Name: observation and quantification of mating behavior in the pinewood nematode, bursaphelenchus xylophilus
Uploaded: 2016-12-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 55 s
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Najie 주홍 및 Liqun 바이는이 작품에 동일하게 기여했다. 이 작품은 재정적으로 공공 복지에서 임업 과학 연구를위한 특별 기금 (201,204,501)와 중국 국가 자연 과학 재단 (31170604, 31270688 및 31570638)에 의해 지원되었다. 우리는 영어 쓰기에 자신의 도움이 제안 박사 Holighaus 리트 박사 다니엘 Hickford 감사합니다.

버진 성인 선충 1. 취득 <ol><li> 파인 우드 선충의 분리 및 배양 조건 B를 xylophilus Nxy61 원래 중국 절강 성 닝보 지역에서 병에 걸린 Pinus의 massoniana에서 추출 분리 : 주. <ol><li> (PDA 재료의 표 참조) 감자 포도당 한천을 준비 보 트리 티스 시네 레아를 성장 판. </li><li> 접종 들어 B. 시네 메트에서 10mm의 직경을 갖는 매트 진균의 조각을 펀칭하고 새로운 PDA 플레이트의 중간에 넣어. 문화 어둠 속에서 25 ° C에서 5 D에 대한 B. 시네. </li><li> 문화 어둠 속에서 25 ° C에서 B. 시네을 포함하는 준비된 배양 접시에있는 파인 우드 선충. </li></ol></li><li> B. xylophilus 계란의 취득 <ol><li> 깔때기 아래에 고정 고무 튜브를 놓고 조립하는 랙에 제조 된 깔때기를 개최Baermann 깔때기 장치. 깔때기의 입에 종이 필터 대신 거즈 두 레이어를 놓습니다. </li><li> 유입 경로 설정에 곰팡이 문화를 전송하고 곰팡이 매트가 침지 될 때까지 물을 추가합니다. 2 시간을 기다린 선충은 곰팡이 문화에서 나올 여과지를 통과하고 Baermann 깔때기의 가장 낮은 부분에 정착 것입니다. </li><li> 15 ML의 튜브에 튜브의 바닥에서 물 방울의 첫 번째 부부를 수집하고 천천히 튜브 클램프를 풀어 선충를 수집합니다. </li><li> 실온에서 2 분 동안 3,000 XG에서 위의 컬렉션을 원심 분리기. </li><li> 피펫 물의 상층을 제거하고 멸균 이중 증류 (DD)의 1 mL의 H 2 O와 함께 재현 탁 </li><li> 피펫으로, 새로운 유리 페트리 접시 (6cm 직경)에 위의 부유를 전송합니다. 선충 자유롭게 수영을 할 수 있는지 확인하기 위해 페트리 접시에 무균 DD의 H 2 O 3 ML을 추가합니다. </li><li> 한 유리의 선충을 유지어둠 속에서 25 ° C에서 10 분 동안 배양 접시에요. 계란은 임신 한 여성에 의해 배치됩니다. 때문에 당 단백질 표면의, 계란 유리 페트리 접시의 바닥에 충실 할 것이다. </li><li> 계란을 방해하지 않고, 조심스럽게 물과 벌레를 제거합니다. 건조에서 계란을 방지하기 위해 즉시 유리 페트리 접시에 무균 DD의 H 2 O 3 ML을 추가합니다. </li><li> 단계를 반복 1.2.8 배는 모든 애벌레와 어른을 제거하고 순수한 계란을 얻었다. 페트리 접시에 무균 DD의 H 2 O의 추가 2 ㎖ (총 5 ㎖)를 추가합니다. </li></ol></li><li> 네 번째 단계 청소년의 취득 (J4 유충) <ol><li> 해치 25 ℃에서 어둠 속에서 24 시간 동안 수집 된 계란 J2 유충을 얻었다. </li><li> 2 분 동안 3,000 XG에 15 ML의 튜브, 원심 분리기에 피펫으로 J2 유충을 전송, 물 상층을 제거합니다. </li><li> 멸균 DD의 H 2 O의 200 μL와 J2 유충을 재현 탁하고로 전송B. 시네을 포함하는 PDA 판. </li><li> 문화 어둠 속에서 25 ° C에서 52 시간의 J2 애벌레. 이 시점에서, 대부분의 유충 J2 J4 유충의 초기에 개발 된 것이다. </li></ol></li><li> 처녀 성인 선충의 취득 <ol><li> 알코올 버너 동안 가열 한 후 유리 모세관을 그려 선충을 따기위한 바늘을 준비합니다. 주 :이 모세관 바늘의 팁은 일반적으로는 단일 선충류를 픽업하기위한 도구로서 이용 될 수 있도록, 직경 50㎛의 성인 선충 대략 차체 폭 할 필요가있다. </li><li> Baermann 깔때기를 조립하고 단계 1.2.1에 기술 된 바와 같이, 2 시간 동안 곰팡이 문화 선충을 추출 - 1.2.3. </li><li> 깨끗한 페트리 접시에 물을 J4을 전송합니다. </li><li> 실체 현미경 하에서 선충을 관찰하고 마미야와 기요하라 (8) (그림 1에서 설명 된 바와 같이, 성기 형태로 남성과 여성을 구분 </strong&gt;). 