Вспышка нанопреципитации, или FNP методы, продемонстрированые здесь предлагают масштабируемые и простой платформы для инкапсуляции гидрофобных или гидрофильных соединений внутри полимерных наночастиц. Для ясности, метод, используемый для инкапсулировать биопрепараты называется обратной вспышки нанопреципитации, или IFNP. Основные принципы неизменны, но полученная структура наночастиц отличается.
Как правило, новые пользователи нуждаются в практике последовательно работать ввезже шприцы при ручном создании небольших наночастиц партий. Большие объемы могут быть произведены с помощью управляемых компьютером шприц-насосов. Наш протокол также содержит подробную информацию о постобработки наночастиц решений, которые часто имеют решающее значение для успешного применения формулировки.
Перед началом процесса проверьте фитинги смесителя CIJ и убедитесь, что розетка не обжимается. Затем заполните два пятимилитровых полипропиленовых резиновых свободных шприцев Luer блокировки с двумя-тремя миллилитров ацетона, или другой растворитель очистки. Заблокив шприцы в адаптеры в входе, и установите сборку над мусорным контейнером.
Устойчиво угнетайте поршени, чтобы отправить растворителя через камеру смешивания в течение нескольких секунд. Затем снимите шприцы и высушите смесь потоком азотного газа. Далее, чтобы начать подготовку растворителя входного потока, пипетка 0,25 миллилитров 10 миллиграммов на миллилитр раствор витамина Е, в стабилизаторе свободных тетрагидрофуран, в 1,5 миллилитров микроцентрифуг трубки.
Затем пипетка 0,25 миллилитров 10 миллиграммов на миллилитр раствора стабилизатора блока кополитера в THF в ту же трубку. Вихрь смеси в течение пяти-десяти секунд, а затем центрифуга его на тысячу G в течение пяти до 10 секунд, чтобы восстановить жидкость, придерживаясь крышки. Подготовка 1,5 миллилитров центрифуги трубки, содержащей 0,525 миллилитров деионизированной воды в качестве анти-растворителя.
Затем, пипетка четыре миллилитров деионизированной воды в 20 миллилитров сцинтилляционного флакона, чтобы сделать утолить ванну. Поместите небольшой бар перемешать во флаконе. Поместите чистый миксер CIJ над ванной в стойке или блоке пробирки на тарелку для перемешивания.
Начните перемешивать ванну с максимально возможной скоростью около 75%. Затем, подходят тупой наконечником иглы на один миллилитр полипропиленовой резины свободный шприц, и составить анти-растворитель. Тщательно изгнать пузырьки воздуха из шприца, а затем удалить и избавиться от иглы.
Отрегулируйте поршень так, чтобы жидкость доехала до конца шприца. Затем прикрепите шприц к одному из входов CIJ. Нарисуйте растворительную смесь во второй шприц таким же образом и прикрепите его к другому входу.
Чтобы сформировать наночастицы, одновременно угнетают оба поршеня плавным однородным движением менее чем за 0,5 секунды. Очень важно угнетать шприцы быстро, равномерно и плавно. Вы не должны внезапно ударить шприцы, но должны начать движение уже в контакте с вершинами шприцев.
После этого установите смеситель CIJ над контейнером для отходов, не удаляя шприцы, чтобы убедиться, что объем удержания не сливается в дисперсию. Удалите бар перемешать из сцинтилляционной флакона и крышка его. Затем удалите и отбросьте растворители и анти-растворители шприцев.
Очистите миксер перед следующей вспышкой нанопреципибилизации суда. Чтобы подготовить образец для динамического анализа рассеяния света, пипетка 100 микролитров дисперсии в кювет. Добавьте 900 микролитров растворителя ванны, и хорошо перемешайте с помощью пипетки перед началом анализа образца.
Чтобы начать сборку микро MIVM, поместите O-кольцо в диске геометрии смешивания. Выровнять отверстия в смешивая диске с колышками на верхнем диске, и поместить их вместе, будьте осторожны, чтобы не вытеснить O-кольцо. Ослабить розетку трубки установки в нижнем приемнике, а затем винт подключенных дисков в приемник.
Fit шпангоут ключ к колышкам верхнего диска, и затянуть сборки. Затяните розетку трубки установки так, что он сидит твердо против нижней стороне диска смешивания геометрии. Убедитесь, что шприц фитинги на верхнем диске уютно.
