자기 적고를 이용한 세포 밀도 및 항원 적 특성의 정량화

이 기술은 짧은 기간에 거의 또는 전혀 조작없이 밀도에 전적으로 기초하여 다양한 과정을 겪고 다양한 세포 유형과 세포의 분리를 할 수 있습니다. 이 방법의 주요 장점은 최소 침습으로, 작은 볼륨을 필요로하고, 빠른 결과를 제공하고, 고전적인 판독에 의존하지 않으며, 전문 인력이 필요하지 않다는 것입니다. 이 기술은 여러 질병, 예를 들면 빈혈및 패혈증을 검출하기 위하여 적용될 수 있습니다.

원클릭 랜싱 장치를 사용하여 계골 계수 양성 혈액 기증자의 손가락을 찌르고 DPBS의 1 밀리리터에서 10 마이크로리터의 혈액을 수집합니다. 류수스 인자 양성 세포의 1 밀리리터 현탁액에 형광 염료 1개를 첨가하여 혈장 막을 형광으로 염색하고 15분 동안 섭씨 37도에서 배양합니다. 15초 동안 5, 600회 G에서 회전하여 세포를 펠릿으로 만들고, DPBS의 1밀리리터를 사용하여 펠릿을 세 번 세척합니다.

칼슘과 마그네슘으로 HBSS의 1 밀리리터에서 펠릿을 다시 놓습니다. 원 클릭 랜싱 장치를 사용하여 rhesus 요인 음성 혈액 기증자의 손가락을 찌르고 혈액의 두 마이크로 리터를 수집합니다. 구슬만 포함하는 실험 관을 준비하려면 칼슘과 마그네슘을 곁들인 HBSS 174 마이크로리터, IgG 제어 구슬 1개, 밀리리터 밀도당 1.2그램의 무거운 구슬 1개, 500밀리올라 가돌리늄 24마이크로리터를 추가합니다.

IgG가 함유된 실험 제어 관을 준비하기 위해 칼슘과 마그네슘을 함유한 HBSS 172마이크로리터, IgG 대조구의 마이크로리터 1개, 무거운 구슬 1개, 거액의 마이크로리터, 레서스 인자 음성 혈액 1편, 스테인드 리서스 인자 양성 혈액 현탁액 1편, 500밀리알륨 24마이크로리터를 첨가한다. 시료 실험 튜브를 준비하려면 칼슘과 마그네슘을 곁들인 HBSS 172마이크로리터, 항 RhD 코팅 구슬 1개, 무거운 구슬 1마이크로리터, 레서스 인자 음성 혈액의 마이크로리터 1개, 스테인드 레서스 인자 양성 혈액 현탁액 1편, 500밀리알륨 24마이크로리터를 첨가한다. 자기 부상 장치를 설정합니다.

그리고 튜브가 채워지때까지 샘플의 50 마이크로리터를 모세관 튜브에 적재합니다. 모세관 실란트로 모세관 튜브의 끝을 밀봉하여 거품이 없도록 하십시오. 모세관 튜브를 모세관 홀더에 상부와 하단 자석 사이에 놓고 스테이지와 포커스를 조정하여 최적의 시야를 제공합니다.

세포와 구슬이 자기 평형 위치에 정착할 때까지 약 5~20분 정도 기다립니다. 이 프로토콜을 사용하여, 혈액 세포는 자기 부양 장치를 사용하여 부양 높이에 따라 분리되었다. 저밀도 구슬은 밀도 상승 높이 및 크기 참조를 제공하는 데 사용되었습니다.

다형성 핵 세포는 21 밀리알 가돌리늄 이온 농도에서 적혈구 위에 부풀어 있었다. 오래된 혈액 세포는 60 밀리마일라 가돌리늄 이온 농도에서 부풀어 있었습니다. 적혈구, 다형성핵세포 및 림프구는 본질적인 밀도에 기초하여 40밀리알라 가돌리늄 이온 농도로 분리되었다.

rhesus 인자 항원은 IgG 및 항RhD 항체 코팅 구슬을 사용하여 적혈구에서 검출되었다. 비드 적혈구 복합체는 IgG 대조군 샘플에서 생성되지 않았지만, 류수스 인자 양성 구슬에 의해 포획된 형광 염색적 적혈구가 검출되었다. rhesus 인자 양성 세포에 대한 항 RhB의 결합은 불바운드 구슬과 부정적인 적혈구의 간헐적 밀도에서 중심에 비드 세포 복합체를 생성하였다.

또한, 복합성 형성은 방출된 형광을 관찰함으로써 확인되었다. CR1 및 CD47용 항체로 코팅된 고밀도 구슬과 저밀도 비드 사이에 형성된 B 비드 복합체는 세포외 소포 유래적 혈구의 존재를 나타낸다. 거품을 소개하지 않고 모세관을 캡핑하는 것은 가장 어려운 단계이며 연습이 필요합니다.

이 방법은 혈액학에 대 한 통찰력을 제공할 수 있습니다., 특히 적혈구 질환에 초점을 맞춘.