제조 된 모세관 바늘로 원하는 섹스의 선충을 선택하고 남성 또는 여성에 대한 적절한 진균 배양 접시에 전송합니다. 주 : 남성보다 여성이 60에서 여성의 비율에있다 - 70 %. 여성 외음부는 남성 spicule에서 분명히 다르다. 성인에 비해 초기 단계 J4에서 spicule 또는 외음부는 작지만 여전히 쉽게 볼과 구별 될 수있다. 선충은 항상 때로는 남성과 여성을 구별에 어려움을 증가 물에서 움직이고있다. </li><li> 문화 어둠 속에서 25 ° C에서 또 다른 24 시간의 J4 애벌레. 참고 : 모든 선충은 성인으로 발전해야하지만, 그들이 결합 해제하기 때문에, 그들은 처녀 성인으로 간주됩니다. </li><li> Baermann 유입 경로 둘을 조립하고 단계 1.2.1에 기술 된 바와 같이, 2 시간 동안 곰팡이 문화 처녀 성인을 추출 - 1.2.3, 그리고 두 개의 분리 된 깨끗한 페트리 접시에 처녀 성인 남성과 여성을 전송합니다. </li></oL&gt; </li></ol> 2. 관측 및 짝짓기 행동의 비디오 녹화 <ol><li> 여러 오목 슬라이드를 준비하고 자신의 우물 각 멸균 DD의 H 2 O의 200 μL를 추가합니다. </li><li> 모세관 바늘로 준비된 처녀 성인 남성 또는과 여성을 선택하고 각 오목 슬라이드의 물에 하나의 선충을 넣어. </li><li> 그들이 새로운 수성 환경에 적응할 수 있도록 1 시간 동안 잘 내부의 처녀 성인을 유지합니다. </li><li> 피펫을 사용하여 다른 잘 하나에서 둘 중 하나를 전송하여 처녀 남성과 여성의 쌍. </li><li> 실체 현미경 아래 오목 슬라이드에 1♀ + 1♂ 조합의 짝짓기 행동을 관찰한다. </li><li> 버진 성인의 결합 효율을 분석하기 위해, 그 결합 성공률 (R)을 계산하고, 무작위로 선택된 성인 쌍의 것과 비교한다. 교미가 공부 복제의 총 개수에 비해 관찰 된 복제의 백분율 R을 계산한다. </li><li&gt; 결합 선택과 intrasexual 경쟁, 그룹을 조사하고 두 개의 서로 다른 조합으로 처녀 선충을 준수합니다 : 1♀ + 3♂과 + 1♂ 3♀합니다. </li><li> 정량적 분석을위한 데이터를 수집하기 위해, 비디오 현미경을 사용하여 결합 동작을 촬영. 일반적으로, 그들이 교미 후 멀리 이동할 때 선충이 모멘트에 오목 슬라이드의 웰에 배치 된 시점으로부터 전체 정합 프로세스는 2 시간 이내에 완료된다. 따라서 하나의 복제에 적어도 2 시간 동안 연속하여 정합 처리를 기록한다. 최소 30 전체는 각 조합의 총에 복제합니다. 주 : 기록 과정에서 증발을 보상 할뿐만 더 무균 DD의 H마다 0.5 H 2 O (통상 50 μL)을 추가한다. </li></ol> 3. 데이터 수집 <ol><li> 컴퓨터 화면에 신중하게 모든 동영상을보고 성적 하위 행동 특성. </li><li> 결합하여 일의 기간을 측정비디오 레코더의 전자 프레임 별 기능. 수동 종단점으로부터 시작 시간을 뺀다. </li><li> 1♀ + 1♂ 조합은 각 녹화를 분석하여 다음과 같은 이벤트의 지속 시간을 측정한다 : <ol><li> 검색하는 시간을 측정 (즉, 암수가 그들이 발생하는 모멘트에 오목 슬라이드의 웰에 넣고 서로 접촉 할 때까지의 시간). </li><li> 접촉의 지속 시간을 측정한다 (즉, 수형 정확하게 제 교미 위해 여성의 외음부에 위치하는 순간에 제 접촉까지의 시간). </li><li> 교미의 지속 시간을 측정 (즉, 자신이 사정 한 후 아래로 여성의 몸에서 슬라이드까지 남성이 정확하게 여성의 외음부에 위치 할 때까지의 시간). 참고 : 일부 선충은 2 시간에 여러 번 교접 할 수 있습니다. 이러한 경우, 라스의 끝에서 제 교미 교미 기간을 측정사이의 시간을 포함하여 t 하나. </li><li> 여운의 지속 시간을 측정한다 (즉, 교미 후 기간 암수 수영 서로 떨어져 그리고 더 선충의 몸 길이 이하의 간격으로 분리 될 때까지 (통상 1 ㎜)). </li></ol></li><li> 교미 주파수와 모든 교미 기간과 다른 조합의 각각에 대해 2 시간에있는 모든 교미의 평균 시간을 계산합니다 (즉, 1♀ + 1♂, 3♀ + 1♂ 및 1♀ + 3♂). </li><li> 즉시 끊김없이 수행되는 첫 접촉 후 짝짓기 성공률로 상이한 조합에 대해 먼저 접촉 (P)에 대한 상대 성공율을 계산한다. 접촉 단계에서는 여러 연락처는 실제 교미하기 전에 관찰 될 수 있습니다. <ol><li> 두 개인 사이의 거리는 상기 본체의 길이 이상이면 이상으로 하나의 접촉을 고려한다. 하나의 복제, 기록 P 100 %의 교미의 난에 대한의는 휴식없이 첫 접촉 후 즉시 관찰, 또는 0.00 % 더 교미가 관찰되지 않은 경우 또는 교미하지만 두 개 이상의 접점 후이 있다면. 참고 : 여기에 설명 된 각 조합에 대한 30 복제가 있었다. </li></ol></li></ol>

