GEFS+돌연변이는 환자에서 열성 발작을 일으킨다. GEFS + 마우스에서 저체온증 유발 발작을 연구 할 수있는 능력은 우리가 특정 돌연변이와 발작 프로파일 사이의 관계를 조사 할 수있게합니다. 디지털 온도 컨트롤러는 가열 박스의 온도 구배를 재현 가능한 방식으로 설정하는 데 도움이됩니다.
따라서, 마우스의 체온은 느리고 꾸준한 속도로 증가될 수 있다. 이 프로토콜은 열성 발작을 줄이거 나 제거하는 데 사용할 수있는 약물 또는식이 제한과 같은 잠재적 인 치료법을 확인하는 데 사용할 수 있습니다. 직장 온도 프로브를 부상없이 마우스에 삽입하려면 마우스를 간단히 마취시키고 직장 프로브의 팁에 윤활유를 바르는 것이 좋습니다.
전원 켜기 버튼으로 마우스 열 챔버를 켠 다음 열 켜기 버튼을 눌러 시작하십시오. 디지털 온도 컨트롤러의 키패드를 사용하여 열 챔버의 온도를 섭씨 50도로 설정하십시오. 열 챔버의 바닥을 코브 침구로 정렬하십시오.
비디오 녹화 카메라를 열실 앞에 장착합니다. 직경 140mm의 페트리 접시에 두꺼운 티슈 페이퍼 층을 깔고 얼음 위에 올려 냉각 패드 역할을 합니다. 스크리닝 분석의 경우, 마우스의 체중이 15g 이상인지 확인하십시오.
절차를 시작하기 전에 마우스가 발가락 꼬집음으로 완전히 마취되었는지 확인하십시오. 직장 온도 프로브의 금속 팁을 윤활제로 코팅하고 마우스에 부드럽게 삽입하십시오. 직장 프로브를 테이프로 마우스의 꼬리에 고정시킵니다.
마우스를 코브 침구가 늘어선 새로운 회복 케이지에 넣으십시오. 타이머를 시작하고 마우스가 마취에서 완전히 회복되고 온도가 섭씨 35 ~ 36도에서 안정화 될 때까지 코어 체온을 모니터링하면서 5 분 동안 마우스를 관찰하십시오. 다섯 분이 끝나면 마우스의 체온을 제로 분의 초기 체온으로 기록하십시오.
마우스를 예열된 마우스 열 챔버의 바닥으로 신속하게 옮겨 실험 시험을 시작한다. 마우스를 예열 된 마우스 챔버에 넣은 후 카메라와 스톱워치를 시작하고 마우스의 체온이 분당 섭씨 25도, 섭씨 2.5도의 속도로 증가하도록 일정한 간격으로 열 챔버의 온도를 높입니다. 실험 기간 동안 마우스의 체온을 일분 간격으로 기록하기 시작합니다.
9.5 분에 열 챔버의 온도를 섭씨 55도까지 설정하여 10 분까지 열 챔버의 온도를 섭씨 55도에서 안정화시킵니다. 마찬가지로 20 분까지 섭씨 60도까지 열 챔버의 안정적인 온도를 달성하십시오. 각 발작 선별 시험은 30 분 동안 지속됩니다.
마우스가 발작을 경험하면 발작 중 마우스의 체온을 발작 임계 온도로 기록하십시오. 마우스가 표시하는 발작 행동 특성을 기록한 다음 챔버에서 마우스를 빨리 집어 들고 냉각 패드에 놓습니다. 마우스가 관찰 30분 이내에 열로 인한 발작을 경험하지 않거나 마우스의 체온이 섭씨 44도에 도달하면 마우스를 냉각 패드 위에 놓습니다.
마우스의 체온이 섭씨 36 ~ 37도까지 내려 오면 마우스를 회복 케이지로 옮깁니다. 마우스에서 직장 프로브를 제거하려면 마우스 꼬리와 직장 프로브 와이어 사이의 테이프를 조심스럽게 자릅니다. 직장 프로브의 금속 끝을 닦아내고 70 % 에탄올로 청소하십시오.
마우스를 홈 케이지로 되돌리기 전에 회복 될 때까지 마우스를 관찰하십시오. 마우스의 상태를 계속 모니터링하십시오. 실험 시험의 끝을 표시합니다.
마우스 열 챔버의 온도를 섭씨 50도까지 재설정하고 다음 분석 전에 평형을 이루도록하십시오. 열 발작 분석에서, 마우스의 평균 체온을 가열 프로토콜을 사용하여 매분마다 기록하고, 시간에 따른 체온 변화의 비율을 평가하였다. 각각의 유전적 배경에서 이형접합체 돌연변이체와 야생형 마우스 사이의 체온 변화 속도에는 차이가 없었다.
마우스의 실험 및 대조군은 체온의 주기적 증가에 노출되었을 때 상이한 행동을 나타내었다. 129X1 또는 B6NJ 유전적 배경으로부터의 모든 이형접합체 돌연변이 마우스는 열 유도성 발작을 나타내었다. 129X1 풍부 배경에서 야생형 마우스 중 어느 것도 발작을 경험하지 않은 반면, 발작에 민감한 B6NJ 배경으로부터의 마우스 중 삼분의 일만이 발작을 보였다.
129X1 돌연변이 마우스의 평균 발작 역치 온도는 B6NJ 마우스에서 보이는 평균 발작 역치 온도와 유의하게 다르지 않았다. 열 유도성 발작을 나타내었던 B6NJ 야생형 마우스의 삼분의 일은, B6NJ 이형접합체 돌연변이 마우스보다 유의하게 높은 발작 역치 온도를 가졌다. 발작의 중증도는 변형된 라신 스케일을 사용하여 측정하였다.
129X1 풍부 배경에서 이형접합체 돌연변이 마우스의 최대 라신 스코어는 B6NJ 유전적 배경에서 이형접합체 돌연변이 마우스와 유의하게 다르지 않았다. 가열 프로토콜을 설정하는 동안 마우스 체온이 분당 섭씨 25도보다 빠른 속도로 증가하지 않거나 동물의 건강에 해로울 수 있는지 확인하십시오. 가열 프로토콜을 동시 EEG 기록과 결합하는 것은 매우 멋질 것이며, 이는 우리가 뇌 활동의 다른 패턴을 다른 유형의 발작 행동과 연관시킬 수있게 해줄 것입니다.
