인 Sandeep Khurana는 NIH (K08DKO81479)에 의해 지원됩니다. Vikrant Rachakonda은 (T32DK067872)에 의해 지원됩니다.

여기에 표시된 예는 조지아 리전트 대학에서 IACUC의 승인을 실험이다 - 프로토콜 번호 : # 2011-0408 시약 1. 준비 <ol><li> 해부 솔루션 주식을 준비 : 스톡 해부 용액 (5 배)의 500 ml를 들어, 21.18 g의 NaCl, 0.875 g의 KCl, 0.739 g을 황산, 1.049 g을 MOPS와 밀리 Q 물 450 ㎖ 중의 0.019 g의 EDTA를 녹인다. 1 N의 NaOH를 사용하여 7.3-7.4로 산도를 조정합니다. 밀리 Q 물 500 ml의에 볼륨을 확인합니다. 원액 7-10 일 저장할 수 있습니다. 화학 물질과 그들의 공급 업체의 목록은 표 1을 참조하십시오. mM의 농도는 표 2를 참조하십시오. </li><li> 작업 해부 솔루션을 준비 : 매일 신선한 작업 해부 솔루션을 준비합니다. 100 ㎖ 작업 솔루션의 경우, 0.091 g의 포도당, 밀리 Q 물 79.8 용액에 0.016 그램의 NaH 2 PO 4, 0.022 g의 피루브산 나트륨을 용해. volu을 가지고 0.2 ml의 1M 염화칼슘이 20 ml의 해부 솔루션 주식을 추가100 ㎖에 나. </li><li> 생리 식염수 (PSS)를 준비 : 950 ml의에, 1000 ml의 PSS를 준비하려면 0.365 g의 KCl, 6.545 g의 NaCl, 0.296 g을 황산, 0.163 g의 KH 2 PO 4를 용해, 2.072 g의 포도당, 2.184 g을 수 NaHCO3 및 2.383 g을 HEPES 밀리 Q 물. 1 N의 NaOH를 사용하여 7.3-7.4로 산도를 조정합니다. 밀리 Q 물 1,000 ㎖의에 볼륨을 확인합니다. 용액 2 ㎖를 제거하고 1 M CaCl2를 2 ㎖로 교체합니다. (신선한 PSS는 매일 준비해야합니다) </li><li> , 칼슘없이 100 ㎖ PSS의 경우 0.036 g의 KCl, 0.654 g의 NaCl, 0.029 g을 황산, 0.016 g의 KH 2 PO 4, 0.207 g의 포도당, 0.218 g을 NaHCO3를, 0.238을 용해 : 칼슘 (Ca 2+) 무료 PSS 준비 G HEPES, 0.015 g을 EGTA 및 0.0026 g의 나트륨 니트 로프 루시드 (SNP) 밀리-Q의 95 ml의 물에. 1 N의 NaOH를 사용하여 7.3-7.4로 산도를 조정합니다. 밀리 Q 물 100 ㎖에 볼륨을 확인합니다. </li></ol> 유리 캐 뉼러 2. 준비 <ol><li> 유리 피펫을 당겨제조업체의 지침에 따라 피펫 풀러를 사용하여 100 ~ 150 μm의 팁 캐 뉼러를 생성합니다. </li><li> 베벨 beveller 미세 전극을 이용하여 유리 캐 뉼러 팁 화재 그들 연마 및 히터 프로브를 사용하여 45 ~ 유리 캐 뉼러 팁 구부러. </li><li> 마이크로 피펫 홀더에 캐 뉼러를 넣고 관류 챔버에 마이크로 피펫 홀더를 연결합니다. </li></ol> 관류 상공 회의소 3. 준비 <ol><li> 5 분마다 해부 솔루션 다음에 밀리-Q의 물로 씻어 관류 실. 해부 시액 2 mL로 챔버를 넣습니다. </li><li> 정맥을 통해 흡입 해부 솔루션 10 ML의 주사기를 사용하여 조심스럽게 기포없이 전체 정맥과 연결된 튜브를 입력합니다. 거품의 발생을 방지하기 위해 부드럽게 흡입을 적용한다. </li><li> 각 무딘 집게를 사용하여 반 매듭이 봉합을 준비합니다. 안과 모노 필라멘트 나일론 봉합사 때문에 (10-0, 0.2 메트릭) 만있는 노트를 준비하는 데 사용됩니다직경 1-2mm은, 해부 현미경이 필요 할 수있다. </li><li> 해부 현미경으로 시각화, 약간 멀리 끝에서 부분적으로 폐쇄 봉합 매듭으로 모두 캐 뉼러를로드 해부 집게를 사용합니다. 나중에이 노트는 유관 동맥 끝 부분에 조심스럽게 미끄러되고 완전히 마감했다. </li></ol> 흰쥐에서 장간막 동맥 아케이드 4. 컬렉션 <ol><li> 이 실험을 수행하기 전에 지역 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인을 얻을 수 있습니다. 제어 온도와 조명과 물을 무료로 이용할 수 있도록하고 상업 쥐 차우와 동물 시설 하우스 동물. </li><li> 케타민 복강 주사 하였다 (80 mg / kg)과 자일 라진 (10 밀리그램 / kg)로 쥐를 마취. 