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	<li>Tokushige, Y., Kiyohara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bursaphelenchus+sp.+in+the+wood+of+dead+pine+trees.">Bursaphelenchus sp. in the wood of dead pine trees.</a> J. Jap. For. Soc. 51, 193-195 (1969).</li><li>Sun, Y. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bursaphelenchus+xylophilus+was+discovered+in+Sun+Yet-sen's+mausoleum+in+Nanjing.">Bursaphelenchus xylophilus was discovered in Sun Yet-sen's mausoleum in Nanjing.</a> J. Jiangsu Fore. Sci. Tech. (in Chinese). 4, 47 (1982).</li><li>Mota, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+report+of+Bursaphelenchus+xylophilus+in+Portugal+and+in+Europe.">First report of Bursaphelenchus xylophilus in Portugal and in Europe.</a> Nematology. 1, 727-734 (1999).</li><li>Robertson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+the+pine+wood+nematode+Bursaphelenchus+xylophlius+Steiner+&amp;+Buhrer,+1934+(Nickle,+1970)+in+Spain.">Incidence of the pine wood nematode Bursaphelenchus xylophlius Steiner &amp; Buhrer, 1934 (Nickle, 1970) in Spain.</a> Nematology. 13, 755-757 (2011).</li><li>Vicente, C., Espada, M., Vieira, P., Mota, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pine+wilt+disease:+a+threat+to+European+forestry.">Pine wilt disease: a threat to European forestry.</a> Euro. J. Plant Path. 133, 89-99 (2012).</li><li>Jones, J. T., Moens, M., Mota, M., Li, H., Kikuchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bursaphelenchus+xylophilus:+opportunities+in+comparative+genomics+and+molecular+host-parasite+interactions.">Bursaphelenchus xylophilus: opportunities in comparative genomics and molecular host-parasite interactions.</a> Mol. Plant. Path. 9, 357-368 (2008).</li><li>Mamiya, Y., Furukawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecundity+and+reproduction+of+Bursaphelenchus+lignicolus.">Fecundity and reproduction of Bursaphelenchus lignicolus.</a> Jap. J. Nemat. 7, 6-9 (1977).</li><li>Mamiya, Y., Kiyohara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Description+of+Bursaphelenchus+lignicolus.+n.+sp.+(Nematoda:+Aphelenchoididae)+from+pine+wood+and+histophathology+of+nematode-infested+trees.">Description of Bursaphelenchus lignicolus. n. sp. (Nematoda: Aphelenchoididae) from pine wood and histophathology of nematode-infested trees.</a> Nematologica. 18, 120-124 (1972).</li><li>Liu, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioural+features+of+Bursaphelenchus+xylophilus+in+the+mating+process.">Behavioural features of Bursaphelenchus xylophilus in the mating process.</a> Nematology. 16, 895-902 (2014).</li><li>Simon, J. M., Sternberg, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+a+mate+finding+cue+in+the+hermaphrodite+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Evidence of a mate finding cue in the hermaphrodite nematode Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99, 1598-1603 (2002).</li><li>Barr, M. M., Garcia, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+mating+behaviour.">Male mating behaviour.</a> The C. elegans Research Community Wormbook. , (2006).</li><li>Shinya, R., Chen, A., Sternberg, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+attraction+and+mating+in+Bursaphelenchus+okinawaensis+and+B.+xylophilus.">Sex attraction and mating in Bursaphelenchus okinawaensis and B. xylophilus.</a> J. Nematol. 47 (3), 176-183 (2015).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

