Nós fornecemos um protocolo para estabelecer infarto em um pons de rato. Este modelo de rato de infarto pontino foi facilmente executado, facilmente reproduzido e altamente bem sucedido modelo. A estimulação elétrica pode ser usada para causar infarto em qualquer outra área cerebral como o tálamo.
As pessoas que querem realizar esse modelo devem aprender a autonomia pontina antes do experimento. Antes da cirurgia, pesam os ratos e avaliam seu desempenho neurológico de acordo com os testes comportamentais descritos no texto que acompanha. Pré-aqueça a almofada de aquecimento a 37 graus Celsius imediatamente antes da anestesia e conecte a broca do crânio ao suporte no quadro estereotaxista.
Confirme a falta de resposta ao reflexo do pedal no primeiro rato anestesiado e monte o rato sobre o quadro estereotaxic na posição propensa na almofada de aquecimento. Posicione as barras de ouvido acima do canal auditivo para fixar a cabeça, tomando cuidado para que o crânio seja mantido horizontalmente para evitar qualquer distorção da injeção. Aplique pomada nos olhos do animal e use uma micro máquina de barbear para remover o cabelo do crânio.
Use um marcador para desenhar uma linha de três centímetros ao longo da linha média do crânio da linha do canthus lateral bilateral a 0,5 centímetros atrás da fontanelle posterior e use um bisturi para fazer uma incisão de linha média ao longo da linha marcada. Use um cotonete para remover qualquer sangue e coloque um pedaço de fita cirúrgica em cada lado da aba da pele para expor o crânio. Use um novo cotonete encharcado com cloreto de sódio de 0,9% para remover suavemente qualquer tecido conjuntivo do crânio e localizar o bregma.
Use uma caneta marcador de ponta fina para indicar o ponto central do bregma como o ponto de origem, coloque a broca em seis milímetros anteriores, dois milímetros lateral medial. Use a broca para realizar cuidadosamente uma craniotomia de um milímetro de diâmetro. Em seguida, substituiu a broca por uma sonda calibre 22 por uma baia isolada com a ponta colocada dois milímetros acima da extremidade proximal da baia.
Insira as folhas sete milímetros no cérebro e avance a sonda ao longo da baia até que o topo da sonda esteja nove milímetros abaixo da superfície do cérebro. Conecte os eletrodos a um estimulador elétrico e conecte o ânodo à sonda. Em seguida, conecte-se ao cátodo ao ouvido do rato.
Em seguida, ligue o estimulador elétrico e defina a largura de pulso único para 4.050 milissegundos, a tensão para 50 volts e a corrente para quatro miliamperes. Deixe a sonda em posição por cinco minutos após a estimulação antes de remover o dispositivo do cérebro. Cubra a craniotomia com cimento ósseo e deixe o cimento secar antes de usar filamentos de sutura de poliamida 4.0 para fechar a ferida.
Depois de três ou quatro pontos, amarre 2-1-1 nós cirúrgicos padrão. Em seguida, injete intraperitoneally o rato com 250 microliters de penicilina e monitore o rato a cada 15 minutos até totalmente acordado antes de devolver o animal à sua gaiola. Nesta análise, seis animais foram submetidos à cirurgia como demonstrado e seis animais foram tratados como controles.
As fatias cerebrais nestas imagens foram derivadas de um rato por grupo. A ressonância magnética revelou que o infarto foi localizado na base dos pons imitando infartos anterolaterais em pacientes humanos. Como foi utilizada uma baanha isolada, o infarto não foi observado no córtex, cerebelo ou midbrain.
Imagens ponderadas por difusão também revelaram o infarto agudo de pontina. A coloração do TTC foi usada para confirmar o infarto 24 horas após a cirurgia. Como esperado, o volume de infarto foi significativamente maior no grupo cirúrgico em comparação com o grupo controle.
Os escores comportamentais foram medidos antes e depois da cirurgia. Comparados com o grupo controle, ratos com um infarto pontino circularam para a esquerda. Diferenças significativas foram observadas no Longa, Berderson, colocação de membros, equilíbrio do feixe e escores de teste somatossensorial de remoção adesiva entre discursos com infarto pontino e ratos do grupo controle.
Qualquer área cerebral específica será destruída pela estimulação elétrica.
