Bu çalışma CIHR Nöromusküler Araştırma Ortaklığı (-; JAEB için 90959 JNM) hibe tarafından desteklenmiştir.

Bundan önce modelini kullanarak, araştırmacılar vücut yönetim kendi kurumun hayvan kullanımından cerrahi protokolü için onay almış olmalıdır. Model Araştırma Etik Kurulu, Hamilton Sağlık Bilimleri Kurumu, McMaster Üniversitesi (KKS # 10-04-24) tarafından onaylanmıştır ve Hayvan Bakım Kanada Konseyi önerileri ile tam uyum içinde gerçekleştirilir. 1. Fare Hazırlık <ol><li> Fare tartılır. 5 izofluran% veya% 2 halotan ile anestezi neden. Cerrah korumak için yeterli bir anestezik atma kullanılan devre sağlamalıdır. 2-3 dakika sonra hayvanın solunum yavaş olacaktır. Göz kırpma refleksi yoktur emin olun ve cerrahi anestezi (fare ile cevap yani) onaylamak için pençe en arasi bosluklari çimdik. Ameliyat sırasında, korneanın kurumasını önlemek için, göz oftalmik yağ uygulanır. </li><li> Siyatik gelen lateral uyluk ve kalça tıraşdiz çentik ve proviodine ile dezenfekte edin. Tıraş cerrahi alanın yeterli görselleştirme sağlamak ve sinir diseksiyonu ve transection müdahale en aza indirmek için kesi saç site ücretsiz devam edecektir. Üstün ve femur posterior olan siyatik çentik, palpasyonla tespit edilebilir. </li></ol> 2. Operatif Prosedürü <ol><li> 2% (halotan% 1) inhalasyon izofluran azaltın ve bir işletim ya da mikroskop altında yan (yukarı bakacak şekilde ameliyat için tasarlanmıştır tarafı), üzerinde fare yerleştirin. 3,5 kat büyütme, bir yetişkin için (20-25 g), fare için yeterli olduğu Alternatif olarak cerrahi cerrahi loupes ile yapılabilir. </li><li> Steril eldiven Don. Palpasyonla siyatik çentik belirleyin. Siyatik çentik gelen diz (yaklaşık 1 cm) için lateral uyluk bir neşter, insizyon deri kullanma. </li><li> Nazikçe cilt yayıldı. Biceps femoris kas belirlemek, hangi lateral uyluk düz yüzeysel kashemen derinin altında. Ince makas kullanarak, kas lifleri boyunca biceps femoris kas bölünmüş ve siyatik sinir ve dalları ortaya çıkarmak için bir yay retraktörü ile açık tutun. </li><li> Biceps femoris kas hemen derin siyatik sinir belirleyin. Bu karakteristik parlak beyaz renk ile tanımlanan ve çapı yaklaşık 0.8 mm olabilir. Bu popliteal fossa düzeyinde, tibial peroneal ve sural sinirler içine dallanma, siyatik çentik gelen diz çalışır. </li><li> Yavaşça ultra ince forseps ve yaylı Microdissecting makas ile peroneal ve sural sinir dallarından tibia ayırın. Tibial sinir en büyük dalıdır ve genellikle merkezi. Bu dalları ayıran sinir ezmek için değil önemlidir. Ultra ince forseps ile sadece dış adventicial katman üzerinde sinir Holding ve sinir gevşek (öğretti değil) tutarak, sinir ezilme ve çekiş yaralanmaları önlemek olacaktır. </li><li> Tam ve kalıcı bir denervati içinüzerinde, dikkatle popliteal damarlar kaçınarak, gibi distalde mümkün olduğunca makas Microdissecting ile tibial sinir kesti. Alternatif olarak, 2-4 hafta içinde beklenen tam reinnervation ile geçici denervasyon için, tibial sinir sadece kesilen 15 sn yerine için ultra ince forseps ile ezilebilir. (Periferik sinirler aşağıdaki yaralanma regrow ve hedef kas reinnervate olacaktır.) </li><li> Tam denervasyon gerekiyorsa, gastroknemius yeniden innervasyonu anormal önlemek için 5-0 Vicryl ile 10-0 Naylon ve yeniden yaklaşık biceps femoris ile biseps femoris kasının ön yüzeyine kesilen tibial sinir sonunda dikiş ve soleus kasları. </li><li> Bir çalışan 5-0 Vicryl dikiş ile cilt kapatın. </li></ol> 3. Operatif Bakım Mesaj <ol><li> Inhalasyon anestezi kapatın