간외 담즙 시스템을 평가하는 많은 보고서에서 샘플을 얻었지만 어떻게 얻었는지는 보고하지 않아 비교 가능성에 대한 문제가 제기되었습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 전체 간외 담즙 시스템을 해부 할 수 있고 오염 세포를 무 외상으로 제거 할 수 있다는 것입니다. 우리의 해부 프로토콜은 일반적으로 간외 담도 시스템의 해부를 목표로하는 쥐 신생아 담관 장애에 대한 실험적 접근법에 적용될 수 있습니다.
예를 들어, 십이지장에 부착 된 위를 떠나는 것과 같은 프로토콜의 일부 기능은 위장에 의해 표현 된 부분적으로 소화 된 우유에 의한 올바른 방향을 허용하는 십이지장 폐쇄증 연구에 유용 할 수 있습니다. 처음에는 기술이 훈련에 약간의 시간이 필요할 수 있습니다. 단계별 접근 방식을 연습하고 따르면 속도와 결과가 향상됩니다.
시작하려면 소독 및 고압 멸균 된기구를 작업 테이블 옆의 멸균 표면에 놓습니다. 복막을 자른 후 왼쪽 정면 겨드랑이 선을 따라 참수 위치로 절단을 확장하십시오. 외상성 집게로 왼쪽에서 오른쪽으로 피부를 제거하십시오.
현미경으로 비장을 둘러싼 복막을 잡으십시오. 복막이 텐트와 같은 구조와 비슷할 때까지 부드럽게 들어 올리고 중앙에 1 밀리미터의 구멍을 자릅니다. 복막 텐트가 공기로 채워질 때까지 기다리십시오.
아래쪽 갈비뼈, 양쪽 측면 복부 및 아래쪽 방광 영역으로 둘러싸인 창에서 복막을 잘라냅니다. 간, 담관 시스템, 위, 소장 및 결장에 대한 완전한 접근을 보장합니다. 두개골 복부 위치에서 xiphoid 과정을 조심스럽게 당겨 담낭과 담관을 검사하십시오.
담관 시스템에서 담낭이 찢어 질 수있는 falciform 인대의 찢어짐을 피하십시오. 그런 다음 검상돌기의 당김을 해제합니다. 십이지장을 부드럽게 아래로 당겨 담관 시스템을 자유롭게합니다.
그런 다음 담관 시스템을 십이지장에 연결하는 십이지장 유두를 식별하여 하부 En-bloc 동원을 수행하십시오. 유두의 오른쪽 측면으로 약 2 센티미터의 십이지장을 자릅니다. 그런 다음 유문 부위를 자릅니다.
위의 내용물이 절단 위치와 십이지장 유두 사이의 유문 영역에 있는지 확인하십시오. 상부 En-bloc 동원을 수행하려면 검상돌기를 부드럽게 당기고 팔시 폼 인대에 접근하십시오. 담낭 사이의 falciform 인대를 통해 1 센티미터 절단하고 xiphoid 과정에 가깝게 만듭니다.
식도, 하대 정맥, 흉부 대동맥 및 간의 맨 부분을 둘러싸고있는 모든 인대와 같은 간과 흉부 사이의 연결 구조를 잘라냅니다. 또한 등쪽에 남아있는 모든 조직 연결을 절단하십시오. 현미경 배율의 20배에서 En-bloc 샘플을 폼 패드에 놓습니다.
샘플을 올바른 해부학 적 위치로 재구성하여 조립하십시오. 부드러운 움직임을 사용하여 십이지장의 구강 및 구강 부분을 평평하게하십시오. 외상성 집게를 사용하여 십이지장 유두에서 평평한 움직임을 시작하고 절삭 날로 계속하십시오.
그런 다음 십이지장의 구강 부분에서 위의 흰색 펄프 내용물을 부드럽게하십시오. 가능한 담관 회전을 배제하기 위해 십이지장의 구강 및 구강 부분을 식별하십시오. 담관을 해부하기 전에 간 조직의 큰 잔해를 잘라냅니다.
몇 번의 스크래핑 동작 후 샘플을 폼 매트의 더 깨끗한 위치로 옮깁니다. 백그라운드에서 덜 압착된 간 조직을 사용하여 EBDS와 원치 않는 세포 간의 구별을 위한 보기를 최적화합니다. 격리 된 EBDS가 남아있을 때까지 간십이지장 인대를 처리하십시오.
십이지장 유두에서 약 3-5mm 떨어진 흰색의 매우 섬세한 필라멘트로 발생하는 간동맥과 문맥을 관찰하십시오. 조심스럽게 왼쪽 측면을 부드럽게 당겨이 섬세한 필라멘트를 제거하십시오. 긁는 움직임이 담관 시스템에서 시작하여 간 경계로 이어지는지 확인하십시오.
이 프로토콜을 사용하여 EBDS는 9 일 된 쥐 신생아에서 해부되었습니다. 담낭에서 십이지장 유두까지 분리 된 EBDS의 길이는 10 밀리미터 미만이었고, 섬세한 덕트 콜레 도쿠스의 직경은 0.05에서 0.2 밀리미터까지 다양했다. 헤마톡실린 에오신 염색은 개방 내강으로 EBDS의 종방향 단면에서 수행하였다.
담관 세포는 단층으로 내강을 둘러싸고 확인되었으며 더 어둡게 염색되었습니다. 연구원은 해부 및 주사 프로토콜과 같은 운영 기술을 공유하고 표준화하여 연구 및 결과의 비교 가능성과 신속한 유용성을 개선해야 합니다. 선행 해부는 세포 배양 오염의 감소를 초래하기 때문에 담관내 및 담관외 세포의 분리와 같은 조직학적 및 단일세포 접근법에 유리할 것이다.
