre Fonksiyonuanalizi

Skeletal muscle possesses an enormous capacity to regenerate after injury. This process is mainly driven by muscle stem cells, also termed satellite ...

Genetik

Application of Chronic Stimulation to Study Contractile Activity-induced Rat Skeletal Muscle Phenotypic Adaptations

Skeletal muscle is a highly adaptable tissue, as its biochemical and physiological properties are greatly altered in response to chronic exercise. To investigate the underlying mechanisms that bring about various muscle adaptations, a number of exercise protocols such as treadmill, wheel running, and swimming exercise have been used in the animal studies. However, these exercise models require a long period of time to achieve muscle adaptations, which may be also regulated by humoral or neurological factors, thus limiting their applications in studying the muscle-specific contraction-induced adaptations. Indirect low frequency stimulation (10 Hz) to induce chronic contractile activity (CCA) has been used as an alternative model for exercise training, as it can successfully lead to muscle mitochondrial adaptations within 7 days, independent of systemic factors. This paper details the surgical techniques required to apply the treatment of CCA to the skeletal muscle of rats, for widespread application in future studies.

This protocol describes the use of the chronic contractile activity model of exercise to observe stimulation-induced skeletal muscle adaptations in the rat hindlimb.

Contractile fare faaliyet kaynaklı kas iskelet fenotipik uyarlamalar çalışmaya kronik stimulasyon uygulanması

Skeletal muscle is a highly adaptable tissue, as its biochemical and physiological properties are greatly altered in response to chronic exercise. To ...

Gelişim Biyolojisi

Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified Bergstr&#246;m Technique

The percutaneous biopsy technique enables researchers and clinicians to collect skeletal muscle tissue samples. The technique is safe and highly effective. This video describes the percutaneous biopsy technique using a modified Bergstr&#246;m needle to obtain skeletal muscle tissue samples from the vastus lateralis of human subjects. The Bergstr&#246;m needle consists of an outer cannula with a small opening (&#8216;window&#8217;) at the side of the tip and an inner trocar with a cutting blade at the distal end. Under local anesthesia and aseptic conditions, the needle is advanced into the skeletal muscle through an incision in the skin, subcutaneous tissue, and fascia. Next, suction is applied to the inner trocar, the outer trocar is pulled back, skeletal muscle tissue is drawn into the window of the outer cannula by the suction, and the inner trocar is rapidly closed, thus cutting or clipping the skeletal muscle tissue sample. The needle is rotated 90&#176;&#160;and another cut is made. This process may be repeated three more times. This multiple cutting technique typically produces a sample of 100-200 mg or more in healthy subjects and can be done immediately before, during, and after a bout of exercise or other intervention. Following post-biopsy dressing of the incision site, subjects typically resume their activities of daily living right away and can fully participate in vigorous physical activity within 48-72 hr. Subjects should avoid heavy resistance exercise for 48 hr to reduce the risk of herniation of the muscle through the incision in the fascia.

The purpose of this video is to present the modified Bergstr&#246;m skeletal muscle biopsy technique on human subjects.

Modifiye Bergström Tekniği İnsan İskelet Kası Biyopsi Prosedürleri

The percutaneous biopsy technique enables researchers and clinicians to collect skeletal muscle tissue samples. The technique is safe and highly ...

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

Despite the regenerative capacity of skeletal muscle, permanent functional and/or cosmetic deficits (e.g., volumetric muscle loss (VML) resulting from traumatic injury, disease and various congenital, genetic and acquired conditions are quite common. Tissue engineering and regenerative medicine technologies have enormous potential to provide a therapeutic solution. However, utilization of biologically relevant animal models in combination with longitudinal assessments of pertinent functional measures are critical to the development of improved regenerative therapeutics for treatment of VML-like injuries. In that regard, a commercial muscle lever system can be used to measure length, tension, force and velocity parameters in skeletal muscle. We used this system, in conjunction with a high power, bi-phase stimulator, to measure in vivo force production in response to activation of the anterior crural compartment of the rat hindlimb. We have previously used this equipment to assess the functional impact of VML injury on the tibialis anterior (TA) muscle, as well as the extent of functional recovery following treatment of the injured TA muscle with our tissue engineered muscle repair (TEMR) technology. For such studies, the left foot of an anaesthetized rat is securely anchored to a footplate linked to a servomotor, and the common peroneal nerve is stimulated by two percutaneous needle electrodes to elicit muscle contraction and dorsiflexion of the foot. The peroneal nerve stimulation-induced muscle contraction is measured over a range of stimulation frequencies (1-200 Hz), to ensure an eventual plateau in force production that allows for an accurate determination of peak tetanic force. In addition to evaluation of the extent of VML injury as well as the degree of functional recovery following treatment, this methodology can be easily applied to study diverse aspects of muscle physiology and pathophysiology. Such an approach should assist with the more rational development of improved therapeutics for muscle repair and regeneration.