ama oksijen akışını sağlamak. Subkutan analjezik buprinorphine (veya yerine) yönetmek. </li><li> Olmayan temiz bir kafes için fareyi transferyatak anestezi uyanma sırasında. Ambulasyon kadar kafes içinde ve doğrudan gözlem altında bir ısınma battaniye tutun. </li><li> Bol yumuşak yatak yumuşak alt kafeste transferi ve ev (değil tel). </li><li> Dekübit topuk ülser veya çiğneme kanıtı gelişimi için cerrahi yara ve ayak durumu için günlük ameliyat bacak kontrol edin. Ufak sorunlar topikal antibiyotik ya da proviodine gibi antiseptikler ile tedavi edilebilir. Hayvan ötenazi gerektiren Endpoint göstergeleri kilo kaybı, kendine bakım kanıtı (karıştırdı kürk), ve kambur duruş vardır. Buna ek olarak, büyük yara bozulma veya topikal antibiyotiklerle 1-2 hafta içinde iyileşmek ya da ağrı görünmüyor ülseri ile hayvanların kurban edilmelidir. </li></ol> 4. Denerve Gastrocnemius ve Soleus Kas Hasat <ol><li> İstenilen sonrası ameliyat süresi noktada, CO 2 doz aşımı ile fare ve kurban tartın. </li><li> Hem de medial Tıraşoperatif ve karşı kontrol bacakları ve alkol ile temiz. Bir işletim ya da mikroskop altında fare yerleştirin, ya da alternatif büyütme için cerrahi görüntüleme loupes kullanın. </li><li> Operatif bacak üzerinde, bir diz ayak bileği neşter ve çevresel olarak ayak bileği etrafında ile medial buzağı cilt insizyon. Yavaşça kas kapalı ve proksimal uyluk doğru forseps ile cilt çekin. Bu, bacak bölgesinin tüm kas ortaya koyar. Diz bacak arka yönü üzerinde ayak bileği için çalışır ve cilt altında hemen yatıyor baldır kas gastroknemius kas, tanımlayın. Diz medial yönü üzerinde gastroknemius kas proksimal biseps femoris kas distal ekleme, tanımlayın. Distal ekleme de biseps femoris ince ve şeffaf görünür ve gastroknemius en proksimal kısmını örter. Makas ve künt sonunda diseksiyon kullanarak, yavaşça gazdan biceps femoris distal ekleme ayırmaktrocnemius kas. </li><li> Calcaneous içine distal ekleme de, gastroknemius kas Aşil tendonu içine tapers. Beyaz ve zinde görünen Aşil tendonu, tanımlayın. Tutun veya gastroknemius kas ezmek için özen, forseps ile Aşil tendonu tutun ve makas kullanarak kalkaneus ekleme gelen Aşil tendonu bölün. </li><li> Hala tendon tutarak, yavaşça diz aslına doğru distal ekleme (soleus ayrı ayrı hasat edilebilir) gelen, derin soleus (derin kırmızı) kapalı gastroknemius kas (soluk kırmızı) kaldırın. </li><li> Makas kullanarak medial ve lateral femur chondyles gelen gastroknemius kökeni bölerek bacak kapalı gastrocnemius parçalara ayır. Kas çok nazik çekiş bu süreci kolaylaştırır. Kas ezmek için dikkatli olun. </li><li> Soleus şimdi hemen gastroknemius sitenin altında, açıkça görülebilir. Için Aşil tendonu üzerindeki ekleme gelen soleus kaldırın onun veyaarka buzağı üzerinde igin. Soleus yanlışlıkla gastroknemius ile kaldırılırsa, yavaşça hasat örnekten ayırmak. Gastrokinemius (açık kırmızı) ve soleus (koyu kırmızı), renk farklılıkları nedeniyle hasat örnekte kolayca tanımlanabilir kalır. </li><li> , Bir hassas terazi üzerinde ayrı ayrı kas tartılır. </li><li> (Sonraki protein ve / veya RNA ekstraksiyonu için) sıvı azot içinde ek dondurma için dikey yarım kaslar ayrıldı ve histoloji (yani morfolojik değerlendirmesi, immünohistoloji) için yarım izopentan içinde% 10 formalin ile, ya da dondurulmuş sabitleme ya da sabitleme sıvı azot ile soğutulmuş istendiği gibi. </li><li> Kontrolü gastroknemius ve soleus kasları hasat için kontrol yukarıdaki adım 4.3, un-çalışan, taraftan tekrarlayın. </li></ol>

