Использование анализа теплового сдвига для зондирования связывания субстрата с селенопротеином O

Наша цель — изучить биохимическую активность белков с неизвестными функциями. Связывание кофактора не только важно для активности некоторых белков, но также может изменять их термическую стабильность. Одно из практических применений этого явления заключается в использовании изменения термической стабильности, измеряемого температурой плавления белка, для анализа связывания лигандов.

Анализ теплового сдвига является универсальным инструментом для исследования взаимодействия белков с потенциальными кофакторами или лекарственными препаратами, а также для выявления стабилизирующих условий для кристаллографии. Некоторые из его преимуществ по сравнению с другими методами грохочения заключаются в относительно простой настройке и высокой производительности с 96 или 384 луночными планшетами. Селенопротеин О, или SelO, является эволюционно консервативной псевдокиназой, которая переносит аденозинмонофосфат из АТФ в белковые субстраты в посттрансляционной модификации, известной как АМПилирование.

В этом протоколе мы используем TSA для анализа связывания нуклеотидов и металлов с SelO.