Ensaio de remontagem de luciferase dividida para medir contatos de retículo endoplasmático-mitocôndrias em células vivas

Em meu laboratório, estudamos a comunicação interorgânica que assume uma forma de contato com a membrana e seus papéis na manutenção da saúde celular, bem como na patogênese da doença. Estamos particularmente interessados nos contatos de membrana entre as mitocôndrias e o retículo endoplasmático e em tentar entender como eles são regulados e como sua desregulação pode levar à neurodegeneração. Embora saibamos que os contatos das mitocôndrias do RE são importantes para a saúde celular e sua desregulação está associada a muitas doenças, não sabemos muito sobre como seu nível é regulado.

O primeiro passo para resolver isso é estabelecer um protocolo simples e confiável para medir o nível de contatos das mitocôndrias do ER nas células. Nosso ensaio de luciferase dividida oferece uma maneira mais fácil e rápida de quantificar os contatos das mitocôndrias do ER em células vivas em comparação com a maioria dos ensaios. Aproveitamos duas metades divididas da renila luciferase, uma metade direcionada ao ER e a outra às mitocôndrias.

Eles podem ser remontados juntos apenas onde o ER e as membranas mitocondriais têm contato próximo, o que resulta em luciferase reconstituída com uma atividade enzimática completa. Este método é simples, adequado para triagens de alto rendimento e facilmente acessível para muitos laboratórios. Esperamos que ele avance no campo das doenças neurodegenerativas, identificando moduladores moleculares e genéticos dos contatos das mitocôndrias do ER que podem ser desenvolvidos em agentes terapêuticos.

Nossos resultados abriram caminho para questões importantes, como como diferentes drogas ou combinações de drogas afetam os contatos das mitocôndrias do ER e quais são os importantes atores moleculares por trás desses contatos. A partir dessas perguntas, podemos entender melhor o mecanismo dos contatos das mitocôndrias do ER e encontrar maneiras de combater doenças relacionadas.