내 실험실에서 연구는 생물학의 시작 자금의 WKU학과, WKU 연구 재단 RCAP-I는 # 11-8032을 부여하고 지원하는 국립 연구소의 종합 의료 과학 국립 연구소에서 부모 부여를 통해 자금 KBRIN 면적 그랜트 건강의 보너스 번호 5P20GM103436-13에서. 또한 그의 실험실 내가 먼저 쑤 실험실에서이 기술을 확립이 기술 박사 레이몬드 Pagliarini에 소개 된 박사 티안 쑤에 감사드립니다.

1. 양성 비 침습적 종양의 유도 <ol><li> 양성 종양의 유도를 위해 표 2에 주식을 사용합니다. </li><li> 다음과 같은 유전자형의 &quot;테스터&quot;주식에 대한 스타터 문화를 준비, 욕조 - Gal80, FRT40A, Y, EY-FLP1, w Act5C&gt; Y +&gt; 인 Gal4, UAS - GFP </li><li> 다음과 같은 유전자형의 &quot;테스트&quot;주식에 대한 스타터 문화를 준비 W; FRT40A, UAS - 라스 V12 / CYO </li><li> &quot;테스트&quot;주식에서 &quot;테스터&quot;주식 ~ 10 여성 처녀 십 명의 남성을 수집합니다. </li><li> 플라이 음식과 함께 유리 병에 모두 배치하여 &quot;테스터&quot;및 &quot;테스트&quot;주식에서 남성과 여성을 교차. </li><li> 25 ° C 배양기에서 십자가를 놓고 남성과 여성이 짝과 24-48 시간 동안 알을 낳을 수 있습니다. </li><li> 충분한 계란 증착 먼저 령 애벌레 문화가 건조되지 않도록 만드는 존재의 병을 확인합니다. <ol><li> 멸균 몇 방울 추가(문화가 건조되어있는 경우)가 촉촉한 유지하는 문화에 물을 증류. </li><li> 문화를 모니터하고 필요에 따라 단계 1.7.1를 반복을 계속합니다. </li></ol></li><li> 3 절에 설명 된대로 형광 실체 현미경을 이용하여 제 령 애벌레를 방황 관찰한다. </li></ol> 2. 침윤성 종양의 유도 <ol><li> 침습성 종양의 유도를 위해 표 2에 주식을 사용합니다. </li><li> 다음과 같은 유전자형의 위의 단계 1.2에서 스타터 문화를 사용하여, Y EY-FLP1, W, 욕조 - Gal80, FRT40A; Act5C&gt; Y +&gt; 인 Gal4, UAS - GFP </li><li> LGL 4, FRT40A, UAS - 라스 V12 / CYO, W : 다음과 같은 유전자형의 &quot;테스트&quot;주식에 대한 스타터 문화를 준비 </li><li> &quot;테스트&quot;주식에서 &quot;테스터&quot;주식 ~ 10 여성 처녀 십 명의 남성을 수집합니다. </li><li> 비행 F와 함께 유리 병에 모두 배치하여 &quot;테스터&quot;및 &quot;테스트&quot;주식에서 남성과 여성을 건너짐 우드. </li><li> 25 ° C 배양기에서 십자가를 놓고 남성과 여성이 짝과 24-48 시간 동안 알을 낳을 수 있습니다. </li><li> 충분한 계란 증착 먼저 령 애벌레 문화가 건조되지 않도록 만드는 존재의 병을 확인합니다. <ol><li> (문화가 건조되어있는 경우)가 촉촉한 유지하는 문화에 멸균 증류수를 몇 방울을 추가합니다. </li><li> 필요에 따라 건조 단계를 반복 2.7.1의 문화를 지속적으로 모니터. </li></ol></li><li> 3 절에 설명 된대로 형광 실체 현미경을 이용하여 제 령 유충을 관찰합니다. </li></ol> 3. 양성 및 침윤성 종양의 관측 <ol><li> 양성 종양의 격리 및 시각화를위한 세 번째 령 유충을 사용합니다. <ol><li> 증류수에 페인트 붓을 적시고,이 페인트 브러시를 사용하여 배양 병의 벽에서 몇 번째 령 유충을 다 쳤어요. </li><li> 1X PBS와 우울증 슬라이드에 애벌레를 배치 한 다음 젖은 페인트 브러시 스크랩을 사용하여유충의 표피에서 어떤 음식 재료를 전자. </li><li> 페트리 접시에 애벌레를 놓고 유충을 고정시키기 30 분 -20 ° C 냉장고에 둡니다. <ol><li> FLYNAP를 사용하여 유충을 고정화하는 다른 방법. </li><li> 3.1.3.2에서 유리 병에 FLYNAP에 담근 FLYNAP 지팡이를 놓고 애벌레 유리 병하자 연결 유리 병을 연결 한 후 30 ~ 40 분간 방치. </li></ol></li><li> 빛 할로 카본 오일 한 방울을 추가 커버 유리 커버 및 녹색 형광 단백질 (GFP)을 시각화 할 수있는 능력을 가진 형광 실체 현미경을 이용하여 관찰, 유리 슬라이드에 고정 된 애벌레를 놓습니다. </li><li> 양성 종양 베어링 애벌레는 두개의 복잡한 존재하는 전방 지역에서 녹색 형광을합니다. </li></ol></li><li> 침습성 종양의 관찰 위의 단계 # 2에서 설정 한 문화 일에게 (유도 후​​) 10 애벌레를 선택합니다. 