발가락 핀치에 의해 필요한 관리] 추가 마취제 경우 깊은 마취를 확인합니다. </li><li> 외과 적 마취를 확인한 후, 단두하여 동물을 안락사. 요로 감염에 대한 AAALAC의 지침을 따르십시오동물 안락사에 대한 적절한 방법을 LIZING. </li><li> 흉골 골반으로부터 중심선 개복 수술을 수행하기 위해 해부 가위와 집게를 사용한다. 이 두 단계로 수행된다 : 첫째, 피부를 절개하고 둘째, 기본 근육층 절개. 케어는 복강 내 장기를 손상하지 않도록주의해야합니다. </li><li> 유문에 장 가까이 ileo - 맹장 접합에 가까운 선단의 근위 끝을 잘라. 모두 미즙 때문에 입욕 세포 용액의 오염을 방지 배설물 누설을 방지하기 위해 별도로 묶어 종료한다. 급전 혈관 즉, 상 장간막 동맥 근처의 기지 장간막을 절개하고 빙냉 해부 용액을 함유하는 50 ㎖의 비커에 전체 소장 장간막 침대 옮긴다. </li><li> 수확 된 조직이 5 분 동안 차가운 얼음 해부 용액에 머물면서 혈액 없애 신선한 해부 용액으로 씻어 수 있습니다. </li></ol> 5. 분리 및 제 4의 캐 뉼러 </SUP&gt; 주문 장간막 동맥 <ol><li> 실 가드 코팅 접시에 오른쪽에 소장의 기단부 아래에 핀. (도 1) 장간막 확산 아래 세그먼트를 피닝 및 혈관 노출, 반 시계 방향의 경로에 남아있는 부위를 확장. 참고 : 우리는 실온에서 동맥 세그먼트를 격리 할 것. 그렇지 않으면 우리는 얼음에 접시를 포함하는 장간막 아케이드를 놓습니다. 우리 기관에 포함 일부 실험실, 4 ℃에서 동맥을 해부하기 위해 냉각 장치를 사용합니다. </li><li> 스테레오 줌 현미경 위해 작은 장간막 동맥 제 3 차 및 4 작은 가위를 사용하여 소장에 (~ 260 μm의) 평행을 해부하다. 우선 피복 지방을 멀리 해부하다. 그런 다음 정맥을 해부하고 V 자형 분기점과 동맥을 격리 할 것. 선택된 세그먼트에 구멍을하지 않도록주의하십시오. 2 차 주문 지점 근처에 지방을 해부 시작하고 3 번째 또는 4 번째 ORD에 방법을 찾아어 선박. <ol><li> 주 : 동맥과 정맥들은 벽의 두께에 기초하여 구별 될 수있다 - 동맥 벽 혈관의보다 두껍다. 또한, 결합 조직 인접 때하는 동맥하지 쉽게하면서 혈관, 정맥의 붕괴를 조심스럽게 수직으로 당겨진다. 루멘 직경 동맥 때문에 &lt;400 μm의 우리가 (직경 &lt;300 μm의 루멘) 주문 쥐 장간막 동맥 번째 4를 사용하는이 프로토콜에 대한 전신 혈관 저항의 주요 사이트입니다. </li></ol></li><li> 소장에 동맥 평행 4-5mm 섹션을 분리합니다. 소장에 포함 된 모든 5 번째 순서 지점을 시각화하고 약간 떨어진 지점의 원점에서 그들을 잘라 일부를 보존 할 수 있습니다. 지점이 보존 된 부분은 이후 자신의 삽관을 안내, 관류 챔버에 동맥 세그먼트를 전송 (해부 포셉) 사이트를 잡고 역할을한다. </li><li> 이어서 2 절개 원위함으로써 동맥 세그먼트를 잘라5 번째 순서의 동맥의 각각의 측면에 분기 및 관류 챔버로 이동시켜 (도 1C 및 범례 참조). </li><li> (: 100-150 ㎛의 직경) 해부 집게 동맥 세그먼트의 끝을 잡고 해부 집게를 사용하여 유리 마이크로 피펫의 하나에 용기의 한쪽 끝을 Cannulate. 유관 끝에 이전에로드 된 부분적으로 폐쇄 봉합을 밀어 고정합니다. 주 : 동맥의 기단부는 동일계 환경에서 모방하는 서보 제어 압력 조절 장치에 연결되어 유리 캐 뉼러로 캐 뉼러를 삽입 할 수있다. </li><li> 박리 용액을 캐 뉼러와 스톱 콕을 접속 배관에 박리 액을 주사기에두고 병합되도록이 캐 뉼러에 접속 콕에 10 ㎖ 주사기를 연결로드. 조심스럽게 주사기를 올립니다. 용액에 중력이 용기의 개방 단부에서의 혈관 내 혈액을 제거 할 것이다. 동맥 혈액을 제거한 후,, 꼭지를 닫습니다. 대안 적으로, 상기 압력 컨트롤러에 콕을 부착를 켜 부드럽게 동일한 결과를 얻을 5-10 mmHg 이상으로 압력을 증가 참고. </li><li> 신중 동맥 세그먼트의 묶이지 단부에 가능한 한 가까운 다른 뉼러를 가져와 2 유리 캐 뉼러 상 혈관의 말단부 넥타이. 유관 끝에 이전에로드 된 부분적으로 폐쇄 봉합을 밀어 고정합니다. 케어는 예인선 또는 동맥 세그먼트 당기지 않도록주의해야합니다. 