행동 테스트는 화학 생태학, 신경 생물학, 분자 생물학, 유전학의 기본적인 부분입니다. 선충, 특히 C. 엘레은 광범위하게이 분야에서 연구에 사용됩니다. 선충의 짝짓기 행동은 이전에 10-11을 조사하고있다. 그러나, B.의 xylophilus는 자웅 이체와 자웅 동체 C. elegans의 다른이며, 그 결합 과정은 다른 행동 기능 9있다. 최근 Bursaphelenchus의 okinawaensis, ...

The pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus (Steiner and Buhrer) Nickle, is one of the most destructive invasive species, causing the wilting and eventual death of pine trees. This pathogenic nematode is believed to be native to the USA, but it was transported to several countries, including China, Japan, South Korea, and Portugal. Recently, it has also been reported in Spain, killing millions of pine trees at huge economic losses and threatening forest production and ecological stability1-5.
Once a host pine tree is infected by pinewood nematodes, thousands of millions of offspring are propagated rapidly within the trunk. This causes xylem dysfunction, resulting in wilting and eventually in the death of the host tree6. However, there is currently no efficient way to control this disease. Mating behavior might play an important role in the high fecundity of this nematode7. We therefore investigated the mating behavior of B. xylophilus in the laboratory, trying to find an effective way of disturbing its mating and decreasing its fecundity. 
This protocol is intended to introduce the detailed methods of how to obtain the virgin adults of B. xylophilus and how to observe and analyze the mating behavior using a video recorder and a stereomicroscope. This protocol can also be used as a reference for behavioral studies of other nematodes.