침략 종양 베어링 애벌레 확장 L을 가지고 있기 때문에 10 일째 유충이 선택됩니다일반적으로 ARVAL 무대와는 pupariate 실패합니다. </li><li> 대신 세 번째 령 애벌레 사용 일 10 애벌레를 제외하고 3.1.4 단계 3.1.1를 따르십시오. <ol><li> 하루 10 침습 종양 베어링 애벌레는 두개의 복잡한 존재하는 전방 지역에서 녹색 형광을합니다. </li></ol></li><li> 형광 현미경은 디지털 카메라가 장착되어있는 경우 다음 형광 양성 및 침입 종양 베어링 애벌레의 사진을 찍을. </li></ol> 4. 양성 및 침윤성 종양의 두개의 콤플렉스 및 추가 관측의 해부 유충의 반투명 표피 어려운 종양의 침윤 정도를 관찰 할 수 있습니다. 따라서 침략의 정도는 더 유충 밖으로 두개의 복잡한을 해부 시각화됩니다. 다음 단계는 두부 복잡한 해부하기 위해 이용되어야한다. <ol><li> 젖은 페인트 붓을 사용하면 F 제 령 (양성 종양) 유충 일 (침략 종양) 10 유충을 선택각각의 문화 튜브를 롬. </li><li> 차가운 1X PBS를 포함하는 해부 접시에 잘 애벌레를 놓습니다. 유충의 표피에서 어떤 음식 입자를 긁어 페인트 브러시를 사용합니다. <ol><li> 차가운 1X PBS를 포함하는 해부 접시의 신선한 잘 깨끗한 유충을 전송합니다. </li><li> 형광을 검출 할 수있는 실체 현미경을 이용하여 GFP의 형광의 유무를 확인합니다. 비 GFP 베어링 애벌레를 폐기하십시오. </li></ol></li><li> 해부 접시에 신선한 잘에 차가운 1X PBS의 1.0 ㎖를 추가하고 포셉 한 켤레를 사용하여 양성 또는 침습성 종양 (해부 프로토콜은 종양의 두 가지 유형에 대해 동일하게 유지) 중 하나를 베어링 유충을 전송합니다. </li><li> 앞쪽 끝에서 2/3rds에 대한 포셉 한 쌍을 사용하여 유충을 누릅니다. <ol><li> 포셉의 다른 쌍을 사용하여 스마트 유충의 후방 1/3rd를 분리하고 폐기. </li><li> 유충의 앞쪽에 2/3rds에 가자. 유충 내부 압력의 내용을 떼면유충 체강 배어 나오기 것이다. </li><li> 창자, 지방 몸과 체강 밖으로 분출 한 흔적이 유충의 다른 내부 내용을 제거하는 포셉 한 쌍을 사용합니다. </li><li> 유충의 입 후크를 잡고 애벌레 표피에 밀어 포셉 한 켤레를 사용하여 완전히 유충을 반전 포셉의 다른 쌍을 사용. </li><li> 부드럽게 조심스럽게 지방을 몸, 침샘, 창자, 날개 디스크 복잡하고 어떤 기관 튜브를 제거하는 집게를 사용합니다. 두개의 복잡한 이제 반전 유충의 입으로 훅에 연결된 볼 수 있어야합니다. 뇌 반구 및 복부 신경 코드 (VNC)은 여전히​​ VNC에서 나오는 신경을 통해 유충의 표피에 연결됩니다. </li><li> 부드럽게 두부 신경과 유충의 표피 사이의 연결을 중단 집게의 쌍을 사용합니다. </li><li> VNC와 유충의 표피 사이의 신경 연결이 끊어 및 여분의 지방 기관 및 기타 조직을 제거 할 때, 두개의 공동MPLEX 명확하게 표시 될 것입니다 만 입 후크에서 유충의 표피에 첨부됩니다. </li><li> 복잡한 항체 염색과 같은 다운 스트림 응용 프로그램에 이상 시각화 고정해야하는 경우 두개의 복잡한 애벌레 표피에 붙어 남아있을 수 있습니다. </li><li> 더 다운 스트림 응용 프로그램이 다음을 수행하지 될 경우 두개의 복잡한 애벌레 표피에서 분리하고 추가 관찰과 분석을 위해 설치 미디어를 기반으로하는 글리세롤의 드롭에 배치 할 수 있습니다. 설치 매체로 VECTASHIELD를 사용합니다. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Bale, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hedgehog+signaling+and+human+disease.">Hedgehog signaling and human disease.</a> Annu Rev Genomics Hum Genet. 3, 47-65 (2002).</li><li>Bier, E., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila,+an+emerging+model+for+cardiac+disease.">Drosophila, an emerging model for cardiac disease.</a> Gene. 342, 1-11 (2004).</li><li>Coombs, G. S., Covey, T. M., Virshup, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt+signaling+in+development,+disease+and+translational+medicine.">Wnt signaling in development, disease and translational medicine.</a> Curr Drug Targets. 9, 513-531 (2008).</li><li>Gistelinck, M., Lambert, J. C., Callaerts, P., Dermaut, B., Dourlen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+models+of+tauopathies:+what+have+we+learned.">Drosophila models of tauopathies: what have we learned.