Наши исследования сосредоточены на стандартизации макроскопических измерений раны с использованием контролируемой визуализации, обеспечивающей согласованность и легкое положение и расстояние или протоколов, направленных на минимизацию вариабельности и улучшение актуальности измерения близости раны в доклинических моделях. Мы решаем проблему отсутствия стандартизации в микроскопических измерениях ран. В современных методологиях часто отсутствуют условия контроля, что приводит к несогласованности данных.
Наш протокол предлагает применимую конфигурацию, которая обеспечивает равномерное освещение, позиционирование и расстояние, снижая вероятность и повышая воспроизводимость. Наш протокол устраняет распространенные источники погрешности измерений за счет стандартизации условий визуализации. В отличие от ручных методов, он обеспечивает согласованность между экспериментами, позволяя проводить точные сравнения и уменьшая вариабельность в измерениях площади и периметра ран.
Наш результат позволяет получить более точные и воспроизводимые данные измерений раны за счет стандартизированной методологии. Это является основой для оценки терапевтических вмешательств и доклинических исследований ран. Для начала закрепите алюминиевый профиль с прорезями на внутренней площади бокового края крыши.
Поместите две прямоугольные алюминиевые пластины с полиэтиленовыми центрами в пазы кровельных профилей, чтобы обеспечить скольжение через оба профиля. Установите 20-сантиметровую светодиодную трубку RGB под углом 45 градусов на нижний край первой панели с помощью двустороннего скотча. Затем установите прямоугольную панель из пенопласта с центральным круглым вырезом 7,82 см на каждой панели крыши, чтобы можно было установить объектив камеры.
Для постройки пола сначала вырежьте квадраты со стороной 2,54 сантиметра из каждого угла из белой пенопластовой плиты размером 40 на 40 сантиметров. Этот шаг гарантирует, что пенопластовая плита правильно вписывается в профили пола. После обрезки углов поместите пенопластовую плиту поверх профилей зоны пола.
Прикрепите застежки-липучки к алюминиевым профилям A и B, чтобы легко манипулировать внутренними элементами фотобудки. Неподвижный клей крепится в одном сантиметре от края из двух квадратов из пенокартона с одной стороны и располагает их на передней и задней стенках. С помощью силикона приклейте две панели по сторонам C и D, чтобы сформировать левую и правую боковые стены.
Поместите напечатанную на 3D-принтере маску в 11,5 сантиметрах от края предварительно вырезанного прямоугольника из белого пенопласта размером 40 на 28 сантиметров, чтобы держать мышей под ингаляционной анестезией. Затем приклейте его к центру опорной основы. Закрепите напечатанный на 3D-принтере блок линейки в одном сантиметре от левой стороны основания мыши, чтобы разместить измерительный эталонный элемент для цифровой обработки изображений.
Затем прикрепите 15-сантиметровую градуированную линейку из нержавеющей стали к блоку линейки и установите всю опорную базу внутри кабины для масштабирования изображения. После обезболивания мыши используйте стерильный пятимиллиметровый биопсийный перфоратор, чтобы круговыми движениями надавить на него, чтобы создать дермоэпидермальный разрез на уровне лопатки. Снимите лоскут зубчатыми щипцами и разрежьте ножницами с наконечником ириса.
С помощью ювелирных щипцов наложите на рану круглую дермальную пленку диаметром один сантиметр, чтобы предотвратить загрязнение и сокращение. Чтобы сделать снимки ран, расположите опорную базу в центре пола фотобудки. Затем расположите мышь под наркозом в положении лежа на мышиной платформе.
Установите переднюю стенку фотобудки и сделайте макроскопические снимки. Чтобы открыть созданный образ резервной копии в imagej, перейдите в раздел «Файл», «Открыть и поиск». Затем нажмите кнопку Открыть.
Теперь разверните изображение, выберите инструмент «Прямая линия», затем с помощью клавиши «плюс» увеличьте масштаб линейки рядом с мышью. Нарисуйте на изображении линейки прямую линию длиной 10 миллиметров. Перейдите к анализу и установите масштаб.
Введите 10 в качестве известного расстояния. Установите единицу измерения длины в миллиметрах и нажмите Okay. Затем с помощью инструмента «Прямоугольник» выделите область вокруг раны шириной и высотой 150 и запишите значения X и Y.
Затем щелкните правой кнопкой мыши по прямоугольнику и выберите дубликат. Назовите дубликат изображения и нажмите клавишу Enter. На новом изображении дважды нажмите «плюс», чтобы увеличить масштаб.
Чтобы разделить изображение на цветовые каналы, перейдите в раздел «Изображение», «Тип» и «Стек RGB». На изображении красного канала щелкните правой кнопкой мыши по изображению, выберите дубликат и нажмите Ok в окне дубликата. Затем нажмите на изображение красного канала, выберите изображение, настройте и порог для его сегментации.
Выберите По умолчанию и нажмите кнопку Применить, чтобы применить пороговое значение. Выпрямляйте интересующую область или ROI, чтобы обеспечить полное покрытие раны и избежать искажений сегментации. Чтобы определить периметр области интереса, выберите «Редактировать», затем перейдите к выборке и выберите «Создать выборку».
После этого выберите «Редактировать», затем «Выбор» и нажмите «Добавить в менеджер», чтобы добавить его в менеджер ROI. Чтобы проверить сегментацию, откройте окно Менеджер ROI и выберите ROI для проверки. Нажмите «Еще», «Перевод», введите записанные значения X и Y и нажмите «ОК».
Разверните исходное изображение, затем выберите ROI в менеджере ROI. С помощью клавиш со стрелками отрегулируйте ROI до тех пор, пока он не совпадет с раной. После подтверждения сегментации получите измерения раны, выбрав «Анализ и измерение».
Процент закрытия раны первоначально увеличился до 138,04% на второй день из-за воспалительных процессов, а затем снизился и перешел к фазам восстановления и консолидации, при этом последовательное закрытие наблюдалось после седьмого дня. Расстояние втягивания края раны первоначально увеличивалось во время воспалительной фазы, но начало уменьшаться после третьего дня, как показано уравнением Гилмана, указывающим на постепенное сокращение раны.
