저자는 도움이 토론 및 기술 지원에 대한 산부인과의 부서의 구성원과 암 생물학 감사합니다. 이 연구는 과학의 진흥 (JSPS)에 대한 일본 사회에 의해 지원되었다 그랜트 -에 - 보조 과학 연구 (15K15604, H. Kajiyama에).

치료 프로토콜은 나고야 대학에 의해 채택 된 동물 실험에 대한 가이드 라인을 따른다. 세포 현탁액 1. 준비 <ol><li> 인간의 난소 투명 세포 암 세포주. <ol><li> (100 단위 / ㎖, 스트렙토 마이신 0.1 ㎎ / ㎖ 페니실린) 10 % 소 태아 혈청 (FBS) 및 페니실린 / 스트렙토 마이신을 가진 RPMI-1640 배지에서 ES-2 셀 (12)을 유지한다. 5 % CO 2 가습 인큐베이터에서 37 ° C에서 배양 세포. </li><li> 0.05 %의 트립신 / 0.02 %의 EDTA 용액 (트립신 / EDTA)를 대수 증식기의 세포를 수집한다. <ol><li> (- 25cm 2 당 4 ml의 2 + 칼슘 / 마그네슘없이 PBS 3) 먼저, 다음 PBS로 한 번 세포를 씻어, 세포 배양 용기에서 이전 용지를 제거합니다. </li><li> 다음으로, 25cm 트립신 / EDTA 2 당 1 ml에 추가 할 수 있습니다. 트립신 / EDTA로 세포 단층을 포함하는 세포 배양 용기를 돌린다. 제거하고 트립신 / EDTA를 폐기 한 후, 세포를 반환3 인큐베이터에 배양 용기 - 세포 5 분 또는 때까지이 분리된다. </li><li> 현미경으로 세포를 검사하는 세포는 세포 배양 용기 및 부동의 표면으로부터 분리되도록한다. </li><li> 트립신 (25cm이 당 5 ㎖)를 불 활성화하고, 세포를 다시 일시 성장 배지를 함유하는 신선한 혈청에 추가. 15 ML 원뿔 관에 다시 정지 세포를 전송합니다. </li><li> 5 분 동안 300 XG에 원심 분리기. 4 °의 C 또는 실온에서 원심 분리를 수행합니다. 조심스럽게 상층 액을 제거하고 (25cm 2 당 5 ㎖) 성장 매체와 세포를 일시 중지 다시. </li></ol></li><li> (트리 판 블루 배제에 의해 예) 세포를 계산 한 다음 2 × 108 세포 / ㎖의 밀도로 성장 배지에 재현 탁. 얼음에 일시 중단 된 세포를 넣습니다. </li></ol></li><li> 해동 냉동 세포 외 기질 (ECM)의 빙욕에서 하이드로 겔 분취 기반. </li><li> 1 (최종 셀 (C) : 1의 비율로 ECM 계 하이드로 겔 분취 량의 세포 현탁액을 추가oncentration : 1 × 10 5 세포 / 중간 ECM 기반의 하이드로 겔의 μL)하고 철저하게 섞는다. 사용할 때까지 얼음 용기에 제조 된 세포 현탁액을 놓습니다. </li></ol> 세포 현탁액 2. 동소 이식 접종 참고 : 전용 제품군을 필요로하지 않는다 수술. 수술 별도 최소 활성을 갖는 실내 영역에서 실험실 벤치 탑상에서 수행 될 수있다. 층류 후드도 사용될 수있다. 무균 수술 도구가 사용되어야하며 가위는 피부 절개를 만들기 위해 사용할 수 없습니다. <ol><li> 이 소성을 접종 모델에 대한 연령 8 주에서 여성 누드 마우스 (BALB / C 뉴 / 뉴)를 사용합니다. </li><li> (- 4 %, 2) 우선, 흡입 이소 플루 란을 이용하여 마우스를 마취. 회사 발가락 핀치에 따라 철수의 부족을 확인하여 마취 깊이를 확인합니다. 마우스를 마취 한 후, 필요에 따라 건조 방지하기 위해 눈에 개성 멸균 안과 연고를 적용합니다. </li><li> 조작하기에 마취 마우스를 놓습니다아래 단계의 배 쪽을 보내고. 외과 영역을 알코올과 요오드 계 또는 클로르헥시딘 기반 스크럽 모두 여러 번 소독. </li><li> 수직으로 오른쪽 늑골 아치와 대퇴골과 척추 근처 ​​~ 2 cm의 절개를합니다. 절개 부위 주변의 무균 수술 드레이프를 사용합니다. 개방을 유지하기 위해 클램프와 절개 피부 표면을 수정합니다. 주 : 견인기 대신 클램프 사용될 수있다. </li><li> 다음으로, 복강을 열고 첫 번째 절개에서 정수리 복막에서 두 번째 절개 (약 1cm)를 확인합니다. 절개 복부 표면을 클램프. 복강에서 난소를 제거하는 클램프 동측 난소 및 나팔관 주위의 지방 조직을 클립. 조심스럽게 거즈에 난소 및 나팔관을 배치합니다. 그 후, 해부 현미경으로 마우스의 배 쪽을 아래로 놓습니다. </li><li> 바로 주입하기 전에 (1/2 CC, 29 G) 인슐린 주사기의 세포 현탁액을 놓습니다. 조심스럽게 준비된 세포 현탁액을 (주사 1- 난소에 2 μL). 몇 초를 들어, ECM 계 하이드로 겔의 겔화를 위해 난소 내 바늘을 보유한다. 겔화 후, 주입 된 종양 세포는 난소 안에 남아있다. </li><li> 조심스럽게 몸에 난소를 돌려줍니다. 멸균 의료 실크와 두 번째 절개를 봉합하고 상처 클립으로 피부를 밀봉. </li><li> 수술 후 생쥐의 초기 24 시간의 기간 동안 진통제 (예를 들어, 멜 록시 캄, 근육 내 (IM) 또는 피하 (SC), 0.2 ㎎ / ㎏)을 투여한다. </li></ol> 3. 후 수술 치료 <ol><li> 이 흉골 드러 누움을 유지하기 위해 충분한 의식을 회복 할 때까지 마우스를 따뜻하게 유지하기 위해 뜨거운 팩을 깨끗한 종이에 별도의 장에 각 마우스를 놓습니다. 그런 다음, 양육 및 모니터링을 위해 자신의 새장에 동물을 반환합니다. 수술 적 치료 다음 칠일 - 3 매일 쥐를 모니터링합니다. </li><li> 수술 후 마우스의 모니터링 <ol><li> 고통의 흔적의 경우, analge 관리SICS 매일 (예를 들어, 멜 록시 캄, 메신저 또는 SC / kg, 0.2 mg)을 얻었다. </li><li> 마우스 감염 (예를 들어, 발적, 부종, 방전)의 흔적이있는 경우, 항 감염 시약 (예, 페니실린, 메신저, 100,000 IU / kg)을 매일 주사를 관리 할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 수술 치료 후 14 일 - 피부 폐쇄 재료 (10)를 제거합니다. </li></ol> 종양과 전이 4. 분석 주 : 종양이 주입 된 난소이 형성됩니다 - 접종 후 삼주. <ol><li> 이산화탄소에 의한 쥐를 희생하고 추가 분석을 14,16-20에 대한 샘플 (예를 들어, 종양, 전이, 기관) 13-15를 수집합니다. 주 : 생체 내 이미징 시스템이 제공되는 경우, 생물 발광 (예 : 루시 페라 제) 또는 형광 단백질 (예 : GFP)를 생성하는 효소 담 셀이 프로토콜에서 사용될 수있다. 이 수정 된 프로토콜에 대한 유용한 정보를 제공 할 것입니다일차 종양 암 세포의 확산의 역학. </li></ol>

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	<li>Jemal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics.">Global cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 61 (2), 69-90 (2011).</li><li>Kajiyama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+clinical+outcome+of+patients+with+recurrent+epithelial+ovarian+carcinoma:+is+it+the+same+for+each+histological+type.">Long-term clinical outcome of patients with recurrent epithelial ovarian carcinoma: is it the same for each histological type.</a> Int J Gynecol Cancer. 22 (3), 394-399 (2012).</li><li>Kikkawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+treatment+of+epithelial+ovarian+cancer.">Advances in treatment of epithelial ovarian cancer.</a> Nagoya J Med Sci. 68 (1-2), 19-26 (2006).</li><li>Yoshikawa, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinicopathologic+features+of+epithelial+ovarian+carcinoma+in+younger+vs.+older+patients:+analysis+in+Japanese+women.">Clinicopathologic features of epithelial ovarian carcinoma in younger vs. older patients: analysis in Japanese women.</a> J Gynecol Oncol. 25 (2), 118-123 (2014).</li><li>Kajiyama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+SDF-1alpha/CXCR4+axis+in+the+enhanced+peritoneal+metastasis+of+epithelial+ovarian+carcinoma.">Involvement of SDF-1alpha/CXCR4 axis in the enhanced peritoneal metastasis of epithelial ovarian carcinoma.</a> Int J Cancer. 122 (1), 91-99 (2008).</li><li>Terauchi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Possible+involvement+of+TWIST+in+enhanced+peritoneal+metastasis+of+epithelial+ovarian+carcinoma.">Possible involvement of TWIST in enhanced peritoneal metastasis of epithelial ovarian carcinoma.</a> Clin Exp Metastasis. 24 (5), 329-339 (2007).</li><li>Bronstein, L., Zechner, C., Koeppl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bayesian+inference+of+reaction+kinetics+from+single-cell+recordings+across+a+heterogeneous+cell+population.">Bayesian inference of reaction kinetics from single-cell recordings across a heterogeneous cell population.</a> Methods. 85, 22-35 (2015).</li><li>Guo, W., Zhang, S., Liu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+novel+orthotopic+model+of+breast+cancer+metastasis+to+the+lung.">Establishment of a novel orthotopic model of breast cancer metastasis to the lung.</a> Oncol Rep. 33 (6), 2992-2998 (2015).</li><li>Lewis-Tuffin, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Src+family+kinases+differentially+influence+glioma+growth+and+motility.">Src family kinases differentially influence glioma growth and motility.</a> Mol Oncol. , (2015).</li><li>Saar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+tumorgrafts+in+nude+mice:+A+new+method+to+study+human+prostate+cancer.">Orthotopic tumorgrafts in nude mice: A new method to study human prostate cancer.</a> Prostate. 75 (14), 1526-1537 (2015).</li><li>Zou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-29c+suppresses+pancreatic+cancer+liver+metastasis+in+an+orthotopic+implantation+model+in+nude+mice+and+affects+survival+in+pancreatic+cancer+patients.">miR-29c suppresses pancreatic cancer liver metastasis in an orthotopic implantation model in nude mice and affects survival in pancreatic cancer patients.</a> Carcinogenesis. 36 (6), 676-684 (2015).</li><li>Lau, D. H., Lewis, A. D., Ehsan, M. N., Sikic, B. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multifactorial+mechanisms+associated+with+broad+cross-resistance+of+ovarian+carcinoma+cells+selected+by+cyanomorpholino+doxorubicin.">Multifactorial mechanisms associated with broad cross-resistance of ovarian carcinoma cells selected by cyanomorpholino doxorubicin.</a> Cancer Res. 51 (19), 5181-5187 (1991).</li><li>Bao, L., Matsumura, Y., Baban, D., Sun, Y., Tarin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+inoculation+site+and+Matrigel+on+growth+and+metastasis+of+human+breast+cancer+cells.">Effects of inoculation site and Matrigel on growth and metastasis of human breast cancer cells.</a> Br J Cancer. 70 (2), 228-232 (1994).</li><li>Huang, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiological+investigation+on+major+depressive+disorder+in+the+most+heavily+damaged+areas+from+Wenchuan+earthquake+in+2008.">Epidemiological investigation on major depressive disorder in the most heavily damaged areas from Wenchuan earthquake in 2008.</a> Zhonghua Liu Xing Bing Xue Za Zhi. 31 (2), 167-170 (2010).</li><li>Ma, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mortality+of+neonatal+respiratory+failure+related+to+socioeconomic+factors+in+Hebei+province+of+China.">Mortality of neonatal respiratory failure related to socioeconomic factors in Hebei province of China.</a> Neonatology. 100 (1), 14-22 (2011).</li><li>Lin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+levels+of+FGF-21+are+increased+in+coronary+heart+disease+patients+and+are+independently+associated+with+adverse+lipid+profile.">Serum levels of FGF-21 are increased in coronary heart disease patients and are independently associated with adverse lipid profile.</a> PLoS One. 5 (12), e15534 (2010).</li><li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lumbar+interspinous+non-fusion+techniques:+comparison+between+Coflex+and+Wallis.">Lumbar interspinous non-fusion techniques: comparison between Coflex and Wallis.</a> Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 30 (11), 2455-2458 (2010).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wave+intensity+analysis+of+carotid+artery:+a+noninvasive+technique+for+assessing+hemodynamic+changes+of+hyperthyroid+patients.">Wave intensity analysis of carotid artery: a noninvasive technique for assessing hemodynamic changes of hyperthyroid patients.</a> J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci. 30 (5), 672-677 (2010).</li><li>Song, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+transcriptional+profiling+and+preliminary+study+on+heterosis+mechanism+of+super-hybrid+rice.">Comparative transcriptional profiling and preliminary study on heterosis mechanism of super-hybrid rice.</a> Mol Plant. 3 (6), 1012-1025 (2010).</li><li>Wan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+analysis+of+variation+of+Han+female+adolescent+bone+development+in+Henan+and+Zhejiang+province.">The analysis of variation of Han female adolescent bone development in Henan and Zhejiang province.</a> Fa Yi Xue Za Zhi. 26 (2), 97-99 (2010).</li><li>Wang, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excitation-emission+fluorescence+characterization+study+of+the+three+phenolic+compounds.">Excitation-emission fluorescence characterization study of the three phenolic compounds.</a> Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi. 30 (5), 1271-1274 (2010).</li></ol>

저자는 공개 아무것도 없어.

동물 모델은 암 세포에 대해 종양 발달 진행, 전이, 약물 효능의 기전을 분석하기 위해 필수적이다. 인간 난소 암 세포를 담지 마우스는 동물 모델로서 사용되어왔다. 여기서, 우리는 동소 사이트 난소 종양 세포의 투여에 덜 침습적 인 과정을 설명한다. 지느러미 측면에서 후 복막 접근 방식을 통해 난소에이 절차 접종을 사용하면 일반적으로 사용되는 다른 기술에 비해 상당한 이점을 제공한다. ...

상피 난소 암 (EOC)는 부인과 악성 종양 1 중 암 관련 사망의 가장 높은 비율을 차지. EOC는 주로 인해 늦게 증상으로, 예후와 연관되어, 종종 여러 복강 내 disseminations 및 원격 전이 2-4와 연결되어 있습니다. 복막 전파는 다단계 프로세스이다. 우선, 종양 세포는 일차 병소에서 분리 및 복강 내로 이동한다. 종양 세포가 복강 mesothelium에 부착되면, 그들은 mesothelium 5,6- 통해 조직을 침범하기 시작한다. 더 나은 종양 생물학 (예를 들어, 암의 진행 및 치료 반응)을 이해하기 위해서는, 마우스 모델은 풍부한 정보를 제공합니다. 인간 암세포와 이종 널리 인간 암세포를 복강 내, 정맥 내 및 동소 피하 접종 된 마우스 모델을 사용한다. 동소의 g를 가진 동물 모델뗏목 종양보다 효율적이고 정확하게 heterotopically 그래프트 종양 동물 모델에 비해 인간 종양 환경을 반영하는 결과를 생성 할 수있다. 따라서, 많은 인간의 종양, 동 소성 이식 모델은 7-11 설립되었습니다. 여기, 우리는 복부 접종에 비해 침입이 제한 지느러미 측면에서 복막 접근을 통해 인간의 EOC 세포의 동 소성 접종에 대해 설명합니다. 이 기술은 EOC에 유용한 정보, 복강 보급 특히기구의 다양한 기능을 제공 할 수있다.

<table><tbody><tr><td>Matrigel matrix&amp;nbsp;</td><td>BD</td><td>354234</td><td>ECM-based hydrogel</td></tr><tr><td>Insulin syringe</td><td>TERUMO</td><td>SS-05M2913</td><td>1/2 cc, 29 G x 1/2&quot;</td></tr><tr><td>Suturing needle with suture</td><td></td><td></td><td>11 mm, 3/8, Nylon6-0</td></tr><tr><td>Reflex 7 mm Wound Clip Applier</td><td>CellPoint Scientific</td><td>204-1000</td><td></td></tr><tr><td>&amp;nbsp;Reflex 7 mm wound clips</td><td>CellPoint Scientific</td><td>203-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

murine experimental model of original tumor development and peritoneal metastasis via orthotopic inoculation with ovarian carcinoma cells

이 복막 보급을 보여주기 때문에 상피 난소 암 (EOC)는 불량한 예후와 연관되어있다. 예후를 개선하기 위해, 복막 보급을 제어하는 ​​것이 중요하다. 종양 세포는 일차 병소에서 분리 및 부착 방법 mesothelium 그러나, 여전히 불분명하다. 적절한 동물 모델의 확립은 생체 내에서 복막 보급의 메커니즘을 이해하기 위해 필요하다. 현재의 연구는 복막과 원격 장기 포함한 전이 현상에 쥐 난소 표면에 EOC 세포의 국소 주입의 과정을 소개한다. 나이 8 주째 암컷 누드 마우스 (BALB / C 뉴 / 민)를 사용 하였다. 보기의 현미경 분야에서 EOC 세포 지느러미 측면에서 후 복막 접근 방식을 통해 쥐의 난소에 주입했다 (중간 세포 외 기질 (ECM)의 1 × 10 5 세포 / μL은 하이드로 겔 / 일방적 인 난소 / 마우스 기반). 이 제안 된 방법은 르입니다마우스에 대한 SS 침략 절차 및 난소의 손상을 최소화 할 수 있습니다. 여기서는 EOC 원래 전이성 종양 형성의 개발 방법 론적 단계를 설명한다.

<html> 여섯 누드 마우스는이 프로토콜에 기재된 바와 같이 난소가 인간 투명 세포 암종 세포주 ES-2로 접종했다. 도 1a에 도시 된 바와 같이, 1 주 후 6 마우스의 5 ES-2 세포에 접종 난소 종양을 가졌으나 (대조군으로서 사용됨) 접종하지 않고 반대측 난소에는 종양이 없었다. 또한, 5 쥐의 2 복수 여러 복막 disseminations을 보였다. 세포는 간 (그림 1B)로 전?...

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Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

난소 암의 복막 보급의 다단계 과정을 명확히하기 위해, 본 연구는 이러한 종양 세포와 동 소성 접종을 통해 원래의 종양 개발 및 복막 전이의 쥐 실험 모델을 제시한다.

원래 종양 개발의 쥐 실험 모델 및 복막 전이<em&gt;를 통해</em난소 암 세포에&gt; 동소 이식 접종

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

murine-experimental-model-original-tumor-development-peritoneal

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

10.4K 조회수.  Bell Research Center for Reproductive Health and Cancer.  난소 암의 복막 보급의 다단계 과정을 명확히하기 위해, 본 연구는 이러한 종양 세포와 동 소성 접종을 통해 원래의 종양 개발 및 복막 전이의 쥐 실험 모델을 제시한다. 

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An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all gynecologic malignancies among US women 1,2,3. Serous tumors are the most widespread forms of ovarian cancer and 4,5 the Tg-MISIIR-TAg transgenic represents the only mouse model that spontaneously develops this type of tumors. Tg-MISIIR-TAg mice express SV40 transforming region under control of the Mullerian Inhibitory Substance type II Receptor (MISIIR) gene promoter 6. Additional transgenic lines have been identified that express the SV40 TAg transgene, but do not develop ovarian tumors. Non-tumor prone mice exhibit typical lifespan for C57Bl/6 mice and are fertile. These mice can be used as syngeneic allograft recipients for tumor cells isolated from Tg-MISIIR-TAg-DR26 mice.
Objective: Although tumor imaging is possible 7, early detection of deep tumors is challenging in small living animals. To enable preclinical studies in an immunologically intact animal model for serous ovarian cancer, we describe a syngeneic mouse model for this type of ovarian cancer that permits in vivo imaging, studies of the tumor microenvironment and tumor immune responses.
Methods: We first derived a TAg+ mouse cancer cell line (MOV1) from a spontaneous ovarian tumor harvested in a 26 week-old DR26 Tg-MISIIR-TAg female. Then, we stably transduced MOV1 cells with TurboFP635 Lentivirus mammalian vector that encodes Katushka, a far-red mutant of the red fluorescent protein from sea anemone Entacmaea quadricolor with excitation/emission maxima at 588/635 nm 8,9,10. We orthotopically implanted MOV1Kat in the ovary 11,12,13,14 of non-tumor prone Tg-MISIIR-TAg female mice. Tumor progression was followed by in vivo optical imaging and tumor microenvironment was analyzed by immunohistochemistry.
Results: Orthotopically implanted MOV1Kat cells developed serous ovarian tumors. MOV1Kat tumors could be visualized by in vivo imaging up to three weeks after implantation (fig. 1) and were infiltrated with leukocytes, as observed in human ovarian cancers 15 (fig. 2).
Conclusions: We describe an orthotopic model of ovarian cancer suitable for in vivo imaging of early tumors due to the high pH-stability and photostability of Katushka in deep tissues. We propose the use of this novel syngeneic model of serous ovarian cancer for in vivo imaging studies and monitoring of tumor immune responses and immunotherapies.

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

To study in vivo tumor growth and tumor microenvironment, we used a syngeneic and orthotopic mouse model of ovarian cancer in immunocompetent animals. We transduced a mouse tumor cell line (MOV1) with Katushka fluorescent protein (MOV1KAT) and here we show its orthotopic implantation in ovary and in vivo imaging.

에 대한 면역 적격 마우스에 묽은 난소암의 Orthotopic 모델 생체내에</em종양 면역 응답> 종양 이미징 및 모니터링

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

연구

면역학 및 감염병학

An Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer using Human Stroma to Promote Metastasis

Ovarian cancer is characterized by early, diffuse metastasis with 70% of women having metastatic disease at the time of diagnosis. While elegant transgenic mouse models of ovarian cancer exist, these mice are expensive and take a long time to develop tumors. Intraperitoneal injection xenograft models lack human stroma and do not accurately model ovarian cancer metastasis. Even patient derived xenografts (PDX) do not fully recapitulate the human stromal microenvironment as serial PDX passages demonstrate significant loss of human stroma. The ability to easily model human ovarian cancer within a physiologically relevant stromal microenvironment is an unmet need. Here, the protocol presents an orthotopic ovarian cancer mouse model using human ovarian cancer cells combined with patient-derived carcinoma-associated mesenchymal stem cells (CA-MSCs). CA-MSCs are stromal progenitor cells, which drive the formation of the stromal microenvironment and support ovarian cancer growth and metastasis. This model develops early and diffuses metastasis mimicking clinical presentation. In this model, luciferase expressing ovarian cancer cells are mixed in a 1:1 ratio with CA-MSCs and injected into the ovarian bursa of NSG mice. Tumor growth and metastasis are followed serially over time using bioluminescence imaging. The resulting tumors grow aggressively and form abdominal metastases by 14 days post injection. Mice experienced significant decreases in body weight as a marker of systemic illness and increased disease burden. By day 30 post injection, mice met endpoint criteria of &gt;10% body weight loss and necropsy confirmed intra-abdominal metastasis in 100% of mice and 60%-80% lung and parenchymal liver metastasis. Collectively, orthotopic engraftment of ovarian cancer cells and stroma cells generates tumors that closely mimic the early and diffuse metastatic behavior of human ovarian cancer. Furthermore, this model provides a tool to study the role of ovarian cancer cell: stroma cell interactions in metastatic progression.

Orthotopic engraftment of ovarian cancer cells mixed with human stromal cells provides a mouse model that exhibits rapid, diffuse metastatic behavior that is characteristic of human ovarian cancer. This model also allows for the study of tumor cell and stromal cell interactions, as well as their role in tumor progression and metastasis.

Ovarian cancer is characterized by early, diffuse metastasis with 70% of women having metastatic disease at the time of diagnosis. While elegant ...