<ol>
	<li>Fu, S. Y., Gordon, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contributing+factors+to+poor+functional+recovery+after+delayed+nerve+repair:+prolonged+denervation.">Contributing factors to poor functional recovery after delayed nerve repair: prolonged denervation.</a> J. Neurosci. 15, 3886-3895 (1995).</li><li>Kobayashi, J., Mackinnon, S. E., Watanabe, O., Ball, D. J., Gu, X. M., Hunter, D. A., Kuzon, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+duration+of+muscle+denervation+on+functional+recovery+in+the+rat+model.">The effect of duration of muscle denervation on functional recovery in the rat model.</a> Muscle Nerve. 20, 858-866 (1997).</li><li>Bain, J. R., Veltri, K. L., Chamberlain, D., Fahnestock, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+functional+recovery+of+denervated+skeletal+muscle+after+temporary+sensory+nerve+innervation.">Improved functional recovery of denervated skeletal muscle after temporary sensory nerve innervation.</a> Neuroscience. , 103-503 (2001).</li><li>Batt, J., Bain, J., Goncalves, J., Michalski, B., Plant, P., Fahnestock, M., Woodgett, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+gene+expression+profiling+of+short+and+long+term+denervated+muscle.">Differential gene expression profiling of short and long term denervated muscle.</a> FASEB J. 20, 115-117 (2006).</li><li>Sher, J., Cardasis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle+fiber+types+in+the+adult+mouse.">Skeletal muscle fiber types in the adult mouse.</a> Acta Neurol. Scand. 54, 45-56 (1976).</li><li>Agbulut, O., Noirez, P., Beaumont, F., Butler-Browne, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin+heavy+chain+isoforms+in+postnatal+muscle+development+of+mice.">Myosin heavy chain isoforms in postnatal muscle development of mice.</a> Biol. Cell. 95, 399-406 (2003).</li><li>Nagpal, P., Plant, P. J., Correa, J., Bain, A., Takeda, M., Kawabe, H., Rotin, D., Bain, J. R., Batt, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ubiquitin+ligase+nedd4-1+participates+in+denervation-induced+skeletal+muscle+atrophy+in+mice.">The ubiquitin ligase nedd4-1 participates in denervation-induced skeletal muscle atrophy in mice.</a> PLoS ONE. 7, e46427 (2012).</li><li>Plant, P. J., Bain, J. R., Correa, J. E., Woo, M., Batt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absence+of+caspase-3+protects+against+denervation-induced+skeletal+muscle+atrophy.">Absence of caspase-3 protects against denervation-induced skeletal muscle atrophy.</a> J. Appl. Physiol. 107, 224-234 (2009).</li><li>Varejao, A. S., Meek, M. F., Ferreira, A. J., Patricio, J. A., Cabrita, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+evaluation+of+peripheral+nerve+regeneration+in+the+rat:+walking+track+analysis.">Functional evaluation of peripheral nerve regeneration in the rat: walking track analysis.</a> J. Neurosci. Methods. 108, 1-9 (2001).</li><li>Willand, M. P., Holmes, M., Bain, J., Fahnestock, M., de Bruin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+muscle+stimulation+after+immediate+nerve+repair+reduces+muscle+atrophy+without+affecting+reinnervation.">Electrical muscle stimulation after immediate nerve repair reduces muscle atrophy without affecting reinnervation.</a> Muscle Nerve. 48, 219-225 (2013).</li><li>Sterne, G. D., Coulton, G. R., Brown, R. A., Green, C. J., Terenghi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotrophin-3-enhanced+nerve+regeneration+selectively+improves+recovery+of+muscle+fibers+expressing+myosin+heavy+chains+2b.">Neurotrophin-3-enhanced nerve regeneration selectively improves recovery of muscle fibers expressing myosin heavy chains 2b.</a> J. Cell Biol. 139, 709-715 (1997).</li><li>Plant, P. J., North, M. L., Ward, A., Ward, M., Khanna, N., Correa, J., Scott, J. A., Batt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertrophic+airway+smooth+muscle+mass+correlates+with+increased+airway+responsiveness+in+a+murine+model+of+asthma.">Hypertrophic airway smooth muscle mass correlates with increased airway responsiveness in a murine model of asthma.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 46, 532-540 (2012).</li><li>Bain, J. R., Mackinnon, S. E., Hunter, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+evaluation+of+complete+sciatic,+peroneal,+and+posterior+tibial+nerve+lesions+in+the+rat.">Functional evaluation of complete sciatic, peroneal, and posterior tibial nerve lesions in the rat.</a> Plast. Reconstr. Surg. 83, 129-138 (1989).</li><li>Hare, G. M., Evans, P. J., Mackinnon, S. E., Best, T. J., Midha, R., Szalai, J. P., Hunter, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Walking+track+analysis:+utilization+of+individual+footprint+parameters.">Walking track analysis: utilization of individual footprint parameters.</a> Ann. Plast. Surg. 30, 147-153 (1993).</li><li>McLean, J., Batt, J., Doering, L. C., Rotin, D., Bain, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+rate+of+nerve+regeneration+and+directional+errors+after+sciatic+nerve+injury+in+receptor+protein+tyrosine+phosphatase+sigma+knock-out+mice.">Enhanced rate of nerve regeneration and directional errors after sciatic nerve injury in receptor protein tyrosine phosphatase sigma knock-out mice.</a> J. Neurosci. 22, 5481-5491 (2002).</li><li>Richner, M., Bjerrum, O. J., Nykjaer, A., Vaegter, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spared+nerve+injury+(SNI)+model+of+induced+mechanical+allodynia+in+mice.">The spared nerve injury (SNI) model of induced mechanical allodynia in mice.</a> J. Vis. Exp. (54), e3092 (2011).</li><li>Rogoz, K., Lagerstrom, M. C., Dufour, S., Kullander, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VGLUT2-dependent+glutamatergic+transmission+in+primary+afferents+is+required+for+intact+nociception+in+both+acute+and+persistent+pain+modalities.">VGLUT2-dependent glutamatergic transmission in primary afferents is required for intact nociception in both acute and persistent pain modalities.</a> Pain. 153, 1525-1536 (2012).</li><li>Thornell, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sarcopenic+obesity:+satellite+cells+in+the+aging+muscle.">Sarcopenic obesity: satellite cells in the aging muscle.</a> Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care. 14, 22-27 (2011).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan edilir.

