Name: differential effects of lipid-lowering drugs in modulating morphology of cholesterol particles
Uploaded: 2017-11-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 15 s
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이 작품은 Plaxgen의 연구에 의해 투자 되었다 SM (PLX-1008)에 게 수 여 하는 그랜트. 우리는 IRB 승인 아래 동맥 경화 과목에서 혈 청 샘플을 수집 하기 위해 팔로 알토 의학 연구 재단 연구소를 감사 합니다.

1. 준비의 형광 표시 된 콜레스테롤과 지질 저하 약물 참고: 형광 표시 된 콜레스테롤 집계 및 스타 틴 우리의 이전 기사에서 설명한 대로 준비 했다 21. 시 약, 교류 cytometer, 화학 분석기 및 데이터 분석 소프트웨어를이 연구에 사용 된 이미지의 세부 정보에 대 한 테이블의 자료를 참조 하시기 바랍니다.
<ol><li>형광 표시 된 동결 건조 된 콜레스테롤을 solubilize (1mg, 전 / Em = 495 nm/507 nm) 100% 알코올의 1 mL에 가루.</li>
	<li>2,040 x g에서 3 분을 위한 견본을 원심 고 성 형광 표시 된 콜레스테롤 집계 패 배열 분석 결과에서 포함 된 supernatants 사용.</li>
	<li>약물 준비에 대 한 개별적으로 simvastatin로 바 스타 틴, atorvastatin, ezetimibe, 및 100% 알코올의 1 ml에 오메가-3 지방산의 분말 (2 mg)를 solubilize.</li>
	<li>2,040 x g에서 3 분 동안 원심 분리 후 사용 마약 분석 결과에 포함 된 supernatants.</li>
	<li>마찬가지로 solubilize 개별적으로 분말 (2mg) 심, rosuvastatin, 니 아 신, 그리고 이온된 물 2 mg/mL의 재고 솔루션을 만들고의 1 mL에 fibrate.</li>
	<li>2,040 x g에서 3 분 동안 원심 분리 후 사용 마약 패 배열 분석 결과에 포함 된 supernatants.</li>
</ol> 2. 패 배열 분석 결과 검토에 시험관 콜레스테롤 입자 형성을 위한 <ol><li>사용 화학 분석기-1 (재료의 표 참조) 패 배열 분석 결과 콜레스테롤 입자 형성에 대 한 설정. 둥근 바닥, 낮은 단백질 바인딩 96 잘 접시 섹션 1에서 준비 하는 시 약을 사용 하 여 분석 결과 수행 합니다. 200 µ L에서 각 잘에서 최종 반응 볼륨을 유지 하 고 3 중에 모든 분석을 수행.
	<ol><li>먼저, 부하 194.5 µ L 인산의 염 분 (PBS) 각 음을 버퍼링.</li>
		<li>각 잘 각 지질 저하 약물 솔루션의 2.5 µ L (5 µ g)를 추가 하 고 흔들어 30 접시를 균일 하 게 솔루션으로 약물을 섞어 화학 분석기-1 반응 접시에 그것을 배치 하 여 s. 약 부정적인 컨트롤 샘플에 추가 됩니다.</li>
		<li>마지막으로, 각 음을 2 µ L (2 µ g) 형광 표시 된 콜레스테롤 집계 솔루션을 추가 하 고 30 접시를 흔들어 화학 분석기-1 반응 접시에 그것을 배치 하 여 s.</li>
		<li>2 h 37 ° C와 200 rpm에서 설정에 대 한 실험실 셰이 커에 접시를 품 어.</li>
		<li>Cytometry 이미징 하 여 입자의 이미지를 수집 부 화, 후.</li>
	</ol></li></ol> 3. 캡처 이미지의 콜레스테롤 입자를 사용 하 여 이미징 Flow Cytometry <ol><li>열기 데이터 수집 템플릿 올바른 악기 설정을 로드를. 클릭 &#34; 파일 &#34;, 다음 선택 &#34; 오픈 템플릿 &#8230; &#34; 하 고 서식 파일을 선택 합니다.</li>
	<li>클릭 &#34; 플러시, 잠금, 부하 &#34; 샘플 로드에 대 한 악기를 준비 하.</li>
	<li>때는 &#34; 로드 샘플 &#34; 대화 상자가 열립니다, 클릭 &#34; 확인 &#34; 이미징 교류 cytometer로 제 2에서 준비 각 샘플의 50 µ L 로드.</li>
	<li>클릭 &#34; 실행 | 설치 &#34; 실시간에서 이미징 영역에서 입자를 볼.</li>
	<li>이미징 영역에서 입자 좋은 초점에 있을 때 클릭 &#34; 실행 | 취득 &#34; 다크 필드 (사이드 분산형/SSC), 밝은 (BF), 녹색 형광와 노란색 형광에 대 한 높은 처리 방식으로 각 개체의 이미지를 동시에 취득 하.</li>
	<li>반복 단계 각 샘플에서 5000-10000 입자를 얻으려고 3.2-3.5.</li>
	<li>개체 형광 강도 및 형태학 상 변이 결정 하기 위한 이미지 분석 소프트웨어를 사용 하 여 모든 raw 이미지 파일을 분석.
	<ol><li>클릭는 &#34; 도구 &#34; 선택 후 이미지 분석 소프트웨어의 상단에 버튼 &#34; 일괄 처리 데이터 파일 &#34; 드롭-다운 메뉴에서을 열 것 이다는 &#34; 배치 &#34; 창.</li>
		<li>에 &#34; 배치 &#34; 창 클릭는 &#34; 추가 배치 &#34; 열립니다 단추는 &#34; 일괄 처리 정의 &#34; 창.</li>
		<li>에는 &#34; 일괄 처리 정의 &#34; 창 클릭는 &#34; 파일 추가 &#34; 버튼 및 raw 이미지 파일을 선택, 클릭는 &#34; 서식 파일 &#34; 버튼 적절 한 데이터 분석 템플릿 파일을 선택한 후 선택 &#34; 확인 &#34; 및 &#34; 일괄 처리 제출 &#34; 처리 및 raw 이미지 파일의 분석을 시작 하려면.</li>
	</ol></li></ol> 4. 배열 분석 결과 기반 평가의 지질-저하 약물 효과 플 라크 콜레스테롤 입자 정화 <ol><li>단계 2.1에에서 설명 된 대로 수행 콜레스테롤 입자 형성 분석 결과 정화 VLDL, LDL 및 HDL 지방 단백질/입자를 사용 하 여. 96 잘 접시에 패 배열 분석을 수행.
	<ol><li>첫째, PBS 가진 모든 우물을 로드; 200 µ L 최종 볼륨을 사용 하 여 각 잘.</li>
	</ol></li> <li>부정적인 제어를 위한 4 µ g VLDL, LDL, 추가 또는 HDL 단백질/입자 각각에 개별적으로 약 없이 고 30 접시를 흔들어 s.
	<ol><li>지질 저하 약물 효과 조사, 추가 4 µ g VLDL, LDL, 또는 HDL 단백질/입자 각각을 개별적으로 잘 흔들어 30 접시 s.</li>
		<li>우물 4 µ g VLDL, LDL, 또는 HDL 추가, 2.5 µ (5 µ g) L ezetimibe로 바 스타 틴, simvastatin, 또는 니 아 신 솔루션을 추가 하 고 30 접시를 흔들어 화학 분석기-1에 그것을 배치 하 여 s.</li>
