전도 실패의 메커니즘을 검사하기 위해 연결된 Sciatic 신경을 가진 생체 내 단일 섬유 기록 및 손상되지 않은 등철 루트 신경절의 사용

단일 섬유 레코딩은 신경 섬유의 활동을 기록하는 데 중요한 역할을합니다. 특히 등대 뿌리 신경절의 신경세포에 수용 필드에서 주변 감각을 전달하는 활동. 섬유 레코딩의 물결에서, 자연 자극에 대한 응답을 기록하는 용량으로 지속 시간의 길이를 제공하고, 나중에 세포 간 환경의 교란이었다.

단일 섬유 레코딩에서 상황에 중성자 자동이 필요합니다. 치료사는 통합 DRG 테스트의 준비에 대한 요구 사항을 호출하는 것은 상주 신경이 통합된다. 데모 상황의 결과는 좋은 물리적 데칼 단계에서 신경의 거의 모든 세부 사항을 보여줍니다.

셋째, 전체 DRG 준비는 통합되어 있습니다. 이 절차를 시작하려면 수술 전에 모든 수술 기구를 준비하고 소독하십시오. 그런 다음 일반 링거의 세포외 용액을 1~2리터로 준비하고 사용할 때까지 섭씨 4도에 보관하십시오.

기록을 위해 상골 신경 트렁크를 노출하려면 먼저 허벅지의 등색 부위에 마취 된 쥐의 피부와 근육을 열어 두습니다. 그런 다음 대퇴이 두근을 따라 무딘 해부를 수행합니다. 안과 가위와 유리 분리 바늘을 사용하여 좌골 신경 트렁크를 조심스럽게 분리하고 링거의 용액을 사용하여 조직을 촉촉하게 유지합니다.

다음으로, 피부를 주변 슬롯에 바느질하여 집에서 만든 금속 후프에 동물을 고정합니다. 피부를 살짝 위로 당겨 체액 목욕을 설정합니다. 근동 측에 상반신경 트렁크 의 1 센티미터를 노출.

미세한 신경 트렁크를 명확하게 관찰하기 위해 대비를 향상시키기 위해 신경 트렁크 아래에 작고 갈색 플랫폼을 배치합니다. 그 후, 섬유 표면의 건조를 방지하기 위해 신경 트렁크의 상단에 일부 따뜻한 액체 파라핀을 적용합니다. 신경 트렁크 주위에 발산이 있는 경우에 액체를 제거합니다.

레코딩을 수행하려면 백금 필라멘트를 기록 전극으로 선택합니다. 먹고 마지막에 작은 후크를 만들 수 있습니다. 그 후, 전극을 마이크로 조작기에 부착합니다.

목욕에, 피하 조직 옆에 참조 전극을 배치. 척추 두라와 피아 메이터를 분할하고 상골 신경을 얻을. 25% 배율의 스테레오 현미경하에서, 미세한 근심을 집어 들고 기록 전극의 후크에 축삭의 대략적인 끝을 일시 중단합니다.

기계적 동시화 및 열 자극을 사용하여 단일 비개념 c 섬유의 수용 필드를 식별합니다. 신경 섬유의 발사가 기계적 자극과 온수에 반응하는 경우, 폴리모토, 비개념 C 섬유로 간주하십시오. 다음으로, 전기 자극의 전달을 위해 식별 필드의 피부에 2 밀리미터 간격으로 두 개의 바늘 자극 전극을 삽입한다.

오실로스코프에 작용 잠재력의 파형을 표시하고, 20킬로헤르츠의 신호 샘플링 속도로 컴퓨터에 D-보드를 사용합니다. 그런 다음 데이터 수집 소프트웨어를 사용하여 스파이크를 기록하고 나중에 전문 소프트웨어로 분석합니다. 전도 실패를 측정하기 위해, 60 초 동안 c 섬유에 다른 주파수에서 반복적 인 전극 자극을 제공합니다.

섬유가 자극 사이에 이완되도록 10분 간격을 허용합니다. 이어서, 전달된 반복자극 펄스의 수에 대한 실패 수의 비율을 계산하고 전도 실패의 정도를 얻기 위해 100%씩 곱한다. 등쪽 뿌리 신경절을 노출하려면 먼저 l4에서 l5 세그먼트로 뒷면의 중간선에서 피부를 엽니다.