Denervasyon bağlı iskelet kas atrofi tibial sinir kesisi modeli sıçanlarda yaygın olarak kullanılan ve iyi onaylanmış modelidir. Biz araştırmacı genetik farenin varlığını yararlanmak ve kas kütlesi 7,8 düzenlenmesinde çok önemli proteinlerin yokluğunda in vivo olarak kas atrofisi süreci çalışma sağlar farenin olarak kullanımı Bu modeli adapte edilmiştir. Gastroknemius ve soleus kas, bu modelde denerve hem de böylece daha sonraki moleküler analiz için mükemmel kalitede ...

Travmatik periferik sinir yaralanma, hastalık veya farmakolojik müdahale nedeniyle İskelet kası denervasyon, kas gönüllü kasılma fonksiyonu hemen kaybına neden olur. Kas eş zamanlı atrofi başlar ve zamanında, kaliteli reinnervation 1,2 oluşursa bu atrofi tersine çevrilebilir. Reinervasyon yokluğunda, myofiber atrofi ilerler ve geri dönüşü olmayan bir biyolojik kas değişiklikleri kas fibroz ve myofiber ölüm meydana gelir. Burada farelerde tibial sinir transection modeli, denervasyon-bağlı iskelet kas atrofisi ve fibrozis bir model, göstermektedir. Bu model gastroknemius ve soleus kaslarında in vivo kas atrofi altında yatan, fizyolojik hücresel ve moleküler biyolojik mekanizmaları incelemek için bilim adamları sağlar. Tarihsel sıçanlarda ağırlıklı olarak kullanılır iken, nakavt ve özellikle transgenik fare hatları, bu modelin daha yeni uygulama, araştırmacılar kendi rolünü değerlendirmenizi sağlarin vivo indüksiyon, geliştirme ve bakım veya alternatif çözümü, kas atrofi ve fibrozis ilgi özellikle protein (ler). Tibial sinir kemirgen bacak bir karma motor duyusal periferik sinir ve siyatik sinirin üç terminali dallarından biridir. Tibial sinir kesisi gastroknemius, soleus ve plantaris kas (ve posterior tibial, fleksör digitorum longus ve fleksör hallicus longus dahil olmak üzere ayağın üç küçük derin fleksör kaslar) denervates ve sıçanlarda 3,4 bir iyi standart ve onaylanmış model . Gastroknemius ve soleus kasları kolayca tibial sinir kesisi, sabit ve eğitim amacıyla kas RNA ve protein çıkarılması için dondurulmuş kas histoloji ve kas lifi morfometrik, veya flash değerlendirilmesi için işlenmiş, örneğin, sonrası seri zaman noktalarında disseke edilebilir kas atrofi düzenleyen hücresel sinyal ağları. Gastrocnemius kas karışık elyaf tipi kas (tip I ve tip II, tip II, ancak ağırlıklı olarak) ve soleus kasının ve böylece 5,6 değerlendirilmesi için hızlı ve yavaş hem kasılan kas sağlayarak, tip I lifleri büyük bir kısmı oluşmaktadır. Tibial sinir kesisi modeli (ay hafta) kısa vadeli (gün) 7 ve uzun vadeli hem de 4,8 de denervasyon bağlı kas atrofi süreci çalışmak için uygundur. Siyatik sinir transeksiyonu modeli (genellikle kemirgenlerde kullanılan denervasyon bağlı kas atrofi bir ikinci model) aksine, tibial sinir kesisi bir daha çekici model yapımı, hayvan daha az morbidite neden olur. Tibial sinir kesisi siyatik sinirin peroneal ve sural sinir dalları olduğu gibi bırakır ise siyatik sinir kesisi böylece koruyarak, 2 ambulasyon için hayvanın yeteneğini bozarak, bacak (diz altında) ve ayak tüm kasları denervateshedef kas ve duyusal toprakları. Fare plantar esnek yapamaz veya ayak invert, ancak kolayca ambulasyon yapabiliyor ve ağırlığı böylece önemli ölçüde modelin morbidite azalan, her iki arka ayakları üzerinde eşit taşımaktadır. Yürüyüş desen değerlendiren yürüme analizi çalışmaları tibial ve siyatik sinir yaralanmaları sonrasında sıçanlarda yapılan ve ayak izi ve yük daha tibia yaralanma 9,10 ile korunmuş olduğunu göstermektedir. Edilmiştir Çalışma tasarımı 3 gerektiriyorsa, ek olarak, tibial sinir transection modelinde, peroneal sinir daha sonra bir noktada seferber edilebilir ve gecikmiş reinnervation kaynağı olarak aktarılır. Buna karşılık, siyatik sinir kesisi modelinde gecikmeli reinnervation çok önemli modelin teknik zorluk artan ve yetenekli cerrahlar onun kullanımını sınırlayan, siyatik sinir açığı bir sinir greft kullanılması gerekmektedir. Ise tibial sinir transeksiyonu model rbu innervates tibial sinir ve baldır kasları hem hayvan cerrahi steril ameliyat tekniği ile operatörün aşinalık, equires cerrahlar değil, ya da çok hayvan cerrahi deneyimli kişiler, kolayca bu model ana böylece, manipülasyon için kolay erişilebilir ve tanımlanabilir .