암 연구학

Intratibial Osteosarcoma Cell Injection to Generate Orthotopic Osteosarcoma and Lung Metastasis Mouse Models

Osteosarcoma is the most common primary bone cancer in children and adolescents, with lungs as the most common metastatic site. The five-year survival rate of osteosarcoma patients with pulmonary metastasis is less than 30%.Therefore, the utilization of mouse models mimicking the osteosarcoma development in humans is of great significance for understanding the fundamental mechanism of osteosarcoma carcinogenesis and pulmonary metastasis to develop novel therapeutics. Here, detailed procedures are reported to generate the primary osteosarcoma and pulmonary metastasis mouse models via&#160;intratibia injection of osteosarcoma cells. Combined with the bioluminescence or X-ray live imaging system, these living mouse models are utilized to monitor and quantify osteosarcoma growth and metastasis. To establish this model, a basement membrane matrix containing osteosarcoma cells was loaded in a micro-volume syringe and injected into one tibia of each athymic mouse after being anesthetized. The mice were sacrificed when the primary osteosarcoma reached the size limitation in the IACUC-approved protocol. The legs bearing osteosarcoma and the lungs with metastasis lesions were separated. These models are characterized by a short incubation period, rapid growth, severe lesions, and sensitivity in monitoring the development of primary and pulmonary metastatic lesions. Therefore, these are ideal models for exploring the functions and mechanisms of specific factors in osteosarcoma carcinogenesis and pulmonary metastasis, the tumor microenvironment, and evaluating the therapeutic efficacy in vivo.

The present protocol describes intratibia osteosarcoma cell injection to generate mouse models bearing orthotopic osteosarcoma and pulmonary metastasis lesions.

경골 내 골육종 세포 주사 동위원소 골육종 및 폐 전이 마우스 모델 생성

Osteosarcoma is the most common primary bone cancer in children and adolescents, with lungs as the most common metastatic site. The five-year survival ...

Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of care consisting of surgical debulking and combination chemotherapy consisting of platinum and taxane compounds, almost 90% of patients recur within a few years. In these patients the development of chemoresistant disease limits the efficacy of currently available chemotherapy agents and therefore contributes to the high mortality. To discover novel therapy options that can target recurrent disease, appropriate animal models that closely mimic the clinical profile of patients with recurrent ovarian cancer are required. The challenge in monitoring intra-peritoneal (i.p.) disease limits the use of i.p. models and thus most xenografts are established subcutaneously. We have developed a sensitive optical imaging platform that allows the detection and anatomical location of i.p. tumor mass. The platform includes the use of optical reporters that extend from the visible light range to near infrared, which in combination with 2-dimensional X-ray co-registration can provide anatomical location of molecular signals. Detection is significantly improved by the use of a rotation system that drives the animal to multiple angular positions for 360 degree imaging, allowing the identification of tumors that are not visible in single orientation. This platform provides a unique model to non-invasively monitor tumor growth and evaluate the efficacy of new therapies for the prevention or treatment of recurrent ovarian cancer.

We describe a non-invasive animal imaging platform that allows the detection, quantification, and monitoring of ovarian cancer growth and recurrence. This intra-peritoneal xenograft model mimics the clinical profile of patients with ovarian cancer.

비 침습적 영상에 대한 생쥐 모델 검색 및 모니터 난소 암 재발

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of ...

의학

난소암-오멘텀 상호작용을 위한 3D Ex Vivo 모델 구축

An Ex Vivo Model of Ovarian Cancer Peritoneal Metastasis Using Human Omentum

Ovarian cancer is the deadliest gynecologic malignancy. The omentum plays a key role in providing a supportive microenvironment to metastatic ovarian cancer cells as well as immune modulatory signals that allow tumor tolerance. However, we have limited models that closely mimic the interaction between ovarian cancer cells and adipose-rich tissues. To further understand the cellular and molecular mechanisms by which the omentum provides a pro-tumoral microenvironment, we developed a unique 3D ex vivo model of cancer cell-omentum interaction. Using human omentum, we are able to grow ovarian cancer cells within this adipose-rich microenvironment and monitor the factors responsible for tumor growth and immune regulation. In addition to providing a platform for the study of this adipose-rich tumor microenvironment, the model provides an excellent platform for the development and evaluation of novel therapeutic approaches to target metastatic cancer cells in this niche. The proposed model is easy to generate, inexpensive, and applicable to translational investigations.