다음으로, 뼈 로거를 사용하여 근육 척추 과정 척추 보버 및 횡방향 과정을 제거하고 척수 NDRG 본체를 노출시한다. 노출된 척수 NDRG를 커버하고, 면은 정상적인 링거의 세포외 용액에 담그고 신경 활동을 유지합니다. 출혈을 멈추고 필요에 따라 혈액을 제거하십시오.

그 후, 안과 가위를 사용하여, DRG와 연결된 척추 신경을 노출시키기 위하여 척추 대원 위에 l4를 s1 뼈 구조물을 제거합니다. 중간 허벅지에 상골 신경을 노출하는 피부에 상처를. 분리 하고 근육 내부로 가는 신경의 말단 끝에서 상선 신경을 분리.

그리고 절단하기 전에 신경의 끝에 수술 라인으로 신경 트렁크를 리게이트. 그런 다음, 신경 결찰 점을 들어 올려 근본적인 결합 조직으로부터 상주 신경을 분리한다. 척수에서 두라를 제거하고, SCIATIC 신경의 인접 한 부분에 도달 할 때까지 기본 결합 조직에서 DRG를 분리합니다.

따라서, 부착된 상골 신경으로 DRG의 전체 준비를 분리한다. DRG의 표면을 4배 배율로 클리어하려면 핀셋을 사용하여 l4~ l6 DRG 표면의 척추 두라를 조심스럽게 제거합니다. 혼합 효소 1밀리리터를 함유한 유리 튜브에 부착된 상아 신경을 장착한 DRG를 놓습니다.

섭씨 37도의 수조에서 15분간 소화하세요. 15분 후, 수술 라인의 끝을 들어 올리고 효소를 씻어 일반 링거의 세포 외 용액으로 가득 찬 접시로 준비를 이동합니다. 그런 다음 소화된 DRG를 녹음을 위한 산소링어의 세포외 용액으로 채워진 용기로 전송합니다.

레코딩을 수행하려면 세포내 용액을 준비하고 사용할 때까지 섭씨 0도에 저장하십시오. 슬라이스 앵커를 사용하여 신경을 안정시키고 신경 끝을 전극자극 흡입에 연결합니다. 40배율에서 물 에머젼 목표를 가진 DRG 뉴런을 시각화하고 선택합니다.

전극을 접고 세포내 용액으로 채웁니다. 홀더에 전극을 부착하고 4~7메가옴의 최종 저항으로 파이펫에 양압을 가한다. 다음으로 전극을 세포 표면에 가져옵니다.

그런 다음 파이프에 음압을 적용하여 씰을 형성합니다. 기가옴 씰에 도달하면 멤브레인 전위를 약 60밀리볼트로 설정하고 모든 셀 레코딩 모드를 설정합니다. 이어서, 전도 실패를 선별하기 위해 흡입 전극을 통해 상시 신경에 5 내지 50 헤르츠의 반복자극을 전달한다.

기준선에서 피크까지 AHP의 진폭과 80%의 AHP 지속 시간을 측정합니다. 이 그림은 10 헤르츠 전기 자극에 대한 응답으로 쥐에서 다시 발사 단일 c5의 원래 연속 기록을 보여줍니다. 모든 20 번째 스윕이 표시되고 위에서 아래로 표시됩니다.

삽입은 대표 작업 잠재력을 보여 주어 있습니다. 다음은 CFA주입랫으로부터의 단일 C 섬유의 레코딩이 이전 패널과 동일한 자극에 응하여 이다. 이 수치는 CFA 정격 쥐로부터 작은 직경 DRG 뉴런에서 5 헤르츠 자극에 대한 연속 발사 반응, 또는 ZD7288의 상이한 농도의 투여를 보여줍니다.

인셋에는 지정된 기록 기간에 대한 확장된 추적이 표시됩니다. 어두운 반점은 스파이크 실패를 나타냅니다. AHP는 컨트롤에서 더 큰 상승 경사를 보였다.

ZD7288 응용 프로그램에서 125 마이크로몰라 후 더 작은 상승 경사를 관찰했다. 시간 단일 파이버 레코딩 할 때, 나는 동물이 좋은 안전 상태를 유지합니다 섬유를 절단하는 것이 중요하다고 생각합니다. 그리고 중성자 주변의 미세 환경.

단일 섬유 레코딩과 상골 신경과 부착된 그대로 DRG의 적용의 조합은 통증에 관한 말초 신경계에 대한 이해를 향상시다.