<table><tbody><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Reagents and Materials&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>10-0 Nylon suture</td><td>Ethicon</td><td>2850G</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Vicryl suture</td><td>Ethicon</td><td>J553G</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Equipment&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Spring microdissecting scissors</td><td>Fine Surgical Tools</td><td>15021-15</td><td></td></tr><tr><td>Ultra fine forceps</td><td>Fine Surgical Tools</td><td>11370-40</td><td></td></tr><tr><td>Non locking micro needle holder (driver)</td><td>Fine Surgical Tools</td><td>12076-12</td><td></td></tr><tr><td>Spring retractor</td><td>Fine Surgical Tools</td><td>17000-02</td><td></td></tr></tbody></table>

tibial nerve transection - a standardized model for denervation-induced skeletal muscle atrophy in mice

Tibial sinir kesisi modeli kemirgenlerde denervasyon bağlı iskelet kas atrofisi bir, iyi tolere doğrulanmış ve tekrarlanabilir bir model. Geliştirildiği ve daha büyük boyutu nedeniyle sıçan yaygın olarak kullanılmasına rağmen, farelerde tibial sinir siyatik sinirin peroneal ve sural sinir dalları sağlam ve böylece muhafaza bırakarak, kolayca ezmeyin veya kesisi ya ile manipüle edilebilir yeterince büyük hedef kasları. Bu nedenle, bu model siyatik sinir transeksiyonu modeli daha az morbidite ve ambulasyon engel uyaran avantajları sunuyor ve aynı zamanda araştırmacılar genetik olarak farelerde kas atrofi süreci düzenleyen, fizyolojik hücresel ve moleküler biyolojik mekanizmalar çalışma sağlar. Tibial sinir gastroknemius, soleus ve plantaris kasları sağlar, bu yüzden onun transection hızlı kasılan tip II lifleri ve / veya yavaş kasılan tip oluşan Denerve iskelet kası çalışma izin Ilifler. Burada C57Black6 fare tibial sinir transeksiyonu modeli göstermektedir. Biz parafine gömülü histolojik bölümlerde kas ağırlık ve lif tipi özel kesit alanı ölçerek 1, 2, bir temsilci kas olarak, gastroknemius kas atrofi değerlendirmek ve 4 hafta sonrası denervasyon hızlı kasılan miyozin için immunohistokimyasal.

<html> Tibial sinir kesisi gastroknemius, soleus ve buzağı plantaris kasları denervates. Burada bir temsilci kas olarak, gastroknemius kas atrofi gelişimini değerlendirmek. Gastrokinemius kası, 1, 2 ya da 4 hafta boyunca denerve 2-3 aylık C57Black 6 fareleri (Jackson Laboratuarları) hasat edilmiştir. Kas ağırlıkları kademeli olarak zaman içinde tip II hızlı kasılan kas lifleri (Şekil 2), enine kesit alanı yapar (Şekil 1) azalır. Gastrokinemius karışık lif tipi kas...

Watch this Scientific Journal Video about Tibial Nerve Transection - A Standardized Model for Denervation-induced Skeletal Muscle Atrophy in Mice at JoVE.com

Tibial Nerve Transection - A Standardized Model for Denervation-induced Skeletal Muscle Atrophy in Mice

Tibial sinir kesisi modeli iskelet kas atrofi bir, iyi tolere doğrulanmış ve tekrarlanabilir bir model. Model cerrahi protokol C57Black6 farelerde açıklanan ve gösterilmiştir.

Tibial Sinir transeksiyonu - Farelerde denervasyon bağlı İskelet Kas Atrofi için bir Standart Model

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. ...

tibial-nerve-transection-standardized-model-for-denervation-induced

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

24.3K Görüntüleme.  St Michaels Hospital.  Tibial sinir kesisi modeli iskelet kas atrofi bir, iyi tolere doğrulanmış ve tekrarlanabilir bir model. Model cerrahi protokol C57Black6 farelerde açıklanan ve gösterilmiştir. 

Video: Tibial Nerve Transection - A Standardized Model for Denervation-induced Skeletal Muscle Atrophy in Mice

The Spared Nerve Injury (SNI) Model of Induced Mechanical Allodynia in Mice

Peripheral neuropathic pain is a severe chronic pain condition which may result from trauma to sensory nerves in the peripheral nervous system. The spared nerve injury (SNI) model induces symptoms of neuropathic pain such as mechanical allodynia i.e. pain due to tactile stimuli that do not normally provoke a painful response [1]. 
The SNI mouse model involves ligation of two of the three branches of the sciatic nerve (the tibial nerve and the common peroneal nerve), while the sural nerve is left intact [2]. The lesion results in marked hypersensitivity in the lateral area of the paw, which is innervated by the spared sural nerve. The non-operated side of the mouse can be used as a control. The advantages of the SNI model are the robustness of the response and that it doesn&#x2019;t require expert microsurgical skills.
The threshold for mechanical pain response is determined by testing with von Frey filaments of increasing bending force, which are repetitively pressed against the lateral area of the paw [3], [4]. A positive pain reaction is defined as sudden paw withdrawal, flinching and/or paw licking induced by the filament. A positive response in three out of five repetitive stimuli is defined as the pain threshold. 
As demonstrated in the video protocol, C57BL/6 mice experience profound allodynia as early as the day following surgery and maintain this for several weeks.

