심근 절범의 이 뮤린 모델은 관상 동맥 폐색에서 현지 심장 조직 및 전신 수준에서 후기 심부전으로 발생하는 병리학적 과정을 모니터링할 수 있습니다. 이 방법은 현재 심장 생물학 및 생리학에 사용되는 모든 판독과 호환됩니다. 또한, 그것은 뮤린 유전 모델의 엄청난 다양성에서 혜택을.
적절한 수술 기술을 습득하는 데는 시간이 걸릴 수 있습니다. 이 절차는 숙련 된 연구원과 단계적으로 학습하는 것이 가장 좋습니다. 이 뮤린 모델의 시각적 데모는 외과 적 수술에 도움이 되고 학습 과정을 가속화 할 수있는 힌트를 공유 할 수 있습니다.
전기 면도기를 사용하여 마취, 25-30그램, 남성, C57-Black/6 마우스를 목구멍과 늑골 케이지의 왼쪽에 빠르게 면도합니다. 발가락 핀치에 대한 응답의 부족을 확인합니다. 동물의 눈에 연고를 바르습니다.
가열 패드에 수핀 위치에 마우스를 배치하고 눈과 열을 피하기 위해 머리 아래에 작은 거즈 압축을 배치합니다. 접착제 테이프로 팔다리를 고정합니다. 상부 절개 아래에 5-0 실크 봉합사의 루프를 전달하고, 캐닝 중에 입을 열어 두기 위해 가열 패드에 루프의 극단을 고정합니다.
미리 면도된 부위에 탈모 크림을 바르고 면봉으로 1분간 부드럽게 마사지하세요. 거즈로 과도한 모피와 크림을 제거하고 0.9% 식염수와 거즈를 떨어뜨려 노출된 피부를 청소합니다. 멸균 거즈 조각을 면도된 목구멍과 흉부에 바르고, 이오도포비단으로 거즈를 담그세요.
인공호흡기를 킬로그램당 7밀리리터의 조수부와 분당 140스트로크의 환기속도로 설정합니다. 미세 수술 스테레오 현미경으로 마우스를 이동합니다. 목의 중앙에 피부를 잡고, caudal / 세팔 라인을 따라 0.5 센티미터 절개를하고, 타액 선의 엽을 분리합니다.
후두와 기관진이 보일 때까지 구부러진 집게를 사용하여 스테르노하이드 드 근막의 근막을 부드럽게 분리하십시오. 그런 다음 탄력적 밴드에 리트랙터가 부착되어 개구부 가장자리를 고정합니다. 다음으로, 혀를 옆으로 부드럽게 당기고, 집게를 사용하여 16 게이지 캐뉼라의 무딘 내부 바늘을 기관지에 삽입합니다.
인후 절개를 통해 기관체에 올바른 삽입을 시각화하고 캐뉼라를 인공호흡기에 연결합니다. 멸균 0.9%의 식염수에 요오도포비도에 담근 거즈를 절개에 두어 작업 중에 조직을 젖은 상태로 유지합니다. 그런 다음 배기 튜브를 물에 넣습니다.
거품의 존재는 성공적인 삽관을 나타냅니다. 좌측 전방 내림차순 관상동맥 또는 LAD의 결찰을 위해 마우스를 오른쪽 디큐비투스 위치로 조심스럽게 이동하고, 새로운 위치에서 왼쪽 전방 사지를 재확보한다. 왼쪽 가슴절부미와 주요 근육 사이의 선을 식별하고 선을 따라 경사 1 센티미터 피부 절개를합니다.
무딘 해부 마이크로 가위를 사용하여 조직을 절개하지 않고 가슴 근육의 근막을 분리하고, 분리를 유지하기 위해 탄성 밴드에 부착 된 재트랙터를 사용합니다. 3센티미터의 물의 양수 종기 기만 압력으로 인공호흡기를 설정합니다. 무딘 집게를 사용하여 세 번째 갈비뼈와 네 번째 갈비뼈 사이의 세 번째 늑간 공간에서 가슴 구멍을 엽니다.
