<p class="jove_content"> Yazarlar Hyewon Cooper&#39;ın sanatsal katkılarından dolayı minnettarız. </p>

<p class="jove_title"> 1.. Propodite-dactylopodite (PD) Sinir gelen Diseksiyon ve Kayıt Elektrik Etkinliği </p><ol><li> Arkasından karapaksla karşısında Yengeç tutun ve pençeleri kaçınarak, forseps ile meropodite proksimal kısmını çimdik. Bacak ölüme kanama hayvan önlemek için autotomize olacaktır. Onlar yerine agresif ve çok hızlı olarak mavi yengeçler tutarken dikkatli olun. <br /><img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig1.jpg" width="500px" /><br /> <strong>Şekil 1. İlk yengeç bacağını yürüyüş.</strong> Chordotonal organların (taralı bölgeler) arasında anatomik konumu bu şekil üzerine bindirilmiş. Çift ok başı nerede PD sinir deneyler için bacak transect gösterir. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/51050/51050fig1highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </li><li> Propodite ve carpodite arasında bir kesim olun. Carpopodite ve t atın<html> o <strong>(Şekil 1)</strong> meropodite eklenmiş. </li><li> . Derinden <strong>kesmeyin:</strong> # 11 bıçak <strong>(Şekil 2</strong> ve <strong>3) Not</strong> ile bir neşter ile propodite pigmentli (lateral) taraftaki manikür büyük bir pencere kesti. </li><li> Altında neşter bıçağı kaydırarak Kütikül çıkarın ve manikür paralel. Bu kütikül bağlı kas liflerinin koparır. </li><li> Aynı tekniği kullanarak pigmentless propodite (medial) tarafında küçük bir pencere kesmek, ama (mafsal ya da bölümler arasındaki menteşe) kondilini bırakın eki bozulmamış. <br /><img alt="Şekil 2," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig2.jpg" width="500px" /><br /> <strong>Şekil 2. Propodite noktalı çizgi boyunca kesin.</strong> <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/51050/51050fig2highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . <br />n &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/51050/51050fig3.jpg &quot;width =&quot; 500px &quot;/&gt; <br /> <strong>Şekil 3. Penceresinde siniri (oklar sinir demeti özetleyecek) Açığa.</strong> <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/51050/51050fig3highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </li><li> Aşağı hazırlık pin yengeç tuzlu su içeren bir Sylgard kaplı çanak hazırlayın <strong>Not:.</strong> Türe özgü tuzlu yemek tarifleri için <strong>Tablo 1&#39;e</strong> bakınız. </li><li> Dikkatle yangın parlatılmış cam iğne ile araştırılarak PD organı bulun. Eklemi kapsayan elastik kordon gümüş bir görünüme sahiptir. </li><li> Tendonun her iki taraftan organ görünümünü belirsiz kas liflerini çıkarın. PD organ veya onun sinir kesmemeye çok dikkatli olun. </li><li> Bu sağlandıktan sonra, sıkıca <strong>(Şekil 4)</strong> yukarı bakacak (yanal) pigment tarafı ile çanak hazırlık yatıştırıldı. <br /><img alt="Şekil 4," fo:content-width= &quot;5in&quot; src = &quot;/ files/ftp_upload/51050/51050fig4.jpg&quot; width = &quot;500px&quot; /&gt; <br /> <strong>Şekil 4. PD organ ve sinir Exposed.</strong> <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/51050/51050fig4highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </li><li> Özgür-up sinir uzun bir uzunluğu (1.5 cm) kayıt amaçlı sırayla kadar proksimale mümkün Propodite yılında PD organı sinir izleyin. PD sinir hala ana bacak sinirine takılı iken bu en iyi yapılır. </li><li> Cam iğneler yardımı ile ana bacak sinir PD sinir ayırdıktan sonra, iris makası ile proksimale PD sinir sever <strong>Not:.</strong> Diseksiyonu sırasında germek veya sinir çekmeyin. </li><li> Uzatılmış ve tam fleksiyon konuma dactylopodite getirin. Aşırı fleksiyon ve ekstansiyon pozisyonları ve daha sonra kullanılmak üzere bir yarım noktası nerede not alın. </li><li> Tuzlu su banyosu içinde bir topraklama kablosu yerleştirin. </li><li> E açınlectrophysiology kayıt donanım / yazılım <strong>Not:.</strong> Bizim kurulum önce <sup>23</sup> tarif edilmiştir. </li><li> Bu mikroskop sahne bakan böylece mikroskop yerleştirin. Hazırlık çanak sahnede yerleştirildikten sonra, en iyi hazırlık görselleştirmek için yüksek yoğunluklu aydınlatıcı ışınının konumunu ayarlamak gerekir. </li><li> Ekli emme elektrot takımı tuzlu su banyosu ve hazırlanması kolay erişim böylece mikromanipülatör yerleştirin. Bir online video <sup>24</sup> de gösterildiği gibi, emme elektrodu inşa edilmiştir. </li><li> , Nöral aktiviteyi tespit emme elektrot içine PD sinirin kesik ucunu çizmek için. </li><li> Bir cam prob veya tahta takoz yardımı ile birkaç döngüleri için genişletilmiş ve fleksiyonda pozisyonlarda boyunca Dactyl taşıyın. </li><li> Dactyl, genişletilmiş fleksiyonda ve orta pozisyonlarda tutturulmuş zaman bir sonraki etkinliği gözlemlemek. </li></ol><p class="jove_title"> 2. Gerginlik Elektrik Hareketi KayıtKuvvet Nesil İzleme sinir ederken </p><ol><li> Bacağın lateral ve medial tarafı belirler. Medial tarafı bir tırnak ile Meropodite bölgede hafifçe sıkarak hissedilebilir bir yumuşak bir dokuya sahiptir. </li><li> Çanak, bu yumuşak manikür tarafı yukarı yerleştirin. Açıcı kas innervates excitor motor sinir da Carpopodite sedye kas innerve. </li><li> Açıcı kas uyarmak amacıyla carpodite bölgedeki sedye motor sinir izole edilir ve bir emme elektrodu ile uyarılır. Bacağın proksimal kısmı makasla meropodite kesilmesiyle çıkarılır. </li><li> Iç taraftaki bilek bölgesindeki kütikül bir bölümünü (medial yan, <strong>Şekil 5A)</strong> çıkarın. </li><li> Bükücü kas apodeme kesin ve bacak boşluğundan dışarı ana bacak sinir çekme olmayacak şekilde kas çıkarın <strong>(Şekil 5B, C</strong> apodeme ayrılır bender için oklara dikkat edin). Ana bacak sinir ve bir sutyenNCH ​​sedye kas sonra <strong>(Şekil 5D)</strong> gözlenebilir. </li><li> Sedye kas (ok at <strong>Şekil 5E)</strong> ana sinir demeti dallanma sinir <strong>bulun.</strong> Bu yakın kas kesmek ve uyarmak için bir emme elektrot içine çekilebilir <strong>(Şekil 5F</strong> ve <strong>G,</strong> ok dalı gösteriyor). </li><li> Siniri sıkıştırmasıyla olmadan açacağı doğru çıkıntı sinirin bir bölümünü kızdırmak. Sedye / açacağı motor sinir transect. </li><li> Emme elektrodu içine motor sinir çekin ve sonra uyarır. </li><li> Açıcı kas ve sinir gerginlik maruz yakın kas ve propodite ventral bölgesini kaldırın. Propodite bir # 11 bıçak <strong>(Şekil 6)</strong> ile bir neşter ile yakın kas kesti <strong>Not:.</strong> Bunun açacağı motor sinirine zarar verebilir çünkü yakın bölgede derin kesmeyin. <br /><img alt="Şekil 5," fo:content-width = &quot;5in&quot; src = &quot;/ files/ftp_upload/51050/51050fig5.jpg&quot; width = &quot;500px&quot; /&gt; <br /> <strong>Şekil 5. Açacağı kas uyarıcı için motor nöron sergilemek için Diseksiyon adımlar.</strong> <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/51050/51050fig5highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . <br /><img alt="Şekil 6," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig6.jpg" width="500px" /><br /> <strong>Şekil 6,. Kaldırılamaz böylece yakın kas maruz propodite ventral yarısında manikür kesti.</strong> <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/51050/51050fig6highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </li><li> Canlı nöronlar tutmak için diseksiyon işlemi boyunca taze soğutulmuş tuzlu suyla tuzlu değişimi. Daha fazla diseksiyon için, bir mikroskop altında hazırlanması çanak yerleştirin ve fiber optik aydınlatma kullanın. </li><li> Dikkatli olan ek yakın tendon kestisivri uçlu orta boy makas kullanarak dactyl. </li><li> Açıkça görünür olmalıdır ana bacak sinir açıcı kas dalları rahatsız etmemek için çok dikkatli olun. </li><li> Çıkarın ve yakın kas ve tendon atın. </li><li> Bir diseksiyon iğne ile Dactyl bir delik açın. Bu delik, bir gerilim (kuvvet) dönüştürücü metal pim bağlamak için daha sonra kullanılabilir, ancak bu işlem, bu aşamada yapmak gereklidir. </li><li> Açıcı kas distal bölgesinde açıcı kas ve apodeme için projeler sinir dalı bulun. Dikkatle yangın parlatılmış cam aracı ile sinir prob. </li><li> Motor sinir demetine apodeme hasılatı distal ucundan ortaya çıkan gerilim sinir dikkate alınmalıdır. </li><li> , Nöral aktiviteyi tespit yengeç tuzlu su ile bir emme elektrot doldurmak ve elektrot içine açacağı gerilim sinirin kesik ucunu çizmek için. Emme elektrot sinir üzerine sıkıca oturduğundan emin olun. </li><li> Neura için inceleyinaçacağı apodeme pasif gerginlik l bağlılaşığı. Gerginlik sinir elektriksel aktivite kaydederken, <em>(yani</em> açacağı kas germe) uzun bir eklem içine hızla Dactyl döndürün. </li><li> Sonraki, stimülasyon frekansı ile ilgili test aktif güç geliştirme. </li><li> Kanca ucu Dactyl küçük bir delikten geçer ve böylece sıkıca metal kanca takmak. </li><li> . Kuvvet transformatörüne metal kanca diğer ucunu <strong>Not:</strong> pin dik üretilen kuvvetin maksimum tespiti için dönüştürücüye, böylece güç çevrim, 90 ° açı ile her zaman olduğundan emin olun. </li><li> Bu açacağı eklemin yaklaşık 45 ° &#39;lik açıyla böylece kanca ve Dactyl çekin. </li><li> Şimdi 250 msn için, 100 Hz&#39;de, motor sinir uyarmak ve kuvvet gibi gerilim sinirin ateşleme frekansını ölçmek. </li><li> Açıcı yumuşak kas lifleri, böylece, tam uzatılmış pozisyona ortak yerleştirin. </li><li> S250 msn için, 100 Hz&#39;de, motor sinir ve timulate kuvveti hem de germe sinirin ateşleme frekansını ölçmek. </li><li> Tamamen (~ 90 °) fleksiyonda böylece viraj / eklemi esnetin. Bu konumda açıcının kas lifleri tamamen gerilir. Nedeniyle kas bu pasif germek dönüştürücü tarafından ölçülen bazı güç olabilir. </li><li> 250 msn için, 100 Hz&#39;de, motor sinir ve teşvik kuvveti hem de germe sinirin ateşleme frekansını ölçmek. </li><li> Bir kuvvet ölçüm sonra çeşitli frekansların bir dizi devam: Her ortak konumda, 8-10 saniye boyunca 20, 40, 60, 80, ve 100 Hz. </li><li> Hızlı bir gerilim sürümü ile tepkisini ölçmek. Kuvvet dönüştürücü üzerinde kanca kolayca Dactyl delikten dışarı itilmesi, böylece hazırlık düzenleyin. </li><li> Tamamen (~ 90 °) fleksiyonda böylece viraj / eklemi esnetin. Şimdi 5 sn sürekli stimülasyon ile 100 Hz motor sinirini uyarır. </li><li> İlk secon sonragerginlik açıcı kas inşa gibi d veya daha az, Dactyl delikten dışarı pimini itin. </li><li> Dactyl tutan pimin yayımlanmasından önce ve sonra gerginlik sinir kaydını inceleyin. </li><li> Bu gerilim nöronların çıkışını değiştirmek Octopamine, serotonin ve proctolin gibi nöro-aktif maddelerin modüle edici etkileri, açıktaki açıcı kas üzerinde banyo ortamı için bu moleküllerin eklenmesi ve tekrar deneyleri ile tespit edilebilir. </li><li> Bir pipet kullanın ve hazırlanması üzerinde 1-2 ml damla. </li></ol><p class="jove_title"> 3. Crustacean içinde boyama Periferik Sinir Sistemi Yapıları Ayakları Yürüyüş </p><ol><li> <strong>Metilen mavisi tekniği</strong> <ol><li> Damıtılmış su, iki parçalı bir parça metilen mavisi klorür stok solüsyonu (% 0.25) seyreltin. </li><li> Tamponlu tuz beş parça için bu karışımı ekleyin. Iyice ilgi alanı sulayacak. </li><li> 1. bölümdeki protokole göre bir bacak teşrih. Ön inkübe12-13 ° C&#39;de metilen mavisi çözeltisi içinde Terkip </li><li> Hazırlayıcıları boyamanın ilerleme takip düşük yoğunluklu aydınlatma kullanılarak mikroskop ile her 10-15 dk inceleyin. Boyama diğerleri, bir saat içinde tamamlanmış olacak bazı durumlarda bu gecede alabilir. </li></ol></li><li> <strong>4-di-2-ASP tekniği</strong> <ol><li> Floresan boyalar geri-dolgu PD nöron veya doğrudan banyosundan hazırlanmasını leke için kullanılabilir. Ancak floresan boya görüntülemek için yetenekleri olan, uygun bir mikroskop gereklidir. </li><li> 1. bölümdeki bir protokole göre bir bacak teşrih. </li><li> 4-Di-2-ASP çözeltisi, 10 uM konsantrasyonda in hazırlanmasını inkübe edin ve 15 dakika boyunca buzdolabında hazırlanmasını bırakın. Hazırlık karşılamak için yeterli bir çözüm kullanın. </li><li> Hızla hazırlıklarını fotoğraflamak ve cıva ışığa maruz kaldıktan kaçının. Bu floresan boya nispeten hızlı bir şekilde kaybolur. </li></ol></li><li&gt; <strong>Kobalt klorid tekniği</strong> <ol><li> 1. bölümde protokolüne göre PD siniri ortaya çıkarmak ve soğuk tuzlu su içinde bekletildi tutun. </li><li> <sub>CoCl2</sub> tutmak için jöle de bir petrol olun. Herhangi bir <sub>CoCl2</sub> tuzlu su dökülür durumunda tüm hazırlık kara leke, ve preparat atılmalıdır. </li><li> , Bir polistiren levha küçük bir kesim Kayma plastik platformu yapmak için, ve uzakta yüzer veya <strong>(Şekil 7)</strong> tuzlu su banyosu dalmış haline olmaz böyle bir şekilde bunu pin. <br /><img alt="Şekil 7" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig7.jpg" width="500px" /><br /> <strong>Çanak yerinde tutmak için iğne ile Şekil 7.. Polistiren levha.</strong> <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/51050/51050fig7highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </li><li> Bir tek şırıngaya tutturulmuş ince bir derialtı iğne vazelin çıkarın,sonra sinir polistiren kayma üstüne, üzerinde bol dökümlü olacak orta sığ bir &quot;V&quot; dışında yüksek yaklaşık 1-1.5 mm olmalıdır bir engel (bir daire işe yarayabilecek) yapmak. </li><li> &quot;V&quot; yakın bariyerin iki tarafında tuzlu küçük bir su birikintisi yapın. Germek veya tutam sinir, çanak dikkatlice sinir kaldırın ve jöle de petrol tuzlu su birikintisi içinde yerleştirmek için özen. </li><li> Sinir bölümü siniri açığa karşılamak için vazelin çıkarma dikkatle, kurumasına değil o kadar hızlı çalışır. Şimdi tuzlu su ile bariyer testi ve emin sızıntı olmadığından emin olun. </li><li> Bariyerin iç tuzlu uzak kurutun ve banyo tuzlu iki tarafı <strong>(Şekil 8)</strong> birbirinden izole edilir emin olmak için vazelin çeperi etrafında yüksek olduğunda doldurur bakın. <br /><img alt="Şekil 8," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig8.jpg" width="500px" /><br /><stro<html> ng&gt; Şekil 8. <strong>vazelin de tuzlu ve PD sinir iyice yayılan ile.</strong> PD sinir henüz kesilmiş değil. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/51050/51050fig8highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </li><li> Iyi doku bir parça kağıt kullanarak tuzlu fitil. Kağıt sinir kadar tamamlamayı icar kaçının. </li><li> Distile su birkaç küçük damla kullanarak yeni bir su birikintisi olun ve sonra sinir ucunu kesti. Kesim yaparken bariyer boyunca sinir çekmek için çok dikkatli olun. Distile su ozmotik şok olacak &quot;balon&quot; aksonlar. </li><li> 30 saniye içinde, suya <sub>CoCl2</sub> küçük bir damla bu çözüm emmesi ve daha sonra sinirin bu kısaltılmış bölüm <strong>(Şekil 9)</strong> üzerinde bir su birikintisi oluşturacak kadar <sub>CoCl2</sub> ekleyin. Preparatlar en iyi, 12-24 saat boyunca 13 ° C&#39;de buzdolabında saklanır. <br />tp_upload/51050/51050fig9.jpg &quot;width =&quot; 500px &quot;/&gt; <br /> <strong>Şekil 9. Kesim PD sinir <sub>CoCl2</sub> maruz.