The Spared Nerve Injury SNI Model of Induced Mechanical Allodynia in Mice

The Spared Nerve Injury animal model is described here as a mouse model of peripheral neuropathic pain following partial denervation of the sciatic nerve by lesioning the tibial and common peroneal nerve branches, leaving the remaining sural nerve intact. Behavioral modification resulting from mechanical allodynia is quantified by von Frey filaments.

Fare İndüklenmiş Mekanik allodini ayrılan sinir hasarı (SNI) Model

Peripheral neuropathic pain is a severe chronic pain condition which may result from trauma to sensory nerves in the peripheral nervous system. The spared ...

Tıp

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative response mounted by PNS neurons thereby possibly illuminating the failures of CNS regeneration1. Sciatic nerve crush (axonotmesis) is one of the most common models of peripheral nerve injury in rodents2. Crushing interrupts all axons but Schwann cell basal laminae are preserved so that regeneration is optimal3,4. This allows the investigator to study precisely the ability of a growing axon to interact with both the Schwann cell and basal laminae4. Rats have generally been the preferred animal models for experimental nerve crush. They are widely available and their lesioned sciatic nerve provides a reasonable approximation of human nerve lesions5,4. Though smaller in size than rat nerve, the mouse nerve has many similar qualities. Most importantly though, mouse models are increasingly valuable because of the wide availability of transgenic lines now allows for a detailed dissection of the individual molecules critical for nerve regeneration6, 7. Prior investigators have used multiple methods to produce a nerve crush or injury including simple angled forceps, chilled forceps, hemostatic forceps, vascular clamps, and investigator-designed clamps8,9,10,11,12. Investigators have also used various methods of marking the injury site including suture, carbon particles and fluorescent beads13,14,1. We describe our method to obtain a reproducibly complete sciatic nerve crush with accurate and persistent marking of the crush-site using a fine hemostatic forceps and subsequent carbon crush-site marking. As part of our description of the sciatic nerve crush procedure we have also included a relatively simple method of muscle whole mount we use to subsequently quantify regeneration.

In this report we describe a method to crush mouse sciatic nerve. This method uses readily available hemostatic forceps and easily and reproducibly produces complete sciatic nerve crush. In addition, we describe a method to prepare muscle whole mounts suitable for analysis of nerve regeneration after sciatic nerve crush.

Tüm Dağı Muscle Analizi ile tekrarlanabilir Fare Siyatik Sinir Ezilme ve Rejenerasyon daha sonraki Değerlendirme

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Nörobilim

Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and either cut or crush it to induce peripheral nerve injury. Advantages of this surgery are its simplicity, high reproducibility, and the lack of effect on vital functions or mobility from the subsequent facial paralysis, thus resulting in a relatively mild surgical outcome compared to other nerve injury models. A major advantage of using a cranial nerve injury model is that the motoneurons reside in a relatively homogenous population in the facial motor nucleus in the pons, simplifying the study of the motoneuron cell bodies. Because of the symmetrical nature of facial nerve innervation and the lack of crosstalk between the facial motor nuclei, the operation can be performed unilaterally with the unaxotomized side serving as a paired internal control. A variety of analyses can be performed postoperatively to assess the physiologic response, details of which are beyond the scope of this article. For example, recovery of muscle function can serve as a behavioral marker for reinnervation, or the motoneurons can be quantified to measure cell survival. Additionally, the motoneurons can be accurately captured using laser microdissection for molecular analysis. Because the facial nerve axotomy is minimally invasive and well tolerated, it can be utilized on a wide variety of genetically modified mice. Also, this surgery model can be used to analyze the effectiveness of peripheral nerve injury treatments. Facial nerve injury provides a means for investigating not only motoneurons, but also the responses of the central and peripheral glial microenvironment, immune system, and target musculature. The facial nerve injury model is a widely accepted peripheral nerve injury model that serves as a powerful tool for studying nerve injury and regeneration.

We present a surgical protocol detailing how to perform a cut or crush axotomy on the facial nerve in the mouse. The facial nerve axotomy can be employed to study the physiological response to nerve injury and test therapeutic techniques.

Farelerde Yüz Sinir Aksotomi: Sakatlık Motonöron Yanıtı Eğitim için Bir Model

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and ...

Cutaneous Surgical Denervation:  A Method for Testing the Requirement for Nerves in Mouse Models of Skin Disease

Cutaneous somatosensory nerves function to detect diverse stimuli that act upon the skin. In addition to their established sensory roles, recent studies have suggested that nerves may also modulate skin disorders including atopic dermatitis, psoriasis and cancer. Here, we describe protocols for testing the requirement for nerves in maintaining a cutaneous mechanosensory organ, the touch dome (TD). Specifically, we discuss methods for genetically labeling, harvesting and visualizing TDs by whole-mount staining, and for performing unilateral surgical denervation on mouse dorsal back skin. Together, these approaches can be used to directly compare TD morphology and gene expression in denervated as well as sham-operated skin from the same animal. These methods can also be readily adapted to examine the requirement for nerves in mouse models of skin pathology. Finally, the ability to repeatedly sample the skin provides an opportunity to monitor disease progression at different stages and times after initiation.