모두 캐 뉼러에 부착 된 마개가 닫혀 있는지 확인하십시오. </li><li> 라이브 비디오 녹화를 갖춘 거꾸로 현미경의 무대에 관류 챔버를 전송합니다. </li><li> 서보 제어 압력 조절 장치에 동맥 세그먼트 (segment)의 기단부에 연결 정맥의 꼭지를 연결하고 안정된 관내 압력을 유지하기 위해 폐쇄 상태를 유지 꼭지는 다른 정맥에 연결해야합니다. </li><li> 이어서, 흡입 포트를 진공 튜빙을 첨부ND 관류 챔버의 관류 포트 튜빙. 참고 : 경 사진 바늘 포트가 관류에 대한 흡입 및 무딘 바늘 포트에 사용됩니다. </li><li> 단일 인라인 용액 히터 통해 따뜻한 PSS와 용기의 관류 시작 (37 ° C, 기체 혼합물로 평형화 : 중성 pH 및 충분한 산소 (17)을 유지하기 위해 5 % CO 2, 5 % O 2, 90 % N)이 용액에 / min의 연동 펌프. 뿐만 아니라에 진공을 돌립니다. 연속적으로 온도를 모니터링하기 위해 챔버 내에 서미스터를 배치. </li><li> 챔버의 PSS의 온도가 가까워지면 ~ 37 ° C (보통 5 분 이내), 천천히 20 ~ 100 mmHg로에서 관내 압력을 증가시키고 혈관 누출을 확인합니다. 이것은 압력 조절기의 압력을 자동 설정을 사용하여 수행된다. 누출과 혈관을 취소하고 다른 세그먼트로 교체. 누수와 혈관의 압력을 유지 할 수 없습니다. </li><li> 100 mmHg의 압력에서 유지하면서 굽힘위한 동맥 분절을 평가.나사 레버를 사용하여 동맥 세그먼트를 곧게 캐 뉼러를 이동합니다. 이상 동맥 세그먼트를 늘리지 않습니다; 목표는 생체 동맥 세그먼트 길이에 모방하는 것이다. </li><li> 70 mmHg로에 압력을 감소 (장간막 아케이드 (18) 생체 내 압력의 모방)과 동맥 세그먼트 안정과 근육 조직 톤을 개발 할 수 있습니다. 동맥은 (40 ~ 70 mmHg로) 실험 전략 및 혈관 침대에 따라 가변적으로 가압 할 수있다. 이전에 출판 된 리뷰는 다른 혈관 침대 8에서 동맥 부문에서 MT에 변화의 우수한 리뷰를 제공합니다. </li></ol> 동맥 직경의 6 측정 <ol><li> 단색 영상 전하 결합 소자 카메라를 구비 10X 현미경 대물 렌즈에 볼 동맥. 비디오 프레임 그래버 실시간 에지 검출 시스템을 사용하여 내강 직경을 측정한다. 사용 된 장비의 목록은 표 3에 제공된다. </li><li> 모니터 및 기록 용기 D계속 iameter. </li><li> MT의 개발을위한 관찰한다. 참고 : 우리는 쥐 장간막 저항 동맥, 70 mmHg로에서, MT의 개발은 직​​경이 20 % 감소 ~ 특징입니다 것을 관찰했다. MT는 혈관 침대와 동물 종에 따라 달라집니다. </li><li> 1 μM의 페닐 (Phe가) 1 μm의 아세틸 콜린 (ACH)에 혈관 수축과 혈관 확장 반응을 평가하여 혈관 가능성을 확인합니다. </li><li> 각 실험의 끝에서 20 분 동안 불 함유 PSS 칼슘으로 동맥을 배양함으로써 수동적 직경 (PD)를 결정한다. </li></ol> 7. 근육 조직 응답 <ol><li> 20mm 수은에 압력을 줄이고 직경이 안정 될 수 있도록. 증분 단계 (20, 40, 60, 80, 100)의 관내 압력을 증가시키고, 각 압력 단계에서 동맥 (통상 5 분 이내) 직경 안정을 달성 할 수있다. </li><li> 20 mmHg로에 관내 압력을 줄이고 2+ - 무료 PSS 0.39 mM의를 포함하는 칼슘의 동맥 세그먼트를 품다EGTA 및 0.1 mM의 SNP. 동맥 직경이 (보통 15 분)을 안정화 할 수 있습니다. </li><li> 0.39 mM의 EGTA 0.1 mM의 SNP를 포함하는 칼슘 - 무료 PSS의 압력 단계의 응답을 반복합니다. </li></ol> 데이터의 결과 및 계산 8. 해석 <ol><li> 칼슘 관찰 직경 %의 차이는 다음과 같은 계산에 따라 각 압력에서 2 + - 무료 PSS 칼슘에 비해 함유로 MT를 계산한다 : <img alt="식 (1)" fo:src="/files/ftp_upload/50997/50997eq1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50997/50997eq1.jpg" /></li><li> 직경 vasomotion 겪고 동맥 들어 1 분 동안 플래 위상을 평균함으로써 계산 될 수있다. 관계에 따라 최대 휴식 (%의 PD)의 퍼센트로 수집 된 데이터를 표현 %의 PD = 100 × [ΔD / PD] ΔD 전에 어떤 임상 화합물 (예 : Phe가)을 첨가 한 후, 직경의 차이이고; PD는 패시브 직경 (인최대 직경). </li></ol>