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

We describe an in vivo protocol to measure dorsiflexion of the foot following stimulation of the peroneal nerve and contraction of the anterior crural compartment of the rat hindlimb. Such measurements are an indispensable translational tool for evaluating skeletal muscle pathology and tissue engineering approaches to muscle repair and regeneration.

Uygulamaları<em&gt; İn Vivo</em&gt; Doku değerlendirilmesi için Rat Tibialis Anterior Fonksiyonel Test İskelet Kası Onarım Engineered

Despite the regenerative capacity of skeletal muscle, permanent functional and/or cosmetic deficits (e.g., volumetric muscle loss (VML) resulting from ...

Minimally Invasive Muscle Embedding (MIME) - A Novel Experimental Technique to Facilitate Donor-Cell-Mediated Myogenesis

Skeletal muscle possesses regenerative capacity due to tissue-resident, muscle-fiber-generating (myogenic) satellite cells (SCs), which can form new muscle fibers under the right conditions. Although SCs can be harvested from muscle tissue and cultured in vitro, the resulting myoblast cells are not very effective in promoting myogenesis when transplanted into host muscle. Surgically exposing the host muscle and grafting segments of donor muscle tissue, or the isolated muscle fibers with their SCs onto host muscle, promotes better myogenesis compared to myoblast transplantation. We have developed a novel technique that we call Minimally Invasive Muscle Embedding (MIME). MIME involves passing a surgical needle through the host muscle, drawing a piece of donor muscle tissue through the needle track, and then leaving the donor tissue embedded in the host muscle so that it may act as a source of SCs for the host muscle. Here we describe in detail the steps involved in performing MIME in an immunodeficient mouse model that expresses a green fluorescent protein (GFP) in all of its cells. Immunodeficiency in the host mouse reduces the risk of immune rejection of the donor tissue, and GFP expression enables easy identification of the host muscle fibers (GFP+) and donor-cell-derived muscle fibers (GFP-). Our pilot data suggest that MIME can be used to implant an extensor digitorum longus (EDL) muscle from a donor mouse into the tibialis anterior (TA) muscle of a host mouse. Our data also suggest that when a myotoxin (barium chloride, BaCl2) is injected into the host muscle after MIME, there is evidence of donor-cell-derived myogenesis in the host muscle, with approximately 5%, 26%, 26% and 43% of the fibers in a single host TA muscle showing no host contribution, minimal host contribution, moderate host contribution, and maximal host contribution, respectively.

Minimally Invasive Muscle Embedding MIME - A Novel Experimental Technique to Facilitate Donor-Cell-Mediated Myogenesis

We describe a novel experimental technique that we call Minimally Invasive Muscle Embedding (MIME), which is based on the evidence that skeletal muscle tissue contains viable myogenic cells that can facilitate donor-cell-mediated myogenesis when implanted into a host muscle.

Minimal invaziv kas (MIME) katıştırma - donör-Hücre-aracılı Myogenesis kolaylaştırmak için yeni bir deneysel teknik

Skeletal muscle possesses regenerative capacity due to tissue-resident, muscle-fiber-generating (myogenic) satellite cells (SCs), which can form new ...

Isolation, Culture, and Transplantation of Muscle Satellite Cells

Muscle satellite cells are a stem cell population required for postnatal skeletal muscle development and regeneration, accounting for 2-5% of sublaminal nuclei in muscle fibers. In adult muscle, satellite cells are normally mitotically quiescent. Following injury, however, satellite cells initiate cellular proliferation to produce myoblasts, their progenies, to mediate the regeneration of muscle. Transplantation of satellite cell-derived myoblasts has been widely studied as a possible therapy for several regenerative diseases including muscular dystrophy, heart failure, and urological dysfunction. Myoblast transplantation into dystrophic skeletal muscle, infarcted heart, and dysfunctioning urinary ducts has shown that engrafted myoblasts can differentiate into muscle fibers in the host tissues and display partial functional improvement in these diseases. Therefore, the development of efficient purification methods of quiescent satellite cells from skeletal muscle, as well as the establishment of satellite cell-derived myoblast cultures and transplantation methods for myoblasts, are essential for understanding the molecular mechanisms behind satellite cell self-renewal, activation, and differentiation. Additionally, the development of cell-based therapies for muscular dystrophy and other regenerative diseases are also dependent upon these factors.