This article includes detailed protocols for genetic labeling of mouse skin, surgical denervation, skin biopsy and visualizing labeled epithelia by whole-mount &#946;-galactosidase staining. These methods can be used to test the requirement for nerves in mouse models of normal and pathological skin.

Deri Cerrahi denervasyon: Cilt Hastalıkları Fare modelleri Sinirler için Gereği Test Bir Yöntem

Cutaneous somatosensory nerves function to detect diverse stimuli that act upon the skin. In addition to their established sensory roles, recent studies ...

Maximum Isometric Tetanic Force Measurement of the Tibialis Anterior Muscle in the Rat

Traumatic nerve injuries result in substantial functional loss and segmental nerve defects often necessitate the use of autologous interposition nerve grafts. Due to their limited availability and associated donor side morbidity, many studies in the field of nerve regeneration focus on alternative techniques to bridge a segmental nerve gap. In order to investigate the outcomes of surgical or pharmacological experimental treatment options, the rat sciatic nerve model is often used as a bioassay. There are a variety of outcome measurements used in rat models to determine the extent of nerve regeneration. The maximum output force of the target muscle remains the most relevant outcome for clinical translation of experimental therapies. Isometric force measurement of tetanic muscle contraction has previously been described as a reproducible and valid technique for evaluating motor recovery after nerve injury or repair in both rat and rabbit models. In this video, we will provide a step-by-step instruction of this invaluable procedure for assessment of functional recovery of the tibialis anterior muscle in a rat sciatic nerve defect model using optimized parameters. We will describe the necessary pre-surgical preparations in addition to the surgical approach and dissection of the common peroneal nerve and tibialis anterior muscle tendon. The isometric tetanic force measurement technique will be detailed. Determining the optimal muscle length and stimulus pulse frequency is explained and measuring the maximum tetanic muscle contraction is demonstrated.

Evaluation of motor recovery remains the benchmark outcome measure in experimental peripheral nerve studies. The isometric tetanic force measurement of the tibialis anterior muscle in the rat is an invaluable tool to assess functional outcomes after reconstruction of sciatic nerve defects. The methods and nuances are detailed in this article.

Sıçandaki Tibialis Ön Kasının Maksimum İzometrik Tetanik Kuvvet Ölçümü

Traumatic nerve injuries result in substantial functional loss and segmental nerve defects often necessitate the use of autologous interposition nerve ...

Modified Spared Nerve Injury Surgery Model of Neuropathic Pain in Mice

Spared nerve injury (SNI) is an animal model that mimics the cardinal symptoms of peripheral nerve injury for studying the molecular and cellular mechanism of neuropathic pain in mice and rats. Currently, there are two types of SNI model, one to cut and ligate the common peroneal and the tibial nerves with intact sural nerve, which is defined as SNIs in this study, and another to cut and ligate the common peroneal and the sural nerves with intact tibial nerve, which is defined as SNIt in this study. Because the sural nerve is purely sensory whereas the tibial nerve contains both motor and sensory fibers, the SNIt model has much less motor deficit than the SNIs model. In the traditional SNIt mouse model, the common peroneal and the sural nerves are cut and ligated separately. Here a modified SNIt surgery method is described to damage both common peroneal and sural nerves with only one ligation and one cut with a shorter procedure time, which is easier to perform and reduces the potential risk of stretching the sciatic or tibial nerves, and produces similar mechanical hypersensitivity as the traditional SNIt model.

<meta charset="utf8"></head><body>Farelerde Nöropatik Ağrının Modifiye Edilmiş Korunmuş Sinir Yaralanması Cerrahisi Modeli

The modified surgery is a simplified method for mouse or rat spared nerve injury model that requires only one ligation and one cut to injure both common peroneal and sural nerves.

Farelerde Nöropatik Ağrının Modifiye Edilmiş Korunmuş Sinir Yaralanması Cerrahisi Modeli

Spared nerve injury (SNI) is an animal model that mimics the cardinal symptoms of peripheral nerve injury for studying the molecular and cellular ...

Traumatic Peripheral Nerve Injury in Mice

Traumatic peripheral nerve injury (TPNI) is a common cause of morbidity following orthopedic trauma. Reproducible and precise methods of injuring nerve and denervating muscle have long been a goal in musculoskeletal research. Many traumatically injured limbs have nerve trauma that defines the long-term patient outcome. Over several years, precise methods of producing microsurgical nerve injuries have been developed, including crush, lacerations, and nerve-gap grafting, allowing for reproducible outcome assessments. Moreover, newer methods are created for calibrated crush injuries that offer clinically relevant correlations with outcomes used to assess human patients. The principles of minimal manipulation to ensure low variability in nerve injury allow for adding still more associated tissue injuries into these models. This includes direct muscle crush and other components of limb injury. Finally, atrophy assessment and precise analysis of behavioral outcomes make these methods a complete package for studying musculoskeletal trauma that realistically incorporates all the elements of human traumatic limb injury.

The present protocol describes traumatic peripheral nerve injuries (TPNIs), including precisely calibrated crush, strictly aligned and misaligned laceration, as well as grafted and non-grafted gaps of the sciatic nerve in mice. Custom-designed sensors are developed to gauge nerve trauma, induced with commonly available tools to ensure reproducible post-TPNI outcomes.

