Anopheles 모기 벡터에서 플라스모듐 팔시파룸 감염 검출을 위한 표준 막 공급 분석

이 프로토콜을 통해 아프리카 말라리아 벡터의 말라리아 감수성에 대한 치료 효과를 감지 할 수 있습니다. 예를 들어, 인간에서 모기로의 전염을 차단하기위한 화합물. 이 기술을 통해 연구자들은 독성 GATE를 사용할 수 있기 전에도 실험실 조건에서 많은 수의 화합물을 평가할 수 있습니다.

중추 해부는 처음에는 어려울 수 있지만 약간의 연습이 필요합니다. 또한, oocysts를 식별 할 수있는 것이 항상 쉬운 것은 아닙니다. 먼저 입 흡인기를 사용하여 먹이를 먹지 않은 암컷 Anopheles gambiae 모기 25 마리를 350 밀리리터 먹이 컵에 넣습니다.

대조군과 치료 그룹을 구별하기 위해 컵에 명확하게 라벨을 붙입니다. 포함된 기술 복제물의 수에 따라 처리당 컵 수를 선택합니다. 유리 피더 시스템을 수조에 연결하고 온도를 섭씨 37도로 유지하십시오.

그런 다음 젖소 장 또는 합성막을 수돗물로 헹구고 각 피더에 맞는 조각으로 절단하여 준비하십시오. 각 피더의 바닥 부분을 덮고 탄성 밴드로 멤브레인을 고정하십시오. 수유 컵을 감염 컵으로 사용하려면 먼저 컵의 그물 위에 막을 유지하십시오.

그런 다음 감염 컵을 피더 아래에 놓습니다. 이제 배우자 세포에 감염된 혈액 1 밀리리터를 대조군 컵의 피더에 추가하고 테스트 화합물로 배우자 세포에 감염된 혈액을 치료 컵의 피더에 추가하십시오. 그런 다음 모기를 약 40 분 동안 먹이십시오.

수유 후 컵에서 피더를 제거하고 피더를 헹구고 과도한 혈액을 차아 염소산염으로 처리하십시오. 그런 다음 모든 모기를 얼음 위에 1-2 분 동안 두드리고 부어 오르고 붉은 복부를 찾아 혈액 식사를 한 모기를 선택하십시오. 각 감염 컵에 격일로 제공되는 설탕물을 10% 설탕 물 패드로 교체하고 감염 컵을 생물안전 챔버에서 8-10일 동안 배양합니다.

먹이를 먹은 후 8-10 일 후에 감염된 모기를 얼음 위에 올려 놓으십시오. 그런 다음 70 % 에탄올로 라벨이 붙은 튜브로 옮겨 각 치료 그룹의 대조군을 별도의 튜브에 보관합니다. 대조군과 시험군을 분리하여 모기를 여과지가 늘어선 라벨이 붙은 페트리 접시로 옮깁니다.

적절하게 표시된 유리 슬라이드에 PBS 한 방울을 추가하고 모기를 여과지에서 방울로 옮깁니다. 해부 바늘로 모기의 흉부를 고정하십시오. 그런 다음 집게로 일곱 번째 복부 부분을 당겨 중추를 제거하고 새로운 현미경 슬라이드에서 0.1 % 수질 방울로 옮깁니다.

장을 8-10 분 동안 얼룩지게하십시오. 그런 다음 얼룩진 내장에 커버 슬립을 놓고 20-40 배 배율의 명시야 조명 아래에서 봅니다. 대조군과 각 치료 그룹에 대한 중추 당 oocysts의 수를 기록하십시오.

이 연구에서, 화합물 MMV1581558은 대조군과 비교하여 암컷 Anopheles gambiae 모기의 중추에서 플라스모듐 팔시파룸 oocysts의 수를 유의하게 제한하는 것으로 밝혀졌다. 대조군에서 중추의 oocysts의 평균 유병률은 89%였으며 평균 강도는 중추당 9.5개의 oocysts였습니다. 그러나 MMV1581558 치료군에서 평균 난포낭 유병률은 36%였으며 평균 강도는 중추당 1.5개에 불과했습니다.

따라서 MMV1581558 처리는 세 가지 생물학적 복제 모두에서 58%의 투과 차단 활성과 82%의 투과 감소 활성을 나타냈습니다. 모기가 건강한 배우자 세포 배양을 먹도록하는 것이 중요합니다. 이들이 미성숙 배우자 세포이거나 5 단계 배우자 세포가 아닌 경우 모기에 감염 될 확률은 제한적이거나 불가능합니다.

분석은 시각적 형태학적 식별 방법을 사용하지만 분자 정량 분석을 사용할 수 있습니다. 그러나 이것은 비용이 많이 들고 자원이 제한된 실험실에서의 사용을 제한 할 수 있습니다. 이 기술을 수행 할 수있는 능력을 갖추면 모기의 거의 모든 것 사이에서 말라리아 유병률과 강도의 변화를 평가할 수있는 새로운 길이 열립니다.

예를 들어, 종 벡터 용량을 비교합니다.