However, current prospective purification methods of quiescent satellite cells require the use of expensive fluorescence-activated cell sorting (FACS) machines. Here, we present a new method for the rapid, economical, and reliable purification of quiescent satellite cells from adult mouse skeletal muscle by enzymatic dissociation followed by magnetic-activated cell sorting (MACS). Following isolation of pure quiescent satellite cells, these cells can be cultured to obtain large numbers of myoblasts after several passages. These freshly isolated quiescent satellite cells or ex vivo expanded myoblasts can be transplanted into cardiotoxin (CTX)-induced regenerating mouse skeletal muscle to examine the contribution of donor-derived cells to regenerating muscle fibers, as well as to satellite cell compartments for the examination of self-renewal activities.

The isolation and culture of a pure population of quiescent satellite cells, a muscle stem cell population, is essential to the understanding of muscle stem cell biology and regeneration, as well as stem cell transplantation for therapies in muscular dystrophy and other degenerative diseases.&#160;

Kas Uydu Hücreleri İzolasyon, Kültür ve Transplantasyon

Muscle satellite cells are a stem cell population required for postnatal skeletal muscle development and regeneration, accounting for 2-5% of sublaminal ...

Biyoloji

In Situ Immunofluorescent Staining of Autophagy in Muscle Stem Cells

Increasing evidence points to autophagy as a crucial regulatory process to preserve tissue homeostasis. It is known that autophagy is involved in skeletal muscle development and regeneration, and the autophagic process has been described in several muscular pathologies and age-related muscle disorders. A recently described block of the autophagic process that correlates with the functional exhaustion of satellite cells during muscle repair supports the notion that active autophagy is coupled with productive muscle regeneration. These data uncover the crucial role of autophagy in satellite cell activation during muscle regeneration in both normal and pathological conditions, such as muscular dystrophies. Here, we provide a protocol to monitor the autophagic process in the adult Muscle Stem Cell (MuSC) compartment during muscle regenerative conditions. This protocol describes the setup methodology to perform in situ immunofluorescence imaging of LC3, an autophagy marker, and MyoD, a myogenic lineage marker, in muscle tissue sections from control and injured mice. The methodology reported allows for monitoring the autophagic process in one specific cell compartment, the MuSC compartment, which plays a central role in orchestrating muscle regeneration.

In Situ Immunofluorescent Staining of Autophagy in Muscle Stem Cells

Active autophagy is associated with productive muscle regeneration, which is essential for Muscle Stem Cell (MuSC) activation. Here, we provide a protocol for the in situ detection of LC3, an autophagy marker in MyoD-positive MuSCs of muscle tissue sections from control and injured mice.

Otofajinin Kas Hücrelerinde Yerinde İmmunofloresan Boyanması

Increasing evidence points to autophagy as a crucial regulatory process to preserve tissue homeostasis. It is known that autophagy is involved in skeletal ...

Bir sıçan modelinde kas yaralanmasını tedavi etmek için Ding'in yuvarlanma manipülasyonuna dayalı bir masaj aleti

Mimicking Ding's Roll Method on Notexin-Induced Muscle Injury in Rats

Ding's roll method is one of the most commonly used manipulations in traditional Chinese massage (Tuina) clinics and one of the most influential contemporary Tuina manipulations in China. It is based on the traditional rolling method commonly used in the one finger Zen genre and named Ding's roll method. Due to its anti-inflammatory and blood circulation-promoting effects, Ding's rolling method has sound therapeutic effects on myopathy. Because of the large area of force applied to human skin, Ding's roll method is challenging to perform on experimental animals with small skin areas, such as rats and rabbits. Additionally, the strength of Tuina applied to the human body differs from that applied to experimental animals, so it may happen that the strength is too high or too low to achieve the therapeutic effect of Tuina during the experiment. This experiment aims to create a simple massager suitable for rats based on Ding's rolling manipulation parameters (strength, frequency, Tuina duration). The device can standardize manipulation in animal experiments and reduce the variation in Tuina force applied to different animals due to subjective factors. A rat model of notexin-induced skeletal muscle injury was established, and plasma injury markers creatine kinase (CK) and fatty acid binding protein 3 (FABP3) were used to assess the therapeutic effect of Tuina on skeletal muscle injury. The results showed that this Tuina massager could reduce the levels of CK and FABP3 expression and slow down the degree of skeletal muscle injury. Therefore, the Tuina massager described here, mimicking Ding's roll method, contributes to standardizing Tuina manipulation in experimental research and is of great help for subsequent research on the molecular mechanism of Tuina for myopathy.

Yazar Spotlight: Kendi Kendine Yapılan Bir Masaj Aleti Kullanarak Sıçanlarda Tuina Masajı Yapma 

This protocol describes a simple device that mimics Ding's roll method, establishes a rat model of skeletal muscle injury, and uses hematoxylin-eosin staining to observe the pathology of damaged tissue and enzyme-linked immunosorbent assay to detect changes in serum damage markers.

Cardiotoxin Enjeksiyonu ile Akut İskelet Kası Regeneration indüksiyon

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler