Yazarlar onun mükemmel teknik yardım, konfokal ve zaman atlamalı mikroskopi konularındaki teknik danışmanlık için Andreas Wodarz ve Stephan Heermann&#39;ın için Chalid Ghadban teşekkür ederim. Yazarların herhangi için herhangi bir çıkar çatışması yoktur. Bu çalışma Dres tarafından, Forschergruppe 942 Proje 2 (FOR942 BI 703/3-1) Alman Araştırma Kurumu (DFG) tarafından finanse edilmektedir. Bayer-Stiftung (Baden Württembergischer Krebspreis, Almanya) ve Tıp Fakültesi, Georg-August-Üniversitesi Göttingen, Almanya Araştırma Programı tarafından.

Bu yeni model, daha önce yayınlanan organotipik hipokampal beyin dilim yaklaşımın 9-12 bir uyarlamasıdır. Değişiklikler ve ilave kanser hücresi-beyin dokusu etkileşimlerini optimize etmek ve garanti etmek için tekrarlanabilirlik tanıtıldı. Çalışma gözden ve yerel etik kurul tarafından onaylandı. Hayvanlar Üniversitesi Tıp Göttingen&#39;de hayvan bakım kurallarına göre özenle tedavi edildi. Organotipik beyin dilim kokültürü iki adım ayrılabilir. Birinci adım Organotipik beyin dilim hazırlanmasıdır. İkinci adım kokültürü modelinde tümör hücre hazırlama ve birikmesini içerir. 1.. Organotipik Beyin Dilim <ol><li> 0.2 mM glutamin, 100 U / ml penisilin, 100 mg / ml streptomisin, ve glukoz 4.5 mg / ml ile takviye edilmiş minimum temel ortam (MEM), aşağıdakilerden oluşan diseksiyon orta hazırlayın. </li><li> Doğum sonrası günler arasında herhangi bir fare suşundan fareler başını kesmekAltı ve sekiz (P6-8). </li><li> Aseptik koşullar altında hızlı bir şekilde kafatası beyin çıkarın ve buz gibi soğuk diseksiyon ortamına aktarmak. </li><li> Bütün beyin bölümünden ön kutup ve beyincik çıkarın. </li><li> Düzeltmek ve kriyo tutkal ve 5% agaroz ile bir sahnede beyin stabilize. </li><li> Bir Vibratome kullanarak 350 mikron kalınlığında yatay beyin bölümleri dilimleyin. </li><li> Türler ve yaşına bağlı olarak, tek bir fare beyninden 05:56 tüm beyin dilimleri toplayın. </li><li> % 50 MEM oluşan kültür ortamı hazırlanır,% 25 Hanks dengeli tuz çözeltisi (HBSS),% 25 normal at serumu (NHS), 0.2 mM glutamin, 100 U / ml penisilin, 100 mg / ml streptomisin (Sigma, Münih, Almanya) ve 4.5 mg / ml glükoz. </li><li> Alt de kültür ortamı içinde 1 ml olan bir altı-çukurlu plaka içinde bir 0.4 um polikarbonat membran transwell uç üzerindeki her Organotipik beyin dilim koyun. </li><li> Bir nemlendirilmiş Kültür organotipik beyin dilimleri gecede37 ° C inkübatör% 5 CO 2 ile d atmosfer. </li></ol> 2. Dilim Coculture Modeli <ol><li> GFP ile transfekte edilmiş tümör veya başka hücrelerden% 15 RPMI ortamı ve% 85 ECM jel oluşan 20 ul jel matrisi içinde (örneğin, MCF-7-hücreleri GFP), 10 5, katıştırma. </li><li> Organotipik beyin dilim kortikal bölgede doğrudan bitişik steril bir metal ara parça (3.8 mm çap) MCF-7-jel matris karışımı koyun ve 2 saat boyunca inkübe edilir. </li><li> Boşluk çıkarın ve 3D tümör sfero 24-96 saat organotipik dilim ile Coculture sağlar. </li><li> Her gün kültür ortamı değiştirin. </li></ol> 3. Organotipik Beyin Dilim Coculture içinde Astrositler ve mikrogliyal immünflöresan boyanması <ol><li> 4 ° C &#39;de 8 saat boyunca% 4 paraformaldehit ile Organotipik beyin dilim kokültür saptamak </li><li> 5 dakika boyunca (% 0,5 Triton X-100 içeren PBS) PBST ile kokültür dilim yıkayın. </li><li> S blok1 saat boyunca oda sıcaklığında PBST içinde normal keçi serumu (01:20) ile depas&#39;lar. </li><li> Keçi anti-fare-TRITC (PBST içinde 1:100) boyama, ardından 4 ° C&#39;de 36 saat boyunca anti-glial fibriler asidik protein monoklonal antikor (GFAP, PBST içinde 1:200) ile beyin dilim ortak kültürü ile enkübe astrositler Leke Oda sıcaklığında 1 saat karıştırıldı. </li><li> 5 dakika boyunca üç kez PBST ile örnekleri yıkayın. </li><li> Oda sıcaklığında 1 saat boyunca (PBST içinde 1:100) ILB 4-Alexa Fluor 647 ile mikroglial hücreleri boyamak. </li><li> Oda sıcaklığında 3 dakika boyunca DAPI ile beyin dilim kokültür (1:1000) Counterstain. </li><li> Dağı ve DAKO floresan montaj orta beyin dilim Coculture lamel. </li><li> Aşağıdaki sisteme göre tümör istilasının değerlendirilmesi notu: + + = 1/3 - 2/3,,, + &lt;1/3 hücrelerinin 0 = yok işgal hücrelerin + + + ≥ 2/3 (birinci Tümör göbek ve dilim arasındaki temas bölümünün uzunluğunu, daha sonra fractio ölçmek) İstilacı hücreler tarafından tespit temas n. </li></ol> 4. Glial ve Tümör Hücreleri arasındaki Etkileşim Canlı Görüntüleme <ol><li> Bir Leica altında deneyi gerçekleştirmek 10X büyütme lens ve bir Leica DFC 350 FX CCD kamera DMI 6000B mikroskop ters. </li></ol>

<ol>
	<li>Langley, R. R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+seed+and+soil+hypothesis+revisited--the+role+of+tumor-stroma+interactions+in+metastasis+to+different+organs.">The seed and soil hypothesis revisited--the role of tumor-stroma interactions in metastasis to different organs.</a> Int. J. Cancer. 128, 2527-2535 (2011).</li><li>Joyce, J. A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironmental+regulation+of+metastasis.">Microenvironmental regulation of metastasis.</a> Nat. Rev. Cancer. 9, 239-252 (2009).</li><li>Mantovani, A., Allavena, P., Sica, A., Balkwill, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer-related+inflammation.">Cancer-related inflammation.</a> Nature. 454, 436-444 (2008).</li><li>Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+organ+microenvironment+in+brain+metastasis.">The role of the organ microenvironment in brain metastasis.</a> Semin. Cancer Biol. 21, 107-112 (2011).</li><li>Rath, B. H., Fair, J. M., Jamal, M., Camphausen, K., Tofilon, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+enhance+the+invasion+potential+of+glioblastoma+stem-like+cells.">Astrocytes enhance the invasion potential of glioblastoma stem-like cells.</a> PloS one. 8, e54752 (2013).</li><li>Steeg, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+metastasis:+mechanistic+insights+and+clinical+challenges.">Tumor metastasis: mechanistic insights and clinical challenges.</a> Nat. Med. 12, 895-904 (2006).</li><li>Eichler, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biology+of+brain+metastases-translation+to+new+therapies.">The biology of brain metastases-translation to new therapies.</a> Nat. Rev. Clin. Oncol. 8, 344-356 (2011).</li><li>Winkler, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+glioma+cell+invasion+in+vivo+reveals+mechanisms+of+dissemination+and+peritumoral+angiogenesis.">Imaging glioma cell invasion in vivo reveals mechanisms of dissemination and peritumoral angiogenesis.</a> Glia. 57, 1306-1315 (2009).</li><li>Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue.">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> J. Neurosci. Methods. 37, 173-182 (1991).</li><li>Kreutz, S., Koch, M., Ghadban, C., Korf, H. W., Dehghani, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cannabinoids+and+neuronal+damage:+differential+effects+of+THC,+AEA+and+2-AG+on+activated+microglial+cells+and+degenerating+neurons+in+excitotoxically+lesioned+rat+organotypic+hippocampal+slice+cultures.">Cannabinoids and neuronal damage: differential effects of THC, AEA and 2-AG on activated microglial cells and degenerating neurons in excitotoxically lesioned rat organotypic hippocampal slice cultures.</a> Exp. Neurol. 203, 246-257 (2007).</li><li>De Simoni, A., Yu, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+organotypic+hippocampal+slice+cultures:+interface+method.">Preparation of organotypic hippocampal slice cultures: interface method.</a> Nat. Protoc. 1, 1439-1445 (2006).</li><li>Fuller, L., Dailey, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+rodent+hippocampal+slice+cultures.">Preparation of rodent hippocampal slice cultures.</a> CSH Protoc. 2007, pdb prot4848 (2007).</li><li>Lorger, M., Felding-Habermann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capturing+changes+in+the+brain+microenvironment+during+initial+steps+of+breast+cancer+brain+metastasis.">Capturing changes in the brain microenvironment during initial steps of breast cancer brain metastasis.</a> Am. J. Pathol. 176, 2958-2971 (2010).</li><li>Brana, C., Biggs, T. E., Mann, D. A., Sundstrom, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+macrophage+hippocampal+slice+co-culture+system:+application+to+the+study+of+HIV-induced+brain+damage.">A macrophage hippocampal slice co-culture system: application to the study of HIV-induced brain damage.</a> J. Neurosci. Methods. 90, 7-11 (1999).</li><li>Kim, J. A., Yamada, M. K., Nishiyama, N., Matsuki, N., Ikegaya, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mossy+fiber+pathfinding+in+multilayer+organotypic+cultures+of+rat+hippocampal+slices.">Mossy fiber pathfinding in multilayer organotypic cultures of rat hippocampal slices.</a> Cell. Mol. Neurobiol. 23, 115-119 (2003).</li><li>Matsumura, H., Ohnishi, T., Kanemura, Y., Maruno, M., Yoshimine, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+glioma+cell+invasion+by+confocal+laser+scanning+microscopy+in+a+novel+brain+slice+model.">Quantitative analysis of glioma cell invasion by confocal laser scanning microscopy in a novel brain slice model.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 269, 513-520 (2000).</li><li>Charles, N. A., Holland, E. C., Gilbertson, R., Glass, R., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+brain+tumor+microenvironment.">The brain tumor microenvironment.</a> Glia. , (2011).</li><li>Mizutani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fractalkine+receptor+but+not+CCR2+is+present+on+microglia+from+embryonic+development+throughout+adulthood.">The fractalkine receptor but not CCR2 is present on microglia from embryonic development throughout adulthood.</a> J. Immunol. 188, 29-36 (2012).</li><li>Kettenmann, H., Hanisch, U. K., Noda, M., Verkhratsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+of+microglia.">Physiology of microglia.</a> Physiol. Rev. 91, 461-553 (2011).</li><li>Markovic, D. S., Glass, R., Synowitz, M., Rooijen, N., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+stimulate+the+invasiveness+of+glioma+cells+by+increasing+the+activity+of+metalloprotease-2.">Microglia stimulate the invasiveness of glioma cells by increasing the activity of metalloprotease-2.</a> J. Neuropathol. Exp. Neurol. 64, 754-762 (2005).</li><li>Baumert, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pathology-based+substrate+for+target+definition+in+radiosurgery+of+brain+metastases.">A pathology-based substrate for target definition in radiosurgery of brain metastases.</a> Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 66, 187-194 (2006).</li><li>Palmieri, D., Chambers, A. F., Felding-Habermann, B., Huang, S., Steeg, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biology+of+metastasis+to+a+sanctuary+site.">The biology of metastasis to a sanctuary site.</a> Clin. Cancer Res. 13, 1656-1662 (2007).</li><li>Pukrop, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+promote+colonization+of+brain+tissue+by+breast+cancer+cells+in+a+Wnt-dependent+way.">Microglia promote colonization of brain tissue by breast cancer cells in a Wnt-dependent way.</a> Glia. 58, 1477-1489 (2010).</li><li>Bos, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+that+mediate+breast+cancer+metastasis+to+the+brain.">Genes that mediate breast cancer metastasis to the brain.</a> Nature. 459, 1005-1009 (2009).</li></ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Serebral metastaz Önceki histolojik araştırmalar özellikle astrositlerde ve mikrogliya 13 yerleşik glial hücrelerin hızlı ve köklü değişiklikler göstermiştir. Karsinom hücreleri ile bu değişiklikleri ve etkileşimleri incelemek için, bu yeni kokültürü sistemi iyi uygundur. Diğer araştırmalar alanlar zaten organotipik hipokampal beyin dilimleri ile uzun yıllara dayanan bir deneyime sahip. Bir avantajı organotipik hipokampal beyin dilim kültürlerin uzun süreli deneyler için uygun hale, hafta canlı ve etkili bir gün boyunca korunmuş olmasıdır. 1991 yılında Organotipik hippocampal slice sistemi Stoppini en tanıtılmasından bu yana, yaygın dejeneratif hastalıkların araştırmada, örneğin kullanılmıştır. Bu nedenle, bu yenilik kokültürü sistemi tümörü 9,11 biyoloji uygulamaları bir dizi iyi kurulmuş bir yaklaşım bir modifikasyonunu ifade eder. Modifikasyon tümör yayılması af derecesini değerlendirmek için bize bir tekrarlanabilir bir model sunduArabirim yöntemiyle geliştirilmişlerdir terwards ve kültürler, ideal olarak, üç boyutlu bir yapı gerektiren deneyler için uygundur. Çeşitli teknikler diğer hücrelerle Organotipik hipokampal dilimler ortak kültürü için kullanılmıştır. Bunlar, makrofaj hücreleri ve Organotipik beyin dilim 14 arasında dolaylı sistemi ve hipokamp bölgesinin 15 iki farklı dilim doğrudan bir ortak kültürü içerir. Glioma agrega Ayrıca beyin dilimleri 16 ile kültüre edilmiştir. Bu modeller Beyin dilimleri hücresel ve moleküler olayları incelemek için kullanılabilir, ancak tümör hücreleri, mikroglia ve beyin parankiması arasındaki doğrudan temas fizyolojik izin vermez. Ayrıca, bu yöntem, kemik iliği kaynaklı periferal monositler / makrofajlar kirlenme olmadan mikroglia gözlem sağlar. CCR2 ve CX3CR1 transgenik fare modeli kullanılması nedeniyle monositler işgal yerleşik mikroglia ayırt etmek zor olduğu gerçeğinden için önemli bir gelişmedirOnların benzer özelliklere 17,18,19 dayanmaktadır. Karsinom hücrelerinin intraserebral enjeksiyonu tümör gelişimini araştıran sağlar rağmen, çevrili makrofaj benzeri hücreler beyin-yerleşik mikrogliya nüfus veya kemik iliğinden elde edilen periferal monositler / makrofajlar 17 kaynaklanan olmadığı kadar söyleyemem. Kettenmann ekibi bir micromanipulator 20 ile beyin dilimler halinde glioma hücrelerinin aşılanması dahil bir organotipik beyin dilim modelini tanıttı. Ancak primer kötü huylu gliyömların metastatik karsinom birçok bakımdan farklıdır. İlk olarak, malign gliomalar mezenkimal kökenli, tümör ve beyin dokusu arasında hiçbir sınır gibi tek hücreleri istila / sinir sistemi dışında metastaz ve göç yok. Buna karşılık, infiltratif büyüme tipik patolojik özelliğidir ve bu karsinomlar genellikle göç / kohortlarda olarak işgal. Hücreleri glial İkincisi, karsinom genellikle beyinde epitel yapıları yeniden deneyina (sözde) kapsül ile beyin doku tümörü ayırmak için deneyin. Biyolojik ve morfolojik özellikleri göz önüne alındığında, malign glioma ve karsinom metastazı gerçekten karşılaştırılabilir değildir. Bu nedenlerden dolayı, biz değiştirilmiş ve biz beyin dilim bitişik bir kanserli hücre fiş enjekte ama kokültürü olmayan bir kokültürü sistem geliştirdi. Ayrıca, mikroglia tümör fiş kolayca girip parlak alan mikroskopi ile tespit edilir ve daha sonra konfokal mikroskopi ile teyit edilebilir olabilir, yani, mikroglia ve tümör tıpanın sınırında astrositik birikimi gözlemlenmiştir. Kanser hücreleri in vivo durumda gerçek ve Baumert ve beyin metastazı 21 ile otopsi olgularının% 63 bir sızma bölgesi buldu meslektaşları tarafından yapılan bir gözlem karşılaştırılabilir beyin dilim içine işgal. Çünkü kayıp kan perfüzyon, bu kültür sadece ikamet makrofaj / mikrogliya vardır. Ayrıca, çünkü mIssing T hücreleri ve bu nedenle, mevcut allo-tepkiselliğe göre insan karsinoma hücreleri da bağışıklığı fare veya sıçan beyin dilimlerindeki (NMRI, B6 veya Wistar) ile birlikte-kültür için kullanılabilir. Bu çıplak fare modelinde bir alternatif olarak hizmet verebilir. 4-5 dilim her bir fareden elde edilebildiğinden, hayvan sayısı önemli ölçüde azalır, mevcut enjeksiyon modellere kıyasla gereklidir. Buna ek olarak, hayvan metastatik hastalık uzun bir süre boyunca maruz kalmaz ve arka arkaya 22 ameliyat prosedürleri uğramaz. Bu kokültürü sistemi ile, kanser hücreleri tarafından mikroglia aktivasyonunu ve kanser hücresi istilasını teşvik kapasitesini göstermiştir. Ayrıca, bu bizim bildiğimiz kadarıyla, mikrogliya aktif kanser hücrelerini 23 taşıma bulundu, ilk kez. Tüm bu avantajlara rağmen, kokültürü sistem, gerçekten de sınırlılıkları vardır. Yine de, bir in vitro olduğuönce kolonizasyon metastaz adımlar eksik modeli. Çünkü perfüzyon eksikliği, bu ekstravazasyonu çalışma mümkün değildir. Bu nedenle, çalışma ekstravazasyonu için bir alternatif yol, kan-beyin bariyerini 22,24 taklit etmek için in vivo model veya enjeksiyon değiştirilmiş Boyden haznesi sistemi, hücre dışı matris ile, HUVEC ve astrositler ya kullanmaktır. Beyin dilim kokültürü yöntemi henüz birçok avantaj ile güvenilir ve tekrarlanabilir bir model ve bu kolonizasyon analizi gibi uygulamalar, geniş bir yelpazede, bir potansiyel yerleşik hücrelerin rolü üzerinde bir odaklanma ile özellikle. (Örneğin, immünohistokimya, konfokal mikroskopi ve zaman atlamalı mikroskopi gibi) diğer bilinen teknikler ile kombinasyon doğrudan hücre-hücre etkileşimleri soruşturma destekler. Bu kolay bir alternatif ve diğer tekniklerin tamamlama ve metastatik mikro dayattığı gibi ipuçları ve etkilerinin araştırılması erişim sunmaktadır.

<table><tbody><tr><td>Hank&amp;#039;s balanced salt solution (HBSS)</td><td>Gibco, Darmstadt,Germany</td><td>24020</td><td></td></tr><tr><td>Minimum essential medium (MEM)</td><td>Gibco, Darmstadt , Germany</td><td>32360</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>PAA Laboratories Inc., C&amp;ouml;lbe, Germany</td><td>E15-840</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;#039;s phosphate buffered saline (PBS)</td><td>Pan Biotech, Aidenbach, Germany</td><td>P04-36500</td><td></td></tr><tr><td>Normal horse serum (NHS)</td><td>Invitrogen, Karlsruhe, Germany</td><td>16050-122</td><td></td></tr><tr><td>Fetal calf serum (FCS)</td><td>Invitrogen, Karlsruhe, Germany</td><td>10091148</td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>B. Braum, Melsungen, Germany</td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine-Penicillin-Streptomycin solution</td><td>Sigma, Steinheim, Germany</td><td>G1146</td><td></td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Leica, Wetzlar, Germany</td><td>Leica VT1200S</td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Leica, Wetzlar, Germany</td><td>Leica SM 2000R</td><td></td></tr><tr><td>Polycarbonate membrane</td><td>BD Falcon, Heidelberg,Germany</td><td>353090</td><td>transwell membrane insert (0.4 &amp;mu;m pore size)</td></tr><tr><td>ECM gel</td><td>Trevigen, R&amp;amp;D, Wiesbaden-Nordenstadt, Germany</td><td>3432-005-01</td><td>Basement membrane extract</td></tr><tr><td>Metallic spacer</td><td>Kig GmbG, Kirkel, Germany</td><td>DIN 433</td><td></td></tr><tr><td>Confocal microscope</td><td>Zeiss, G&amp;ouml;ttingen, Germany</td><td>LSM 510</td><td></td></tr><tr><td>Time-lapse microscope and camera</td><td>Leica, Wetzlar, Germany</td><td>DMI 6000B microscope and a DFC 350 FX CCD camera</td><td></td></tr><tr><td>Anatomy microscope</td><td>Zeiss, G&amp;ouml;ttingen, Germany</td><td>Stemi SV11</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Merck, Darmstadt, Germany</td><td>1.04005.1000</td><td></td></tr><tr><td>Mouse monoclonal anti-glial fibrillary acidic protein (GFAP) antibody</td><td>Sigma, Steinheim, Germany</td><td>G3893</td><td></td></tr><tr><td>Goat anti-mouse IgG, F(ab&amp;#039;)&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;- TRITC</td><td>Santa Cruz, Heidelberg, Germany</td><td>SC3796</td><td></td></tr><tr><td>Isolectin GS-IB4 from Griffonia simplicifolia, Alexa Fluor 647 conjugate</td><td>Invitrogen, Karlsruhe, Germany</td><td>132450</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4&amp;#039;,6&amp;#039;-diamidino-2-phenylindole dihyfrochloride)</td><td>Sigma, Steinheim, Germany</td><td>D8417</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescent mounting medium</td><td>DAKO, Glostrup, Denmark</td><td>S3023</td><td></td></tr></tbody></table>

coculture system with an organotypic brain slice and 3d spheroid of carcinoma cells

Karsinom serebral metastazı olan hastalarda kötü prognoz. Bununla birlikte, metastatik yerinde işlem ancak, özellikle, ikamet (stromal) hücrelerinin rolü araştırılmıştır. Birincil karsinomlarda çalışmalar bile prognoz 1,2 üzerinde, metastaz üzerinde mikroçevresinin etkisini göstermektedir. Özellikle tümör ilişkili makrofajlar (TAM) desteği göç, istila ve çoğalması 3. İlginç bir şekilde, metastazının başlıca hedefi siteleri gibi CNS&#39;deki karaciğer veya mikroglia Kupffer hücreleri gibi doku spesifik, makrofajları da sahiptirler. Ayrıca, metastatik siteleri de astrosit gibi diğer dokuya-özgü hücreleri sahiptirler. Son zamanlarda, astrositler ve kanser hücrelerinin çoğalmasını 4,5 kalıcılığı teşvik etmek için ortaya konmuştur. Bu nedenle, bu dokuya özel hücre tipleri fonksiyonları beyin metastazı, 6,7 sürecinde çok önemli olduğu görülmektedir. Bu gözlemlere rağmen,Bununla birlikte, şu ana kadar, doğrudan parlak alan mikroskopi ile, özellikle de serebral metastaz oluşumu sırasında, glial reaksiyonları görselleştirmek için uygun in vivo / in vitro modelinde uygun bir yoktur. Karsinom hücrelerinin in vivo canlı görüntülemede son kendi serebral kolonizasyon davranışlarını 8. gösterdi. Ancak bu yöntem çok zahmetli, maliyetli ve teknik olarak karmaşıktır. Buna ek olarak, hayvan deneyleri bu tür küçük seri kısıtlanır ve önemli bir (cam levhanın implantasyon ile, tümör hücrelerinin enjeksiyonundan, tekrar anestezi ve uzun süreli tespit) hayvanlar için stres ile birlikte gelir. Yerleşik hücreleri ile etkileşimleri henüz tasvir edilmemiş ise Dahası, in vivo görüntüleme, şimdiye kadar, karsinoma hücrelerinin görselleştirilmesi ile sınırlıdır. Son olarak, bağışıklığı yeterli hayvanlara içinde insan karsinoma hücrelerinin araştırmalar 8 imkansızdır. Bu nedenlerle, bir kokültürü sistemi consi kurulmuşmatrigel (3D hücre küre) gömülü bir organotipik fare beyin dilim ve epitel hücrelerinin sokması. 3D karsinom hücre küreleri komşu beyin dokusunun işgali araştırmak amacıyla doğrudan yanındaki beyin dilim kenarına yerleştirildi. Bu floresan ile ve daha parlak alan mikroskopi ile glial hücreleri ve kanserli hücreler arasında morfolojik değişiklikler ve etkileşimleri görselleştirmek için sağlamaktadır. Kokültürü Deney sonra beyin dokusu ya da 3B hücre küremsiler toplanabilir ve daha fazla moleküler analizler (ör. qRT-PCR, IHC veya immunoblot) hem de eş odaklı mikroskopi ile araştırmaları için kullanılmıştır. Bu yöntem, beyin dilimlerine zararlı etkiler olmadan gün boyunca canlı bir beyin dokusu içinde olayları izlemek için uygulanabilir. Bu model aynı zamanda, seçici bastırma ve belirli bir genotip ayrı etkisini belirlemek için verici bir dokudan hücrelerin yerleşik hücre değiştirilmesini sağlar. Son olarak, model, kokültürü uygulanabilir bir alternatifhedeflenen farmakolojik manipülasyonlar sınarken in vivo yaklaşımlar.

Öncelikle, kullanılan tüm kanser hücreleri (insan: MCF-7 ve kemirgen: 410.4) organotipik fare beyin dilim işgal etti. İstila türe bağımsız bir şekilde geniş bir uygulama yelpazesi gösterir, bu nedenle türe bağımsız (Şekil 1A) idi. Buna ek olarak, mikroglia hem de in vivo olarak daha önce ve hasta numuneleri 13 de tarif edildiği gibi, ara yüzeyde birikmiş astrositler. Uzun bir süre boyunca zaman atlamalı görüntüleme dilim canlılığı ortaya ama aynı zamanda hücresel etkileşimleri gözlemlemek için iyi bir platform sundu değil sadece. Time-lapse deneyleri ile, Mikroglial hücreleri sırayla, kanser hücrelerinin de beyin dilim (Şekil 1B1-B2) işgal, 3D cep küre süre girmek için kaydedildi. Ayrıca, daha önce bu şekilde karsinom işgali yardımcı olmak için bir mekanizma ile hâlâ anlaşılmaz karsinom hücreleri taşıma mikroglia yeteneğini göstermiştir. Immünofloresan etiketleme teknikleri kullanarak,işgali işlemi sırasında, bu hücreler arasında sıkı bir etkileşim olduğunu gösterir beyin dokusunda ve tümör hücresi fiş (Şekil 1 C-D) hem de tümör hücreleri ve stromal hücre ko-lokalizasyonunu (örneğin, mikroglia ve astrositler), tarif edildiği. Farklı türler, genotip ve cinslerinden hücreleri incelemek için uygulamaların geniş gösteren - Fare Beyin dilimleri bir insan için (Şekil 1C1-C3), ya murin (Şekil 1D1-D3) karsinoma hücreleri ile ya da kültüre zaman karşılaştırılabilir sonuçlar elde edilmiştir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/50881/50881fig1.jpg" fo:content-width="4.75in" fo:src="/files/ftp_upload/50881/50881fig1highres.jpg" /> Şekil 1. Fare ve insan karsinoma hücrelerinin 3D sfero ile Brain dilim kokültürü modeli. Fare meme kanseri olan Organotipik bütün beyin dilim cocultures, kanser hücresi yayılımını A) miktarının belirlenmesihücre hattı 410,4 ya da bir insan göğüs kanseri hücre soyu MCF-7. Veriler n ≥ 38 ile her bir grupta beyin dilim içine cep istila derecesinin yüzdesini temsil eder. Bu iki grup arasında anlamlı bir fark (Kruskal-Wallis testi). B) MCF-7-GFP hücreleri ve gün2 (B1 temsili görüntüleri ile organotipik bütün beyin dilim cocultures Time-lapse görüntüleri) ve günde 5 (B2) idi vardı gösterilmiştir. CD) mikroskopisi görüntüleri karsinom, astrositlerde ve mikrogliya kohortlarını gösterdi. Çift astrositlerin boyama (anti-GFAP-TRITC, kırmızı) ve mikroglia 350 mikron kalınlığında Organotipik beyin dilim ve GFP-transfekte edilmiş tümör hücresi fişi (yeşil) ile bütün ko-kültürü (ILB4-Alexa Fluor 647 mor): 3D- MCF-7-GFP (C1-C3) ve 3D-410.4-GFP (D1-D3). Beyaz çizgiler beyin dilim ve tümör işgali ön kenarını gösterdi. Ölçek çubukları 50 um temsil eder. Mikroglia astrositler birnd tümörler colocalizations (C1 ve D1), astrocytes tümörler colocalizations (C2 ve D2) ve dilim kokültür mikroglia-tümör colocalizations (C3 ve D3). <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/50881/50881fig1highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a>

Watch this Scientific Journal Video about Coculture System with an Organotypic Brain Slice and 3D Spheroid of Carcinoma Cells at JoVE.com

Coculture System with an Organotypic Brain Slice and 3D Spheroid of Carcinoma Cells

Karsinom hücreleri ile Organotipik beyin kesit kokültürü beyin dokusu karsinoma hücre istilası sürecinde floresan gibi parlak saha (video) mikroskopisi ile görselleştirme morfolojik değişiklikler sağlar. Bu model sistem ayrıca hücre değişimi ve ikmal yaklaşımlar sağlar ve manipülasyonlar ve analizlerin bir yelpazede sunuyor.

Bir Organotipik Beyin Dilim ve kanser hücrelerinin 3D Sferoid ile Coculture Sistemi

Patients with cerebral metastasis of carcinomas have a poor prognosis. However, the process at the metastatic site has barely been investigated, in ...

coculture-system-with-an-organotypic-brain-slice-3d-spheroid

Research

JoVE Journal

Medicine

20.6K Görüntüleme.  University of Göttingen.  Karsinom hücreleri ile Organotipik beyin kesit kokültürü beyin dokusu karsinoma hücre istilası sürecinde floresan gibi parlak saha (video) mikroskopisi ile görselleştirme morfolojik değişiklikler sağlar. Bu model sistem ayrıca hücre değişimi ve ikmal yaklaşımlar sağlar ve manipülasyonlar ve analizlerin bir yelpazede sunuyor. 

Video: Coculture System with an Organotypic Brain Slice and 3D Spheroid of Carcinoma Cells

A 3D Spheroid Model for Glioblastoma

Two-dimensional (2D) cell cultures do not mimic in vivo tumor growth satisfactorily. Therefore, three-dimensional (3D) culture spheroid models were developed. These models may be particularly important in the field of neuro-oncology. Indeed, brain tumors have the tendency to invade the healthy brain environment. We describe herein an ideal 3D glioblastoma spheroid-based assay that we developed to study tumor invasion. We provide all technical details and analytical tools to successfully perform this assay.

Here, we describe an easy-to-use invasion assay for glioblastoma. This assay is suitable for glioblastoma stem-like cells. A Fiji macro for easy quantification of invasion, migration, and proliferation is also described.

Glioblastoma için 3D Spheroid Model

Two-dimensional (2D) cell cultures do not mimic in vivo tumor growth satisfactorily. Therefore, three-dimensional (3D) culture spheroid models were ...

Kanser Araştırmaları

A Three-Dimensional Spheroid Model to Investigate the Tumor-Stromal Interaction in Hepatocellular Carcinoma

The aggressiveness and lack of well-tolerated and widely effective treatments for advanced hepatocellular carcinoma (HCC), the predominant form of liver cancer, rationalize its rank as the second most common cause of cancer-related death. Preclinical models need to be adapted to recapitulate the human conditions to select the best therapeutic candidates for clinical development and aid the delivery of personalized medicine. Three-dimensional (3D) cellular spheroid models show promise as an emerging in vitro alternative to two-dimensional (2D) monolayer cultures. Here, we describe a 3D tumor spheroid&#160;model which exploits the ability of individual cells to aggregate when maintained in hanging droplets, and is more representative of an in vivo environment than standard monolayers. Furthermore, 3D spheroids can be produced by combining homotypic or heterotypic cells, more reflective of the cellular heterogeneity in vivo, potentially enabling the study of environmental interactions that can influence progression and treatment responses. The current research optimized the cell density to form 3D homotypic and heterotypic tumor spheroids by immobilizing cell suspensions on the lids of standard 10 cm3 Petri dishes. Longitudinal analysis was performed to generate growth curves for homotypic versus heterotypic tumor/fibroblasts spheroids. Finally, the proliferative impact of fibroblasts (COS7 cells) and liver myofibroblasts (LX2) on homotypic tumor (Hep3B) spheroids was investigated. A seeding density of 3,000 cells (in 20 &#181;L media) successfully yielded Huh7/COS7 heterotypic spheroids, which displayed a steady increase in size up to culture day 8, followed by growth retardation. This finding was corroborated using Hep3B homotypic spheroids cultured in LX2 (human hepatic stellate cell line) conditioned medium (CM). LX2 CM triggered the proliferation of Hep3B spheroids compared to control tumor spheroids. In conclusion, this protocol has shown that 3D tumor spheroids can be used as a simple, economical, and prescreen in vitro tool to study tumor-stromal interactions more comprehensively.

Comprehensive in vitro models that faithfully recapitulate the relevant human disease are lacking. The current study presents three-dimensional (3D) tumor spheroid creation and culture, a reliable in vitro tool to study the tumor-stromal interaction in human hepatocellular carcinoma.

Hepatosellüler Karsinomdaki Tümör-Stromal Etkileşimi Araştırmak İçin Üç Boyutlu Sferoid Modeli

The aggressiveness and lack of well-tolerated and widely effective treatments for advanced hepatocellular carcinoma (HCC), the predominant form of liver ...

Synaptic Microcircuit Modeling with 3D Cocultures of Astrocytes and Neurons from Human Pluripotent Stem Cells

A barrier to our understanding of how various cell types and signals contribute to synaptic circuit function is the lack of relevant models for studying the human brain. One emerging technology to address this issue is the use of three dimensional (3D) neural cell cultures, termed &#39;organoids&#39; or &#39;spheroids&#39;, for long term preservation of intercellular interactions including extracellular adhesion molecules. However, these culture systems are time consuming and not systematically generated. Here, we detail a method to rapidly and consistently produce 3D cocultures of neurons and astrocytes from human pluripotent stem cells. First, pre-differentiated astrocytes and neuronal progenitors are dissociated and counted. Next, cells are combined in sphere-forming dishes with a Rho-Kinase inhibitor and at specific ratios to produce spheres of reproducible size. After several weeks of culture as floating spheres, cocultures (&#39;asteroids&#39;) are finally sectioned for immunostaining or plated upon multielectrode arrays to measure synaptic density and strength. In general, it is expected that this protocol will yield 3D neural spheres that display mature cell-type restricted markers, form functional synapses, and exhibit spontaneous synaptic network burst activity. Together, this system permits drug screening and investigations into mechanisms of disease in a more suitable model compared to monolayer cultures.