<table><tbody><tr><td>&lt;em&gt;B. xylophilus&lt;/em&gt; isolate &lt;em&gt;Nxy61&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td>Extracted from &lt;em&gt;Pinus massoniana&lt;/em&gt; in Ningbo area of China</td></tr><tr><td>Grey mold strain</td><td></td><td></td><td>Obtained from Forestry Academy of China</td></tr><tr><td>Baermann funnels</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>falcon tubes</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>centrifuge</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pipette</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>sterile dd H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td></td><td></td><td>Sterilized by high pressure of steam at 121 &amp;deg;C for 30 min.</td></tr><tr><td>Petri dishes</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PDA medium</td><td>Huankai Bio.</td><td>021050</td><td></td></tr><tr><td>incubator</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminar flow</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>glass capillary</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereoscope</td><td>Leica</td><td>LED5000 RL</td><td></td></tr><tr><td>inverted stereo microscope</td><td>Zeiss</td><td>A1</td><td></td></tr><tr><td>concave slides</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

observation and quantification of mating behavior in the pinewood nematode, bursaphelenchus xylophilus

관찰과 소나무 선충, Bursaphelenchus의 xylophilus의 짝짓기 행동을 정량화하기위한 방법은, 실체 현미경 아래 설립되었다. B. Xylophilus의 결합 효율을 향상시키고 상대 관찰 가능성을 증가시키는, 버진 성인 배양하고, 조사에 사용. 계란은 물에 선충을 유지하고, 여성은 10 분 동안 알을 낳기 수 있도록함으로써 얻을 수 있었다. 2 단째 유생 (J2)는 어둠에서 25 ° C에서 24 시간 동안 난자를 배양하여 동기화하고, 초기 J4 또 다른 52 시간 동안, 잿빛 곰팡이, 보 트리 티스 시네 레아와 J2를 배양함으로써 얻어졌다. 이 시점에서, 가장 J4 선충은 생식기 형태를 사용하여 남성 또는 여성 인 것으로 명확히 구별 될 수있다. 남성과 여성의 J4 수집하고 처녀 성인 선충을받을 24 시간 동안 두 개의 서로 다른 배양 접시에서 분리 배양 하였다. 처녀 남성과 처녀 여성은 와트의 드롭 쌍 하였다오목 슬라이드의 잘 어. 정합 동작은 실체 현미경 비디오 레코더로 촬영했다. 결합 프로세스의 전체 시간은 82.8 ± 3.91 분 (± SE 평균)이고 4 개의 단계로 나눌 수있다 : 검색, 접촉 교미 및 느린. 구간의 평균 분은 각각 21.8 ± 2.0, 28.0 ± 1.9, 25.8 ± 0.7 및 7.2 ± 0.5이었다. 일레븐 서브 행동을 설명했다 :, 순항 접근, 발생, 반원형 누수 방지 공법, 터치, 위치, 부착, 사정을, 정지를 분리하고, 로밍. 한 여성이 3 명의 남성 3 명의 여성과 한 남성과 함께 그룹화 할 때 흥미롭게도, 분명 내 성적 경쟁이 관찰되었다. 이 프로토콜의 B. xylophilus의 결합 거동을 조사에서뿐만 아니라 다른 선충 ethological 연구를위한 기준으로서 작용에서뿐만 아니라, 유용하고 귀중하다.

처녀 성인의 짝짓기 성공률 (R)가 무작위로 선택된 성인에 비해 유의하게 높았다하는 평균 86.67 %이었다 : 13.33 ± 4.65 % (F = 1301.71, DF = 1, P = 0.0001) (그림 2). 이 발견은 B의 xylophilus 무작위로 선택된 성인보다 처녀 성인 짝짓기 행동을 관찰하기 쉽다는 것을 의미한다. 한 남성이 여성 하나와 결합되?...

