이 연구는 확립 된 동물 모델을 사용하여 뇌 허혈의 회복과 후유단계를 연구합니다. 이 기술의 주요 장점은 안정적이고 신뢰할 수 있으며 비교적 간단하다는 것입니다. 먼저 마취된 쥐를 수술 용 고정 테이블에 놓는 것으로 시작합니다.
수술 내내, 작은 동물 온도 조절기에서 37섭씨에서 쥐의 체온을 유지한다. 마취 기계 마스크에 입을 연결하고 사지 장력, 각막 반사 신경 및 통증의 부족으로 깊은 마취를 확인합니다. 용지 붕대를 사용하여 쥐의 팔다리를 수술대에 고정합니다.
전기 면도기로 목 털을 제거하고 75 %의 알코올로 목을 살균하십시오. 안과 가위를 사용하여 목의 중앙 세로 모양을 따라 2~3cm를 자른다. 그리고 안과 봉제와 함께 피하 근육을 분리하십시오.
수제 리트랙터를 사용하여 시야를 완전히 노출하십시오. 모든 생존 수술 절차에 적합한 무균 기술을 제시하기 위해주의를 기울여야합니다. 비디오의 나중에 설명된 기술은 전체 절차를 통해 수행해야 합니다.
마이크로 집게를 사용하여 일반적인 경동맥, 외부 경동맥 및 내부 경동맥을 분리합니다. 현미경으로 작업, 사용 8-0 단단한 매듭으로 일반적인 경동맥을 리딩하는 봉합사, 단단한 매듭으로 심장 끝에서 멀리 외부 경동맥, 느슨한 매듭으로 내부 경동맥을 묶은 다음 심장 끝 근처의 외부 경동맥을 줄. 마이크로 가위를 사용하여 외부 경동맥의 작은 개구부를 자르고 나사 볼트를 부드럽게 삽입합니다.
얇고 느슨한 매듭외부 경동맥의 봉합사를 리게이트하고 외부 경동맥을 잘라냅니다. 내부 경동맥의 느슨한 매듭을 풀고 봉합사로 표시된 중간 대뇌 동맥의 시작 부분에 스레드 볼트를 계속 삽입하고 노출된 실 볼트를 차단합니다. 허혈 시간이 2 ~3 시간 후에 도달 한 후 마이크로 집게를 사용하여 외부 경동맥의 골절을 수정하고 다른 마이크로 집게로 스레드 볼트를 부드럽게 꺼냅니다.
내부 경동맥에서 나사 볼트의 프런트 엔드를 완전히 철회한 후 8-0으로 늘어선 외부 경동맥을 리게이트합니다. 봉합사 다음 스레드 볼트를 완전히 제거합니다. 일반적인 경동맥을 풀어낸 후, 감염을 방지하기 위해 상처 표면에 페니실린 나트륨 분말의 약 50, 000 단위를 두드려. 피하 근육과 피부를 봉합하기 위해 4 개의 봉합사를 사용합니다.
쥐를 다시 케이지에 넣은 후, 1 밀리리터 주사기를 사용하여 수술 후 탈수를 방지하기 위해 약 0.2 밀리리터의 물을 쥐에게 구두로 제공합니다. TTC 염색 또는 감각 모터 연구에 대 한 가장 긴 점수에 따라 동물을 선택 합니다. TTC 염색을 위해 격리된 뇌를 30분 영하 20도에서 배양한 후 미리 냉각된 쥐 뇌 슬라이스 몰드에 놓습니다.
미리 냉각된 블레이드를 사용하여 뇌를 6개의 2mm 두께의 연속 섹션으로 자른다. 6웰 컬쳐 플레이트에 2%TTC로 섹션을 염색하고 흔들리는 동안 섭씨 37도에서 30~60분 동안 배양합니다. 10 분마다 뇌가 허혈되고 영향을받지 않는 부위가 눈에 띄게 흰색과 빨간색이 될 때까지 섹션을 뒤집습니다.
각 줄의 총 길이가 동일하고 사진을 찍을 수 있도록 통치자를 사용하여 뇌의 뒤쪽에서 뇌 의 전면에 순서대로 뇌 슬라이스를 수직으로 줄입니다. 사진을 가져오고 뇌 조각을 선택합니다. 검은색 전경을 선택하고 Alt Delete를 입력하여 배경 색을 채운 다음 D를 제어하여 선택 취소합니다.
마지막으로 이미지를 바탕 화면에 저장합니다. 광활한 볼륨을 분석하려면 먼저 소프트웨어를 열고 사진을 가져옵니다. 수정을 결함으로 변경하려면 배경이 검은색이 되도록 대비 향상 도구로 밝기를 조정합니다.
필터에서 중앙값 도구를 사용하여 하이라이트를 제거합니다. 왼쪽 정상 뇌 영역을 계산하려면 세분화를 사용하여 색상을 선택하고 H, S 및 I의 값을 조정하여 뇌 조각을 검은 색 배경에서 분리합니다. 카운트 크기로 돌아가 수를 클릭합니다.