In this protocol, we aim to describe a reproducible method for combining dissociated human pluripotent stem cell derived neurons and astrocytes together into 3D sphere cocultures, maintaining these spheres in free floating conditions, and subsequently measuring synaptic circuit activity of the spheres with immunoanalysis and multielectrode array recordings.

Sinaptik Microcircuit modelleme 3D Cocultures Astrocytes ve Neurons insan Pluripotent kök hücre ile

A barrier to our understanding of how various cell types and signals contribute to synaptic circuit function is the lack of relevant models for studying ...

Gelişim Biyolojisi

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in particular (e.g., brain tumors such as glioblastoma multiforme and squamous cell carcinoma of the head and neck &#8211; SCCHN) it is a cause of severe morbidity and can be life-threatening even in the absence of distant metastases. In addition, cancers which have relapsed following treatment unfortunately often present with a more aggressive phenotype. Therefore, there is an opportunity to target the process of invasion to provide novel therapies that could be complementary to standard anti-proliferative agents. Until now, this strategy has been hampered by the lack of robust, reproducible assays suitable for a detailed analysis of invasion and for drug screening. Here we provide a simple micro-plate method (based on uniform, self-assembling 3D tumor spheroids) which has great potential for such studies. We exemplify the assay platform using a human glioblastoma cell line and also an SCCHN model where the development of resistance against targeted epidermal growth factor receptor (EGFR) inhibitors is associated with enhanced matrix-invasive potential. We also provide two alternative methods of semi-automated quantification: one using an imaging cytometer and a second which simply requires standard microscopy and image capture with digital image analysis.

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Invasion of surrounding normal tissues is a defining characteristic of malignant tumors. We provide here a simple, semi-automated micro-plate assay of invasion into a natural 3D biomatrix that has been exemplified with a number of models of advanced human cancers.

Üç boyutlu (3D) Tümör Sfero Yayılması deneyindeki

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Tıp

Heteromulticellular Stromal Cells in Scaffold-free 3D Cultures of Epithelial Cancer Cells to Drive Invasion

Breast cancer is the second leading cause of cancer-related death among women in the U.S. Organoid models of solid tumors have been shown to faithfully recapitulate aspects of cancer progression such as proliferation and invasion. Although patient-derived organoids and patient-derived xenograft organoids are pathophysiologically relevant, they are costly to propagate, difficult to manipulate, and comprised primarily of the most proliferative cell types within the tumor microenvironment (TME). These limitations prevent their use for elucidating cellular mechanisms of disease progression that depend upon tumor-associated stromal cells which are found within the TME and known to contribute to metastasis and therapy resistance. 
Here, we report on methods for cultivating epithelial-stromal multicellular 3D cultures. The advantages of these methods include a cost-effective system for rapidly generating organoid-like 3D cultures within scaffold-free environments that can be used to track invasion at single-cell resolution within hydrogel scaffolds. Specifically, we demonstrate how to generate these heteromulticellular 3D cultures using BT-474 breast cancer cells in combination with fibroblasts (BJ-5ta), monocyte-like cells (THP-1), and/or endothelial cells (EA.hy926). Additionally, differential fluorescent labeling of cell populations enables time-lapse microscopy to define 3D culture assembly and invasion dynamics. 
Notably, the addition of any two stromal cell combinations to 3D cultures of BT-474 cells significantly reduces circularity of the 3D cultures, consistent with the presence of organoid-like or secondary spheroid structures. In tracker dye experiments, fibroblasts and endothelial cells co-localize in the peripheral organoid-like protrusions and are spatially segregated from the primary BT-474 spheroid. Finally, heteromulticellular 3D cultures of BT-474 cells have increased hydrogel invasion capacity. Since we observed these protrusive structures in heteromulticellular 3D cultures of both non-tumorigenic and tumorigenic breast epithelial cells, this work provides an efficient and reproducible method for generating organoid-like 3D cultures in a scaffold-free environment for subsequent analyses of phenotypes associated with solid tumor progression.

There is a critical need for 3D cancer models that capture heterocellular crosstalk to study cancer metastasis. Our study presents the generation of heteromulticellular stromal-epithelial in a scaffold and scaffold-free environment that can be used to study invasion and cellular spatial distributions.

İstilayı Yönlendirmek İçin Epitelyal Kanser Hücrelerinin İskelesiz 3D Kültürlerinde Heteromultihücreli Stromal Hücreler

Breast cancer is the second leading cause of cancer-related death among women in the U.S. Organoid models of solid tumors have been shown to faithfully ...

A Brain Tumor/Organotypic Slice Co-culture System for Studying Tumor Microenvironment and Targeted Drug Therapies

Brain tumors are a major cause of cancer-related morbidity and mortality. Developing new therapeutics for these cancers is difficult, as many of these tumors are not easily grown in standard culture conditions. Neurosphere cultures under serum-free conditions and orthotopic xenografts have expanded the range of tumors that can be maintained. However, many types of brain tumors remain difficult to propagate or study. This is particularly true for pediatric brain tumors such as pilocytic astrocytomas and medulloblastomas. This protocol describes a system that allows primary human brain tumors to be grown in culture. This quantitative assay can be used to investigate the effect of microenvironment on tumor growth, and to test new drug therapies. This protocol describes a system where fluorescently labeled brain tumor cells are grown on an organotypic brain slice from a juvenile mouse. The response of tumor cells to drug treatments can be studied in this assay, by analyzing changes in the number of cells on the slice over time. In addition, this system can address the nature of the microenvironment that normally fosters growth of brain tumors. This brain tumor organotypic slice co-culture assay provides a propitious system for testing new drugs on human tumor cells within a brain microenvironment.

Many types of human brain tumors are localized to specific regions within the brain and are difficult to grow in culture. This protocol addresses the role of tumor microenvironment and investigates new drug treatments by analyzing fluorescent primary brain tumor cells growing in an organotypic mouse brain slice. &#160;

İlaç Tedavileri tümörün mikro incelenmesi ve Hedeflenen A Beyin Tümörü / Organotipik Dilim Co-kültür Sistemi

Brain tumors are a major cause of cancer-related morbidity and mortality. Developing new therapeutics for these cancers is difficult, as many of these ...