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중요한 단계, 문제 해결 및 수정 전형적인 동중 선박 대비, 동맥 따뜻한 (37 ° C) PSS와 관류이 유리 캐 뉼러 사이에 70 mmHg로에서 가압된다. 30-45 분 후에, 동맥 20-30 분에서 안정화 직경 감소에 의해 자발적 특징 MT 개발. 다양한 혈관 침대에서 저항 동맥 변수 MT를 개발한다. cremastric 동맥 PD의 MT ~ 40 %를 달성 할 수있다 예를 쥐 저항 장간막 동맥 ~ PD의 25 %를 MT를 개발한다. 60 분 이내?...

작은 저항 동맥 SVR의 주요 결정 요인이며, 많은 질병 1, 2의 병태 생리에 중요한 역할을한다. 당뇨병 3, 임신 4, 허혈 - 재관류 5, 비만과 고혈압 6,7 등의 조건은 자주 변경된 미세 혈관 기능과 연관되어 있습니다. 혈관 myography 다양한 질환에서 미세 혈관 기능의 변화에​​ 중요한 통찰력을 제공 할뿐만 아니라, 치료 목표를 식별하고 혈관 활성 화합물의 효능을 평가할 수 있습니다뿐만 아니라. 혈관 기능이 아이소 메트릭 또는 등압 선박 조건 (8)에서 고립 된 작은 동맥을 이용하여 연구하고있다. 아이소 myography의 상세한 설명은도 9 곳이 제공된다. 그러나 동중 준비 10 ~ 12 대 아이소 메트릭에서 얻은 정보에 차이가 있습니다. 가압 된 제제는 동맥 거의 생리적 조건에서 미세 혈관 기능 연구를 허용하기 때문에,얻어진 결과는 혈관 침대 8, 13의 생체 내 행동을 더 잘 상관 관계 수 있습니다. 1902 년 베일리스 먼저 혈관 직경 14 전층 압력의 효과를 설명했다. 그는 압력의 감소는 혈관 확장으로 이어졌습니다 토끼, 개와 고양이의 다양한 혈관 침대에서 작은 저항 동맥에서 관찰, 압력의 증가는 혈관 수축으로 이어졌습니다. 이 현상은 근육 조직 반응으로 알려져있다. 베일리스 이후 연구자들은 동중 조건에서 작은 저항 동맥 MT (15, 16)로 알려진 지속적인 수축을 개발하는 것을 관찰했다. 근육 조직 응답 및 MT 모두 myography 압력 (PM) 기법을 사용하여 평가할 수있다. 오후는 작은 동맥, 정맥 및 기타 선박의 vasoactivity를 결정하는 데 주로 사용된다. 이름에서 알 수 있듯이 - - 혈관 직경의 혈관 활성 화합물의 효과를 평가뿐만 아니라, 혈관 내 압력 PM 매개 CH 관용법혈관 직경에 ANGES. 지난 수십 년 동안 비디오 현미경 유리 피펫은, PM을 수행하기 쉽게 만든 당기기 향상된 컴퓨터 소프트웨어에 진행한다. 그러나, 작은 혈관의 가능한 손상 부분의 절개는 지루하고 때로는 도전 남아있다. 여기에서 우리는 쥐에서 고립 된 작은 장간막 저항 동맥의 근육 조직 반응을 연구하기 위해 상세한 프로토콜을 설명합니다.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Chemical</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Acetylcholine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A6625</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Calcium chloride (CaCl2)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>223506</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G5767</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N',N'-tetra acetic acid (EGTA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E3889</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E9884</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H3784</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M7506</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MOPS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M5162</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6126</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P3911</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Potassium phosphate (KH2PO4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5655</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium bicarbonate (NaHCO3 )</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S6014</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S5881</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium nitroprusside</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>13451</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic monohydrate (NaH2PO4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P8574</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 1.</td>
		 </tr>
		 <tr>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td>
 <table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Physiological salt solution (1000 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KCl</td>
			<td>4.9</td>
			<td>0.365 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>112</td>
			<td>6.545 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MgSO4.7H2O</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.296 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.163 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>11.5</td>
			<td>2.072 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>26</td>
			<td>2.184 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>10</td>
			<td>2.383 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>2</td>
			<td>2 ml (1M stock)</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>998 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ca2+ free physiological salt solution (100 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KCl</td>
			<td>4.9</td>
			<td>0.036 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>112</td>
			<td>0.645 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MgSO4.7H2O</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.029 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.016 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>11.5</td>
			<td>0.207 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>26</td>
			<td>0.218 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>10</td>
			<td>0.238 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>EGTA </td>
			<td>0.39</td>
			<td>0.015 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium nitroprusside </td>
			<td>0.1</td>
			<td>0.0026 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>100 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissection solution, stock (500 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>145</td>
			<td>21.18 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KCl</td>
			<td>4.7</td>
			<td>0.875 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.739 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MOPS</td>
			<td>2</td>
			<td>1.049 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>0.02</td>
			<td>0.019 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>500 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Working dissection solution (100 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissection solution stock</td>
			<td>20 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.091 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>5</td>
			<td>0.016 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>2</td>
			<td>0.022 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>2</td>
			<td>0.2 ml (1M stock)</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>79.8 ml</td>
		 </tr>
	 </tbody>
</table>
 </td>
	 </tr>
		 <tr>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td>Table 2. Composition of Experimetnal solutions</td>
	 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>CCD Monochrome Camera</td>
			<td>The imaging Source</td>
			<td>DMK 21AU04</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Single inline solution heater</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0102</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Thermistor</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0108</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dual automatic temperature controller</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>TC-344B</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Flaming/Brown micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instruments </td>
			<td>P-97</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fluorescence System Interface</td>
			<td>IonOptix</td>
			<td>model FSI-700</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Forceps and scissors </td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ion Wizard-Core and Analysis</td>
			<td>IonOptix</td>
			<td>Ion Wizard 6.0</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Laboratory tubing</td>
			<td>Silastic </td>
			<td>508-005</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Male Sprague Dawley rat</td>
			<td>Harlan Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Master flex console drive</td>
			<td>Cole-parmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Milli-Q Plus Ultrapure Water System</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>ZD5211584</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ophthalmic monofilament nylon suture </td>
			<td>Ethicon </td>
			<td>9007G</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Photometry and Dimensioning Microscope</td>
			<td>Motic</td>
			<td>AE31</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pressure Servo Controller with peristaltic pump and pressure transducer</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>PS-200</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon Instruments Inc</td>
			<td>SMZ660</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Vessel Chamber</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>CH-1</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissection dish</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>DD-90-S</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Thin Wall Glass Capillaries</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>TW120-6</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Microforge</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51550</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 3.</td>
		 </tr>
	 </tbody>
</table>