편집에서 분할 된 물체를 클릭하여 뇌를 중간선과 분리하여 왼쪽과 오른쪽 뇌 영역을 자동으로 구별합니다. 오른쪽 경색 뇌 영역을 계산하려면 이미지를 가져오고 배경을 조정하고 이전과 마찬가지로 하이라이트를 제거합니다. 카운트 크기를 선택하고 편집에서 병합 개체 도구를 그립니다.
허혈 영역을 수동으로 선택하고 카운트를 클릭하여 허혈 영역을 계산합니다. 올바른 건강한 뇌 영역을 계산하려면 먼저 이미지를 가져오고 배경을 조정하고 이전과 마찬가지로 하이라이트를 제거합니다. 세분화를 사용하여 색상을 선택하고 H, S 및 I의 값을 조정하여 건강한 뇌 조각을 검은 색 배경에서 분리합니다.
카운트 크기로 돌아가서 카운트를 클릭하여 이 영역을 계산합니다. 편집에서 분할 된 물체를 클릭하여 뇌를 중간선과 분리하여 왼쪽과 오른쪽 뇌 영역을 자동으로 구별합니다. 감각 모터 연구를 위해 선택된 쥐를 취하고 양자 간 비순조 시험을 위해 선택하고 동일한 압력을 사용하여 각 발톱의 사페누스 부분에 종이 테이프를 세 번 감쌉니다.
각 쥐에 대해 카메라로 각 발톱 접촉 횟수를 기록하고 영향을 받지 않고 영향을 받지 않는 발 시간을 포함하여 5분 이내에 테이프를 제거합니다. 30분 후에 래핑 및 레코딩을 반복한 다음 값을 계산합니다. 그리드 보행 테스트를 위해 2.5 평방 센티미터의 개구부가 있는 높은 그리드 표면 플랫폼의 중앙에 쥐를 배치합니다.
쥐의 엉덩이를 약간 밀어 표면을 가로 질러 움직이도록 격려하십시오. 카메라를 사용하여 오른쪽 영향을 받지 않고 왼쪽에 영향을 받지 않은 팔다리와 총 걸음 수에 의해 만들어진 발 결함의 수를 카메라로 1분 안에 기록합니다. 로터 로드 테스트의 경우, 서포트 소프트웨어를 사용하여 5분 동안 쥐 회전 바 피로 장치를 13 RPM의 속도로 설정합니다.
컴퓨터 프로그램을 시작하고 동시에 로터 로드 링에 쥐를 배치합니다. 쥐가 링에서 떨어지거나 5 분 후에 떨어지면 시험을 종료하고 회전 시간을 기록하십시오. 쥐를 30분 동안 쉬게 한 다음 테스트를 두 번 더 반복하고 최대 값을 마지막 회전 시간으로 선택합니다.
리프팅 로프 테스트를 위해 리프팅 로프 장비를 책상위에 놓습니다. 쥐가 앞다리로 밧줄을 잡고 걸게하십시오. 교수형 시간을 기록하고 점수를 계산합니다.
중대 뇌동맥 폐색및 재관류에 의해 유발되는 뇌 허혈성 상해가 연구되었을 때, 300그램 무게 3040 실 볼트와 3시간 뇌 경색 시간이 가장 큰 뇌경색, 가장 높은 최장 점수 및 가장 큰 모델 성공률에 가장 적합한 것으로 판명되었습니다. 이는 275그램 무게, 2636개의 실볼트 및 2시간 뇌 경색 시간의 종래의 치료에 비해 현저히 개선되었다. 뇌허혈의 회복 상태를 연구하기 위해 TTC 염색이 수행되었고, 중견동맥 폐색 및 재관주 후 첫날 23.4%로 경색 및 수축 부피를, 35일째 19.6%, 60일에는 16.1%, 90일에는 15.7%로 나타났다.
중뇌 동맥 폐색 및 재퍼융합의 하루 후, 양측 의 형편성 검사에서 감각 모터 편향, 그리드 보행 오류 시간 리프팅 로프 테스트에서 도취 감소 로터 로드 시험에서 로터 로드 시간이 모두 증가하면서 로터 로드 테스트에서 이러한 시험의 중요성을 나타내는 급성 뇌 허혈을 연구하는 이러한 시험의 중요성을 나타낸다. 만 감각 모터 바이어스는 중간 뇌동맥 폐색 및 재구의 35, 60 및 90 일 후에 시간 의존적인 방식으로 큰 기능 장애를 유지했습니다. 그리드 걷기 테스트의 경우 35일과 60일 동안 그리드 보행 오류 시간의 상당한 차이가 있었습니다.
이러한 결과 이러한 두 테스트 쥐에서 복구 테스트에 적합 할 수 있습니다 표시. 성공을 보장하기 위해 동작은 온화해야하며 작업이 안정적이어야합니다. 걸음걸이 검출과 같은 다른 행동 테스트도 이 모델에 적합할 수 있다.
이 모형의 발달은 연구원이 복구및 후유 단계에서 두뇌 허혈을 탐구하는 쪽을 포장할 수 있었습니다.