</strong> Kesim sinir nöron hücresi bedenlerine aksonlar aracılığıyla boya moleküllerinin hareketini kolaylaştırır ve hızlandırır suyun varlığında şişer. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/51050/51050fig9highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </li><li> Nemlendirme su birikintileri çıkarın. Bir dokusu kullanılarak kobalt çözüm uzak kurulayın ve tuzlu çeşitli değişiklikler ile kobalt kalıntıları silsin. </li><li> Yengeç tuzlu çözeltinin yaklaşık 10 ml içeren bir küçük bir cam Petri tabağına izole edilmiş bir preparasyonunu aktarın. Nöronlar, yıkanır ve aşağıdaki adımları <em>yerinde</em> gerçekleştirilir. İyi metal aletler, bu adımdan sonra hazırlık (eğer fizyolojisi için daha sonraki bir zamanda kullanılmak üzere olmayan belirli araçları kullanmak gerekir) işlemek için kullanılacak değildir. </li><li> (Amonyum sülfid 1-2 damla NH<sub>4)</sub> tuzlu <sub>2</sub> S. Sıkıca (NH <sub>4) 2</sub> S şişe kapağı ve arka kaputun içine yerleştirin. Bir mikroskop altında hazırlanmasında, reaksiyonu dikkate </li><li> 1-2 dakika içinde, kobalt-dolu nöronlar ve bunların işlemleri onlar siyah leke çünkü görünmeye başlamalıdır. </li><li> 5-10 dakika sonra, taze tuzlu çözelti ile geliştirme çözümü değiştirin. </li><li> Eğer lavabonun drenaj dökülür var geliştirme çözümü birkaç dakika veya kapaklı bir çöp şişe akan musluk suyu ile takip emin olun. </li><li> Tuzlu su dökün ve Bouin çözeltisi sabitleyici iki değişiklik ile yaklaşık 15 dakika boyunca sinir hazırlık düzeltin. Açıcı kas gibi daha büyük dokular için (gerilim nöronlar leke), 30 dakika tespitin süresini artırır. </li><li> % 70 <em>(örneğin%</em> 70,% 80,% 90,% 100) başlayan etanol konsantrasyonuna göre artan bir dizi kurutmak. Her bir konsantrasyonda yaklaşık 10 dakika için yeterlidirküçük dokular. </li><li> % 100 etanol iki kez değiştirilerek yaklaşık 10-15 dakika sonra,% 100 metil salisilat ile etanol değiştirerek doku temizleyin. Hazırlık tekrarlanan görüntüleme için sürekli bu çözüm kalacak. Çevredeki doku daha açık hale gelecektir, çünkü zaman ile doldurulmuş hücreler, daha fazla belirgin hale gelecektir. İntensifikasyon yöntemler zaman üzerinde <sup>25</sup> solmaya önlemek için kullanılabilir. </li><li> CoCl <sub>2</sub> ile gerginlik sinir doldurmak için aynı işlemi kullanın. Bununla birlikte, her etanol dehidrasyon adımda etanol çözeltisi birden çok kez değiştirebilir ve iyice kas dihidrat ve onları iyi temizlenmesi için, her adım için yaklaşık 20 dakika boyunca alkol içinde hazırlanmasını inkübe edin. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Whitear, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chordotonal+organs+in+Crustacea.">Chordotonal organs in Crustacea.</a> <em style='font-style: italic'>Nature</em>. <b>187</b>, 522-523 (1038).</li><li>Alexandrowicz, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comparative+anatomy+of+leg+propriocetors+in+some+decapod+Crustacea.">The comparative anatomy of leg propriocetors in some decapod Crustacea.</a> <em style='font-style: italic'>J. Mar. Biol. Assoc. U.K</em>. <b>52</b> (3), 605-634 (1972).</li><li>Hartman, H. B., Boettiger, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+functional+organization+of+the+propys-dactylus+organ+in+Cancer+irroratus+Say.">The functional organization of the propys-dactylus organ in Cancer irroratus Say.</a> <em style='font-style: italic'>Comp. Biochem. Physiol</em>. <b>22</b>, 651-663 (1967).</li><li>Cooper, R. L., Hartman, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+the+bender+apodeme+tension+receptors+in+the+Dungeness+crab,+Cancer+magister.">Responses of the bender apodeme tension receptors in the Dungeness crab, Cancer magister.</a> <em style='font-style: italic'>Comp. Biochem. Physiol. A Physiol</em>. <b>109</b> (2), 479-486 (1994).</li><li>Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+proprioceptive+neurons+on+chordotonal+organs+in+the+crab,+Cancer+magister.">Mapping proprioceptive neurons on chordotonal organs in the crab, Cancer magister.</a> <em style='font-style: italic'>Crustaceana</em>. <b>81</b> (4), 447-475 (2008).</li><li>Burke, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+organ+for+proprioception+and+vibration+sense+in+Carcinus+maenas.">An organ for proprioception and vibration sense in Carcinus maenas.</a> <em style='font-style: italic'>J. Exp. Biol</em>. <b>31</b>, 127-138 (1953).</li><li>Hill, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>First and Last Experiments in Muscle Mechanics</em>. , (1970).</li><li>Stuart, D. G., Mosher, C. C., Gerlach, R. L., Reinking, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+arrangement+and+transducing+properties+of+Golgi+tendon+organs.">Mechanical arrangement and transducing properties of Golgi tendon organs.</a> <em style='font-style: italic'>Exp. Brain Res</em>. <b>14</b> (3), 274-292 (1972).</li><li>Macmillan, D. L., Dando, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tension+receptors+on+the+apodemes+of+muscles+in+the+walking+legs+of+the+crab,+Cancer+magister.">Tension receptors on the apodemes of muscles in the walking legs of the crab, Cancer magister.</a> <em style='font-style: italic'>Mar. Behav. Physiol</em>. <b>1</b> (1-4), 185-208 (1972).</li><li>B&#233;vengut, M., Simmers, A. J., Clarac, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+neuronal+projections+and+neuromuscular+organization+of+the+basal+region+of+the+shore+crab+leg.">Central neuronal projections and neuromuscular organization of the basal region of the shore crab leg.</a> <em style='font-style: italic'>J. Comp. Neurol</em>. <b>221</b> (2), 185-198 (1983).</li><li>El Manira, A., Cattaert, D., Clarac, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monosynaptic+connections+mediate+resistance+reflex+in+crayfish+(Procambarus+clarkii)+legs.">Monosynaptic connections mediate resistance reflex in crayfish (Procambarus clarkii) legs.</a> <em style='font-style: italic'>J. Comp. Physiol. A</em>. <b>168</b> (3), 337-349 (1991).</li><li>Le Bon-Jego, M., Cattaert, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitory+component+of+the+resistance+reflex+in+the+locomotor+network+of+the+crayfish.">Inhibitory component of the resistance reflex in the locomotor network of the crayfish.</a> <em style='font-style: italic'>J. Neurophysiol</em>. <b>88</b> (5), 2575-2588 (2002).</li><li>Ray, D. L., Clarac, F., Cattaert, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+analysis+of+the+sensory+motor+pathway+of+resistance+reflex+in+crayfish.+I.+Multisensory+coding+and+motor+neuron+monosynaptic+responses.">Functional analysis of the sensory motor pathway of resistance reflex in crayfish. I. Multisensory coding and motor neuron monosynaptic responses.</a> <em style='font-style: italic'>J. Neurophysiol</em>. <b>78</b> (6), 3133-3143 (1997).</li><li>Wiersma, C. A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vergleichende+Untersuchungen&#252;ber+das+periphere+Nerve-muskelsystem+von+Crustaceen+(Comparative+studies+on+the+peripheral+nerve-muscle+system+of+crustaceans).">Vergleichende Untersuchungen&#252;ber das periphere Nerve-muskelsystem von Crustaceen (Comparative studies on the peripheral nerve-muscle system of crustaceans).</a> <em style='font-style: italic'>J. Comp. Physiol</em>. <b>19</b>, 349-385 (1933).</li><li>Wiersma, C. A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Movement+receptors+in+decapod+crustacea.">Movement receptors in decapod crustacea.</a> <em style='font-style: italic'>J. Mar. Biol. Assoc. U.K</em>. <b>38</b> (01), 01-143 (1959).</li><li>Hartman, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tension+receptors+on+the+closer+muscle+apodeme+in+the+walking+legs+of+the+blue+crab+Callinectes+sapidus.">Tension receptors on the closer muscle apodeme in the walking legs of the blue crab Callinectes sapidus.</a> <em style='font-style: italic'>J. Comp. Physiol. A</em>. <b>157</b> (3), 355-362 (1985).</li><li>Holsinger, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>The effect of regional phenotypic differences of Procambarus clarkii opener muscle on sarcomere length, fiber diameter, and force development MSc thesis [dissertation]</em>. , (2013).</li><li>Parsons, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+morphology+and+ultrastructure+of+tension+receptors+in+the+walking+legs+of+the+crab,+Carcinus+maenas.">The morphology and ultrastructure of tension receptors in the walking legs of the crab, Carcinus maenas.</a> <em style='font-style: italic'>Cell Tissue Res</em>. <b>211</b> (1), 139-149 (1980).</li><li>Parsons, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+and+central+interactions+of+tension+receptors+in+the+leg+muscle+of+Carcinus.">Responses and central interactions of tension receptors in the leg muscle of Carcinus.</a> <em style='font-style: italic'>Comp. Biochem. Physiol. A Physiol</em>. <b>72</b> (2), 391-399 (1982).</li><li>Tryba, A. K., Hartman, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+responses+of+series+force+receptors+innervating+the+opener+muscle+apodeme+in+the+blue+crab,+Callinectes+sapidus.">Dynamic responses of series force receptors innervating the opener muscle apodeme in the blue crab, Callinectes sapidus.</a> <em style='font-style: italic'>J. Comp. Physiol. A</em>. <b>180</b> (3), 215-221 (1997).</li><li>Whitear, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fine+structure+of+crustacean+proprioceptors.+I.+The+chordotonal+organs+in+the+legs+of+the+shore+crab,+Carcinus+meanas.">The fine structure of crustacean proprioceptors. I. The chordotonal organs in the legs of the shore crab, Carcinus meanas.</a> <em style='font-style: italic'>Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci</em>. <b>245</b> (725), 291-325 (1962).</li><li>Whitear, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fine+structure+of+crustacean+proprioceptors.+II.+The+thoracico-coxal+organs+in+Carcinus,+Pagurus+and+Astacus.">The fine structure of crustacean proprioceptors. II. The thoracico-coxal organs in Carcinus, Pagurus and Astacus.</a> <em style='font-style: italic'>Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci</em>. <b>248</b> (752), 437-456 (1965).</li><li>Leksrisawat, B., Cooper, A. S., Gilberts, A. B., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+Receptor+Organs+in+the+Crayfish+Abdomen:+A+Student+Laboratory+Exercise+in+Proprioception.">Muscle Receptor Organs in the Crayfish Abdomen: A Student Laboratory Exercise in Proprioception.</a> <em style='font-style: italic'>J. Vis. Exp</em>.  (45), e2323 (2010).</li><li>Baierlein, B., Thurow, A. L., Atwood, H. L., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+Potentials,+Synaptic+Responses,+Neuronal+Circuitry,+Neuromodulation+and+Muscle+Histology+Using+the+Crayfish:+Student+Laboratory+Exercises.">Membrane Potentials, Synaptic Responses, Neuronal Circuitry, Neuromodulation and Muscle Histology Using the Crayfish: Student Laboratory Exercises.</a> <em style='font-style: italic'>J. Vis. Exp</em>.  (47), e2322 (2011).</li><li>Delaney, K., Gelperin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+interneurons+controlling+fictive+feeding+in+Limaxmaximus;+I.+Anatomy+and+criteria+for+re-identification.">Cerebral interneurons controlling fictive feeding in Limaxmaximus; I. Anatomy and criteria for re-identification.</a> <em style='font-style: italic'>J. Comp. Physiol. A</em>. <b>166</b>, 297-310 (1990).</li><li>Hartman, H. B., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+and+molting+effects+on+a+proprioceptor+organ+in+the+Dungeness+crab,+Cancer+magister.">Regeneration and molting effects on a proprioceptor organ in the Dungeness crab, Cancer magister.</a> <em style='font-style: italic'>J. Neurobiol</em>. <b>25</b> (5), 461-471 (1994).</li><li>Hartman, H. B., Austin, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proprioceptor+organs+in+the+antennae+of+Decapoda+Crustacea.">Proprioceptor organs in the antennae of Decapoda Crustacea.</a> <em style='font-style: italic'>J. Comp. Physiol</em>. <b>81</b> (2), 187-202 (1972).</li><li>Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+sensory+processes+during+limb+regeneration+in+adult+crayfish.">Development of sensory processes during limb regeneration in adult crayfish.</a> <em style='font-style: italic'>J. Exp. Biol</em>. <b>201</b> (Pt 11), 1745-1752 (1998).</li><li>Chung, Y. -. S., Cooper, R. M., Graff, J., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+acute+and+chronic+effect+of+low+temperature+on+survival,+heart+rate+and+neural+function+in+crayfish+(Procambarus+clarkii)+and+prawn+(Macrobrachium+rosenbergii)+species.">The acute and chronic effect of low temperature on survival, heart rate and neural function in crayfish (Procambarus clarkii) and prawn (Macrobrachium rosenbergii) species.</a> <em style='font-style: italic'>Open J. Mol. Int. Physiol</em>. <b>2</b> (3), 75-86 (2012).</li><li>Blundon, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+temperature+and+thermal+history+on+neuromuscular+properties+of+two+crustacean+species.">Effects of temperature and thermal history on neuromuscular properties of two crustacean species.</a> <em style='font-style: italic'>J. Comp. Physiol. B</em>. <b>158</b> (6), 689-696 (1989).</li><li>Cooper, R. M., Schapker, H., Adami, H., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+and+ventilatory+measures+in+crayfish+during+copulation.">Heart and ventilatory measures in crayfish during copulation.</a> <em style='font-style: italic'>Open J. Mol. Int. Physiol</em>. <b>1</b> (3), 36-42 (2011).</li><li>Bierbower, S. M., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanistic+action+of+carbon+dioxide+on+a+neural+circuit+and+NMJ+communication.">The mechanistic action of carbon dioxide on a neural circuit and NMJ communication.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Experimental Zoology</em>. , (2013).</li><li>Bierbower, S. M., Shuranova, Z. P., Viele, K., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+systems+and+environmental+change+on+behavior+during+social+interactions.">Sensory systems and environmental change on behavior during social interactions.</a> <em style='font-style: italic'>Brain Behav</em>. <b>3</b> (1), 4-13 (2013).</li></ol>

