Utilizando o ensaio de deslocamento térmico para sondar a ligação do substrato à selenoproteína O

Nosso objetivo é estudar a atividade bioquímica de proteínas com funções desconhecidas. A ligação ao cofator não é apenas essencial para a atividade de algumas proteínas, mas também pode alterar sua estabilidade térmica. Uma aplicação prática desse fenômeno reside na utilização da mudança na estabilidade térmica medida pela temperatura de fusão da proteína para analisar a ligação do ligante.

O ensaio de deslocamento térmico é uma ferramenta versátil para investigar interações proteicas com potenciais cofatores ou drogas e para identificar condições estabilizadoras para cristalografia. Algumas de suas vantagens sobre outros métodos de peneiramento são sua configuração relativamente simples e alto rendimento com placas de 96 ou 384 poços. A selenoproteína O, ou SelO, é uma pseudoquinase evolutivamente conservada que transfere monofosfato de adenosina do ATP para substratos proteicos em uma modificação pós-traducional conhecida como AMPilação.

Neste protocolo, usamos TSA para analisar a ligação de nucleotídeos e metais ao SelO.