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Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

A protocol for investigating the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, is presented. Behavioral features of B. xylophilus are described in the mating process.

파인 우드 선충의 관측 및 짝짓기 행동의 정량화,<em&gt; 소나무 재선충</em

A method for observing and quantifying the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, was established under a stereomicroscope. ...

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Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

9.3K 조회수.  Zhejiang Agricultural & Forestry University. A protocol for investigating the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, is presented. Behavioral features of B. xylophilus are described in the mating process.

비디오: Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters (Homarus americanus)

Despite being one of the most productive fisheries in the Northwest Atlantic, much remains unknown about the natural reproductive dynamics of American lobsters. Recent work in exploited crustacean populations (crabs and lobsters) suggests that there are circumstances where mature females are unable to achieve their full reproductive potential due to sperm limitation. To examine this possibility in different regions of the American lobster fishery, a reliable and noninvasive method was developed for sampling large numbers of female lobsters at sea. This method involves inserting a blunt-tipped needle into the female&#39;s seminal receptacle to determine the presence or absence of a sperm plug and to withdraw a sample that can be examined for the presence of sperm. A series of control studies were conducted at the dock and in the laboratory to test the reliability of this technique. These efforts entailed sampling 294 female lobsters to confirm that the presence of a sperm plug was a reliable indicator of sperm within the receptacle and thus, mating. This paper details the methodology and the results obtained from a subset of the total females sampled. Of the 230 female lobsters sampled from George&#39;s Bank and Cape Ann, MA (size range = 71-145 mm in carapace length), 90.3% were positive for sperm. Potential explanations for the absence of sperm in some females include: immaturity (lack of physiological maturity), breakdown of the sperm plug after being used to fertilize a clutch of eggs, and lack of mating activity. The surveys indicate that this technique for examining the mating success of female lobsters is a reliable proxy that can be used in the field to document reproductive activity in natural populations.

A Noninvasive Method For In situ Determination of Mating Success in Female American Lobsters Homarus americanus

Fishery-induced changes to exploited crustacean fisheries, such as the American lobster fishery, could potentially influence their reproductive dynamics, leading to a reduction in mating success. This study&#39;s goal was to develop a noninvasive method for ascertaining the mating success of female lobsters that may be physiologically or functionally mature.

에 대한 비 침습적 방법<em&gt; 현장에서</em&gt; 여성 미국의 바닷가에 연결 성공 (의 결정<em&gt; Homarus의 americanus</em&gt;)

Despite being one of the most productive fisheries in the Northwest Atlantic, much remains unknown about the natural reproductive dynamics of American ...

연구

환경과학

Field Experiments of Pollination Ecology: The Case of Lycoris sanguinea var. sanguinea

Plant-pollinator interactions have been studied for approximately one hundred years. During that time, many field methods have been developed to clarify the pollination effectiveness of each pollinator for visited flowers. Pollinator observations have been one of the most common methods to identify pollinators, and bagging and cage experiments have been conducted to show the effectiveness of specific pollinators. In a previous study of Lycoris sanguinea var. sanguinea, its effective pollinators, the visitation frequencies of each floral visitor, and its reproductive strategies were not identified. This study reports the observation that small bees visited flowers that were partially opened (breaking buds). To the best of our knowledge, this phenomenon has not been reported previously. Further, this study investigates the hypothesis that small bees can pollinate at that flowering stage. This study demonstrates the basic methods of field experiments in pollination ecology using L. sanguinea var. sanguinea. Pollinator observations and digital video showed the visitation frequencies of each floral visitor. Bagging and cage experiments revealed that these flowers could be pollinated fully and that breaking-bud pollination could be important for the pollination of this plant species. The advantages and disadvantages of each method are discussed, and recent developments, including laboratory experiments, are described.

Field Experiments of Pollination Ecology: The Case of Lycoris sanguinea var. sanguinea

To reveal the pollinator effectiveness of a given plant species, multiple methods of field experiments have been developed. This study demonstrates the basic methods of field experiments for pollination ecology using the case study of Lycoris sanguinea var. sanguinea and the novel pollination mechanism, breaking-bud pollination.