		<li>마지막으로, 모든 우물을 2 µ L (2 µ g) 형광 표시 된 콜레스테롤 집계 솔루션을 추가 하 고 30 접시를 흔들어 화학 분석기-1 반응 접시에 그것을 배치 하 여 s.</li>
	</ol></li> <li>37 ° C와 200 rpm에서 설정 실험실 셰이 커에 2 h에 대 한 접시를 품 어.</li>
	<li>이미징 cytometry 다음 단계 3.1-3.5를 사용 하 여 샘플을 수집.</li>
	<li>단계 3.7에서에서 설명한 대로 이미지 분석 소프트웨어를 사용 하 여 raw 이미지 파일을 분석.</li>
	<li>분석 서식 파일에서 콜레스테롤 입자 모집단의 식별을 위해 다음 제어 체계 사용.
	<ol><li>녹색 채널 포화 픽셀 수 (x 축)와 어두운 필드 채널의 음모에 포화 픽셀 수 (y 축), 어느 채널에서 하나 이상의 포화 픽셀 개체 거부.</li>
		<li>녹색 채널 강도 (x 축) 및 SSC 강도 (y 축)을 사용 하 여 포화 픽셀 없이 개체/입자 플롯: 개체가 그들의 녹색 채널 및 SSC 농도에 따라 세 영역 (VLDL, LDL, HDL) 중 하나에 속합니다. 
		참고: 이러한 게이츠 순화 VLDL, LDL 및 HDL 입자/단백질 약물 없이 사용 하 여 실시 하는 제어 실험에서 생성 된 데이터에 따라 만들어졌습니다.</li>
	</ol></li> <li>각 샘플에 대 한 지질 저하 약물 효과 확인 하려면 계산 각 부분 모집단 (VLDL, LDL, HDL)의 비율 뿐만 아니라 총 단백 입자 농도에 설명 된 단계 6.5.
	다음 수식을 사용 하 여 <ol><li>계산 입자 농도 (입자/mL): <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/56596/56596eq1.jpg" /> 참고:는 VLDL, LDL 및 HDL 게이팅 형광 도트-음모에서 영역 검출 ~ 그들의 각각 부분 모집단, 및 나머지의 80% ~ 20%는 입자의 다른 제어 영역 중복.</li>
	</ol></li></ol> 5. 혈 청 샘플에서 지질 농도의 측정 <ol><li>화학 분석기-2에 의해 LDL, HDL, 콜레스테롤 및 트리 글 리세 리드의 농도 결정 하는 데 사용 나이 일치 하는 정상 및 dyslipidemia 과목에서 얻은 혈 청 샘플.</li>
	<li>LDL, HDL, 콜레스테롤, 고 중성 지방 혈 청 샘플에서 상위 및 하위 참조 값을 넘어 식별 하는 그들의 농도에 따라의 비정상적인 농도 정의.</li>
	<li>따라 일반적인 참조 값 recommen시 약 제조 업체에 의해 공격 한: 콜레스테롤 (4-200 mg/dL), HDL (3.0-65 mg/dL), (4-100 mg/dL), LDL 및 트리 글 리세 리드 (9-200 mg/dL).</li>
	<li>낮은 참조 값 아래 또는 더 높은 참조 콜레스테롤 및 트리 글리세라이드에 대 한 가치와 존재 및 지질 저하 약물의 부재에 심사에 대 한 그들을 사용 된 비정상적인 값 있는 혈 청 샘플 식별.</li>
</ol> 6. 혈 청 샘플에서 콜레스테롤 입자 형성에 대 한 약물의 효과 분석 <ol><li>사용 화학 분석기-패 배열 분석 결과 혈 청 샘플에서 콜레스테롤 입자 형성에 대 한 설정 1. 둥근 바닥, 낮은 단백질 바인딩 96 잘 접시에에서 분석 결과 수행 합니다. 최종 반응 양의 200 µ L/잘 사용 하 고 3 중에 모든 분석을 수행.</li>
	<li>Stepwise 방식에서 시 약을 로드 하 여 접시를 준비.
	<ol><li>제어 웰 스 준비.</li>
		<li>각 잘을 PBS의 부하 193 µ L.</li>
		<li>2.5% (v/v) 환자 혈 청 (잘 당 하나의 혈 청 샘플)을 추가 하 고 30 접시를 흔들어 화학 분석기 반응 접시에 그것을 배치 하 여 s.</li>
		<li>추가 2 µ L (2 µ g) 형광 표시 된 콜레스테롤의 각 음에 솔루션을 집계 및 30 접시를 흔들어 화학 분석기-1 반응 접시에 그것을 배치 하 여 s.</li>
	</ol></li> <li>약물과 웰 스 준비.
	<ol><li>각 잘을 PBS의 부하 191 µ L.</li>
		<li>2.5% (v/v) 환자 혈 청 (잘 당 하나의 혈 청 샘플)을 추가 하 고 30 접시를 흔들어 화학 분석기-1 반응 접시에 그것을 배치 하 여 s.</li>
		<li>추가 2 µ L ezetimibe로 바 스타 틴, simvastatin 또는 니 아 신 솔루션 (4 µ g) 부정적인 제어 웰 스 제외 하 고 모든 우물. 잘 당 하나의 약물을 추가 하 고 30 접시를 흔들어 화학 분석기-1 반응 접시에 그것을 배치 하 여 s.</li>
		<li>형광 표시 된 콜레스테롤의 추가 2 µ L 각 우물에 솔루션 (2 µ g)를 집계 하 고 30 접시를 흔들어 화학 분석기-1 반응 접시에 그것을 배치 하 여 s.</li>
	</ol></li> <li>마약 모든 우물만 로드 (제어 및 약물 치료) 그들의 각각 혈 청 샘플 로드 되었습니다 및 형광 표시 된 콜레스테롤이이 단계 끝에 추가.</li>
	<li>37 ° C와 200 rpm에서 설정 실험실 셰이 커에 2 h에 대 한 접시를 품 어.</li>
	<li>교류 cytometer 다음 단계 3.1-3.6에서에서 설명한 설정을 이미지에 의해 샘플을 취득.</li>
	<li>단계 3.7에서에서 설명한 대로 동일한 서식 파일을 사용 하 여 모든 이미지 파일을 처리 하는 일괄 처리에 대 한 소프트웨어를 분석 하는 이미지를 사용 하 여.
	<ol><li>4.5와 4.6 단계에 설명 된 대로 플롯 게이츠를 그려서 데이터 분석을 수행.</li>
	</ol></li> <li>지질 저하 약물 효과/응답 (낮음, 중간, 및 높은) 각 샘플에 대 한 결정, VLDL, LDL과 HDL의 총 입자 구성의 비율 뿐만 아니라 총 단백 입자 농도 계산 부분 모집단.</li>
	<li>플롯 개체의 히스토그램에 VLDL, LDL 및 HDL 인구 &#39; s 밝은 필드 이미지, 구형 또는 선형 영역으로 길이 (길이-폭), 그리고 게이트에서 뺀 폭: 개체 (길이-폭) &#8804; 2 µ m으로가 구형 및 선형 비율 계산에 대 한 구형 영역 모양 입자.</li>
	<li>구형 및 선형 모양의 LDL과 HDL 콜레스테롤 입자와 각 약물 없이 incubated 각 혈 청 샘플에 대 한 식별의 백분율을 비교 합니다. 각 혈 청 샘플에 대 한 가져온 triplicate 값, 중 동의 구형 및 선형 비율 LDL과 HDL 입자는 약물 효과의 결정에 대 한 SD ± 2 범위 내에 속하는 모양.</li>
</ol>