assessing myogenic response and vasoactivity in resistance mesenteric arteries using pressure myography

작은 저항 동맥 수축 증가 또는 관내 압력의 감소에 응답하여 각각 팽창; 근육 조직 응답이라고하는이 현상은 로컬 혈류 키 레귤레이터이다. 동중 조건에서 작은 저항 동맥 전신 혈관 저항 (SVR)의 주요 결정 요인 인 근육 조직 톤 (MT)로 알려진 수축을 지속 개발한다. 따라서, 작은 저항 동맥의 생체 가압 준비는 거의 생리적 상태에서 미세 혈관의 기능을 연구하는 중요한 도구입니다. 이를 달성하기 위해, 작은 저항 동맥 (~ 260 μm의 직경)의 갓 고립 세그먼트는 손대지 개의 작은 유리 캐 뉼러 및 가압에 장착된다. 이들 제제는 생체 동맥의 특성과 실시간으로 혈관의 색조 평가에 허용 최대한 유지. 여기에서 우리는 쥐에서 가압 작은 저항 장간막 동맥에 vasoactivity을 평가하기위한 상세한 프로토콜을 제공한다; 이러한 동맥 개발지속적인 혈관 수축 - 최대 직경의 약 25 % - 70 mmHg로에서 가압. 이러한 동맥 제제는 다양한 질병의 동물 모델에서 미세 혈관 기능의 변화를 동맥 압력 및 vasoactivity 사이의 관계에 대한 임상 시험 화합물의 효과를 연구하고 결정하는데 사용될 수있다.

전형적인 압력 myograph 설정의 개략적 인 대표도 1에 도시된다. 용기의 양단은 유리 마이크로 피펫으로 삽관과 양측 봉합사로 고정된다. 배관 및 오픈 콕 통해 하나 뉼러는 서보 제어식 압력 조절기에 접속되고; 다른 캐 뉼러가 클로즈 콕에 접속된다. 챔버는 CCD 카메라와 접속 도립 현미경으로 관찰 PSS 및 혈관 직경의 변화와 관류된다. 70 mmHg로 가압하는 동맥 분절?...

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Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

압력 myography는 가압 할 때 지속적인 수축을 개발하는 작은 동맥의 vasoactivity을 평가하는 데 사용됩니다. 이 원고는 쥐, vasoactivity 혈관 직경에 관내 압력의 영향에서 작은 장간막 동맥의 고립 된 세그먼트에서 평가하기위한 세부 프로토콜을 제공합니다.

압력 Myography를 사용하여 저항 장간막 동맥에서 근육 조직 대응 및 Vasoactivity 평가

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

assessing-myogenic-response-vasoactivity-resistance-mesenteric

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

16.7K 조회수.  Georgia Regents University.  압력 myography는 가압 할 때 지속적인 수축을 개발하는 작은 동맥의 vasoactivity을 평가하는 데 사용됩니다. 이 원고는 쥐, vasoactivity 혈관 직경에 관내 압력의 영향에서 작은 장간막 동맥의 고립 된 세그먼트에서 평가하기위한 세부 프로토콜을 제공합니다. 