수분 (受粉) 생태학의 필드 실험 :의 케이스<em&gt; 상사화 sanguinea</em&gt; VAR.<em&gt; sanguinea</em

Plant-pollinator interactions have been studied for approximately one hundred years. During that time, many field methods have been developed to clarify ...

Induction and Evaluation of Inbreeding Crosses Using the Ant, Vollenhovia Emeryi

The genetic and molecular components of the sex-determination cascade have been extensively studied in the honeybee, Apis mellifera, a hymenopteran model organism. However, little is known about the sex-determination mechanisms found in other non-model hymenopteran taxa, such as ants. Because of the complex nature of the life cycles that have evolved in hymenopteran species, it is difficult to maintain and conduct experimental crosses between these organisms in the laboratory. Here, we describe the methods for conducting inbreeding crosses and for evaluating the success of those crosses in ant Vollenhovia emeryi. Inducing inbreeding in the laboratory using V. emeryi, is relatively simple because of the unique biology of the species. Specifically, this species produces androgenetic males, and female reproductives exhibit wing polymorphism, which simplifies identification of the phenotypes in genetic crosses. In addition, evaluating the success of inbreeding is straightforward as males can be produced continuously by inbreeding crosses, while normal males only appear during a well-defined reproductive season in the field. Our protocol allow for using V. emeryi as a model to investigate the genetic and molecular basis of the sex determination system in ant species.

Induction and Evaluation of Inbreeding Crosses Using the Ant, Vollenhovia Emeryi

In this protocol, methods for conducting inbreeding crosses, and for evaluating the success of those crosses, are described for the ant Vollenhovia emeryi. These protocols are important for experiments aimed at understanding the genetic basis of sex determination systems in Hymenoptera.

유도 및 개미, Vollenhovia Emeryi 를 사용 하 여 근 친 십자가의 평가

The genetic and molecular components of the sex-determination cascade have been extensively studied in the honeybee, Apis mellifera, a hymenopteran model ...

유전학

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors remains poorly understood. In Drosophila melanogaster, environmental cues, such as food availability, affect mating activity offering a tractable system to investigate the mechanisms modulating sexual behavior. In D. melanogaster, environmental cues are often sensed via the chemosensory gustatory and olfactory systems. Here, we present a method to test the effect of environmental chemical cues on mating behavior. The assay consists of a small mating arena containing food medium and a mating couple. The mating frequency for each couple is continuously monitored for 24 h. Here we present the applicability of this assay to test environmental compounds from an external source through a pressurized air system as well as manipulation of the environmental components directly in the mating arena. The use of a pressurized air system is especially useful to test the effect of very volatile compounds, while manipulating components directly in the mating arena can be of value to ascertain a compound's presence. This assay can be adapted to answer questions about the influence of genetic and environmental cues on mating behavior and fecundity as well as other male and female reproductive behaviors.

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

We demonstrate an assay to analyze the environmental and genetic cues that influence mating behavior in the fruit fly Drosophila melanogaster.

환경에서 신호의 결합 효과에 미치는 영향을 시험하는 방법<em&gt; Drosophila melanogaster</em

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors ...

행동분석학

Individual Culturing of Tigriopus Copepods and Quantitative Analysis of Their Mate-guarding Behavior

Copepods of the genus Tigriopus, which are common zooplankton in rocky tide pools, show precopulatory mate-guarding behavior where a male clasps a potential mate to form a pair. While this phenomenon has attracted interest of researchers, methods for its analysis have not been well described. Here we describe procedures for: 1) individual culturing and staging of Tigriopus juveniles and adults, and 2) video-based analysis of their mate-guarding behavior. The culturing method enables experimental control of paring experience of animals as well as the ability to track their development before behavioral tests. The analysis method allows quantitative evaluation of several aspects of the mate-guarding behavior, including capturing attempts by males and swimming trajectory of mate-guarding pairs. Although these methods were originally established for ethological studies on Tigriopus, with proper modifications they can also be applied to studies of other zooplankton in different research fields, such as physiology, toxicology, and ecological genetics.