<ol>
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C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-density+lipoprotein+heterogeneity+and+function+in+reverse+cholesterol+transport.">High-density lipoprotein heterogeneity and function in reverse cholesterol transport.</a> Curr Opin Lipidol. 21, 229-238 (2011).</li><li>Kontush, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HDL+particle+number+and+size+as+predictors+of+cardiovascular+disease.">HDL particle number and size as predictors of cardiovascular disease.</a> Front in Pharmacol. , (2015).</li><li>Karathanasis, S. K., Freeman, L. A., Gordon, S. M., Remaley, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+changing+face+of+HDL+and+the+best+way+to+measure+it.">The changing face of HDL and the best way to measure it.</a> Clin. Chem. 63, 196-210 (2017).</li></ol>

박사 Madasamy Plaxgen, Inc에서 보조금 지원을 받고 있으며 경쟁 금융 관심 있습니다. 다른 작성자 공개 경쟁 금융 관심 없습니다 있어야 합니다.

일반적으로, 배포 및 혈액 순환에 VLDL, LDL 및 HDL 콜레스테롤 입자의 기능 특성 주로 대사, 유전 역학, 세포, 및 플라즈마 요인22,23에 의해 결정 됩니다. 현재 연구에서 지질 변경의 효과 검사 버퍼에 마약 밝혀 ezetimibe로 바 스타 틴, simvastatin, atorvastatin 등 높은 질 성 약 콜레스테롤 입자의 형태에 더 높은 수준의 복잡성을 유도 높은 친수성 rosuvastatin 심 약으로 관찰 된 낮은 수준의 효과에 비해. 이러한 결과 좋은 계약에 우리의 이전 연구 버퍼 및 혈 청 샘플21에서 LDL과 HDL 콜레스테롤 입자 형성을 변조에서 스타 틴의 효과 기반으로 하는 비 효소 메커니즘을 설명 하. 따라서, 현재 연구에서 결과 ezetimibe, 니 아 신, fibrate, 그리고 오메가-3 지방산 마약 변조 콜레스테롤 입자 형성에 직접적인 역할을 할 수 있는 행동의 비 효소 메커니즘 밝혀. 약물 및 콜레스테롤 집계 사이 상호 작용 구형 및 선형 가닥 형태학 전시 대형 콜레스테롤 입자 들 2-60 µ m2의 어셈블리에 연결 가능 하다.
게다가, 순화 된 지단백 입자를 사용 하 여 얻은 결과 콜레스테롤 집계와 작곡과 콜레스테롤의 형태학 속성을 변경할 수 있습니다 VLDL, LDL 및 HDL 단백질을 포함 한 플라즈마 요소 간의 상호 작용을 제안 입자입니다. 순화 된 지 단백질 입자와 관련 된 약물 치료 결과 LDL 콜레스테롤 입자 형성에 관찰 하는 그들의 효과에 비해 VLDL 입자 형성에 더 높은 수준의 마약 효과를 나타냅니다. 로 바 스타 틴, simvastatin, ezetimibe 약 프로 약으로 사용 되었다 하 고 그들의 복용량은 분석 실험에서 생리 적 농도 보다 높을 수 있습니다.
흥미롭게도, 선형의 형성에 미치는 영향에 특히 LDL과 HDL 입자를 형성 VLDL, LDL 및 HDL 콜레스테롤 입자 형성의 프로필 변경에 약물 효과의 변이 보여주었다 혈 청 샘플의 심사. 이러한 약물 LDL과 HDL 콜레스테롤 입자 형성 dyslipidemia에 나이 일치 하는 정상 혈 청 샘플 모양의 선형에 감소 유도. 선형 모양된 입자 형성을 감소에 관찰 약물 효과 simvastatin, ezetimibe로 바 스타 틴, 니 아 신에서 높았다. 정상 및 dyslipidemia 혈 청 샘플에서 구형 및 선형 스트랜드 형태학과 콜레스테롤 입자의 식별 vivo에서 조건에서 유사한 형태학을 가진 입자 형성 수 있습니다 제안 합니다. 이전 연구는 디스크와 인간과 ApoE-/- LDLR-/- 생쥐 모델24,,2526 의 동맥 경 화성 플 라크에 바늘 모양의 콜레스테롤 결정의 존재를 확인 ,2728.