비디오: Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between 100-400 &mu;m in diameter function primarily in directing blood flow to various organs according to the overall requirements of the body. The rat mesenteric artery has a diameter greater than 100 &mu;m. The myography technique, first described by Mulvay and Halpern1, was based on the method proposed by Bevan and Osher2. The technique provides information about small vessels under isometric conditions, where substantial shortening of the muscle preparation is prevented. Since force production and sensitivity of vessels to different agonists is dependent on the extent of stretch, according to active tension-length relation, it is essential to conduct contraction studies under isometric conditions to prevent compliance of the mounting wires. Stainless steel wires are preferred to tungsten wires because of oxidation of the latter, which affects recorded responses3.The technique allows for the comparison of agonist-induced contractions of mounted vessels to obtain evidence for normal function of vascular smooth muscle cell receptors.
We have shown in several studies that isolated mesenteric arteries that are contracted with phenylyephrine relax upon addition of cumulative concentrations of extracellular calcium (Ca2+e). The findings led us to conclude that perivascular sensory nerves, which express the G protein-coupled Ca2+-sensing receptor (CaR), mediate this vasorelaxation response. Using an automated wire myography method, we show here that mesenteric arteries from Wistar, Dahl salt-sensitive(DS) and Dahl salt-resistant (DR) rats respond differently to Ca2+e. Tissues from Wistar rats showed higher Ca2+-sensitivity compared to those from DR and DS. Reduced CaR expression in mesenteric arteries from DS rats correlates with reduced Ca2+e-induced relaxation of isolated, pre-contracted arteries. The data suggest that the CaR is required for relaxation of mesenteric arteries under increased adrenergic tone, as occurs in hypertension, and indicate an inherent defect in the CaR signaling pathway in Dahl animals, which is much more severe in DS.
The method is useful in determining vascular reactivity ex vivo in mesenteric resistance arteries and similar small blood vessels and comparisons between different agonists and/or antagonists can be easily and consistently assessed side-by-side6,7,8.

An automated myography method for force measurements in isolated mesenteric arteries is described. It employs a Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myograph 510A to determine responses to phenylephrine and extracellular calcium. The method allows consistent determination of isometric responses to agonists in small vessels of diameters of 60 - 300 &mu;m, independently.

자동 와이어 Myography를 사용 Mesenteric 동맥 수축과 휴식 연구

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

연구

의학

Epidural Intracranial Pressure Measurement in Rats Using a Fiber-optic Pressure Transducer

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and cardiac arrest. This elevation may result in further neurological injury, in the form of transtentorial herniation1,2,3,4, midbrain compression, neurological deficit or increased cerebral infarct2,4. Current therapies are often inadequate to control elevated ICP in the clinical setting5,6,7 . Thus there is a need for accurate methods of ICP measurement in animal models to further our understanding of the basic mechanisms and to develop new treatments for elevated ICP.
In both the clinical and experimental setting ICP cannot be estimated without direct measurement. Several methods of ICP catheter insertion currently exist. Of these the intraventricular catheter has become the clinical 'gold standard' of ICP measurement in humans8. This method involves the partial removal of skull and the instrumentation of the catheter through brain tissue. Consequently, intraventricular catheters have an infection rate of 6-11%9. For this reason, subdural and epidural cannulations have become the preferred methods in animal models of ischemic injury. 
Various ICP measurement techniques have been adapted for animal models, and of these, fluid-filled telemetry catheters10 and solid state catheters are the most frequently used11,12,13,14,15. The fluid-filled systems are prone to developing air bubbles in the line, resulting in false ICP readings. Solid state probes avoid this problem (Figure 1). An additional problem is fitting catheters under the skull or into the ventricles without causing any brain injury that might alter the experimental outcomes. Therefore, we have developed a method that places an ICP catheter contiguous with the epidural space, but avoids the need to insert it between skull and brain. 
An optic fibre pressure catheter (420LP, SAMBA Sensors, Sweden) was used to measure ICP at the epidural location because the location of the pressure sensor (at the very tip of the catheter) was found to produce a high fidelity ICP signal in this model. There are other manufacturers of similar optic fibre technologies13 that may be used with our methodology. Alternative solid state catheters, which have the pressure sensor located at the side of the catheter tip, would not be appropriate for this model as the signal would be dampened by the presence of the monitoring screw. 
Here, we present a relatively simple and accurate method to measure ICP. This method can be used across a wide range of ICP related animal models.

A novel technique to record the pressures within the skull is described. The minimally invasive method uses a fibre-optic pressure sensing system to accurately measure intracranial pressure (ICP) in anaesthetized rats without causing significant brain trauma. The technique may be used in a wide range of experimental models.

광섬유 압력 변환기를 사용하여 쥐에서 경막외 Intracranial 압력 측정

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, including mental retardation due to disordered and damaged brain development. Fetal alcohol spectrum disorder (FASD) is a term used to cover a continuum of birth defects that occur due to maternal alcohol consumption, and occurs in approximately 4% of children born in the United States. With 50% of child-bearing age women reporting consumption of alcohol, and half of all pregnancies being unplanned, unintentional exposure is a continuing issue2. In order to best understand the damage produced by ethanol, plus produce a model with which to test potential interventions, we developed a model of developmental ethanol exposure using the zebrafish embryo. Zebrafish are ideal for this kind of teratogen study3-8. Each pair lays hundreds of eggs, which can then be collected without harming the adult fish. The zebrafish embryo is transparent and can be readily imaged with any number of stains. Analysis of these embryos after exposure to ethanol at different doses and times of duration and application shows that the gross developmental defects produced by ethanol are consistent with the human birth defect. Described here are the basic techniques used to study and manipulate the zebrafish FAS model.

In order to understand the molecular mechanisms of the ethanol-induced developmental damage, we have developed a zebrafish model of ethanol exposure and are exploring the physical, cellular, and genetic alterations that occur after ethanol exposure1. We then seek to find potential interventions and rapidly test them in this animal model.