<p class="jove_content"> Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim. </p>

<p class="jove_content"> Bu deney setinin amacı 1) öğretmek ve sergi dışı kayıtların temel ilkelerini tanımlanabilir proprioseptif organ ve gerginlik sinir ve 2) belirli duyusal sistemlerin fizyolojik fonksiyonu ile ilgili anatomik haritalama önemini vurgulamak için. Kullanılan Bu deneysel yaklaşımı ve hayvan modelleri ucuz ve nörofizyoloji öğretim laboratuvarlarda yapmak nispeten kolaydır. </p><p class="jove_content"> Chordotonal organların nöronlar iki özel fonksiyonel türleri, hareket yanıt olanlar ve statik pozisyonları yanıt olanlar bulunmaktadır. Chordotonal organların çeşitli tek hücre kayıtları olursa olsun, ortak incelendiğinde ki, bu durumda <sup>3,5</sup> olduğu gösterilmiştir. Nitekim, ıstakoz antennal eklem ile ilişkili chordotonal organlar aynı iki duyusal türleri ve temel anatomi <sup>27</sup> ortaya koymaktadır. Orada iki nöron türleri (hareket ve positi olmanın yanı sıra) hakkında, nöronlar ilgili elastik iplik üzerinde aynı anatomik düzenleme paylaşır. Iplikçikteki proksimale büyük somata dinamik hareket hassas nöronlara ait eğilimindedir. Statik pozisyonları sinyal Nöronlar küçük somata var ve distalde yer almaktadır. Bu hücreler, tonik olarak aktiftir. Bilek-propodus (CP) ve Merus-carpus (MC) eklemlerde iki chordotonal organ varken PD ortak tek bir chordotonal organı içerir. </p><p class="jove_content"> Elektrofizyolojik kayıt için mavi yengeç <em>(C. sapidus)</em> propriosepsiyonda yapılarını göstermek için diseksiyon duyusal nöronlardan kayıt sırasında eklem hareketleri doğal pozisyonlarında yer almak için izin veren bir strateji gerektirir. Yürüyüş bacak açıcı kas gerginliği sinir birkaç nöronlardan oluşan çok ince bir sinir olduğunu. Bakım alınmadığı takdirde, gerginlik sinir yanı sıra motor sinir uyarıldığında edilecek kas innerve, bu diseksiyon sırasında zarar görebilir. Içinuygun kayıtları emme elektrotlar sinir boyutuna uygun olması gerekir. Kayıtlar 30-40X büyütme mikroskop ve düşük-uç mikromanipülatörler kullanan bir öğrenci laboratuvarda kolayca erişilebilir. </p><p class="jove_content"> Eklem chordotonal organları ile takip etmek ilginç olacaktır Gelecek deneyleri olarak yaşam döngüsünün farklı aşamalarında çeşitli türlerde bacak rejenerasyon sırasında yapısal ve fizyolojik profillerini incelemek olacağını bir <em>Cancer magister</em> <sup>19,26</sup> kullanılan bir ilk çalışmaya kadar takip . Bir uzuv yenileyici ele alınması Kalan Sorular) 1 rejenere nöronların dağıtım ve organizasyon hayvanın yaşına bağlıdır yok, 2) fonksiyonel bir rejenerasyon uzuvun MSS (ventral sinir kablosu) için aksonal projeksiyonlar veya bunu yapar uzuv autot olduğunda fonksiyonel bağlantıları kurmak için zaman ve ortak kullanımı almak, ve 3) ne autotomy düzlemine yakın kopmuş akson oluromized? <sup>28</sup> </p><p class="jove_content"> Kabuklular çevre koşulları ve çevre sıcaklığına uygun, ama nöronlar sıcaklık değişimlerine tepki olarak faaliyetlerini değiştirmek gibi bir nöral devre içinde koordinasyonu sağlamak nasıl belirsizdir. Hızlı bir değişim, 30 not29 oysa değişim hızının az hayvana alışmaları için biraz zaman izin verebilir. Nedeniyle metabolizma, davranış <sup>31,</sup> ya da çevresel etkilerle pH veya osmolaritesi fizyolojik değişiklikler propriosepsiyon katılan nöral devreleri benzer zorluklar olabilir. Bu kabuklu hazırlıklarını kendi işlevi de tek hücre düzeyinde karakterize edilir, çünkü bu tür sorunları ele almak için idealdir. </p><p class="jove_content"> Bu protokolde açıcı kası tarafından üretilen kuvvet izlenmesinde gerginlik nöronların fizyolojik önemini göstermiştir. Bu gerginlik reseptörler boyama prosedürleri kullanarak apodeme içindeki konumlarına izlenebilmektedir. Bunlarnöronlar, memelilerde gibi, çeşitli düzeylerde kuvveti tespit eder ve kuvvet arttıkça ek nöronlar işe. Alımı, doygunluğa ulaşıncaya kadar aktivite sıklığı, motor nöronun uyarım frekansı ile ilgilidir. Fleksiyonda dactylus eklem ile bir çabuk protokolünü kullanarak, gerginlik aktivite hızla kaybolur ama sonra tamamen uzatılmış eklemde gerginlik kazanmak üzerine döner. Bu gerilim, reseptörler tarafından ölçülen kuvvet göstermek için, klasik bir deneysel işlemdir. Çeşitli nöromodülatörler Bu kuvvet ve nöronal yanıtın gelişimini etkileyen görmek için hazırlanmasına uygulanabilir. Önemli yönlerinden biri nöral tepkiler işlenir ve merkezi sinir sistemi ve motor nöron aktivitesi üzerindeki etkileri entegre nasıl. Biz göstermiştir teknikleri bir geri gerginlik (duyu) sinir-motor nöron devresi fonksiyon, gangliyona sağlam bir bacak <em>yani</em> sinyal ve hakkında daha fazla bilgi adres başlamak için izinkas. </p><p class="jove_content"> Göstermiştir boyama işlemleri proprioseptif organları innerve duyu nöronlarının fizyolojisini anlamak için anahtardır. Fonksiyon ve soma boyutuna göre nöronların anatomik düzenleme Yengeç bacakları içinde çeşitli chordotonal organlarda benzerdir. Benzer nöronal düzenlemeler aynı zamanda diğer kabuklu türleri veya böcek bulunursa bilinmemektedir. Tek hücre fizyolojik kayıtları birleştirerek ve konumunu haritalama doğrudan yapı işlev ilişkileri sağlar. CoCl <sub>2</sub> boyama ve sabitleme ile anatomik düzenlemenin uzun vadeli koruma biri arkaya tedbirleri yapmak ve yapısal düzenleme değerlendirmenizi sağlar. </p><p class="jove_content"> Propriyosepsiyon ve iskelet kaslarının gerginliği resepsiyon iskelet kas yapılandırma çeşitli belden hayvanlar için koordineli davranışları ve dış ve iç çevre yanıtları sağlayacak duyu modaliteleri vardırs. , Kerevit karın kas reseptör organı başka iyi belgelenmiş hazırlık (Crawdad Projesi görürsünüz <a href="http://www.crawdad.cornell.edu/">http://www.crawdad.cornell.edu/</a> karın hemi-segmentinde <sup>23</sup> başına sadece iki nöronlar ile propriyosepsiyonunun öğretim amaçları için) . Duyusal sinir demetleri tek nöronlar kayıt edememek daha fazla detay duyusal alımı temel ilkelerini kavrayarak bu yardım sağlar. Bu nispeten basit kabuklu hazırlıklarını bir proprioseptif ve diğer duyusal girdilerin <sup>9-12, 32, 33</sup> merkezi entegrasyonu sağlamak nöral devreleri belirlemek için potansiyeli olan, propriosepsiyon ve gerilim izleme temel yönlerini ele verir. </p>