이질적인 혼합물 및 기능 활동 함께 소형 및 대형 크기 HDL 입자의 수준 반전 콜레스테롤 수송을 통해 그들의 심장 보호 효과 발휘 하는 중요 한 요소는 존재 하는 혈액에서 회람 하는 HDL 입자 통로29,30. HDL 콜레스테롤 입자 subfractions elucidating31 콜레스테롤 경과, 안티-염증, 안티 thrombotic 및 안티 산화 등 여러 생물학적 기능에 그들의 역할에 대 한 식별의 중요성을 강조 하는 최근 연구 . 또한, 연구의 숫자는 플라즈마1,5,21에서 HDL의 수준을 알 맞도록 하는 낮은 증가에 지질을 낮추는 치료의 효과 보고 있다. 따라서, 본 연구에서 결과 콜레스테롤 입자의 형태학 적 특징에 새로운 통찰력을 제공합니다. 특히, dyslipidemia 주제의 혈 청 샘플에서 선형 모양의 HDL 콜레스테롤 입자의 높은 수준의 검색 제안 그들은 모두 진단 및 지질 변경의 효과 평가 대 한 신뢰할 수 있는 biomarker를 있을 수 있습니다 마약 환자에. 그러나, 추가 조사는 명료한 형태학 및 CVD에 그들의 협회와 콜레스테롤 입자를 더 잘 이해 하는 큰 임상 샘플을 사용 하 여 필요 합니다.
콜레스테롤 입자의 조립에 약물 효과 조사 분석 한 패 결과 배열, 표시 된 콜레스테롤 집계 및 5 µgof 마약 때문에 형광의 2 µ g 사용 했습니다: (1) 약물은 콜레스테롤을 표시 두 형광 경쟁적으로 바인딩할 및 내 인 성 지질 혈 청 샘플;에 (2) 각 샘플에서에서 큰 크기와 ~ 2-60 μ2;에서 배열 하는 모양으로 조립 하는 5000 ~ 10000 콜레스테롤 입자를 획득 (3) 약물 (5 µ g 복용 300 ng)와 콜레스테롤 입자 형성;의 프로필에 감지 변경 했다 높은 복용량으로 알을 품을 그들의 1 ~ 5% 인 큐베이 팅 세럼 샘플 중 약물 반응의 다양 한 변화 관찰 (4) 콜레스테롤 집계와 지질 저하 약물 간의 상호 작용은 비 효소 과정에 의해 중재. 따라서, 분석 결과에 사용 된 시 약의 농도 그들의 생리 적인 수준 보다 더 높은 수 있습니다.
결론적으로, 우리는 성공적으로 증명 하고있다는 생체 외에서 이미징 형태학과 콜레스테롤의 조절에 광범위 한 지질 저하 약물의 효과 결정 하기 위한이 연구에서 설명 하는 방법의 장점 입자입니다. 시각화 및 이미지 분석 알고리즘의 별자리를 채용 하 여 지질 입자의 형태를 측정의 접근 환자에서 지질을 낮추는 치료의 결과 평가 하 고 동맥 경화 증의 두 진단을 도움이 됩니다.

고밀도 지단백 (HDL) 콜레스테롤에 있는 증가의 온건한 수준에 저밀도 지 단백질 (LDL) 콜레스테롤의 낮은 플라스마 수준을 감소 시키는 지질 저하 약물의 효능을 증명 하는 수많은 임상 연구는 동맥 경화 관련 심장 혈관 부작용1,2,3,,45의 기본 및 보조 부각을 방지할 수 있습니다. 스타 틴, HMG-CoA reductase 효소 저 해제, 그룹 낮은 회전 리드 순환 혈액6,7에서 LDL 콜레스테롤의 수준에에서 내 인 성 콜레스테롤 합성을 차단 합니다. 마찬가지로, 니코틴산의 효과 낮추는 지질 hepatocyte diacylglycerol acyltransferase-2, triglyceride 합성8에 관련 된 주요 간 효소의 그것의 직접 적이 고 및 회장 저해에 의해 중재 됩니다. 비교적, ezetimibe 소장9의 상피 세포에 위치한 Niemann 선택 C1-Like 1 (NPC1L1) 단백질에 바인딩하여 exogenous 콜레스테롤의 흡수를 제한 하 여 플라즈마 정도를 LDL 감소 시킨다. Fenofibrate, 다른 지질 저하 약물, 실질적으로 플라스마 트리 글리세라이드의 농도 감소 하 고 또한 알맞게 peroxisome proliferator 활성화 수용 체 통로10통해 LDL 콜레스테롤을 감소. 게다가, 오메가-3 지방산은 LDL11의 플라즈마 저수준에 그것의 능력 때문 항 동맥 경 화성 효과를 보고.
지질 낮추는 약물 LDL 콜레스테롤을 낮추는에 그들의 기본 효과 외에 HDL 수준 향상, 내 피 기능을 개선, 염증, 및 감소 혈소판 억제를 포함 하 여 유익한 다 면 발현 성 효과의 번호가 집계12,,1314. 그러나, HDL 콜레스테롤 입자를 증가 하 고 그들의 구조 기능 수정에 이러한 약물의 기본 메커니즘 완전히 이해 되지 않는다. 이러한 의약품 심혈 관계 질환 동맥 경화 관련 (CVDs) 치료를 널리 처방 됩니다, 이후 더 그들의 가능한 역할에 형태학 기능 및 지질 입자의 분포 확인 조사 필수적입니다. 인간의 플라즈마 lipidome 약 600 독특한 지질과 다양 한 크기, 모양, 밀도, 및 작곡15,16,17에 있는 cholesterols의 종류 분자 22의 구성 . 울트라-원심 분리, NMR, 그라데이션 젤 전기 이동 법 등 분석 방법 LDL과 HDL 입자와 그들의 subfractions18,19를 특성화 하는 데 사용 됩니다. 그러나, 이러한 방법의 응용 형태 및 지질 입자의 변조에서 약물의 효과 결정 하기 위한 연구에 제한 됩니다. 교류 cytometer 기반된 패 배열 기능 생화학 분석 결과 검색에 대 한 개발 이며 혈 청의 지질 및 아 밀 로이드 플 라크 입자20파생. 체 외에 이미징이 연구에서 설명 하는 방법의 장점은 변경 형태 및 버퍼 및 혈 청 샘플에서 콜레스테롤 입자의 분포에 지질 조절 약물 효과의 식별 가능