저자 스포트라이트: 암-지방 미세환경 상호작용 조사를 위한 고급 생체 외 모델 

This protocol describes the establishment of a three-dimensional (3D) ex vivo model of cancer cell-omentum interaction. The model provides a platform for elucidating pro-tumor mechanisms within the adipose niche and for testing novel therapies.

인간 Omentum을 사용한 난소암 복막 전이의 생체 외 모델

Ovarian cancer is the deadliest gynecologic malignancy. The omentum plays a key role in providing a supportive microenvironment to metastatic ovarian ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

생체내 이미징 및 난소암의 Orthotopic 마우스 모델에서 치료 트리 트먼트

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

생물학

Quantitation of Intra-peritoneal Ovarian Cancer Metastasis

Epithelial ovarian cancer (EOC) is the leading cause of death from gynecologic malignancy in the United States. Mortality is due to diagnosis of 75% of women with late stage disease, when metastasis is already present. EOC is characterized by diffuse and widely disseminated intra-peritoneal metastasis. Cells shed from the primary tumor anchor in the mesothelium that lines the peritoneal cavity as well as in the omentum, resulting in multi-focal metastasis, often in the presence of peritoneal ascites. Efforts in our laboratory are directed at a more detailed understanding of factors that regulate EOC metastatic success. However, quantifying metastatic tumor burden represents a significant technical challenge due to the large number, small size and broad distribution of lesions throughout the peritoneum. Herein we describe a method for analysis of EOC metastasis using cells labeled with red fluorescent protein (RFP) coupled with in vivo multispectral imaging. Following intra-peritoneal injection of RFP-labelled tumor cells, mice are imaged weekly until time of sacrifice. At this time, the peritoneal cavity is surgically exposed and organs are imaged in situ. Dissected organs are then placed on a labeled transparent template and imaged ex vivo. Removal of tissue auto-fluorescence during image processing using multispectral unmixing enables accurate quantitation of relative tumor burden. This method has utility in a variety of applications including therapeutic studies to evaluate compounds that may inhibit metastasis and thereby improve overall survival.

Ovarian cancer metastasis is characterized by numerous diffuse intra-peritoneal lesions, such that accurate visual quantitation of tumor burden is challenging. Herein we describe a method for in situ and ex vivo quantitation of metastatic tumor burden using red fluorescent protein (RFP)-labeled tumor cells and optical imaging.

복강 내 난소 암 전이의 정량

Epithelial ovarian cancer (EOC) is the leading cause of death from gynecologic malignancy in the United States.  Mortality is due to diagnosis of 75% of ...

Intraperitoneal Injection of Cells: A Method of Delivering Cancer Cells into the Peritoneal Adipose Tissue of Murine Model

Source: Krishnan, V. et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/t/52721">Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose.</a> J. Vis. Exp. (2015)
In this video, we perform an intraperitoneal injection of ovarian cancer cell suspension in a mouse model to study the colonization of ovarian cancer cells in peritoneal adipose tissues and their subsequent metastasis.&#160;

세포의 복강 내 주입: 쥐 모델의 복막 지방 조직에 암세포를 전달하는 방법

Source: Krishnan, V. et al. Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose. J. Vis. Exp. 
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원래 종양 개발의 쥐 실험 모델 및 복막 전이

요약

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에 대한 면역 적격 마우스에 묽은 난소암의 Orthotopic 모델 생체내에 종양 이미징 및 모니터링

An Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer using Human Stroma to Promote Metastasis

경골 내 골육종 세포 주사 동위원소 골육종 및 폐 전이 마우스 모델 생성

비 침습적 영상에 대한 생쥐 모델 검색 및 모니터 난소 암 재발

인간 Omentum을 사용한 난소암 복막 전이의 생체 외 모델

인간 Omentum을 사용한 난소암 복막 전이의 생체 외 모델

인간 Omentum을 사용한 난소암 복막 전이의 생체 외 모델

생체내 이미징 및 난소암의 Orthotopic 마우스 모델에서 치료 트리 트먼트

복강 내 난소 암 전이의 정량

세포의 복강 내 주입: 쥐 모델의 복막 지방 조직에 암세포를 전달하는 방법