태아 알코올 노출의 Zebrafish 모델에서 Teratogenic 변경 사항 평가

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that system. Changes in blood flow to the small intestine can result in effects on the absorptive functions of the organ. Particular interest in toxins liberated from feedstuffs through fermentative and digestive processes has developed in ruminants as an area where productive efficiencies could be improved. The video associated with this article describes an in vitro bioassay developed to screen compounds for vasoactivity in isolated cross-sections of bovine mesenteric artery and vein using a multimyograph. Once the blood vessels are mounted and equilibrated in the myograph, the bioassay itself can be used: as a screening tool to evaluate the contractile response or vasoactivity of compounds of interest; determine the presence of receptor types by pharmacologically targeting receptors with specific agonists; determine the role of a receptor with the presence of one or more antagonists; or determine potential interactions of compounds of interest with antagonists. Through all of this, data are collected real-time, tissue collected from a single animal can be exposed to a large number of different experimental treatments (an in vitro advantage), and represents vasculature on either side of the capillary bed to provide an accurate picture of what could be happening in the afferent and efferent blood supply supporting the small intestine.

The small intestine is frequently exposed to toxins that can influence blood flow and negatively impact nutrient absorption. Using a multimyograph and mesenteric artery and vein isolates, compounds or toxins of interest can be screened for vasoactivity.

생물 검정으로 소 장간막 동맥과 정맥의 섹션을 분리하고 사용하면 소장에서 Vasoactivity을 테스트

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. Despite the discovery of key regulators of uterine contractility, this process is still not fully understood. Transgenic mice provide an ideal model in which to study parturition. Previously, the only method to study uterine contractility in the mouse was ex vivo isometric tension recordings, which are suboptimal for several reasons. The uterus must be removed from its physiological environment, a limited time course of investigation is possible, and the mice must be sacrificed. The recent development of radiometric telemetry has allowed for longitudinal, real-time measurements of in vivo intrauterine pressure in mice. Here, the implantation of an intrauterine telemeter to measure pressure changes in the mouse uterus from mid-pregnancy until delivery is described. By comparing differences in pressures between wild type and transgenic mice, the physiological impact of a gene of interest can be elucidated. This technique should expedite the development of therapeutics used to treat myometrial disorders during pregnancy, including preterm labor.

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy.

자궁 원격 측정은 마우스 수축 압력을 측정하는<em&gt; 생체</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Trabecular Meshwork Response to Pressure Elevation in the Living Human Eye

The mechanical characteristics of the trabecular meshwork (TM) are linked to outflow resistance and intraocular pressure (IOP) regulation. The rationale behind this technique is the direct observation of the mechanical response of the TM to acute IOP elevation. Prior to scanning, IOP is measured at baseline and during IOP elevation. The limbus is scanned by spectral-domain optical coherence tomography at baseline and during IOP elevation (ophthalmodynamometer (ODM) applied at 30 g force). Scans are processed to enhance visualization of the aqueous humor outflow pathway using ImageJ. Vascular landmarks are used to identify corresponding locations in baseline and IOP elevation scan volumes. Schlemm canal (SC) cross-sectional area (SC-CSA) and SC length from anterior to posterior along its long axis are measured manually at 10 locations within a 1 mm segment of SC. Mean inner to outer wall distance (short axis length) is calculated as the area of SC divided by its long axis length. To examine the contribution of adjacent tissues to the effect IOP elevations, measurements are repeated without and with smooth muscle relaxation with instillation of tropicamide. TM migration into SC is resisted by TM stiffness, but is enhanced by the support of its attachment to adjacent smooth muscle within the ciliary body. This technique is the first to measure the living human TM response to pressure elevation in situ under physiological conditions within the human eye.

Trabecular meshwork (TM) migration into Schlemm&#8217;s canal space can be induced by acute pressure elevation by ophthalmodynamometer, and observed by spectral domain optical coherence tomography. The goal of this method is to quantify the morphometric response of the living outflow tract to acute pressure elevation in living tissues in situ.

살아있는 인간의 눈의 압력 상승에 섬유주 응답

The mechanical characteristics of the trabecular meshwork (TM) are linked to outflow resistance and intraocular pressure (IOP) regulation. The rationale ...

Isolation and Culture of Primary Endothelial Cells from Canine Arteries and Veins

Cardiovascular disease is studied in both human and veterinary medicine. Endothelial cells have been used extensively as an in vitro model to study vasculogenesis, (tumor) angiogenesis, and atherosclerosis. The current standard for in vitro research on human endothelial cells (ECs) is the use of Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVECs) and Human Umbilical Artery Endothelial Cells (HUAECs). For canine endothelial research, only one cell line (CnAOEC) is available, which is derived from canine aortic endothelium. Although currently not completely understood, there is a difference between ECs originating from either arteries or veins. For a more direct approach to in vitro functionality studies on ECs, we describe a new method for isolating Canine Primary Endothelial Cells (CaPECs) from a variety of vessels. This technique reduces the chance of contamination with fast-growing cells such as fibroblasts and smooth muscle cells, a problem that is common in standard isolation methods such as flushing the vessel with enzymatic solutions or mincing the vessel prior to digestion of the tissue containing all cells. The technique we describe was optimized for the canine model, but can easily be utilized in other species such as human.