<table><tbody><tr><td>TopFluor fluorescent cholesterol</td><td>Avanti Polar lipids</td><td></td><td>store 100 &amp;micro;l aliquots at -20 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>simvastatin (pro-drug)</td><td>Cayman Chemicals</td><td></td><td>store 100 &amp;micro;l aliquots at -20 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>lovastatin (pro-drug)</td><td>Cayman Chemicals</td><td></td><td>store 100 &amp;micro;l aliquots at -20 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>rosuvastatin</td><td>Cayman Chemicals</td><td></td><td>store 100 &amp;micro;l aliquots at -20 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>atorvastatin</td><td>Cayman Chemicals</td><td></td><td>store 100 &amp;micro;l aliquots at -20 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>fluvastatin</td><td>Cayman Chemicals</td><td></td><td>store 100 &amp;micro;l aliquots at -20 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>ezetimibe (pro-drug)</td><td>Cayman Chemicals</td><td></td><td>store 100 &amp;micro;l aliquots at -20 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>Niacin</td><td>MilliporeSigma</td><td></td><td>store 100 &amp;micro;l aliquots at -20 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>fibrate</td><td>MilliporeSigma</td><td></td><td>store 100 &amp;micro;l aliquots at -20 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>omega-3 fatty acid</td><td>MilliporeSigma</td><td></td><td>store 100 &amp;micro;l aliquots at -20 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>purified VLDL proteins/particles</td><td>Lee Bio</td><td></td><td></td></tr><tr><td>purified LDL proteins/particles</td><td>Lee Bio</td><td></td><td></td></tr><tr><td>purified HDL proteins/particles</td><td>Lee Bio</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Human age-matched serum</td><td>Dx Biosamples</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Human atherosclerosis serum</td><td>Bioserve</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Human normal serum</td><td>Stanford Blood center</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LDL measurement reagent pack</td><td>Roche Diangostics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HDL measurement reagent pack</td><td>Roche Diangostics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Total cholesterol measurment</td><td>Roche Diangostics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>96-well microtitre plates</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triglycerides measurement</td><td>Roche Diangostics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amnis Imaging Flow cytometer</td><td>Amnis Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IDEAS image analysing software</td><td>Amnis Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chemistry Analyzer-1, ChemWel 2902</td><td>Awarness Technology</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chemistry Analyzer-2, Intergra 400</td><td>Roche Diangostics</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

differential effects of lipid-lowering drugs in modulating morphology of cholesterol particles

치료 dyslipidemia 환자 지질 저하 약물의 중요 한 감소 저밀도 지 단백질 (LDL) 수준 및 플라즈마의 고밀도 지단백 (HDL) 콜레스테롤에 있는 증가의 적당 한 수준 낮은 이끌어 낸다. 그러나, 형태학 및 콜레스테롤 입자의 배포 변경에 이러한 약물의 가능한 역할 제대로 이해 된다. 여기, cytometry 이미징 함께 패 배열 메서드를 사용 하면 콜레스테롤 입자의 형태학 적 기능 변조에 지질 저하 약물 효과의 평가 체 외에서 설명 합니다. 콜레스테롤 입자의 이미지 분석 표시로 바 스타 틴, simvastatin, ezetimibe, atorvastatin 구형 및 선형 가닥 모양 입자의 형성을 유발, 피 브 레이트 류, 심, 신과 rosuvastatin 유도 하는 반면에 만 구형 모양 입자의 형성입니다. 다음, 매우 순화 된 저밀도 지 단백질 (VLDL)과이 약물과 incubated LDL 입자 변화에서에서 보여주었다 콜레스테롤의 형태학 및 이미지 텍스처 입자 모집단. 또한, 혈 청 샘플 50의 심사 dyslipidemia (18.3%의 평균)이 일치 하는 정상 (11.1%의 평균) 샘플에 비해 과목에서 선형 모양의 HDL 콜레스테롤 입자의 높은 수준의 존재를 밝혔다. 우리는 또한 선형 감소에 지질 저하 약물 효과에 상당한 변화 모양 혈 청 샘플에서 LDL과 HDL 콜레스테롤 입자 형성을 관찰. 이러한 연구 결과 지질 저하 약물, 그들의 세포 중재 낮추는 효과 뿐만 아니라 행동의 비 효소 메커니즘에 의해 콜레스테롤 입자의 형태를 조절 직접 수 있습니다 나타냅니다. 이러한 결과의 결과 동맥 경화 증의 진단 정보를 최적의 지질을 낮추는 치료 예측 가능성이 있다.

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Differential Effects of Lipid-lowering Drugs in Modulating Morphology of Cholesterol Particles

콜레스테롤 입자의 형태를 변조에 지질 저하 약물의 차동 효과

이 연구의 목적은 약물 효과 콜레스테롤 입자의 형태를 변조에 지질을 낮추는 생체 외에서 평가 했다. 지질 저하 약물의 비교 콜레스테롤 입자의 형태학 적 기능 변조에 그들의 효과에서 변화를 밝혔다.

Treatment of dyslipidemia patients with lipid-lowering drugs leads to a significant reduction in low-density lipoproteins (LDL) level and a low to ...

