이 프로토콜은 무선 원격 분석을 통해 EEG 기록과 함께 외상성 뇌 손상의 쥐 측면 유체 타악기 손상 모델을 사용하는 연구를 조화시킬 수있는 기회를 제공합니다. 그것은 외상 후 간질 발생에 영향을 미치는 요인을 조사 하 고 약물 개입의 신경 치료 잠재력을 테스트 하는 데 사용할 수 있습니다., 외상 후 간 질의 개발을 방지할 수 있는. 이 접근법은 자유롭게 움직이는 쥐의 긴 테르비디오 EEG 레코딩을 허용하고 EEG 레코딩의 중단 없이 동물의 적당한 조작을 가능하게 한다.
절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 MD 박사 과정 학생 인 매튜 맥과이어 (Matthew McGuire)가 될 것입니다. 자세한 수술 절차에 대한이 프로토콜을 동반 원고를 참조하십시오. 숫자 10 메스 블레이드를 사용하여 두피의 피부와 근육을 통해 1 1 1/2 ~ 2 1/2 센티미터 미드 라인 절개를 합니다.
두개골을 노출하고 명확한 수술 필드를 제공하기 위해 피부와 근육을 철회. 일렉트로카운테리는 빠른 혈종을 달성하는 데 유용합니다. 다음으로, 수술 용 큐렛을 사용하여 왼쪽 정수리 뼈의 측면 능선을 면도하여 여성 Luer 잠금 허브의 베이스가 두개골과 함께 홍조로 휴식을 취할 수 있도록 부드럽고 평평한 표면을 생성합니다.
두개골 표면과 주변 조직을 멸균 식염수에 밀리리터 젠타미신 용액당 2.0 밀리그램으로 관개하고 멸균 면봉으로 과도한 용액을 블롯합니다. 그런 다음 두개골에 과산화수소 3%를 적용하여 뼈를 건조시합니다. 이 시점에서, 왼쪽 정수리 뼈를 통해 5 밀리미터 직경 craniectomy 사이트를 만듭니다.
그런 다음 수술 용 큐렛과 매끄러운 조직 집게로 뼈 플랩을 제거합니다. 다음으로, 스테레오 현미경을 사용하여, 부드럽게 두라를 파열하지 않도록주의, 부드러운 조직 집게남아있는 뼈의 얇은 가장자리를 제거합니다. 그런 다음 두개골을 70% 에탄올로 면봉하여 뼈 먼지를 제거하고 두개골을 건조시합니다.
루어 잠금 허브의 아래쪽 가장자리에 얇은 시아노아크라일트 접착제를 적용하고, 개구부를 방해하지 않고 접착제가 듀라에 닿지 않고 두개골에 고정하십시오. 그런 다음 루어 잠금 장치를 허브의 바깥쪽 베이스 주위에 얇은 접착제 층으로 밀봉합니다. 다음으로, 치과 시멘트의 슬러리를 준비하고, 그것을 제자리에 고정시키기 위해 루어 잠금 허브의 기지 주변과 위에 두개골표면에 이것을 적용합니다.
그런 다음 주사기와 바늘을 사용하여 여러 전해질을 포함하는 멸균 방부제 용액으로 Luer 잠금 허브를 채웁니다. 식염수의 볼록 한 볼루스는 림의 상단 위에 볼 수 있어야합니다. 치과 시멘트가 완전히 경화되면 가스 마취를 중단하고 스테레오탁스 프레임에서 쥐를 제거하십시오.
미세 타악기 손상 장치 옆에 있는 플랫폼에 쥐를 배치합니다. 그런 다음 장치의 곡선 팁 끝까지 12센티미터 길이의 압력 튜브를 고정하고 반대 쪽 끝이 2센티미터, 남성 Luer 잠금 트위스트 커넥터로 종료됩니다. 쥐의 두개골에 있는 허브의 암컷 끝을 남성 커넥터에 연결하여 쥐를 장치에 고정시하십시오.
반복적으로 철수 반사의 반환을 위해 동물을 확인합니다. 쥐가 철수 반사를 회복하지만 여전히 진정되자마자 장치의 진자임을 방출하여 단일 20 밀리초 압력 펄스를 일으키고 부상을 유도합니다. 그런 다음 즉시 FPI 장치에서 쥐를 분리하고 흉골 침수에 넣고 자발적인 호흡이 돌아올 때까지 코 콘을 통해 추가 산소를 제공합니다.