Individual Culturing of Tigriopus Copepods and Quantitative Analysis of Their Mate-guarding Behavior

Mate-guarding behavior plays an important role in reproduction of intertidal copepods of the genus Tigriopus. However, methods for studying this behavior have not been well described. Here we describe methods for: 1) individual culture of virgin Tigriopus animals, and 2) quantitative analysis of their mate-guarding behavior.

Tigriopus Copepods 및 그들의 동료를 지키는 행동의 정량 분석의 개별 경작

Copepods of the genus Tigriopus, which are common zooplankton in rocky tide pools, show precopulatory mate-guarding behavior where a male clasps a ...

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

분석의 방법 Drosophila 행동

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

신경과학

난소 생식 분석을 통한 철새 곤충 식별을 위한 해부

Dissection and Grading of Ovarian Development in Wild-Type Female Insects

Migratory insect pests pose serious challenges to food production and security all over the world. The migratory pests can be monitored and captured using searchlight traps. One of the most important techniques for migratory pest forecasting is to identify the migratory species. However, in most cases, it is difficult to get the information just by appearance. Therefore, using knowledge acquired by systematic analysis of the female reproductive system can help to understand the combined anatomic morphology of the ovarian mating sac and ovary developmental grading of wild-type migratory insects captured with searchlight traps. To demonstrate the applicability of this method, ovarian development status and egg grain development stages were directly assessed in Helicoverpa armigera, Mythimna separata, Spodoptera litura, and Spodoptera exigua for the ovarian anatomy, and the ovarian mating sacs were studied in Agrotis ipsilon, Spaelotis valida, Helicoverpa armigera, Athetis lepigone, Mythimna separata, Spodoptera litura, Mamestra brassicae, and Spodoptera exigua, to explore their relationships. This work shows the specific dissection method to predict wild-type migratory insects, comparing the unique reproductive system of different migratory insects. Then, both tissues, namely, the ovary and mating sacs, were further investigated. This method helps to predict the dynamics and the structural development of reproductive systems in wild-type female migratory insects.

저자 스포트라이트: 실험적 과제를 극복하기 위한 철새 곤충의 난소 해부학 분석 

The protocol demonstrates a simple and easy dissection method, suitable for wild-type migratory female insects captured with searchlight traps. This technique can significantly clarify the same species by comparing both reproductive tissues, namely the mating sac and ovarian development of wild-type female insects.

야생형 암컷 곤충의 난소 발달 해부 및 등급

Migratory insect pests pose serious challenges to food production and security all over the world. The migratory pests can be monitored and captured using ...

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy and cheap methods to distinguish between individuals in a trial. A standard technique for this is CO2 anaesthesia and then labelling or wing clipping each fly. However, this is invasive and has been shown to affect behavior. Other techniques have used coloration to identify flies. This article presents a simple and non-invasive method for labelling Drosophila that allows them to be individually identified within experiments, using food coloring. This method is used in trials where two males compete to mate with a female. Dyeing allowed quick and easy identification. There was, however, some difference in the strength of the coloration across the three species tested. Data is presented showing the dye has a lower impact on mating behavior than CO2 in Drosophila melanogaster. The impact of CO2 anaesthesia is shown to depend on the species of Drosophila, with D. pseudoobscura and D. subobscura showing no impact, whereas D. melanogaster males had reduced mating success. The dye method presented is applicable to a wide range of experimental designs.

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

행동 분석 실험에 대한 염색 곤충 : 마취의 짝짓기 행동<em&gt; 초파리</em

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy ...

파인 우드 선충의 관측 및 짝짓기 행동의 정량화,

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환경에서 신호의 결합 효과에 미치는 영향을 시험하는 방법

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분석의 방법 Drosophila 행동

야생형 암컷 곤충의 난소 발달 해부 및 등급

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