<p class="jove_content"> Propriyosepsiyon koordine motor davranış sağlayan ekstremite pozisyon ve hareket hissi olduğunu. Proprioseptörlere pozisyonunda (statik) ve hareket (kinestetik) reseptörleri oluşur. Böcekler ve kabuklular olarak, chordotonal organları MSS <sup>1</sup> bu bilgileri sağlayan yapılardır. Tüm chordotonal organların ortak bir yayılabilir ama onlar hala nedeniyle eklem yayılan ve iskelet kas ve eklem kıkırdağında ile birlikte hareket apodemes (yapılar gibi tendon) kendi eki eklem hareketlerini izleyebilirsiniz. Yengeç bacakları altı eklem, bir ya da iki chordotonal organları <sup>2</sup> olan her var. Tipik bir chordotonal organı elastik bir iplikçik içinde gömülü 60-100 veya daha fazla duyusal nöronlar, statik ortak pozisyon, yön ve hareket <sup>3-6</sup> hızını sinyal nöronlar vardır. Her eklem ve bacak chordotonal organlardan input merkezi hayvan tarafından koordineli hareketleri sağlayan işlenir. </p><p class="jove_content"&gt; Bacak kasları izometrik ve izotonik kasılmalar sırasında üretmek güçleri kas lifleri ve apodemes7-9 ekleri ile ilişkili gerilim reseptörleri tarafından tespit edilir. Primer duyusal propriosepsiyonu izlemek nöronlar ve kas lifleri ile üretilen kuvvetler yanıt nöronlardan gelen kayıtları için metodoloji mevcut izleyin kabuklu yürüyüş bacak protokollerde. Bacak hareketlerini aktive ve güç üretimi ölçülmesi için bir teknik de sunulmuştur, hem de bu periferik sinir sistemi yapılarının düzenleme karakterize etmek için kullanılabilir anatomik teknikleridir. </p><p class="jove_content"> Aşağıda gösterildiği prosedürleri chordotonal elastik iplikçik ve apodeme kendi konumuna göre reseptörlerinin her iki tür innerve nöronların yapısal ve fonksiyonel analiz sağlar. Göstermek için, biz propodite-dactylopodite (PD) chordotonal organı, yengeç bacağı <sup>3</sup> distal en segmentini kapsayan organı kullanın.Ayrıntılı elektrofizyolojik çalışmalar 1930&#39;larda başladı ve bugün hala yürütülmektedir rağmen, bazı yönleri muscles10-16 koordineli kontrolünde çeşitli eklem ve rolleri proprioseptörlere segmental bağlantıları hakkında bilinen haline gelmiştir. Proprioseptif organlar, kaslar ve sinir sistemi arasındaki yapı-fonksiyon ilişkisini kuran ayrıca bu rolleri tanımlamak yardımcı olacaktır. Örneğin, somata ve apodeme yerleştirilen germe nöronların uzak uçları etiketleme kas liflerinin <sup>8,17-21</sup> için kendi göreli konum ortaya çıkaracaktır. </p><p class="jove_content"> Biz araştırma veya akademik laboratuvarlarda kullanılan kabuklu bacaklar için üç boyama tekniklerini sunuyoruz. Metilen mavisi boyama kaslar ve sinirler için uygun kontrast sağlar ve öğrencilerin anatomi öğrenmek için basit bir teknik olarak önerilmektedir. Floresan mikroskopi kurulumları Labs kısaca siniri açığa daha seçici nöronal boyanma başarabilirsinizhayati boya 4-di-2-ASP s. Üçüncü bir alternatif nöronları lekeler ve düzeltmeleri <sub>CoCl2</sub> dolgu, ve flüoresan görüntüleme gerektirmez. Emek ve zaman yoğun olmasına rağmen, bu boyama işlemi dolu sinirler için yüksek kontrast ve seçiciliğini verir. Birlikte bu teknikler, bir uzuv içinde veya komponentler arasında değil, aynı zamanda diğer kabuklu böcek türleri ve <sup>20-22</sup> arasında, çeşitli chordotonal organları karşılaştırmak için kullanılabilir. Fizyolojik kayıtları ve anatomik boyanması için kullanılan mavi yengeç <em>(C. sapidus)</em> tüm Amerika Birleşik Devletleri&#39;nin Güney ve Güneydoğu sınır çevresinde hazır. Bu tür çoğu yengeçler bulunan chordotonal ve gerginlik sinir düzenlemelerin bir temsilcisi olarak hizmet vermektedir. Batı kıyısında Laboratuvarları bu deneyler için çok daha büyük Dungeness Yengeç <em>(Cancer magister)</em> kullanmayı tercih edecektir. </p>

<table><tbody><tr><td>Sylgard</td><td>Dow Corning</td><td>182 silicone kit</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5670</td><td></td></tr><tr><td>HEPES acid</td><td>Sigma</td><td>3375</td><td>Free acid, crystalline</td></tr><tr><td>HEPES base</td><td>Sigma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Sigma</td><td>G7021</td><td></td></tr><tr><td>MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;&amp;bull;7H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td>Sigma</td><td>M2643</td><td></td></tr><tr><td>Na&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;SO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;&amp;bull;10H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td>Sigma</td><td>246980</td><td></td></tr><tr><td>Bouin&amp;rsquo;s solution fixative</td><td>Sigma</td><td>HT10-1-32</td><td>Caution: Hazardous material (Special shipping cost required)</td></tr><tr><td>CoCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma</td><td></td><td>Caution: Hazardous material. Please follow proper disposal according to local and federal regulations.</td></tr><tr><td>Methylene blue chloride</td><td>Matheson Co., Inc</td><td>Basic Blue 9, C.I. 52015</td><td></td></tr><tr><td>4-Di-2-ASP</td><td>Molecular Probes</td><td></td><td>4-(4-diethylaminostyryl)-N-methylpyridinium iodide</td></tr><tr><td>Bleach</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>To chloride silver wire</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221465</td><td>To adjust pH</td></tr><tr><td>HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1758</td><td>To adjust pH</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Materials</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dissecting tools</td><td>World Precision Instruments</td><td>assortment</td><td></td></tr><tr><td>Intracellular electrode probe</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Faraday cage</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Insect Pins</td><td>Fine Science Tools, Inc</td><td>26001-60</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting microscope (100X)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fiber optic lamp</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Small adjustable mirror</td><td></td><td></td><td>To direct light beam toward the preparation.</td></tr><tr><td>Glass electrodes</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS7095B5X</td><td>Box of 200, suction electrodes</td></tr><tr><td>Micromanipulator</td><td>World Precision Instruments</td><td>MD4-M3-R</td><td>Can fix for base or on a metal rod</td></tr><tr><td>Raised preparation stand</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Silver wire (10/1,000 inch)</td><td>A-M Systems</td><td>782500</td><td></td></tr><tr><td>Computer</td><td>Any company</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AC/DC differential amplifier</td><td>A-M Systems</td><td>Model 3000</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab 26T</td><td>AD Instruments</td><td>27T</td><td></td></tr><tr><td>Force transducer</td><td>AD Instruments</td><td>0-50g</td><td>MLTF050/ST</td></tr><tr><td>Head stage</td><td>AD Instruments</td><td></td><td>Comes with AC/DC amplifier</td></tr><tr><td>LabChart7</td><td>AD Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Electrical leads</td><td>Any company</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glass tools</td><td>Make yourself</td><td></td><td>For manipulating nerves</td></tr><tr><td>Cable and connectors</td><td>Any company</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipettes with bulbs</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-7</td><td>Box of 500</td></tr><tr><td>Beakers</td><td>Any company</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wax or modeling clay</td><td>Any company or local stores</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stimulator</td><td>Grass Instruments</td><td>SD9 or S88</td><td></td></tr><tr><td>Plastic tip for suction electrode</td><td>Local hardware store (Watt&amp;rsquo;s brand)</td><td>&amp;frac14; inch OD x 0.170 inch ID</td><td>Cut in small pieces. Pull out over a flame and cut back the tip to the correct size</td></tr></tbody></table>

proprioception and tension receptors in crab limbs: student laboratory exercises

<p class="jove_content"> Bu işlemlerin temel amacı, ortak konumunu ve hareketini tespit ve kas gerginliği gibi propriosepsiyon sorumlu primer duyusal nöronları yaşam aktivitesini kaydetmek için nasıl öğretim ve araştırma amaçlı göstermektir. Kabuklu proprioseptörlere ve gerilim reseptörlerinden elektriksel aktivitesi temel nörofizyolojik enstrümantasyon tarafından kaydedilir ve bir dönüştürücü aynı zamanda, bir motor sinir uyarıcı tarafından oluşturulan kuvvetini ölçmek için kullanılır. Buna ek olarak, biz onların anatomik düzenlemenin hızlı bir değerlendirme için veya kalıcı tespit için nöronlar leke nasıl gösterilmektedir. Boyama en kabuklularda chordotonal organların temsili anatomik organizasyon ortaya koymaktadır. Proprioseptif yanıtları gerginlik sinir yanıtları karşılaştırarak bu duyusal nöronlar fonksiyonel olarak tanımlanmış ve nasıl anatomi işlevine ilişkilidir nasıl belirlemede etkili bir öğretim aracıdır. Üç boyama teknikleriaraştırmacılar ve öğretim laboratuvar için ideal bir yöntem seçmek için izin sunulmaktadır. </p>