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14.5K 조회수.  Plaxgen Inc. 이 연구의 목적은 약물 효과 콜레스테롤 입자의 형태를 변조에 지질을 낮추는 생체 외에서 평가 했다. 지질 저하 약물의 비교 콜레스테롤 입자의 형태학 적 기능 변조에 그들의 효과에서 변화를 밝혔다.

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Optimized Negative Staining: a High-throughput Protocol for Examining Small and Asymmetric Protein Structure by Electron Microscopy

Structural determination of proteins is rather challenging for proteins with molecular masses between 40 - 200 kDa. Considering that more than half of natural proteins have a molecular mass between 40 - 200 kDa1,2, a robust and high-throughput method with a nanometer resolution capability is needed. Negative staining (NS) electron microscopy (EM) is an easy, rapid, and qualitative approach which has frequently been used in research laboratories to examine protein structure and protein-protein interactions. Unfortunately, conventional NS protocols often generate structural artifacts on proteins, especially with lipoproteins that usually form presenting rouleaux artifacts. By using images of lipoproteins from cryo-electron microscopy (cryo-EM) as a standard, the key parameters in NS specimen preparation conditions were recently screened and reported as the optimized NS protocol (OpNS), a modified conventional NS protocol 3 . Artifacts like rouleaux can be greatly limited by OpNS, additionally providing high contrast along with reasonably high&#8208;resolution (near 1 nm) images of small and asymmetric proteins. These high-resolution and high contrast images are even favorable for an individual protein (a single object, no average) 3D reconstruction, such as a 160 kDa antibody, through the method of electron tomography4,5. Moreover, OpNS can be a high&#8208;throughput tool to examine hundreds of samples of small proteins. For example, the previously published mechanism of 53 kDa cholesteryl ester transfer protein (CETP) involved the screening and imaging of hundreds of samples 6. Considering cryo-EM rarely successfully images proteins less than 200 kDa has yet to publish any study involving screening over one hundred sample conditions, it is fair to call OpNS a high-throughput method for studying small proteins. Hopefully the OpNS protocol presented here can be a useful tool to push the boundaries of EM and accelerate EM studies into small protein structure, dynamics and mechanisms.

More than half of proteins are small proteins (molecular mass &#60;200 kDa) that are challenging for both electron microscope imaging and three-dimensional reconstructions. Optimized negative staining is a robust and high-throughput protocol to obtain high contrast and relatively high resolution (~1 nm) images of small asymmetric proteins or complexes under different physiological conditions.

최적화 된 음의 염색 : 전자 현미경으로 작은 비대칭 단백질 구조 검사를위한 높은 처리량 프로토콜

Structural determination of proteins is rather challenging for proteins with molecular masses between 40 - 200 kDa. Considering that more than half of ...

연구

환경과학

Cholesterol Efflux Assay

Cholesterol content of cells must be maintained within the very tight limits, too much or too little cholesterol in a cell results in disruption of cellular membranes, apoptosis and necrosis 1. Cells can source cholesterol from intracellular synthesis and from plasma lipoproteins, both sources are sufficient to fully satisfy cells' requirements for cholesterol. The processes of cholesterol synthesis and uptake are tightly regulated and deficiencies of cholesterol are rare 2. Excessive cholesterol is more common problem 3. With the exception of hepatocytes and to some degree adrenocortical cells, cells are unable to degrade cholesterol. Cells have two options to reduce their cholesterol content: to convert cholesterol into cholesteryl esters, an option with limited capacity as overloading cells with cholesteryl esters is also toxic, and cholesterol efflux, an option with potentially unlimited capacity. Cholesterol efflux is a specific process that is regulated by a number of intracellular transporters, such as ATP binding cassette transporter proteins A1 (ABCA1) and G1 (ABCG1) and scavenger receptor type B1. The natural acceptor of cholesterol in plasma is high density lipoprotein (HDL) and apolipoprotein A-I. 
The cholesterol efflux assay is designed to quantitate the rate of cholesterol efflux from cultured cells. It measures the capacity of cells to maintain cholesterol efflux and/or the capacity of plasma acceptors to accept cholesterol released from cells. The assay consists of the following steps. Step 1: labelling cellular cholesterol by adding labelled cholesterol to serum-containing medium and incubating with cells for 24-48 h. This step may be combined with loading of cells with cholesterol. Step 2: incubation of cells in serum-free medium to equilibrate labelled cholesterol among all intracellular cholesterol pools. This stage may be combined with activation of cellular cholesterol transporters. Step 3: incubation of cells with extracellular acceptor and quantitation of movement of labelled cholesterol from cells to the acceptor. If cholesterol precursors were used to label newly synthesized cholesterol, a fourth step, purification of cholesterol, may be required.
The assay delivers the following information: (i) how a particular treatment (a mutation, a knock-down, an overexpression or a treatment) affects the capacity of cell to efflux cholesterol and (ii) how the capacity of plasma acceptors to accept cholesterol is affected by a disease or a treatment. This method is often used in context of cardiovascular research, metabolic and neurodegenerative disorders, infectious and reproductive diseases.

The cholesterol assay is designed to quantitate the rate of cholesterol efflux from cultured cells and the capacity of plasma acceptors to accept cholesterol released from cells. The assay consists of labelling cells with cholesterol, equilibration of cholesterol among intracellular pools and release of cholesterol to an extracellular acceptor.

콜레스테롤 유출 분석

Cholesterol content of cells must be maintained within the very tight limits, too much or too little cholesterol in a cell results in disruption of ...

의학

Enrichment of Native Lipoprotein Particles with microRNA and Subsequent Determination of Their Absolute/Relative microRNA Content and Their Cellular Transfer Rate

Lipoprotein particles are predominately transporters of lipids and cholesterol in the bloodstream. Furthermore, they contain small amounts of strands of noncoding microRNA (miRNA). In general, miRNA alters the protein expression profile due to interactions with messenger-RNA (mRNA). Thus, knowledge of the relative and absolute miRNA content of lipoprotein particles is essential to estimate the biological effect of cellular particle uptake. Here, a quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR)-based protocol is presented to determine the absolute miRNA content of lipoprotein particles&#8212;exemplified shown for native and miRNA-enriched lipoprotein particles. The relative miRNA content is quantified using multiwell microfluidic array cards. Furthermore, this protocol allows scientists to estimate the cellular miRNA and, thus, the lipoprotein particle uptake rate. A significant increase of the cellular miRNA level is observable when using high-density lipoprotein (HDL) particles artificially loaded with miRNA, whereas incubation with native HDL particles yields no significant effect due to their rather low miRNA content. In contrast, the cellular uptake of low-density lipoprotein (LDL) particles&#8212;neither with native miRNA nor artificially loaded with it&#8212;did not alter the cellular miRNA level.