무호흡증은 부상의 예상 결과입니다. 필요한 경우 쥐가 자발적으로 호흡하기 시작할 때까지 가방 밸브 마스크를 통해 주기적으로 수동 호흡을 제공합니다. 지속적으로 모니터링하고 올바른 반사 반사의 반환 시간을 기록합니다.
부상 후 4시간 후, 다시 쥐를 마취하고, 루어 잠금 허브와 치과 시멘트를 제거하기 위해 스테레오테틱 프레임에 다시 넣습니다. 5개의 파일럿 구멍을 뚫을 각 위치에서 두개골에 0.5%의 부피바카인 염산염을 소량 떨어뜨립니다. 그런 다음, 휴대용 0.1 밀리미터 드릴 비트와 두개골을 통해 파일럿 구멍을 드릴.
다음으로 스테인리스 스틸 전극 나사를 고정하십시오. 첫째, 소뇌 위에 람다에 참조 나사 카우달을 놓습니다. 그런 다음, 여기에서 볼 수 있듯이 4개의 위치에 기록 전극을 배치합니다.
뼈 먼지를 제거하기 위해 70 %의 에탄올로 두개골을 면봉해야합니다. 그런 다음, 노출된 두라를 덮기 위해 멸균 뼈 왁스의 얇은 층으로 크레니절제술 부위를 덮어 주세요. 이제 지정된 스테인리스 스틸 전극 나사 주위에 컬러 코딩 전극 와이어의 노출된 끝을 단단히 감싸서 전극 어레이를 5개의 EEG 전극에 연결합니다.
전극 와이어를 받침대 아래 코일로 수집하고 뼈 시멘트로 전선과 받침대를 제자리에 고정시하십시오. 뼈 시멘트가 치료될 때까지 받침대를 제자리에 고정하십시오. 마지막으로, 스테레오전술 프레임에서 동물을 제거하기 전에 신선한 배터리로 무선 송신기를 받침대에 부착합니다.
부상 당일부터 EEG 제조업체의 컬렉션 소프트웨어를 사용하여 비디오 EEG를 지속적으로 기록하여 각 무선 송신기를 고유한 주파수를 특정 수신기에 연결합니다. 초당 30 프레임으로 녹화하도록 구성된 자체 카메라로 각 쥐의 비디오를 녹화합니다. EEG 기록을 수동으로 검사하여 발작 활동을 정의하는 인덱스 이벤트를 식별합니다.
이 수치는 온건한 TBI의 날에 수집 된 일방적, 간헐적 델타 속도를 보여줍니다. 여기서, 우리는 FFT 분석과 가짜 작동, 미부상 제어 쥐에서 90 초 EEG 흔적을 볼 수 있습니다 2, 048 밀리초 선택 EPOC. 그런 다음, 여기서 우리는 간헐적이고 일방적인 델타 감속 패턴 및 FFT 분석 2, 048 밀리초 선택 EPOC의 적당히 다친 동물의 EEG 흔적을 볼 수 있습니다.
이 수치는 동일한 분석 기술을 사용하여 심각한 TBI 의 날에 수집된 양자 간 연속 델타 속도를 보여줍니다. 여기서는 90초의 EEG 흔적을 볼 수 있는데, 이는 심각한 부상을 입은 동물의 연속적인 양자 델타 느려진 패턴을 보여줍니다. 여기서, 우리는 가혹한 TBI 후에 3 일 집합된 비 경련 전기 전극 포착 활동을 봅트합니다.
수술 후 3일 후 대조쥐로부터의 데이터가 나타났으며, 90초 EEG 는 3일 후 중증 상해를 입었으며, FFT 분석에서 2, 048밀리초 선택 EPOC를 분석한다. 그리고 마지막으로,이 그림은 이 동물에서 FFT 분석과 함께 TBI 이후 9일 동안 수집된 경련성 전극 발작 활성을 보여줍니다. 여기서는 배터리 고장으로 인한 간헐적인 신호 중퇴 및 신호 손실의 대표적인 이미지도 볼 수 있습니다.
두라가 방해받지 않고 광대한 후 그대로 유지되고 루어 잠금 허브가 두개골에 단단히 밀봉되도록하는 것이 중요합니다. 전극 전선이 두개골에 배치된 기록 나사와 잘 접촉할 수 있도록 하는 것도 중요합니다. 마지막으로, 두개골이 먼지가 없고 건조하여 뼈 시멘트가 머리에 장기적으로 부착되도록 하십시오.
