Протокол позволяет неинвазивное и высокое разрешение представления и анализа взрослых зебры функции сердца. Этот метод может быть использован для проверки взрослых моделей сердечных заболеваний и потенциальных экранов наркотиков. Этот метод позволяет быстрое позиционирование рыбы для правильной визуализации, обеспечивая точные и воспроизводимые результаты.
Он неинвазивный и выполняется под водой, что позволяет быстрое восстановление рыбы. Чтобы настроить платформу для получения изображений, используйте маленькие ножницы или скальпель, чтобы сделать разрез на губке в положении 12 часов. Поместите губку в стеклянный контейнер.
Используя двустороннюю ленту, прикрепите стеклянный контейнер, содержащий губку, на ультразвуковой платформе. Убедитесь, что стеклянный контейнер находится в центре платформы и прочно прикреплен. Наклоните платформу вперед примерно на 30 градусов, используя ручку на левой стороне держателя платформы.
Заполните стеклянный контейнер примерно 200 миллилитров воды рыбной системы, содержащей 0,2 миллиграмма на миллилитр трикаина метансульфоната. Вставьте предуктор в держатель микроманипулятора на рабочей железнодорожной станции, поворачивая выемку препонатора в сторону оператора. Держите массив параллельно земле с продольной рабочей стороны по отношению к сцене.
Оставьте достаточно места около 10 сантиметров с обеих сторон для теперь подключенной трансдуцерной железнодорожной системы, чтобы двигаться вдоль х и у-осей. Войдите в программное обеспечение управления и выберите мышь небольшой сосудистой. Создайте новое исследование, а также новую серию для каждого животного, индуцированного в исследовании.
Нажмите новую кнопку исследования, расположенную в левой нижней части экрана на странице браузера. Представление начинается в B-режиме. Используя рыбную сетку, перенесите рыбу в небольшой резервуар, содержащий системную воду с 0,2 миллиграмма на миллилитр трикаина.
Подождите, пока рыба полностью анестезируется без движения или без ответа на прикосновения. Аккуратно и быстро перенесите рыбу в стеклянный контейнер с губкой в ранее сделанный разрез с брюшной стороной рыбы вверх. Аккуратно опустите предуц с помощью ручки на железнодорожной системе, поместив ее продольно и закройте вентраловую сторону рыбы выемкой предуцера, обращенной к оператору.
Оставьте два-три миллиметра зазора от рыбы. Отрегулируйте платформу по отношению к предуктору с помощью микроманипулятора во всех трех осях до тех пор, пока рыбье сердце не будет визуализировано. Сразу после локализации сердца выберите или оставайтесь в B-режиме и уменьшите поле, увеличив масштаб, чтобы поближе взглянуть на сердце.
При необходимости увеличь качество или контрастность изображения, установив динамический диапазон до 45-50 децибел. Перейдите на элементы управления B-mode в опции больше элементов управления и впоследствии сохраните изменение в пресетах режима. Нажмите режим пресетов, чтобы выбрать оптимизированный параметр приобретения изображения каждый раз, прежде чем начать изображение новой серии.
Возьмите столько изображений, сколько пожелает в плоскости длинной оси. Затем переключитесь на цвет Doppler для обнаружения и приобретения кровотока. Используя сенсорный экран, распоить квадрант поверх атриовентрикулярного клапана и локализовать приток, который отличается красным цветным сигналом.
Уменьшите площадь квадранта как можно больше, чтобы увеличить частоту кадров. Активируйте импульсную волну Doppler двигаться, чтобы образец желудочковой скорости притока крови. Распоитите ворота объема образца в центре атриовентрикулярного клапана для обнаружения максимальной скорости потока.
Красный цветной сигнал становится более желтоватым. Отрегулируйте угол импульсной волны на экране с помощью пальцев, чтобы он выравнивается с направлением притока крови. Нажмите начать или обновить, чтобы начать отбор проб скорость крови, поступающей в желудочек.
Определите скорость оттока, поместив цветной квадрант Доплера на стыке желудочка с луковичем и локализуйте поток. Это отличается синим цветом сигнала. Распоить ворота объема образца прямо перед соединением желудочка bulbus и отрегулировать линию коррекции угла, чтобы соответствовать направлению кровотока.
Отрегулируйте базовый уровень, поднимая его в панели скорости потока, чтобы полностью обнаружить и отследить пики сигнала. Как только изображение приобретение завершено, использовать чайную ложку и передачи рыбы в обычной системе газированной воды, свободной от трикаина и пусть рыба восстановить. Чтобы помочь восстановлению, шприц воды неоднократно над жабры с помощью передачи пипетки для содействия аэрации воды и передачи кислорода.
Это обычно занимает от 30 секунд до двух минут, чтобы возобновить движение жабры и плавание. Откройте программное обеспечение для анализа изображений. Выберите изображение и нажмите на значок обработки изображений.
Отрегулируйте яркость и контрастность изображения, чтобы дать возможность четкой визуализации стенок желудочков или структуры кровотока. Используя изображение B-режима, откройте список высадок из параметра парастернал длинной оси на измерениях сердечного пакета. Выберите след LV и проследить желудочковой внутренней стенки на систолы и диастола для получения желудочковой области в систолии и диастолического и диастолического объема и конца систолического объема.
В этом исследовании, B-режим изображения позволили для отслеживания желудочковой внутренней стенки в сизола и диастола и получения мерных данных, таких как камеры и стены размеров. Были также получены функциональные данные, такие как пульс, объем инсульта и сердечный выброс, а также параметры систолической функции желудочков, включая изменение дробной области и фракцию выброса. Измерения на уровне атриовентрикулярного клапана с использованием цветных изображений режима Доплера также обеспечивали приток желудочков и скорость оттока крови.
Основываясь на изображении импульсной волны Доплера, значение сердечного ритма было получено путем отслеживания трех последовательных пиков аортического потока. Самое главное, чтобы распоставить ультразвуковую платформу и рыбу правильно для точной визуализации и свести к минимуму воздействие рыбы на tricaine. Дополнительные методы для поддержки этой процедуры включают рыбы электрокардиограммы для быстрого выявления дисфункции сердца, как аритмии или гистологии методы для оценки структуры сердечной ткани или клеточной смерти.
Эти методы позволяют оценки функции сердца зебры и установить сердечный фенотип в моделях болезней сердца зебры. Это также позволяет тестировать новые препараты, изучать травмы сердца и регенеративные способности. Tricaine MS-222 является раздражением кожи, глаз и дыхательных путей.
При приготовлении tricaine раствор, защитное оборудование должно включать в себя маску пыли, глазной щит и перчатки.