A Human Glioblastoma Organotypic Slice Culture Model for Study of Tumor Cell Migration and Patient-specific Effects of Anti-Invasive Drugs

Glioblastoma (GBM) continues to carry an extremely poor clinical prognosis despite surgical, chemotherapeutic, and radiation therapy. Progressive tumor invasion into surrounding brain parenchyma represents an enduring therapeutic challenge. To develop anti-migration therapies for GBM, model systems that provide a physiologically relevant background for controlled experimentation are essential. Here, we present a protocol for generating slice cultures from human GBM tissue obtained during surgical resection. These cultures allow for ex vivo experimentation without passaging through animal xenografts or single cell cultures. Further, we describe the use of time-lapse laser scanning confocal microscopy in conjunction with cell tracking to quantitatively study the migratory behavior of tumor cells and associated response to therapeutics. Slices are reproducibly generated within 90 min of surgical tissue acquisition. Retrovirally-mediated fluorescent cell labeling, confocal imaging, and tumor cell migration analyses are subsequently completed within two weeks of culture. We have successfully used these slice cultures to uncover genetic factors associated with increased migratory behavior in human GBM. Further, we have validated the model&#39;s ability to detect patient-specific variation in response to anti-migration therapies. Moving forward, human GBM slice cultures are an attractive platform for rapid ex vivo assessment of tumor sensitivity to therapeutic agents, in order to advance personalized neuro-oncologic therapy.

Current ex vivo models of glioblastoma (GBM) are not optimized for physiologically relevant study of human tumor invasion. Here, we present a protocol for generation and maintenance of organotypic slice cultures from fresh human GBM tissue. A description of time-lapse microscopy and quantitative cell migration analysis techniques is provided.

Tümör Hücre Göçü ve İnvaziv Olmayan İlaçların Hastaya Özel Etkilerinin İncelenmesi İçin Bir İnsan Glioblastoma Organotipik Dilim Kültürü Modeli

Glioblastoma (GBM) continues to carry an extremely poor clinical prognosis despite surgical, chemotherapeutic, and radiation therapy. Progressive tumor ...

Organotypic Hippocampal Slice Cultures As a Model to Study Neuroprotection and Invasiveness of Tumor Cells

In organotypic hippocampal slice cultures (OHSC), the morphological and functional characteristics of both neurons and glial cells are well preserved. This model is suitable for addressing different research questions that involve studies on neuroprotection, electrophysiological experiments on neurons, neuronal networks or tumor invasion. The hippocampal architecture and neuronal activity in multisynaptic circuits are well conserved in OHSC, even though the slicing procedure itself initially lesions and leads to formation of a glial scar. The scar formation alters presumably the mechanical properties and diffusive behavior of small molecules, etc. Slices allow the monitoring of time dependent processes after brain injury without animal surgery, and studies on interactions between various brain-derived cell types, namely astrocytes, microglia and neurons under both physiological and pathological conditions. An ambivalent aspect of this model is the absence of blood flow and immune blood cells. During the progression of the neuronal injury, migrating immune cells from the blood play an important role. As those cells are missing in slices, the intrinsic processes in the culture may be observed without external interference. Moreover, in OHSC the composition of the medium-external environment is precisely controlled. A further advantage of this method is the lower number of sacrificed animals compared to standard preparations. Several OHSC can be obtained from one animal making simultaneous studies with multiple treatments in one animal possible. For these reasons, OHSC are well suited to analyze the effects of new protective therapeutics after tissue damage or during tumor invasion. 
The protocol presented here describes a preparation method of OHSC that allows generating highly reproducible, well preserved slices that can be used for a variety of experimental research, like neuroprotection or tumor invasion studies.

Organotypic hippocampal slice cultures (OHSC) represent an in vitro model that simulates the in vivo situation very well. Here we describe a vibratome-based improved slicing protocol to obtain high quality slices for use in assessing the neuroprotective potential of novel substances or the biological behavior of tumor cells.

Organotypic Hipokampal dilim kültürler çalışma Neuroprotection ve tümör hücrelerinin Invasiveness Model olarak

In organotypic hippocampal slice cultures (OHSC), the morphological and functional characteristics of both neurons and glial cells are well preserved. ...

Nörobilim

Establishing a Brain Tumor in an Organotypic Slice Co-culture Model

Source: Chadwick, E. J. et al. <a href="https://appjove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/53304">A Brain Tumor/Organotypic Slice Co-culture System for Studying Tumor Microenvironment and Targeted Drug Therapies.</a> J. Vis. Exp. (2015).
This video demonstrates the development of a 3D co-culture system. Mouse brain slices are placed on a membrane, and fluorescently labeled human brain tumor cells are allowed to grow on it. Once the system is ready, it is stained for imaging.

Organotipik Dilim Ko-kültür Modelinde Beyin Tümörü Kurulması

All procedures involving sample collection have been performed in accordance with the institute&#39;s IRB guidelines.
1. Plating the Slices onto the ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Nöronal Kültür Teknikleri

Çoklu kültür ve Etkileşim Çalışmaları

Generating and Maintaining Slice Cultures from Human Glioblastoma Tissue

Source: Parker, J. J., et al. <a href="https://appjove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/53557">A Human Glioblastoma Organotypic Slice Culture Model for Study of Tumor Cell Migration and Patient-specific Effects of Anti-Invasive Drugs.</a> J. Vis. Exp. (2017).
The video demonstrates the generation and maintenance of organotypic slice cultures from glioblastoma tissue. The isolated tissue is embedded in an agarose matrix, and thin sections are obtained using a vibratome. These sections are then placed on permeable membrane inserts within a microplate and cultured in a slice culture maintenance media for long-term maintenance.

İnsan Glioblastoma Dokusundan Dilim Kültürlerinin Oluşturulması ve Sürdürülmesi

All procedures involving sample collection have been performed in accordance with the institute&#39;s IRB guidelines.
1. Pre-slicing Preparation 

	...