워터젯 기술을 통한 돼지 지방 조직 유래 스트로마 세포 주입

액체, 나노입자, 미세입자, 캡슐화된 약물, 또는 심지어 살아있는 세포와 같은 활성 성분의 워터젯 주사는 표적화된 상이한 조직에서의 바늘 주사와 비교할 때 훨씬 더 정밀하게 적용될 수 있다. 최소 침습적 접근법은 주사 압력을 미리 선택하여 표적 조직의 미리 결정된 층에서 약물의 정확한 국소화를 필요로 한다. 우리의 현재 초점은 요실금에 대한 세포 요법입니다.

그러나, 이 기술은 이미 심각한 심장 발작 후에 감염된 근육 조직의 재생으로 확장되었다. 현재이 기술은 전임상 연구에서 숙련 된 연구자 또는 면허가있는 의사 만 적용 할 수 있습니다. 그것은 미래의 임상 목적을 위해 개발 된 일상적인 실험실 절차에서 사용하기위한 것이 아닙니다.

시작하려면 성인 여성 육상 돼지에서 해부 된 연결 방광이있는 요도를 하부 골반 바닥의 탄력성을 모방 한 스폰지에 놓습니다. 그런 다음 방광을 사용하여 요도의 방향을 결정하십시오. 이것은 복부와 골반강의 방광을 고정시키는 요관과 세 인대의 국소화로 인해 가능합니다.

요도를 올바르게 방향을 잡은 후 카테터의 도움으로 등쪽에서 세로로 열어 자릅니다. 돼지 지방조직 유래 기질 세포의 세포 밀도를 밀리리터당 여섯 번째 세포에 2.4배 10배로 조정한 후, 세포를 녹색 형광막 투과성 살아있는 세포 염색으로 표지한 다음, 주사기로 세포 현탁액을 흡인하고 윌리엄스 세포스코픽 주사 바늘을 적용한다. 다음으로, 바늘을 15 밀리리터 원심분리 튜브에 두 밀리리터의 성장 배지 바로 위에 고정하거나 바늘을 열린 요도 조직에 삽입하십시오.

두 경우 모두 수동으로 250 마이크로 리터의 세포 현탁액을 주입하십시오. 세포는 주입 돔에서 사체 요도에 주입. 원심분리를 통해 배지에 직접 주입된 세포를 수집한다.

사체 요도에 주입 된 세포의 경우, 주사기에 18 게이지 바늘을 적용하여 주사 돔에서 흡인하십시오. 흡인된 세포를 원심분리 튜브로 옮기고 원심분리를 통해 펠릿화한다. 두 세포 펠릿을 네 밀리리터의 성장 배지에 재현탁시킨다.

세포 수율과 생존력을 결정하려면, 세포 현탁액 20개를 20마이크로리터의 트리판 블루와 완전히 섞는다. 그런 다음이 혼합물 10 마이크로 리터를 혈구계의 각 챔버에 채 웁니다. 현미경으로 네 모서리 사각형 모두에서 세포를 계산합니다.

염색되지 않은 백색 세포를 생존 가능한 세포로, 파란색으로 염색 된 세포를 죽은 세포로 계산 한 다음 밀리리터 당 세포 수를 계산하십시오. 워터젯을 통한 주사의 경우, 돼지 지방 조직 유래 기질 세포의 밀도를 밀리리터 당 여섯 배 10 내지 여섯 번째 세포로 조정하십시오. 이전에 입증된 바와 같이 라벨링하고 세포 현탁액을 무바늘 워터젯 장치의 투약 유닛 내로 채운다.

그런 다음 분사 노즐을 15 밀리리터 원심분리 튜브 또는 열린 요도 조직 바로 위에 두 밀리리터의 성장 배지 바로 위에 고정하십시오. 두 경우 모두 100 마이크로 리터의 세포 현탁액을 주입하십시오. 조직 침투를 위해 높은 압력을 사용하고 세포 주입을 위해 저압 단계를 사용하십시오.

사체 요도에 주입 된 세포는 주사 돔을 형성합니다. 원심분리를 통해 배지에 직접 주입된 세포를 수집한다. 사체 요도에 주입 된 세포의 경우, 주사 돔에서 흡인하십시오.

흡인된 세포를 원심분리 튜브 내로 옮기고, 앞서 입증한 바와 같이 원심분리를 사용하여 펠릿화한다. 원심분리 후, 두 펠릿을 네 밀리리터의 성장 배지에 재현탁시킨다. 조직 배양 접시에 주사한 후 회수된 세포를 접시당 다섯 번째 세포에 다섯 배의 밀도로 10번 시드한다.

섭씨 37도에서 3시간 배양한 후, AFM 측정 직전에 성장 배지를 L-글루타민이 없는 Leibovitz의 L-15 배지 3밀리리터로 교체합니다. 개별 세포의 탄력성을 측정하려면 시각적으로 하나의 세포를 식별하고 그것에 집중하십시오. 그런 다음 컴퓨터 마우스를 세포 중앙에 놓고 측정 정밀도를 향상시키기 위해 AFM 팁을 세포 핵 바로 위에 놓습니다.

그런 다음 캔틸레버에 초점을 맞추고 컴퓨터 마우스로 이동하십시오. 그런 다음 실행으로 측정을 시작하고 적어도 50 개의 세포를 측정하십시오. 캔틸레버의 교정에 의해 얻어진 설정점 파라미터가 사용되고 하나의 셀이 세 번 측정된다.

윌리엄스 바늘을 통해 전달된 세포의 생존력은 E60-10 설정을 사용하는 워터젯에 의한 주사보다 높았다. 포획액에서의 주사에 대한 생체역학적 평가는 윌리엄스 바늘 주사가 대조군과 비교했을 때 탄성 모듈리에 유의한 차이를 보이지 않는 반면, 워터젯 주사는 세포 탄성 모듈리를 40 내지 50% 유의하게 감소시켰으며, 유사하게, 사체 요도 조직 샘플에서, 윌리엄스 바늘 주사는 대조군에 비해 세포 탄성 모듈리에 유의한 차이를 보이지 않았다. 그러나, 워터젯 주사 후 51%의 유의한 감소가 관찰되었다.

바늘 주사가 부상을 입히는 조직에 완전히 침투하지 않도록해야합니다. 워터젯을 사용하면 장치를 주입 영역의 올바른 위치에만 배치해야하며 나머지는 장치 자체에서 자동으로 수행됩니다. 워터젯 장치가 내시경 장치에 적합하고 적합하도록 개발되었으므로 이러한 방광내시경 또는 내시경 기술로 도달 할 수있는 신체의 모든 부위에 워터젯 응용 프로그램을 사용하여 조직을 재생하고 수리 작업을 수행 할 수 있습니다.