<p class="jove_content"> PD organı tam olarak ortak uzanan ile gerildiği zaman, PD sinir aktivitesi açık konumda hala tutulduğu <strong>sürece.</strong> Bir miktar etkinlik <strong>kalır, Şekil 10</strong> &#39;de birinci, ikinci için gösterildiği gibi, hareket sırasında sağlamdır. Bu aktivite, statik pozisyonu duyarlı nöronlar <strong>(Şekil 10&#39;da</strong> gösterilen kayıt ikinci yarısı) arasındadır. Hareket sırasında yerinden bir yanıt uyandıran ve ateşleme <strong>(Şekil 11)</strong> chordotonal şeridinin gerilmesi sırasında çoğunlukla mevcuttur. </p><p class="jove_content"> Sivri başka bir analizi kolayca göreli genlikleri sıralayarak yaklaştı olabilir. Bu pozisyonlara veya hareketlerin <sup>5</sup> türleri için işe ediliyor duyusal nöronlar farklı popülasyonlar göstermek için bir yaklaşımdır. Tipik genlikleri 0.25-1.5 mV arasında değişir, ancak bu değerler emme elektrot mühür direnci <em>(yani</em> sıkılık) bağlıdır. T sivri SıklığıÇeşitli boyut aralıkları da grafik analizi için temsil edilebilir. </p><p class="jove_content"> Uyarım frekansı ile ilgili olarak açıcı kas tarafından üretilen kuvvetler <strong>(Şekil 13A</strong> ve <strong>B)</strong> birbirlerinin üzerine ilgili gerilim-zaman-izleri üzerine bindirmek sureti ile karşılaştırılabilir. Bu, aynı zamanda, her belirli bir uyarım bir frekansta her bir ortak pozisyon için gerçekleştirilebilir. Germe sinir aktivitesi daha sonra her bir uyarım frekansında üretilen nispi kuvvet miktarı ile ilişkili, ve her bir pozisyon için ortak olabilir. PD sinir olduğu gibi, başak genlikleri çeşitli açıcı kas <strong>(Şekil 13C)</strong> kasılması görülür. </p><p class="jove_content"> Yürüme bacak nöronların anatomik düzenleme açıkça metilen mavi lekeleme <strong>(Şekil 14)</strong> ile görülmektedir. Apodeme yakın elastik chordotonal iplikçik ve gerginlik nöron unutmayın. Farklı çaplara sahip çeşitli somata bird belirli yerleri bu şekilde de görülebilir. Gerilim sinir ve sedye motor sinirin tüm tabii <strong>ki, Şekil 15</strong> &#39;de gösterilmiştir. PD sinir bireysel nöronlar 4-Di-2-ASP <strong>(Şekil 16)</strong> ve CoCl <sub>2</sub> <strong>(Şekil 17)</strong> teknikleri Dolgu kullanarak yüksek kontrast ile gösterilir. Yüksek büyütmede duyusal sonlar destekleyici scolopales <strong>(Şekil 16B)</strong> <sup>21,22,26</sup> içinde görülebilir. </p><p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="always"><img alt="Şekil 10," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig10.jpg" width="500px" /><br /> <strong>Şekil 10. Taşıyın ve 0 ° tutun.</strong> Dinamik nöronlar hareketi sırasında ateş sağlam ve ortak açık tutulurken statik duyarlı nöronların ani mevcuttur. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/51050/51050fig10highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için tıklayın &lt;</a>/ A&gt;. </p><p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="always"><img alt="Şekil 11" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig11.jpg" width="500px" /><br /> <strong>Şekil 11. Rapid açık ve tamamen genişletilmiş (90-0 °) konumuna fleksiyonda den kapanış.</strong> <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/51050/51050fig11highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </p><p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="always"><img alt="Şekil 12" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig12.jpg" width="500px" /><br /> <strong>PD sinir kaydedildi Şekil 12.. Ekstrasellüler sivri.</strong> Eklem tamamen uzatılmış ve daha sonra hızlı bir şekilde ½ taşındı konumunu fleksiyonda ve daha sonra yine yapılır. Hareketi sırasında etkinlik fark ve ne zaman statik aktivite azalmış. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/51050/51050fig12highres.jpg" target="_blank">büyük ima görmek için buraya tıklayın</a>ge. </p><p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="always"><img alt="Şekil 13" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig13.jpg" width="500px" /><br /> <strong>Şekil 13. Eklem ile geliştirilir bağıl güçleri tamamen fleksiyona ve çeşitli frekanslarda uyarılır. (A)</strong> güç dönüştürücüsünden gerilim-zaman-izleri her uyarım frekansı ile gösterilmiştir. <strong>(B)</strong> Panel A&#39;da izleri karşılaştırıldığında kolaylığı için farklı renklerde birleştirilir. <strong>(C)</strong> Gerilim-zamanlı motor sinir 80 Hz uyarıldığı zaman gerginlik sinir kaydedilen elektriksel aktivite izleri. Nöral etkinlik ile karşılaştırıldığında uyarıcı eserler düzenli desen dikkat edin. Ayrıca, nöral yanıtların çeşitli genlikleri unutmayın. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/51050/51050fig13highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </p><p class="jove_content" fo:keep-together.within-page = &quot;always&quot;&gt; <img alt="Şekil 14" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig14.jpg" width="500px" /><br /> <strong>Yürüme bacak hazırlık 14. Metilen mavisi leke rakam.</strong> Bireysel somas onların duyusal sonlar elastik iplikçik içine çıkıntı ile gösterilir. Bir gerilim nöron gösterilir apodeme yakın. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/51050/51050fig14highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </p><p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="always"><img alt="Şekil 15" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig15.jpg" width="500px" /><br /> <strong>Şekil 15. Uzak ucuna (kırmızı oklar) kaynaklanan ve motor sinir (yeşil ok) katılmadan gerginlik sinir.</strong> <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/51050/51050fig15highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </p><p class="jove_content" fo:keep-together.within-page = &quot;always&quot;&gt; <img alt="Şekil 16" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig16.jpg" width="500px" /><br /> <strong>4-Di-2-ASP ile <em>Kanser magister</em> yılında PD sinirin Şekil 16.. (A) geri dolgu. (B)</strong> duyusal sonlar Yükseköğretim büyütme. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/51050/51050fig16highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </p><p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="always"><img alt="Şekil 17," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig17.jpg" width="500px" /><br /> <strong>Şekil 17. COCI <sub>2</sub> ile dolu ve işlenmiştir Nöronlar (A).</strong> Gösterilen lekeli hazırlık takip anahat <strong>(B).</strong> <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/51050/51050fig17highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </p><table border="0" cellpadding="0" cellspacing = &quot;0&quot; width = &quot;392&quot;&gt; <colgroup><col /><col /></colgroup><tbody><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;width:235px;"> <strong>Tuzlu</strong> </td><td style="width:157px;"> <strong>g / L</strong> </td></tr><tr height="20"><td height="20" style="height:20px;width:235px;"> NaCl </td><td style="width:157px;"> 27.29 </td></tr><tr height="20"><td height="20" style="height:20px;width:235px;"> KCl </td><td style="width:157px;"> 0.81 </td></tr><tr height="26"><td height="26" style="height:26px;width:235px;"> MgSO <sub>4</sub> • 7H <sub>2</sub> O </td><td style="width:157px;"> 4.81 </td></tr><tr height="26"><td height="26" style="height:26px;width:235px;"> <sub>CaCl2</sub> • <sub>2</sub> O 2H </td><td style="width:157px;"> 1.85 </td></tr><tr height="26"><td height="26" style="height:26px;width:235px;"> Na <sub>2</sub> SO <sub>4</sub> • <sub>2</sub> O 10H </td><td style="width:157px;"> 0.97 </td></tr><tr height=&quot;20&quot;&gt; <td height="20" style="height:20px;width:235px;"> Dekstroz (D-glikoz) </td><td style="width:157px;"> 1.982 </td></tr><tr height="20"><td height="20" style="height:20px;width:235px;"> Hepes asit </td><td style="width:157px;"> 0.476 </td></tr><tr height="20"><td height="20" style="height:20px;width:235px;"> Hepes tuz </td><td style="width:157px;"> 2.08 </td></tr><tr height="40"><td height="40" style="height:40px;width:235px;"> NaOH veya HCI ile pH 8.1 &#39;e ayarlayın </td><td style="width:157px;"></td></tr></tbody></table><p> <strong>Tablo 1. Yengeç tuzlu için Tarifler.</strong> </p>

Watch this Scientific Journal Video about Proprioception and Tension Receptors in Crab Limbs: Student Laboratory Exercises at JoVE.com

Yengeç Uzuvlarındaki Propriyosepsiyon ve Gerginlik Reseptörleri | Sinirbilim | Video

Proprioception and Tension Receptors in Crab Limbs: Student Laboratory Exercises

<p class="jove_content"> Fizyolojik ve anatomik teknikler kabuklu yürüme bacaklarda eklem proprioseptörlere ve kas gerginliği reseptörleri için işlevini ve yapısını ele gösterilmiştir. </p>

Yengeç Parmak Propriyoseptör ve Gerilim reseptörleri: Öğrenci Laboratuvarı Egzersizler

The primary purpose of these procedures is to demonstrate for teaching and research purposes how to record the activity of living primary sensory neurons ...

proprioception-tension-receptors-crab-limbs-student-laboratory

Universidad de Cartagena UDEC

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Neuroscience

Fundamentals

Scientific Inquiry

SCIENTISTS IN ACTION

25.1K Görüntüleme.  University of Kentucky.  Fizyolojik ve anatomik teknikler kabuklu yürüme bacaklarda eklem proprioseptörlere ve kas gerginliği reseptörleri için işlevini ve yapısını ele gösterilmiştir. 

Video: Proprioception and Tension Receptors in Crab Limbs: Student Laboratory Exercises

Lab Techniques

<h4>Measurement Accuracy</h4>
<p>The ability to repeat an experiment and get the same results, or <em>reproducibility</em>, is essential in scientific research. However, it&#8217;s impossible to repeat an experiment if you don&#8217;t know how you did it. Thus, scientists keep detailed records of their experiments in lab notebooks. These records include important information like the amount of each material used and descriptions of each step of the procedure.</p>
<p>Equipment, like balances and volumetric or graduated glassware, is used to measure solid and liquid compounds for experiments. The precision of each measurement is limited by the equipment used. Balances and other equipment with digital readouts automatically display values at the maximum precision that they can support. The precision of graduated glassware and rulers depends on the increment, which is the amount represented by the smallest distance between two marks.</p>
<p>The surface of most liquids curves upwards at the edges in glass containers. This type of curved liquid surface is called a concave meniscus. When the edges of the liquid curve down, it is called a convex meniscus. When measuring liquid volumes, the reference point for the top of the liquid is the bottom of a concave meniscus or the top of a convex meniscus. To accurately identify the position of the meniscus, liquid volumes are read by looking at the liquid&#8217;s surface from the side at eye-level. Looking at the liquid from above or below will cause the liquid surface level to appear higher or lower than it actually is.</p>
<p>When the reference point of the meniscus touches a mark on graduated or volumetric glassware, the glassware is holding the volume defined for that mark. Volumetric glassware is designed to measure a specific volume, so it only has one mark. Graduated glassware is designed to measure a range of volumes, so it has many marks, or <em>graduations</em>, which are labeled at regular intervals. Both graduated and volumetric glassware may have additional manufacturer-provided information about their precision.</p>
<h4>Calibration and Uncertainty</h4>
<p>Manufacturers calibrate equipment to ensure that the measurements are accurate to within a specified range of uncertainty. For example, a high-precision analytical balance may read out to four decimal places (0.0000 g) with an uncertainty of &#177; 0.0001 g. A reading of 0.0345 g indicates that the true value is between 0.0344 g and 0.0346 g.</p>
<p>Glassware typically has its measurement uncertainty printed on it. To accurately record volume measurements, you must consider both the increment and the uncertainty. For example, a precise volume measurement in a 100 mL graduated cylinder with 1 mL increments and an uncertainty of &#177; 0.5 mL would be recorded to the tenths place (000.0 mL &#177; 0.5 mL). If the reference point of the meniscus falls between two marks, you should estimate a value for the tenths place; otherwise, leave it as 0. Since temperature affects volume, the temperature for which the glassware is calibrated will be printed on it.</p>
<p>Glassware is calibrated either <em>to contain</em> (TC) or <em>to deliver</em> (TD). TC glassware holds the specified volume of liquid when it is filled to the mark, but a small amount of liquid will be left behind when it is poured into another container. Solutions are often prepared in TC glassware because the accuracy of the solution volume affects the accuracy of the concentration. Volumetric flasks are typically calibrated to contain.</p>
<p>TD glassware holds a little more than the amount of liquid specified when it is filled to the mark, but it dispenses only the specified volume. Thus, TD glassware should not be emptied completely when dispensing liquids. This type of glassware is useful for transferring a precise volume of liquid to another container. Both graduated and volumetric pipettes are typically calibrated to deliver.</p>
<p>Unless otherwise specified, the uncertainty of a number is assumed to be on the scale of the last digit. Thus, it&#8217;s particularly important to report the uncertainty of a measurement if the uncertainty is on a larger scale. For rulers and graduated glassware without a known uncertainty, the uncertainty is estimated as half of the smallest increment. The uncertain digit is based on where the meniscus falls between two tick marks.</p>
<h4>Significant Figures</h4>
<p>Significant figures are the numbers in a value that are <em>meaningful</em>, or essential for expressing that value with the appropriate precision. All numbers other than leading zeroes (<strong>0.00</strong>1), trailing zeroes (1,<strong>000</strong>), or scientific notation multipliers (<strong>10</strong><sup>x</sup>) are always significant.</p>
<p>Leading zeroes are never significant because they can be removed by rewriting the number either in scientific notation or, if it is an SI unit, in smaller units. For example, there are only three significant figures in the value 0.00123 m because it can be rewritten as either 1.23 &#215; 10<sup>-3</sup> m or 1.23 mm without losing any information. Note that the scaling factor between different multiples of the same SI unit does <em>not</em> affect the number of significant figures.</p>
<p>Trailing zeroes are significant when they are before or after a decimal point. For example, the measurement 100.110 mL has six significant figures and 100.0 mL has four. Trailing zeroes in a number written without a decimal point are assumed to be insignificant unless they are marked otherwise. There are several different conventions for marking significant zeroes in those cases, but to avoid ambiguity it is advisable to rewrite those values in scientific notation. If the measurement is in SI units, use larger units.</p>
<p>The precision of a measurement limits the precision of any values calculated from it. A calculated value has the same number of significant figures as the <em>least</em> precise measurement or value used in its calculation. If the result has too many significant figures, it is rounded to the appropriate precision. If the result has too few significant figures, it is extended with significant trailing zeroes to preserve the precision. The significant figures of experimentally derived values, like molar mass, density, or some unit conversion factors, must also be considered when they are used in calculations.</p>
<p>The number of significant figures in a calculated value is <em>not</em> limited by physical or mathematical constants in formulas or exact numbers, like the number of data points acquired in an experiment. For example, the formula for calculating the volume of a sphere is V = 4/3&#960;r<sup>3</sup>. The number of significant figures in the calculated volume is <em>only</em> affected by the number of significant figures in the radius measurement <strong>r</strong>. 4/3&#8201; and &#960; are constants, and <sup>3</sup> is simply notation for a mathematical operation.</p>
<p>Defined conversion factors are also treated as constants. For instance, the inch is defined as exactly 25.4 millimeters; therefore, the number of significant figures of the converted value depends only on the original measurement. Always check whether the conversion factor is exactly defined or an experimental value when converting between units.</p>
<p>For simple addition and subtraction of measurements, we use significance arithmetic to determine the number of significant figures. In this case, the answer has as many decimal places as the measurement with the fewest decimal places <em>regardless of the number of significant figures</em>. Thus, 15,643.7 mL + 0.613 mL = 15,644.3 mL.</p>
<p>For multi-step calculations or complex equations that you break into smaller parts to solve, you should keep at least one or two insignificant figures on the intermediate values. For example, if you calculate the values of the numerator and denominator of a fraction separately before dividing them, you should retain the insignificant figures of the numerator and denominator when you divide them. This minimizes <em>rounding error</em>, which is the difference from the number you would get if you entered the entire formula into your calculator at once. If you write down these intermediate values, you should note which digits are insignificant.</p>
<h4>References</h4>
<p>Harris, D.C. (2015). <em>Quantitative Chemical Analysis</em>. New York, NY: W.H. Freeman and Company.</p>