Novel isolation methods of primary endothelial cells from blood vessels are needed. This protocol describes a new technique that completely inverts blood vessels of interest, exposing only the endothelial side to enzymatic digestion. The resulting pure endothelial cell culture can be used to study cardiovascular diseases, disease modelling, and angiogenesis.

개 동맥과 정맥에서 차 내피 세포의 분리 및 문화

Cardiovascular disease is studied in both human and veterinary medicine. Endothelial cells have been used extensively as an in vitro model to study ...

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant CFTR channel in subjects with cystic fibrosis (CF). Identification of subjects that may benefit from these drugs is challenging because of the extensive heterogeneity of CFTR mutations, as well as other unknown factors that contribute to individual drug efficacy. Here, we describe a simple and relatively rapid assay for measuring individual CFTR function and response to CFTR modulators in vitro. Three dimensional (3D) epithelial organoids are grown from rectal biopsies in standard organoid medium. Once established, the organoids can be bio-banked for future analysis. For the assay, 30-80 organoids are seeded in 96-well plates in basement membrane matrix and are then exposed to drugs. One day later, the organoids are stained with calcein green, and forskolin-induced swelling is monitored by confocal live cell microscopy at 37 &#176;C. Forskolin-induced swelling is fully CFTR-dependent and is sufficiently sensitive and precise to allow for discrimination between the drug responses of individuals with different and even identical CFTR mutations. In vitro swell responses correlate with the clinical response to therapy. This assay provides a cost-effective approach for the identification of drug-responsive individuals, independent of their CFTR mutations. It may also be instrumental in the development of future CFTR modulators.

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

This protocol describes an assay for measuring CFTR function and CFTR modulator responses in cultured tissue from subjects with cystic fibrosis (CF). Biopsy-derived intestinal organoids swell in a cAMP-driven fashion, a response that is defective (or strongly reduced) in CF organoids and can be restored by exposure to CFTR modulators.

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant ...

Laparoscopic Technique for Serial Collection of Liver and Mesenteric Lymph Nodes in Macaques

The mesenteric lymph nodes (MLN) and the liver are exposed to microbes and microbial products from the gastrointestinal (GI) tract, making them immunologically unique. The GI tract and associated MLN are sites of early viral replication in human immunodeficiency virus (HIV) infection and the MLN are likely important reservoir sites that harbor latently-infected cells even after prolonged antiretroviral therapy (ART). The liver has been shown to play a significant role in immune responses to lentiviruses and appears to play a significant role in clearance of virus from circulation. Nonhuman primate (NHP) models for HIV and Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) closely mimic these aspects of HIV infection and serial longitudinal sampling of primary sites of viral replication and the associated immune responses in this model will help to elucidate critical events in infection, pathogenesis, and the impact of various intervention strategies on these events. Current published techniques to sample liver and MLN together involve major surgery and/or necropsy, which limits the ability to investigate these important sites in a serial fashion in the same animal. We have previously described a laparoscopic technique for collection of MLN. Here, we describe a minimally invasive laparoscopic technique for serial longitudinal sampling of liver and MLN through the same two port locations required for the collection of MLN. The use of the same two ports minimizes the impact to the animals as no additional incisions are required. This technique can be used with increased sampling frequency compared to major abdominal surgery and reduces the potential for surgical complications and associated local and systemic inflammatory responses that could complicate interpretation of results. This procedure has potential to facilitate studies involving NHP models while improving animal welfare.

Here, we describe a minimally invasive laparoscopic technique for serial sampling of liver and mesenteric lymph nodes (MLN) in macaques that allows for increased sampling frequency, and reduces the potential for surgical complications when compared to performing a laparotomy.

짧은 꼬리 원숭이의 간 및 장간막 림프절의 시리얼 컬렉션 복강경 기술

The mesenteric lymph nodes (MLN) and the liver are exposed to microbes and microbial products from the gastrointestinal (GI) tract, making them ...

A Cell Culture Model of Resistance Arteries

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and signaling processes that can control vascular tone and blood pressure. As it is a projection from either the endothelial or smooth muscle cell, and due to its small size (on average, an area of ~1 &#181;m2), the MEJ is difficult to study in isolation. However, we have developed a cell culture model called the vascular cell co-culture (VCCC) that allows for in vitro MEJ formation, endothelial cell polarization, and dissection of signaling proteins and processes in the vascular wall of resistance arteries. The VCCC has a multitude of applications and can be adapted to suit different cell types. The model consists of two cell types grown on opposite sides of a filter with 0.4 &#181;m pores in which the in vitro MEJs can form. Here we describe how to create the VCCC via plating of cells and isolation of endothelial, MEJ, and smooth muscle fractions, which can then be used for protein isolation or activity assays. The filter with intact cell layers can be fixed, embedded, and sectioned for immunofluorescent analysis. Importantly, many of the discoveries from this model have been confirmed using intact resistance arteries, underscoring its physiological relevance.

A cell culture model of resistance arteries is described, allowing for the dissection of signaling pathways in endothelium, smooth muscle, or between endothelium and smooth muscle (the myoendothelial junction). The selective application of agonists or protein isolation, electron microscopy, or immunofluorescence can be utilized using this cell culture model.

저항 동맥의 세포 문화 모델

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and ...