Traumatic peripheral nerve injury (TPNI) is a common cause of morbidity following orthopedic trauma. Reproducible and precise methods of injuring nerve ...

Dosage-Adjusted Resistance Training in Mice with a Reduced Risk of Muscle Damage

Progressive resistance training (PRT), which involves performing muscle contractions against progressively greater external loads, can increase muscle mass and strength in healthy individuals and in patient populations. There is a need for precision rehabilitation tools to test the safety and effectiveness of PRT to maintain and/or restore muscle mass and strength in preclinical studies on small and large animal models. The PRT methodology and device described in this article can be used to perform dosage-adjusted resistance training (DART). The DART device can be used as a standalone dynamometer to objectively assess the concentric contractile torque generated by the ankle dorsiflexors in mice or can be added to a pre-existing isokinetic dynamometry system. The DART device can be fabricated with a standard 3D printer based on the instructions and open-source 3D print files provided in this work. The article also describes the workflow for a study to compare contraction-induced muscle damage caused by a single bout of DART to muscle damage caused by a comparable bout of isometric contractions (ISOM) in a mouse model of limb-girdle muscular dystrophy type 2B/R2 (BLAJ mice). The data from eight BLAJ mice (four animals for each condition) suggest that less than 10% of the tibialis anterior (TA) muscle was damaged from a single bout of DART or ISOM, with DART being less damaging than ISOM.

The present protocol describes a unique technique called dosage-adjusted resistance training (DART), which can be incorporated into precision rehabilitation studies performed in small animals, such as mice.

Kas hasarı riski azaltılmış farelerde dozaj ayarlı direnç eğitimi

Progressive resistance training (PRT), which involves performing muscle contractions against progressively greater external loads, can increase muscle ...

Surgery and Behavioral Testing in the Tibial Neuroma Transposition Model in Rats

The tibial neuroma transposition (TNT) is a rat model in which allodynia at the neuroma site (tibial nerve) can be independently evaluated from allodynia at the plantar surface of the hind paw innervated by the intact sural nerve. This TNT model is suitable to test therapies for neuroma pain, such as the potential superiority of certain surgical therapies that are already used in the clinic, or to evaluate new drugs and their effect on both pain modalities in the same animal. In this model, a distal lesion (neurotmesis) is made in the tibial nerve, and the proximal nerve end is transposed and fixed subcutaneously and pretibially to enable assessments of the neuroma site with a 15 g Von Frey monofilament. To assess allodynia over the sural nerve, Von Frey monofilaments can be used via the up-down method on the plantar lateral region of the hind paw. After cutting the tibial nerve, mechanical hypersensitivity develops at the neuroma site within 1 week after surgery and persists at least until 12 weeks after surgery. Allodynia at the sural innervated plantar surface develops within 3 weeks after surgery compared to the contralateral limb. At 12 weeks, a neuroma forms on the proximal end of the severed tibial nerve, indicated by dispersion and swirling of axons. For the TNT model surgery, multiple critical (micro)surgical steps need to be followed, and some surgery practice under terminal anesthesia is advised. Compared to other neuropathic pain models, such as the spared nerve injury model, allodynia over the neuroma site can be independently tested from sural nerve hypersensitivity in the TNT model. However, the neuroma site can be tested only in rats, not in mice. The tips and directions provided in this protocol can help research groups working on pain successfully implement the TNT model in their facility.

This protocol describes the tibial neuroma transposition model, which entails a lesion of the tibial nerve with subsequent transposition of the proximal nerve end toward a subcutaneous pretibial or lateral position. Behavioral testing of neuroma pain and plantar hyperalgesia is quantified using Von Frey monofilaments.

Sıçanlarda Tibial Nöroma Transpozisyon Modelinde Cerrahi ve Davranışsal Test

The tibial neuroma transposition (TNT) is a rat model in which allodynia at the neuroma site (tibial nerve) can be independently evaluated from allodynia ...

Tibial Sinir transeksiyonu - Farelerde denervasyon bağlı İskelet Kas Atrofi için bir Standart Model

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Fare İndüklenmiş Mekanik allodini ayrılan sinir hasarı (SNI) Model

Tüm Dağı Muscle Analizi ile tekrarlanabilir Fare Siyatik Sinir Ezilme ve Rejenerasyon daha sonraki Değerlendirme

Farelerde Yüz Sinir Aksotomi: Sakatlık Motonöron Yanıtı Eğitim için Bir Model

Deri Cerrahi denervasyon: Cilt Hastalıkları Fare modelleri Sinirler için Gereği Test Bir Yöntem

Sıçandaki Tibialis Ön Kasının Maksimum İzometrik Tetanik Kuvvet Ölçümü

Farelerde Nöropatik Ağrının Modifiye Edilmiş Korunmuş Sinir Yaralanması Cerrahisi Modeli

Farelerde Nöropatik Ağrının Modifiye Edilmiş Korunmuş Sinir Yaralanması Cerrahisi Modeli

Traumatic Peripheral Nerve Injury in Mice

Kas hasarı riski azaltılmış farelerde dozaj ayarlı direnç eğitimi

Sıçanlarda Tibial Nöroma Transpozisyon Modelinde Cerrahi ve Davranışsal Test