Accuracy, Precision, Uncertainty, and Significant Figures - Concept

Laboratuvar Teknikleri

Measurement Accuracy
The ability to repeat an experiment and get the same results, or reproducibility, is essential in scientific research. However, ...

JoVE Lab Manual

Kimya

Extraction

<p><strong>Extraction</strong></p>
<p>Extraction is a common technique used in organic chemistry to isolate a target compound. In the extraction process, a solute is transferred from one phase to another to separate it from unreacted starting materials or impurities. Extraction is also used to facilitate the isolation of a solute from a reaction solvent that is difficult to remove by evaporation, such as a solvent with a high boiling point.<span style="color: rgb(0, 0, 0); font-family: Roboto, RobotoDraft, Helvetica, Arial, sans-serif; font-size: 13px; font-style: normal; font-variant-ligatures: normal; font-variant-caps: normal; font-weight: 400; letter-spacing: normal; orphans: 2; text-align: start; text-indent: 0px; text-transform: none; white-space: pre-wrap; widows: 2; word-spacing: 0px; -webkit-text-stroke-width: 0px; background-color: rgb(255, 255, 255); text-decoration-style: initial; text-decoration-color: initial; display: inline !important; float: none;"> </span>Generally, there are three types of extractions. First, in solid-liquid extraction, the solute is transferred from a solid phase to a liquid phase. In liquid-liquid extraction, a solute is transferred from one liquid to another. In acid-base extraction, a solute is transformed into an ionic compound and transferred from an organic phase to an aqueous phase. A common example of extraction is the brewing coffee or tea. The solid phase, which contains the caffeine, plant flavors, and odors, is extracted by the hot water into the liquid phase.</p>
<p><strong>Liquid-Liquid Extraction</strong></p>
<p>A liquid-liquid extraction either transfers an organic compound that is dissolved in an aqueous phase to an organic solvent, or it is used to transfer unreacted reactants, salts, and other water-soluble impurities to the aqueous phase while leaving the organic compound of interest in the organic phase. Immiscible liquids are liquids that never form a homogenous solution, even when thoroughly mixed. Instead, immiscible liquids separate into different phases, like oil and water.</p>
<p>A liquid-liquid extraction transfers an organic compound that is dissolved in an aqueous phase to an organic solvent. To perform a liquid-liquid extraction, first, the aqueous solution containing the solute is added to a separatory funnel. Then, a non-water-soluble organic solvent is added to the separatory funnel. When the contents of the funnel are mixed well, the organic compound partitions into the organic phase based on its higher solubility in the organic phase than the aqueous phase.</p>
<p>Since the two solvents are immiscible, the two liquids form discrete layers, with the dense liquid on the bottom and the less dense liquid on the top. Once the two phases settle back into two layers, they are separated by opening the stopcock at the bottom of the separatory funnel and allowing one layer to flow out. The liquid that had the solute removed is called the raffinate, while the liquid that gained the solute is called the extract.</p>
<p>The organic compound is partitioned between the two layers based on its solubility in each phase. Equilibrium is reached when the chemical potential of the solute is the same in the two phases. The partition coefficient for a solute, K, is the ratio of the concentration of the sample in the organic layer divided by the concentration in the aqueous phase. The partition coefficient is a constant dependent on both the solute and the pair of solvents used in the extraction. The partition coefficient is an expression of preference of the solute for each of the two solvents. Solutes with a large partition coefficient have a higher tendency to be extracted into the organic solvent layer. Solutes with small partition coefficients prefer to transition into the aqueous phase.</p>
<p>Determining which solvent pair to use for a liquid-liquid extraction is a vital step. Consider the following when choosing which solvents to use: First, the solute must be more soluble in the solvent than in water. Therefore, knowing the partition coefficient of the solute in a potential solvent pair is necessary. Second, the solvent-pair must be immiscible in water and not form a homogeneous solution when mixed. Third, the solvents must be inert and not react with the solute. The solvent should also be volatile so that it can be removed from the solute easily. The water-immiscible organic solvent generally possesses a non-polar or low polarity.</p>
<p>It is also critical to know the densities of the solvents to determine the identities of the top and bottom layers. Most organic liquids have a lower density than water, with the exception of chlorinated organic solvents, and will settle to the bottom of the separatory funnel.</p>
<p><strong>Acid-Base Extraction</strong></p>
<p>Acid-base extraction is a type of liquid-liquid extraction that separates organic compounds based on their acid-base properties. If a solute is an acid or base, its charge changes as the pH is changed. Generally, most organic compounds are neutral, and therefore more soluble in organic solvents than they are in water. However, if the organic compound becomes ionic, then it becomes more soluble in water. This is useful in extracting an organic acid or base compound from an organic phase to an aqueous phase.</p>
<p>Acid-base extraction harnesses this property by transforming the solute into its water-soluble salt form, thereby changing its solubility. The solubility of the organic compound and its salt must be dramatically different in order for the technique to be effective.</p>
<p>For example, consider a mixture containing an organic carboxylic acid, an amine, and a neutral compound. Carboxylic acids consisting of six carbons or more are insoluble in water and entirely soluble in organic solvents. However, their conjugate bases (an ionic compound) are water-soluble and insoluble in organic solvents. An amine consisting of at least seven carbons is insoluble in water but soluble in organic solvents. The conjugate acid of that amine (an ionic compound) is water-soluble and insoluble in organic solvents.</p>
<p>When reacted with a base, the carboxylic acid is neutralized to its salt form. The other compounds in the mixture remain neutral. Once the carboxylic acid is transformed into a salt, it will partition to the aqueous phase, while the neutral compounds remain in the organic phase.</p>
<p>Acid-base extraction is also used to separate two weak acids or two weak bases with a significant difference in their pK<sub>a</sub>. In the case of the acids, the relatively stronger acid, having a small pKa value, is neutralized to a salt using a weak base. The weak base does not efficiently react with the weaker acid, and only the stronger acid is transformed to a salt. Then, the salt is extracted into the aqueous phase during extraction. The process follows similarly for weak bases, where the relatively stronger base is neutralized to a salt using a weak acid.</p>
<p><strong>References</strong></p>
<ol>
	<li style="font-size:17px">Harris, D.C. (2015). <em>Quantitative Chemical Analysis.</em> New York, NY: W.H. Freeman and Company.</li>
</ol>

Extraction: Liquid-Liquid and Acid-Base Extraction - Concept

Çıkarma

Extraction
Extraction is a common technique used in organic chemistry to isolate a target compound. In the extraction process, a solute is transferred ...

Scientific Measurement and Lab Skills

<p>Source: Smaa Koraym at Johns Hopkins University, MD, USA</p>
<ol class="note-items">
	<li data-note-item="1" data-parent-collapse="">Preparation of the Laboratory<button class="expand">Expand</button>
	<p><em>Here, we show the laboratory preparation for 10 students working individually, with some excess. Please adjust quantities as needed.</em></p>
	<ul class="lab-items">
		<li data-sub-note-item="1-2">
		<div class="lab-step">To set up for this lab experiment, wear the appropriate personal protective equipment, including a lab coat, chemical splash goggles, and gloves.</div>
		</li>
		<li data-sub-note-item="1-3">
		<div class="lab-step">Prepare a 1.5 x 10<sup>-5</sup> M erythrosin B red dye solution. To prepare 500 mL of this solution, weigh 0.0066 g of erythrosin B on an analytical balance.</div>
		</li>
		<li data-sub-note-item="1-4">
		<div class="lab-step">Transfer the erythrosin B to a 250-mL Erlenmeyer flask. Then, measure 200 mL of deionized water and add it to the flask. Place a magnetic stir bar in the flask, set the flask on a stir plate, and mix the solution until it appears homogeneous.</div>
		</li>
		<li data-sub-note-item="1-5">
		<div class="lab-step">Use a funnel to pour the solution into a 500-mL volumetric flask, and carefully fill the flask to the line using deionized water. Seal the top of the flask with paraffin film and invert it several times until the solution is well-mixed.</div>
		</li>
		<li data-sub-note-item="1-6">
		<div class="lab-step">Label a 500-mL squeeze bottle with the concentration and transfer the solution into the bottle. Store the bottle on a mat in the hood.<strong> Note: </strong>Take significant figures into account.</div>
		</li>
		<li data-sub-note-item="1-7">
		<div class="lab-step">Place acetone in an area so that students have access to it during the lab. <strong>Note: </strong>Each student will need about 40 mL.</div>
		</li>
		<li data-sub-note-item="1-8">
		<div class="lab-step">Set weigh boats, scoops, and a container of sand next to a balance. <strong>Note: </strong>Each student will need about 3 g.</div>
		</li>
		<li data-sub-note-item="1-9">
		<div class="lab-step">Place an organic waste container in a central hood.</div>
		</li>
		<li data-sub-note-item="1-10">
		<div class="lab-step">Set out the following glassware and equipment at each student lab station (we suggest students work independently during this lab):
		<table align="center" style="border-collapse: collapse; font-size: 17px; line-height: 24px;">
			<tbody>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;50-mL beaker</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;100-mL beaker</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;250-mL beaker</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;400-mL beaker</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;600-mL beaker</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;500-mL filter flask</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;B&#252;chner funnel</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;10-mL graduated cylinder</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;Watch glass</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;5-mL volumetric pipette</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;10-mL volumetric pipette</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;10-mL capacity pipetter</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;10-mL volumetric flask</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;String (18 in)</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;Silicone vacuum tubing (18 in)</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;12-in ruler</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;Rubber adapter</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;Rubber stopper</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;Glass stirring rod</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;Rubber policeman</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;Disposable pipette</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;Bottle of deionized water</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;Lab mat</td>
				</tr>
				<tr>
					<td style="border: 1px solid; padding: 0px; ">&#160;1&#160;&#160;&#160;&#160;Box of filter papers (1 filter paper per student)</td>
				</tr>
			</tbody>
		</table>
		</div>
		</li>
	</ul>
	</li>
</ol>

Two-Dimensional Graphs, Curve Fitting, and Standard Deviation - Prep

Bilimsel Ölçüm ve Laboratuvar Becerileri

Source: Smaa Koraym at Johns Hopkins University, MD, USA

	Preparation of the LaboratoryExpand
	Here, we show the laboratory preparation for 10 students ...