Here, a quantitative real-time polymerase chain reaction-based protocol is presented for the determination of the native micro-RNA content (absolute/relative) of lipoprotein particles. In addition, a method for increasing the micro-RNA level, as well as a method for determining the cellular uptake rate of lipoprotein particles, is demonstrated.

마이크로 로르 나를 사용한 네이티브 단백 입자의 농축과 그에 따른 절대/상대 미세 유 변 함량 및 셀룰러 전송 속도의 후속 측정

Lipoprotein particles are predominately transporters of lipids and cholesterol in the bloodstream. Furthermore, they contain small amounts of strands of ...

생화학

Enrichment of Mammalian Tissues and Xenopus Oocytes with Cholesterol

Cholesterol enrichment of mammalian tissues and cells, including Xenopus oocytes used for studying cell function, can be accomplished using a variety of methods. Here, we describe two important approaches used for this purpose. First, we describe how to enrich tissues and cells with cholesterol using cyclodextrin saturated with cholesterol using cerebral arteries (tissues) and hippocampal neurons (cells) as examples. This approach can be used for any type of tissue, cells, or cell lines. An alternative approach for cholesterol enrichment involves the use of low-density lipoprotein (LDL). The advantage of this approach is that it uses part of the natural cholesterol homeostasis machinery of the cell. However, whereas the cyclodextrin approach can be applied to enrich any cell type of interest with cholesterol, the LDL approach is limited to cells that express LDL receptors (e.g., liver cells, bone marrow-derived cells such as blood leukocytes and tissue macrophages), and the level of enrichment depends on the concentration and the mobility of the LDL receptor. Furthermore, LDL particles include other lipids, so cholesterol delivery is nonspecific. Second, we describe how to enrich Xenopus oocytes with cholesterol using a phospholipid-based dispersion (i.e., liposomes) that includes cholesterol. Xenopus oocytes constitute a popular heterologous expression system used for studying cell and protein function. For both the cyclodextrin-based cholesterol enrichment approach of mammalian tissue (cerebral arteries) and for the phospholipid-based cholesterol enrichment approach of Xenopus oocytes, we demonstrate that cholesterol levels reach a maximum following 5 min of incubation. This level of cholesterol remains constant during extended periods of incubation (e.g., 60 min). Together, these data provide the basis for optimized temporal conditions for cholesterol enrichment of tissues, cells, and Xenopus oocytes for functional studies aimed at interrogating the impact of cholesterol enrichment.

Enrichment of Mammalian Tissues and Xenopus Oocytes with Cholesterol

Two methods of cholesterol enrichment are presented: the application of cyclodextrin saturated with cholesterol to enrich mammalian tissues and cells, and the use of cholesterol-enriched phospholipid-based dispersions (liposomes) to enrich Xenopus oocytes. These methods are instrumental for determining the impact of elevated cholesterol levels in molecular, cellular, and organ function.

포유류 조직과 콜레스테롤을 함유한 제노푸스 우세포의 농축

Cholesterol enrichment of mammalian tissues and cells, including Xenopus oocytes used for studying cell function, can be accomplished using a variety of ...

Isolation and Analysis of Plasma Lipoproteins by Ultracentrifugation

Analysis of plasma lipoproteins and apolipoproteins is an essential part for the diagnosis of dyslipidemia and studies of lipid metabolism and atherosclerosis. Although there are several methods for analyzing plasma lipoproteins, ultracentrifugation is still one of the most popular and reliable methods. Because of its intact separation procedure, the lipoprotein fractions isolated by this method can be used for analysis of lipoproteins, apolipoproteins, proteomes, and functional study of lipoproteins with cultured cells in vitro. Here, we provide a detailed protocol to isolate seven lipoprotein fractions including VLDL (d&#60;1.006 g/mL), IDL (d=1.02 g/mL), LDLs (d=1.04 and 1.06 g/mL), HDLs (d=1.08, 1.10, and 1.21 g/mL) from rabbit plasma using sequential floating ultracentrifugation. In addition, we introduce the readers how to analyze apolipoproteins such as apoA-I, apoB, and apoE by SDS-PAGE and Western blotting and show representative results of lipoprotein and apolipoprotein profiles using hyperlipidemic rabbit models. This method can become a standard protocol for both clinicians and basic scientists to analyze lipoprotein functions.

Several methods have been used for analyzing plasma lipoproteins; however, ultracentrifugation is still one of the most popular and reliable methods. Here, we describe a method regarding how to isolate lipoproteins from plasma using sequential density ultracentrifugation and how to analyze the apolipoproteins for both diagnostic and research purposes.

극심분리에 의한 혈장 지단백질의 격리 및 분석

Analysis of plasma lipoproteins and apolipoproteins is an essential part for the diagnosis of dyslipidemia and studies of lipid metabolism and ...

Formulation and Characterization of Bioactive Agent Containing Nanodisks

The term nanodisk refers to a discrete type of nanoparticle comprised of a bilayer forming lipid, a scaffold protein, and an integrated bioactive agent. Nanodisks are organized as a disk-shaped lipid bilayer whose perimeter is circumscribed by the scaffold protein, usually a member of the exchangeable apolipoprotein family. Numerous hydrophobic bioactive agents have been efficiently solubilized in nanodisks by their integration into the hydrophobic milieu of the particle&#39;s lipid bilayer, yielding a largely homogenous population of particles in the range of 10-20 nm in diameter. The formulation of nanodisks requires a precise ratio of individual components, an appropriate sequential addition of each component, followed by bath sonication of the formulation mixture. The amphipathic scaffold protein spontaneously contacts and reorganizes the dispersed bilayer forming lipid/bioactive agent mixture to form a discrete, homogeneous population of nanodisk&#160;particles. During this process, the reaction mixture transitions from an opaque, turbid appearance to a clarified sample that, when fully optimized, yields no precipitate upon centrifugation. Characterization studies involve the determination of bioactive agent solubilization efficiency, electron microscopy, gel filtration chromatography, ultraviolet visible (UV/Vis) absorbance spectroscopy, and/or fluorescence spectroscopy. This is normally followed by an investigation of biological activity using cultured cells or mice. In the case of nanodisks harboring an antibiotic (i.e., the macrolide polyene antibiotic amphotericin B), their ability to inhibit the growth of yeast or fungi as a function of concentration or time can be measured. The relative ease of formulation, versatility with respect to component parts, nanoscale particle size, inherent stability, and aqueous solubility permits myriad in vitro and in vivo applications of nanodisk technology. In the present article, we describe a general methodology to formulate and characterize nanodisks containing amphotericin&#160;B as the hydrophobic bioactive agent.

