Um Protocolo Eficiente para Análise CUT&RUN de Células Satélites de Camundongos Isoladas por FACS

Há mais de 20 anos, nosso laboratório está interessado no papel fisiopatológico dos receptores nucleares. Para decifrar sua função in vivo, projetamos modelos de camundongos que permitem o controle espacial e temporal de sua expressão. Paralelamente, desenvolvemos técnicas de ponta para investigar sua função molecular nos tecidos de camundongos.

Nosso interesse científico recentemente nos levou a determinar a sinalização de receptores de secosteroides e esteroides em vários tecidos, incluindo o músculo esquelético. Recentemente, demonstramos que o receptor de andrógeno nas miofibras que diferenciam as células do músculo esquelético é fundamental em suas funções contráteis e metabólicas. Nossos resultados recentes fornecem uma compreensão mais profunda da dinâmica fisiopatológica do músculo esquelético que é crucial para desenvolver tratamentos eficazes para distúrbios associados ao músculo.

Desenvolvemos este protocolo para poder realizar a análise de ciestroma em células-tronco musculares in vivo. Todos os protocolos anteriores utilizavam modais in vitro, o que dissocia completamente a investigação de todo um contexto do organismo. Além de ser de baixo custo e eficiente em termos de tempo, este protocolo fornece um ambiente experimental eficaz para estudar o recrutamento de fatores de transcrição e a paisagem da cromatina em células progenitoras do músculo esquelético.

A cromatina preparada por este protocolo proporcionou a primeira análise genômica ampla do estromeu AR em células satélites, e facilitará futuros estudos sobre regulação gênica. Entre muitos, nosso objetivo futuro seria estender essas investigações para outros receptores de oxosteroides e explorar seus co-reguladores específicos nos vários tipos celulares envolvidos no processo de regeneração no músculo esquelético.