Lab Manual Sub Articles

Energy Dynamics

<ol class="note-items"><li data-note-item="1" data-parent-collapse="">Caterpillar Energy Dynamics
<button class="expand">Expand</button><ul class="lab-items"><li data-sub-note-item="1-1"><div class="lab-step">NOTE: In this lab you will grow caterpillars in conditions with and without food to examine the transfer of biomass in a typical trophic system.
</div></li><li data-sub-note-item="1-2"><div class="lab-step">Weigh and record the wet mass of enough leaves of cabbage to line the bottom of a plastic tub.
</div></li><li data-sub-note-item="1-3"><div class="lab-step">Then, collect two batches of five caterpillars from their cabbage habitat, and weigh and record the wet mass of each batch separately in individual weigh boats. Make sure to tare the balance before each measurement. HYPOTHESES: The experimental hypothesis is that only a fraction of energy will be transferred between the trophic levels of the cabbage and the caterpillars and a significant amount will be lost as waste and heat energy. The null hypothesis is that there will be no significant difference between the energy input from the cabbage, and the obtained energy stored as biomass in the caterpillars.
</div></li><li data-sub-note-item="1-4"><div class="lab-step">Place the weighed cabbage and five caterpillars in a plastic tub lined with damp paper towels, leaving the lid slightly cracked open for ventilation, but not wide enough for the animals to escape.
</div></li><li data-sub-note-item="1-5"><div class="lab-step">Place the other five caterpillars in a second clean container prepared the same way, but with no cabbage.
</div></li><li data-sub-note-item="1-6"><div class="lab-step">After three days, transfer the caterpillars to new weigh boats, and weigh and record the final wet mass of both groups of caterpillars and the cabbage.
</div></li><li data-sub-note-item="1-7"><div class="lab-step">Then place the caterpillar waste, or frass, and cabbage into two separate dishes, and put both dishes into a 37 &#176;C incubator to dry for 48 hours.
</div></li><li data-sub-note-item="1-8"><div class="lab-step">Euthanize the weighed caterpillars by putting them into a minus 20 &#176;C freezer for 24 hours.
</div></li><li data-sub-note-item="1-9"><div class="lab-step">Then, transfer the dishes to a 37 &#176;C incubator for 48 hours.
</div></li><li data-sub-note-item="1-10"><div class="lab-step">After drying, weigh and record the dry mass of the uneaten cabbage, the two groups of caterpillars, and the frass, and use these data to calculate the percent biomass of the caterpillars.
</div></li><li data-sub-note-item="1-11"><div class="lab-step">Finally, discard all of the dried organisms and plates into the hazardous waste bin, and wipe down your workspace with 70% ethanol.
</div></li></ul></li><li data-note-item="2" data-parent-collapse="">Results
<button class="expand">Expand</button><ul class="lab-items"><li data-sub-note-item="2-1"><div class="lab-step">Take a look at the data you collected. Ensure the initial wet mass, the final wet mass, and the final dry mass columns are accurately filled out in your table. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/CDNSource/lm/labs/13/Table_1_Energy_Dynamics.xlsx" style="display:block;margin:20px;" target="__blank">Click Here to download Table 1</a>
</div></li><li data-sub-note-item="2-2"><div class="lab-step">NOTE: Remember an object&#39;s biomass is equal to its dry mass. Therefore, percent biomass for each group is the final dry mass divided by the final wet mass times 100. For example, obtain the percent biomass of the cabbage by dividing the final dry mass by the final wet mass and multiplying by 100. This means that approximately 15% of the cabbage&#39;s total weight is biomass.
</div></li><li data-sub-note-item="2-3"><div class="lab-step">After this, estimate the initial biomass of the cabbage and caterpillars by multiplying the percent biomass by the initial wet mass, and put the values in this new table. NOTE: Remember, biomass equals dry mass. Therefore, the final dry mass is equal to the final biomass of each group.
</div></li><li data-sub-note-item="2-4"><div class="lab-step">To calculate the approximate initial and final energy in the form of kilocalories within the cabbage, caterpillars, and frass, multiply the biomass values recorded in your table by the conversions, and record the calculated values in the table. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/CDNSource/lm/labs/13/Table_2_Energy_Dynamics.xlsx" style="display:block;margin:20px;" target="__blank">Click Here to download Table 2</a>
</div></li><li data-sub-note-item="2-5"><div class="lab-step">After this, subtract the initial energy from the final energy to obtain the change in energy for each group.
</div></li><li data-sub-note-item="2-6"><div class="lab-step">NOTE: The negative sign denotes loss in energy, and positive indicates gain.
</div></li><li data-sub-note-item="2-7"><div class="lab-step">Using your data table, calculate the energy in kilocalories that the fed caterpillars lost to respiration. The formula is the energy gained from cabbage, which is the positive of the energy lost by cabbage, minus the biomass gained from cabbage, minus the energy lost via frass. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/CDNSource/lm/labs/13/Table_3_Energy_Dynamics.xlsx" style="display:block;margin:20px;" target="__blank">Click Here to download Table 3</a>
</div></li><li data-sub-note-item="2-8"><div class="lab-step">Then, repeat the same calculation for the unfed group of caterpillars. Make another column in the table and note this down.
</div></li><li data-sub-note-item="2-9"><div class="lab-step">Finally, add up all of the energy gained via biomass and cabbage consumption, and the energy lost via frass and respiration for each group of caterpillars. NOTE: For both groups of caterpillars the net energy is zero, meaning that this experiment obeyed the first law of thermodynamics.
</div></li></ul></li></ol>

Studying Energy Dynamics and Productivity - Procedure

Enerji Dinamiği

Caterpillar Energy Dynamics
ExpandNOTE: In this lab you will grow caterpillars in conditions with and without food to examine the transfer of biomass in a ...

Biyoloji

Ekoloji

Animal Behavior

<ol class="note-items"><li data-note-item="1" data-parent-collapse="">Making Choice Chambers
<button class="expand">Expand</button><ul class="lab-items"><li data-sub-note-item="1-1"><div class="lab-step">Before beginning the experiments, use one of the Sharpies from the lab table to trace a line around the circumference of the bottom of both bottles. One line should be 1 cm from the base of the bottle and the other should be 1.5 cm from the base of the bottle.
</div></li><li data-sub-note-item="1-2"><div class="lab-step">Use a razor blade to make a small cut in each bottle at the mark. 
</div></li><li data-sub-note-item="1-3"><div class="lab-step">Then, insert the scissors and carefully cut along the line until the bottoms of the bottles are removed completely.
</div></li><li data-sub-note-item="1-4"><div class="lab-step">Fit one bottle bottom into the other.
</div></li><li data-sub-note-item="1-5"><div class="lab-step">Tape the bottles together to make a secure chamber.
</div></li><li data-sub-note-item="1-6"><div class="lab-step">Use the razor blade and scissors to poke a hole into the center of the chamber. 
</div></li><li data-sub-note-item="1-7"><div class="lab-step">Take a piece of tape and fold the edge onto itself to make a tab and place the tape over the hole.  Note: The tab helps with easy removal and reattachment of the tape to the chamber.
</div></li><li data-sub-note-item="1-8"><div class="lab-step">Use the Sharpie to label one side of the chamber A and the other side B.
</div></li><li data-sub-note-item="1-9"><div class="lab-step">Upon receiving the colony of <em>Drosophila</em>, perform a count to make sure there are 40 living individuals in the vial.
</div></li></ul></li><li data-note-item="2" data-parent-collapse="">Geotaxis
<button class="expand">Expand</button><ul class="lab-items"><li data-sub-note-item="2-1"><div class="lab-step">To perform a geotaxis assay, first attach a clean, empty bottle cap to each end of the choice chamber and turn the fly vial upside down onto its lid.
</div></li><li data-sub-note-item="2-2"><div class="lab-step">Open the tape flap in the center of the choice chamber.
</div></li><li data-sub-note-item="2-3"><div class="lab-step">Insert the funnel into the hole and tap all of the flies into the chamber. HYPOTHESES: The alternate hypothesis is that more flies will be moving against gravity, or up, regardless of the orientation of the choice chamber. Alternatively, if the flies are positively geotactic, then more flies will move down, or with gravity. The null hypothesis is that the flies will have no preference with regard to gravity and will move randomly within the chamber. 
</div></li><li data-sub-note-item="2-4"><div class="lab-step">Once the <em>Drosophila</em> are in the chamber, close the tape flap, rotate the chamber so that it stands vertically with side A on the bottom, and start the timer.
</div></li><li data-sub-note-item="2-5"><div class="lab-step">Immediately, count the number of <em>Drosophila</em> that are moving up and the number that are moving down. Record these data for time point 0 in the table. 
</div></li><li data-sub-note-item="2-6"><div class="lab-step">After 30 seconds, rotate the chamber so that side B is on the bottom and count the number of <em>Drosophila</em> that are moving up or down. Record these data for time point 30 in the table.
</div></li><li data-sub-note-item="2-7"><div class="lab-step">After 60 seconds, rotate the chamber so that side A is on the bottom again and record the number of moving flies for time point 60.  <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/CDNSource/lm/labs/15/Table_1_Animal_behavior.xlsx" style="display:block;margin:20px;" target="__blank">Click Here to download Table 1</a>
</div></li><li data-sub-note-item="2-8"><div class="lab-step">Hold the chamber over the fly vial and carefully open the cap to return all of the <em>Drosophila</em> back to their empty vial. 
</div></li></ul></li><li data-note-item="3" data-parent-collapse="">Phototaxis
<button class="expand">Expand</button><ul class="lab-items"><li data-sub-note-item="3-1"><div class="lab-step">To perform a phototaxis analysis, first cover side A of the choice chamber with tin foil, taking care that the foil reaches to the exact center between the two sides. 
</div></li><li data-sub-note-item="3-2"><div class="lab-step">Ensure the caps are secured on both ends of the chamber.  HYPOTHESES: In this exercise, the alternative hypothesis is that more flies will be found in the light side of the choice chamber, if the flues are attracted to light, or on the dark side if they are repelled by light. The null hypothesis is that <em>Drosophila</em> will have no preference with regard to either stimulus. Therefore, equal numbers of flies will be found on either side of the choice chamber.
</div></li><li data-sub-note-item="3-3"><div class="lab-step">Open the tape flap in the center of the choice chamber, insert the funnel into the hole, and tap all 40 flies into the chamber as previously described.
</div></li><li data-sub-note-item="3-4"><div class="lab-step">Set the timer to sound an alarm at 10 minutes.
</div></li><li data-sub-note-item="3-5"><div class="lab-step">When the alarm sounds, stop the timer, and count the number of flies in the open side B of the chamber.
</div></li><li data-sub-note-item="3-6"><div class="lab-step">Subtract that number from the total number of flies added to the choice chamber to calculate the number of flies in the covered side A.
</div></li><li data-sub-note-item="3-7"><div class="lab-step">Record these data in the table for time point 10.  <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/CDNSource/lm/labs/15/Table_2_Animal_behavior.xlsx" style="display:block;margin:20px;" target="__blank">Click Here to download Table 2</a>
</div></li><li data-sub-note-item="3-8"><div class="lab-step">Carefully, return all of the flies back to their empty vial.
</div></li></ul></li><li data-note-item="4" data-parent-collapse="">Chemotaxis
<button class="expand">Expand</button><ul class="lab-items"><li data-sub-note-item="4-1"><div class="lab-step">HYPOTHESES: In this exercise, the alternative hypothesis is that more flies will be found on the side of the chamber with the apple cider vinegar if the flies are attracted to the odor. Or, if the flies are repelled by the vinegar, then more of them will be found on the side of the chamber presenting the odorless water. The null hypothesis is that <em>Drosophila</em> will have no preference with regard to either stimulus and will move randomly in the chamber.  Use an individual disposable plastic pipette to dispense two drops of the apple cider vinegar onto one cotton ball for side A of the chamber. 
</div></li><li data-sub-note-item="4-2"><div class="lab-step">Use an individual disposable plastic pipette to dispense two drops of the distilled water onto a cotton ball for side B of the chamber. 
</div></li><li data-sub-note-item="4-3"><div class="lab-step">Fold two pieces of tape over themselves to create individual pieces of double-sided tape and use the tape to attach each cotton ball to the inside of the single bottle cap.
</div></li><li data-sub-note-item="4-4"><div class="lab-step">Screw the bottle caps with the cotton balls onto their corresponding sides of the chamber.
</div></li><li data-sub-note-item="4-5"><div class="lab-step">Transfer all of the flies into the chamber and set the timer to sound an alarm after 10 minutes. 
</div></li><li data-sub-note-item="4-6"><div class="lab-step">When the alarm sounds, stop the timer and record the number of flies in each side of the chamber. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/CDNSource/lm/labs/15/Table_3_Animal_behavior.xlsx" style="display:block;margin:20px;" target="__blank">Click Here to download Table 3</a>
</div></li><li data-sub-note-item="4-7"><div class="lab-step">At the end of the final experiment, funnel the flies into a morgue tube containing 70% ethanol. 
</div></li><li data-sub-note-item="4-8"><div class="lab-step">Dismantle the choice chambers for recycling.  NOTE: Since all of the chemicals used in these experiments are lab safe, the liquids can be disposed of down the sink, the chambers rinsed, and the solids can be thrown away in the trash. 
</div></li></ul></li><li data-note-item="5" data-parent-collapse="">Results
<button class="expand">Expand</button><ul class="lab-items"><li data-sub-note-item="5-1"><div class="lab-step">Gather all of the data collected for the geotaxis, phototaxis, and chemotaxis experiments.
</div></li><li data-sub-note-item="5-2"><div class="lab-step">Plot these values as bar graphs for different conditions and different time points.
</div></li><li data-sub-note-item="5-3"><div class="lab-step">Use these data to draw inferences about the behavior of <em>drosophila melanogaster</em>. 
</div></li></ul></li></ol>

Animal Behavior: Studying Taxis Behavior of Drosophila - Procedure

Hayvan Davranışı

Making Choice Chambers
ExpandBefore beginning the experiments, use one of the Sharpies from the lab table to trace a line around the circumference of the ...