두 개의 리트랙터를 갈비뼈에 넣고 각 갈비뼈에 하나씩 놓고 곡선이 있는 미세 포셉을 사용하여 심혼과 폐에 해를 끼치지 않고 심근을 조심스럽게 제거합니다. 왼쪽 아우리클 가장자리에서 정점을 향해 흐르는 피상적인 밝은 빨간색 선으로 LAD를 찾습니다. 바늘 홀더를 사용하여 왼쪽 아리아 아래 2~3mm 의 LAD 아래 실크 봉합사를 7-0으로 전달합니다.
심장 조직이 찢어지는 것을 피하기 위해 천천히 실크를 당기고 합자를 3 노트로 묶습니다. 왼쪽 심실의 왼쪽 아래 부분은 결찰 시 즉시 창백하게 변합니다. 이제 갈비뼈 리트랙터를 풀어주며 세 번째 갈비뼈를 집게로 잡고 세 번째 갈비뼈와 네 번째 갈비뼈 아래 6-0 실크 봉합사로 두 번의 패스를 만듭니다.
37도 섭씨 0.9% 식염수 용액 3방울을 개구부에 놓고 폐를 제대로 팽창시키기 위해 2~3회 호흡주기동안 만료 배기 튜브를 닫습니다. 두 번의 던지기로 봉합사를 조이고 고정하고 근육을 들고 있는 리트랙터를 풀어 근육이 올바른 해부학 적 위치로 돌아갈 수 있도록 돕습니다. 그런 다음 두 개의 바늘과 5-0 봉합사 실크의 두 개의 던지기로 흉부 피부를 닫습니다.
5-0 봉합 실크1개의 스티치와 2개의 던지기로 목 피부를 닫습니다. 절차가 끝나면 팔다리에서 테이프 밴드를 제거하고 동물을 조심스럽게 압축 패드에 복부 디큐비투스로 돌리고 동물의 오른쪽에있는 가열 패드에 압축을 놓습니다. 37도-섭씨 5%의 포도당 용액의 0.3 밀리리터를 내분하였습니다.
인공 호흡기를 중지합니다. 마우스가 자발적으로 호흡하는 경우 조심스럽게 캐뉼라를 제거하십시오. 피하 부프레노르핀킬로그램당 0.1 밀리그램을 피하한다.
모니터링을 통해 적어도 1시간 동안 100%의 산소로 통풍이 잘되는 섭씨 30도 케이지에 마우스를 놓습니다. 수술 후 2 일 동안, 부드러운 다이어트와 물 광고 리비툼으로 마우스를 제공, 필요에 따라 동물을 따뜻하게. 수술 후 7일 후, 허혈성 부위는 염화삼페닐테트라졸륨에 의해 얼룩지지 않은 채로 남아 있는 반면, 살아있는 조직은 탈수소효소의 존재로 인해 붉게 얼룩지게 됩니다.
허혈 영역은 이미징 소프트웨어 프로그램에서 왼쪽 심실의 흰색 영역의 백분율로 계산할 수 있습니다. 알파-부드러운 근육 액틴 및 SMAD2 인산화를 위한 서양 얼룩 분석은 각각 근섬유아세포의 주요 판독값이며 성장 인자 베타 신호 활성화를 변화시키는 데 사용될 수 있으며, 경질된 심근 조직의 근심 조직 내에서 섬유증의 정도를 결정하는 데 사용될 수 있다. 성장인자 베타및 다운스트림 표적 mRNA 발현의 실시간 중합효소 연쇄 반응 분석은 심근 섬유증의 존재를 평가하기 위해 수행될 수 있다.
항염증성 신호 경로 및 프로 염증 유전자의 발현은 전형적으로 심근 경색 후 첫 주 이내에 활성화되는 것으로 나타났습니다. 프로 염증 유전자 및 단핵구/대식세포 마커의 mRNA 발현도 관찰된다. 결찰 높이는 생존에 비판적으로 영향을 미치고 LAD 분기가 다를 수 있으므로 각 변형 또는 유전자형에 적응해야 합니다.
결찰의 상수는 재현 가능한 결과를 얻는 열쇠입니다. 이 절차는 어떤 분석 방법과 결합될 수 있고 기능 분석, 조직 고정, 세포 배양, 또는 관심있는 어떤 기술에 선행될 수 있습니다.