Поднимите мобильную пластину на стенде смесителя, чтобы держать его в стороне, а затем поместите собранный миксер на стенде, с розеткой труб резьбой через опорную пластину. Далее поместите 15 миллилитровую центрифугу, содержащую 5,25 миллилитров хлороформа, в качестве утоляющая ванна под розеткой труб. Затем нарисуйте 0,75 миллилитров раствора А, который составляет пять миллиграммов на миллилитр раствора овалбумина в диметиловом сульфоксиде в 10%воде по объему, в один миллилитровый газ плотный шприц замка Luer с тупой наконечником иглы.
Тщательно изгнать пузырьки воздуха, удалить иглу, и премьер решение к концу Luer установки. Подключите шприц к входу миксера. Повторите этот процесс с 0,75 миллилитров каждый из раствора B, который составляет шесть миллиграммов на миллилитр стабилизатора блока кополитера в DMSO, и раствор C, который является THF.
Подключите шприцы к смесителям по часовой стрелке в алфавитном порядке. Приготовьте 2,5 миллилитровый газовый шприц, содержащий 1,85 миллилитров раствора D, который является хлороформом, и соедините его с четвертым ввесятом. Подтвердите, что существенной разницы в высотах шприца нет.
Затем осторожно схвяйте подшипник с каждой стороны мобильной пластины и медленно опустите тарелку, пока она едва лежит равномерно поверх шприцев. Для генерации наночастиц, неуклонно и плавно угнетают пластину примерно за 0,5 до одной секунды. Затем снимите и крышка утолить трубку ванны.
Разобрать и очистить смеситель, когда закончите. Для работы с большими объемами загрузите растворы в газовые шприцы и соедините полиэтиленовые трубы с фитингами Luer к шприцам. Премьер решения для концов трубки.
Зажим шприцев в шприц насосы, и прикрепить трубки к соответствующим смеситель входов. Поместите небольшой флакон отходов под розетку трубки для сбора объема запуска. Приготовьте ванну для утоления и держите ее поблизости.
Одновременно, запустите насосы, и пусть около пяти миллилитров сточных вод текут в флакон отходов. Затем начните собирать наночастицы в ванне утоления, как обычно. Тарелка перемешивания может быть использована для смешивания утоления ванны при желании.
Четыре репликации FNP полимерных наночастиц с гидрофобным ядром, приготовленные в миксере CIJ, показали высокую репликатность и были относительно монодисперсными, со средним диаметром 107 нанометров. Репрезентативная осечка от медленной или неравномерной депрессии шприца, производится несколько больших частиц, в то время как поликистоз не влияет в этом примере, осечки могут привести к более полидисперсных распределений. Функция автоматической корреляции DLS плавно распалась для репрезентативного образца полимерных наночастиц.
Этот гладкий распад не наблюдался, когда формулировка была предпринята без стабилизатора блока кополимер, который производится микрон масштаба капель масла вместо. Относительное количество основного материала для стабилизатора контролировало размер частиц, как показано здесь, в наночастицах с полистироловым ядром. PDI был ниже 0,15 в каждой формулировке.
Наночастицы с гидрофильные ядра, где производится IFNP. Частицы с мальтодекстринным ядром, приготовленные в смеситель CIJ, были около 65 нанометров в диаметре, и PDI 0,08. Частицы с оварбумин ядром, подготовленным в микро MIVM было около 125 нанометров в диаметре, и PDI 0,16.
FNP и IFNP являются мощными инструментами для обработки молекул и наночастиц. Перед выполнением любой техники, не забудьте рассмотреть solubilities каждого компонента во всех растворителей, или растворителя смеси, чтобы обеспечить высокую супер насыщенность во время смешивания. Основная техника проста, но освоение шприца депрессии шаги занимает некоторую практику.
Если у вас есть проблемы с этим, рассмотреть вопрос об использовании установки шприц насоса, как показано в этом видео для улучшения согласованности. Для заряженных гидрофильных молекул, или молекул с промежуточной солуствоваемости, ФНП может сочетаться с гидрофобным ионом спаривания, чтобы обеспечить эффективную инкапсуляцию. FNP также может быть использован для инкапсулировать несколько соединений в одном и том же ядре наночастиц.
Проконсультируйтесь с текстовыми и другими литературными ресурсами, чтобы узнать, как лучше удалить органические растворители из дисперсий наночастиц в желаемом приложении. Существует также ряд методов стабилизации наночастиц во время хранения.