Natural Selection

<ol class="note-items"><li data-note-item="1" data-parent-collapse="">Simulating Natural Selection
<button class="expand">Expand</button><ul class="lab-items"><li data-sub-note-item="1-1"><div class="lab-step">To prepare for the lab, set out workstations for each student pair containing 6 white, 6 black, and 13 gray 12 inch pipe cleaners.
</div></li><li data-sub-note-item="1-2"><div class="lab-step">Then, add 62 pipe cleaners in any color but black, white or gray, a roll of tape, and a pair of scissors.
</div></li><li data-sub-note-item="1-3"><div class="lab-step">Also, place one piece of black construction paper and one piece of white construction paper at each station.
</div></li><li data-sub-note-item="1-4"><div class="lab-step">Finally, print out tables so that there are enough for each set of partners in the class.
</div></li><li data-sub-note-item="1-5"><div class="lab-step">To save materials for subsequent labs, inform students to save the materials and to avoid damaging them as much as possible.
</div></li></ul></li></ol>

Natural Selection: Calculating Fitness and Selection - Prep

Doğal Seleksiyon

Simulating Natural Selection
ExpandTo prepare for the lab, set out workstations for each student pair containing 6 white, 6 black, and 13 gray 12 inch ...

Evrim

Scientific Method

<ol class="note-items"><li data-note-item="1" data-parent-collapse="">Demonstrating the Scientific Method with Tree Branches
<button class="expand">Expand</button><ul class="lab-items"><li data-sub-note-item="1-1"><div class="lab-step">Obtain branches containing a few dozen typical leaves from five different local tree species. The branches should represent a range of leaf and tree types. 
</div></li><li data-sub-note-item="1-2"><div class="lab-step">Label each branch and leaf with their species name. 
</div></li><li data-sub-note-item="1-3"><div class="lab-step">Distribute the branches to the students, so that each student has access to all five species. 
</div></li><li data-sub-note-item="1-4"><div class="lab-step">Provide some background information about the environment from which each branch was collected. 
</div></li></ul></li></ol>

Scientific Method: Steps and Applications - Prep

Bilimsel Yöntem

Demonstrating the Scientific Method with Tree Branches
ExpandObtain branches containing a few dozen typical leaves from five different local tree species. ...

Temel Bilgiler

Measuring Biodiversity

<ol class="note-items"><li data-note-item="1" data-parent-collapse="">Quadrats and Transects Preparation
<button class="expand">Expand</button><ul class="lab-items"><li data-sub-note-item="1-1"><div class="lab-step">Start by tying a knot at the beginning, end and every 5 feet of six 20-foot pieces of rope.
</div></li><li data-sub-note-item="1-2"><div class="lab-step">Then, identify three outdoor areas near the classroom, each containing a variety of at least four plant species.  NOTE: Surprisingly, grassy areas often contain at least four plant species. Although most plants in these areas will be of a single grass species, there are usually many weeds, such as clovers or dandelions mixed in. Therefore, a well-kept grassy area without shade, a well-kept grassy area with shade, for example under a tree, and a weedy field could be used for the three different habitats that they students will be moving between.
</div></li><li data-sub-note-item="1-3"><div class="lab-step">Place two ropes parallel to each other within each of the habitats. It does not matter which direction the ropes face as long as the entire length of rope is within each area and a hula hoop can be placed on either side of the ropes within the habitat.
</div></li><li data-sub-note-item="1-4"><div class="lab-step">Finally, back in the lab set out enough plant identification guides for each student group to have at least one.
</div></li><li data-sub-note-item="1-5"><div class="lab-step">Also set out enough hula hoops so that each group has one to use as a sampling quadrat.
</div></li></ul></li><li data-note-item="2" data-parent-collapse="">Diversity Lab Simulation Preparation
<button class="expand">Expand</button><ul class="lab-items"><li data-sub-note-item="2-1"><div class="lab-step">Before beginning the species accumulation curves and richness evenness activity, place 50 colored beads into one paper bag. The bag should contain 15 black beads, 10 purple beads, 8 red beads, 5 green beads, 3 blue beads, 3 yellow beads, 2 pink beads, 2 brown beads, 1 orange bead and 1 white bead.
</div></li><li data-sub-note-item="2-2"><div class="lab-step">Label this bag Community A.
</div></li><li data-sub-note-item="2-3"><div class="lab-step">Then, add five beads of each color to the second bag and mark this bag Community B.
</div></li></ul></li></ol>

Biyoçeşitliliğin Ölçülmesi

Quadrats and Transects Preparation
ExpandStart by tying a knot at the beginning, end and every 5 feet of six 20-foot pieces of rope.
Then, identify three ...

Animal Diversity

<ol class="note-items"><li data-note-item="1" data-parent-collapse="">Form and Function of Crickets and Crayfish
<button class="expand">Expand</button><ul class="lab-items"><li data-sub-note-item="1-1"><div class="lab-step">This lab involves dissection of both crickets and crayfish. You will need one cricket and one crayfish for each pair of students. IMPORTANT: Purchase the largest crickets available and place them in the freezer the night before.
</div></li><li data-sub-note-item="1-2"><div class="lab-step">On the day of the lab if they are frozen, allow the crickets to thaw for at least three hours before the dissections begin.
</div></li><li data-sub-note-item="1-3"><div class="lab-step">While waiting for the crickets to thaw, melt dissecting wax in a microwave or on a hotplate until it is completely liquefied.
</div></li><li data-sub-note-item="1-4"><div class="lab-step">Fill enough Petri dishes to have one per student pair to around halfway. Allow these plates to harden at room temperature.
</div></li><li data-sub-note-item="1-5"><div class="lab-step">Next set out a dissecting tray, 12 pins, scissors and a needle probe for each pair of students.
</div></li><li data-sub-note-item="1-6"><div class="lab-step">Also set up a few dissecting microscopes around the room and turn them on. NOTE: Generally, one microscope for four students is sufficient.
</div></li><li data-sub-note-item="1-7"><div class="lab-step">Then, set out a pitcher or beaker of water for students to use during the cricket dissection.
</div></li></ul></li></ol>

Animal Diversity: Form and Function of Crickets and Crayfish - Prep

Hayvan Çeşitliliği

Form and Function of Crickets and Crayfish
ExpandThis lab involves dissection of both crickets and crayfish. You will need one cricket and one crayfish ...

Evolutionary Relationships

<ol class="note-items"><li data-note-item="1" data-parent-collapse="">Forming an Evolutionary Hypothesis
<button class="expand">Expand</button><ul class="lab-items"><li data-sub-note-item="1-1"><div class="lab-step">NOTE: A cladogram is an important tool for forming an evolutionary hypothesis. A cladogram is a tree-shaped chart used to depict the hypothetical genealogical relationships between species. The tips or leaves of the chart represent specific species and the branches of the tree are different lengths. The different lengths represent the degree of change between each of the species. The common ancestor of all of the species that a specific line branches from is located at a node, where the branches intersect. Species that share a node are called a sister group.
</div></li><li data-sub-note-item="1-2"><div class="lab-step">To begin, look at the provided blank cladogram and make a hypothesis about where the assigned animals should be placed on the tree. If a blank cladogram has not been provided please <a target="_blank" href="/files/ftp_upload/10562/Blank_Cladogram.png">download one here</a>.
</div></li><li data-sub-note-item="1-3"><div class="lab-step">Next, observe the image of the fossilized animal.
</div></li><li data-sub-note-item="1-4"><div class="lab-step">Using the morphology, or physical characteristics, of the fossil, make a hypothesis about where on your cladogram it should be placed. Add a new line or mark to indicate your proposed position for the fossil.
</div></li></ul></li><li data-note-item="2" data-parent-collapse="">Comparing Gene Sequences Using BLAST
<button class="expand">Expand</button><ul class="lab-items"><li data-sub-note-item="2-1"><div class="lab-step">NOTE: Historically, cladograms have been constructed through the comparison of morphology. Now, genetic sequences can also be compared between species of interest to construct cladograms. DNA sequences are not usually preserved in fossils, so for this lab you will use the BLAST database to compare the DNA sequences of living species that are closely related to the fossil to thousands of other living species.
</div></li><li data-sub-note-item="2-2"><div class="lab-step">Before beginning this lab, your instructor will have downloaded the three preserved gene sequences to a folder on your desktop.
</div></li><li data-sub-note-item="2-3"><div class="lab-step">Navigate to the BLAST homepage, which the instructor should have left open in your browser, and click on Saved Strategies from the menu at the top of the page.
</div></li><li data-sub-note-item="2-4"><div class="lab-step">Click Open on the Evolutionary_Relationships_Gene1.txt file.
</div></li><li data-sub-note-item="2-5"><div class="lab-step">Then, click View to go to the Standard Nucleotide BLAST search page. You should be able to see the DNA sequence in the Query Sequence box at the top-right of the screen.
</div></li><li data-sub-note-item="2-6"><div class="lab-step">Scroll to the bottom of the screen and click the BLAST button. Note: It will take a few moments to process and analyze the data. 
</div></li><li data-sub-note-item="2-7"><div class="lab-step">When the data has been processed, a graphic summary will appear.  NOTE: Your query sequence is represented by the blue line at the top of the box. Each of the lines below the blue line represents another sequence in the BLAST database that matches your query. The length and location of these bars represent where and how much of the sequence match up to the query. The color of the bar represents its score, or how identical the sequence is to the query. Below the graphic summary is the Sequences producing significant alignments list, which contains descriptions of the DNA sequences retrieved from the database that most closely align with the query sentence. These are listed in descending order, from the most similar at the top to the least similar at the bottom. On the right, there are several statistics on how closely related each database sequence is to the experimental sequence. The higher the Max, Total, Query Coverage, and Identity scores are, the more similar the query and retrieved sequences are to each other. Similarly, the lower the E value number, the less likely the sequences match was found by random chance and more significantly the alignment is accurate. An E value of 0 indicates a highly significant match.
</div></li><li data-sub-note-item="2-8"><div class="lab-step">Click on the name of the description of the most similar alignment listed. This will take you further down the page to the exact DNA sequence alignment between the retrieved sequence and the query sequence.
</div></li><li data-sub-note-item="2-9"><div class="lab-step">Click on the Sequence ID number. This will open a new tab with more specific information on the retrieved gene sequence.
</div></li><li data-sub-note-item="2-10"><div class="lab-step">Identify and record the scientific and common names of the organism, which should be listed next to Source.
</div></li><li data-sub-note-item="2-11"><div class="lab-step">Identify and record the protein that the gene codes for, which should be listed next to Definition.
</div></li><li data-sub-note-item="2-12"><div class="lab-step">Close the tab and hit Back to return to the Sequences producing significant alignments list.
</div></li><li data-sub-note-item="2-13"><div class="lab-step">Then, repeat steps 7 &#8211; 9 for the next most similar sequences.
</div></li><li data-sub-note-item="2-14"><div class="lab-step">After collecting several species names, return to the Sequences producing significant alignments list and click Select: All to check all of the boxes next to the names of each listed alignment sequence.
</div></li><li data-sub-note-item="2-15"><div class="lab-step">Click on Distance of tree results to create a phylogram based on the similarity of all of the BLAST result gene sequences to the query gene sequence.  Note: Your query fossil relative sequence will be highlighted in yellow.
</div></li><li data-sub-note-item="2-16"><div class="lab-step">Record your sequence&#8217;s location in relation to the other taxon groups shown in the tree.
</div></li><li data-sub-note-item="2-17"><div class="lab-step">Finally, return to the Saved Strategies tab and upload the next saved gene sequence.
</div></li><li data-sub-note-item="2-18"><div class="lab-step">Query the remaining two fossil relative DNA sequences as previously demonstrated (steps 1 &#8211; 16).
</div></li></ul></li><li data-note-item="3" data-parent-collapse="">Data Analysis
<button class="expand">Expand</button><ul class="lab-items"><li data-sub-note-item="3-1"><div class="lab-step">Based on your gene sequence results, come up with a second hypothesis about where your fossil specimen fit in the original cladogram.
</div></li><li data-sub-note-item="3-2"><div class="lab-step">Compare this placement with your first hypothesis.
</div></li><li data-sub-note-item="3-3"><div class="lab-step">Compare your tree with your classmates&#8217;. If any of your classmates put the fossil on a different branch, ask them how they came to that decision.
</div></li></ul></li></ol>

Evolutionary Relationships: Using BLAST to Test Evolutionary Hypotheses - Procedure

Evrimsel İlişkiler

Forming an Evolutionary Hypothesis
ExpandNOTE: A cladogram is an important tool for forming an evolutionary hypothesis. A cladogram is a tree-shaped chart ...