Here, we describe the production and characterization of bioactive agents containing nanodisks. Amphotericin B nanodisks are taken as an example to describe the protocol in a stepwise manner.

나노디스크를 함유하는 생리활성제의 제형 및 특성화

The term nanodisk refers to a discrete type of nanoparticle comprised of a bilayer forming lipid, a scaffold protein, and an integrated bioactive agent. ...

3D Fluorescence Lipid Droplet Reconstruction을 통한 간 지방증 평가

Analysis of Fluorescent-Stained Lipid Droplets with 3D Reconstruction for Hepatic Steatosis Assessment

Lipid droplets (LDs) are specialized organelles that mediate lipid storage and play a very important role in suppressing lipotoxicity and preventing dysfunction caused by free fatty acids (FAs). The liver, given its critical role in the body's fat metabolism, is persistently threatened by the intracellular accumulation of LDs in the form of both microvesicular and macrovesicular hepatic steatosis. The histologic characterization of LDs is typically based on lipid-soluble diazo dyes, such as Oil Red O (ORO) staining, but a number of disadvantages consistently hamper the use of this analysis with liver specimens. More recently, lipophilic fluorophores 493/503 have become popular for visualizing and locating LDs due to their rapid uptake and accumulation into the neutral lipid droplet core. Even though most applications are well-described in cell cultures, there is less evidence demonstrating the reliable use of lipophilic fluorophore probes as an LD imaging tool in tissue samples. Herein, we propose an optimized boron dipyrromethene (BODIPY) 493/503-based protocol for the evaluation of LDs in liver specimens from an animal model of high-fat diet (HFD)-induced hepatic steatosis. This protocol covers liver sample preparation, tissue sectioning, BODIPY 493/503 staining, image acquisition, and data analysis. We demonstrate an increased number, intensity, area ratio, and diameter of hepatic LDs upon HFD feeding. Using orthogonal projections and 3D reconstructions, it was possible to observe the full content of neutral lipids in the LD core, which appeared as nearly spherical droplets. Moreover, with the fluorophore BODIPY 493/503, we were able to distinguish microvesicles (1 &#181;m &lt; d &#8804; 3 &#181;m), intermediate vesicles (3 &#181;m &lt; d &#8804; 9 &#181;m), and macrovesicles (d &gt; 9 &#181;m), allowing the successful discrimination of microvesicular and macrovesicular steatosis. Overall, this BODIPY 493/503 fluorescence-based protocol is a reliable and simple tool for hepatic LD characterization and may represent a complementary approach to the classical histological protocols.

저자 스포트라이트: 간 지방증 평가를 위한 3D 재구성을 통한 형광 염색 지질 방울 분석  

Herein, we demonstrate an optimized BODIPY 493/503 fluorescence-based protocol for lipid droplet characterization in liver tissue. Through the use of orthogonal projections and 3D reconstructions, the fluorophore allows for successful discrimination between microvesicular and macrovesicular steatosis and may represent a complementary approach to the classical histological protocols for hepatic steatosis assessment.

간 지방증 평가를 위한 3D 재구성을 통한 형광 염색 지질 방울 분석

Lipid droplets (LDs) are specialized organelles that mediate lipid storage and play a very important role in suppressing lipotoxicity and preventing ...

Cell-free Biochemical Fluorometric Enzymatic Assay for High-throughput Measurement of Lipid Peroxidation in High Density Lipoprotein

Low high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C) levels are one of the most powerful independent negative predictors of atherosclerotic cardiovascular disease (CVD). The structure and function of HDL rather than HDL-C may more accurately predict atherosclerosis. Several HDL protein and lipid compositional changes that impair HDL function occur in inflammatory states such as atherosclerosis. HDL function is usually determined by cell based assays such as cholesterol efflux assay but these assays have numerous drawbacks lack of standardization. Cell-free assays may give more robust measures of HDL function compared to cell-based assays. HDL oxidation impairs HDL function. HDL has a major role in lipid peroxide transport and high amount of lipid peroxides is related to abnormal HDL function. Lipid-probe interactions should be considered when interpreting the results of non-enzymatic fluorescence assays for measuring the lipid oxidative state. This motivated us to develop a cell-free biochemical enzymatic method to assess HDL lipid peroxide content (HDLox) that contributes to HDL dysfunction. This method is based on the enzyme horseradish peroxidase (HRP) and the fluorochrome Amplex Red that can quantify (without cholesterol oxidase) the lipid peroxide content per mg of HDL-C. Here a protocol is describedfor determination of HDL-lipid peroxidation using the fluorochrome reagent. Assay variability can be reduced by strict standardization of experimental conditions. Higher HDLox values are associated with reduced HDL antioxidant function. The readout of this assay is associated with readouts of validated cell-based assays, surrogate measures of cardiovascular disease, systemic inflammation, immune dysfunction, and associated cardiovascular and metabolic risk phenotypes. This technical approach is a robust method to assess HDL function in human disease where systemic inflammation, oxidative stress and oxidized lipids have a key role (such as atherosclerosis).

We describe here a fluorometric cell-free biochemical assay for determination of HDL-lipid peroxidation. This rapid and reproducible assay can be used to determine HDL function in large scale studies and can contribute to our understanding of HDL function in human disease.

고밀도 지단백에 지질 과산화의 높은 처리량 측정을 위한 생 화 확 적인 세포-무료 Fluorometric 효소 분석 결과

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