</a> Int J Alzheimers Dis. 2012, 970980 (2012).</li><li>Marsh, J. L., Thompson, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+in+the+study+of+neurodegenerative+disease.">Drosophila in the study of neurodegenerative disease.</a> Neuron. 52, 169-178 (2006).</li><li>Reiter, L. T., Bier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Drosophila+melanogaster+to+uncover+human+disease+gene+function+and+potential+drug+target+proteins.">Using Drosophila melanogaster to uncover human disease gene function and potential drug target proteins.</a> Expert Opin Ther Targets. 6, 387-399 (2002).</li><li>Valenta, T., Hausmann, G., Basler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+many+faces+and+functions+of+beta-catenin.">The many faces and functions of beta-catenin.</a> EMBO J. 31, 2714-2736 (2012).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li><li>Pagliarini, R. A., Xu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetic+screen+in+Drosophila+for+metastatic+behavior.">A genetic screen in Drosophila for metastatic behavior.</a> Science. 302, 1227-1231 (2003).</li><li>Wu, J. S., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+mosaic+analysis+with+a+repressible+cell+marker+(MARCM)+in+Drosophila.">A protocol for mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) in Drosophila.</a> Nat Protoc. 1, 2583-2589 (2006).</li><li>Boccaccio, C., Comoglio, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasive+growth:+a+MET-driven+genetic+programme+for+cancer+and+stem+cells.">Invasive growth: a MET-driven genetic programme for cancer and stem cells.</a> Nat Rev Cancer. 6, 637-645 (2006).</li><li>Srivastava, A., Pastor-Pareja, J. C., Igaki, T., Pagliarini, R., Xu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basement+membrane+remodeling+is+essential+for+Drosophila+disc+eversion+and+tumor+invasion.">Basement membrane remodeling is essential for Drosophila disc eversion and tumor invasion.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 2721-2726 (2007).</li><li>Wang, W., Eddy, R., Condeelis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cofilin+pathway+in+breast+cancer+invasion+and+metastasis.">The cofilin pathway in breast cancer invasion and metastasis.</a> Nat Rev Cancer. 7, 429-440 (2007).</li><li>Brand, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFP+as+a+cell+and+developmental+marker+in+the+Drosophila+nervous+system.">GFP as a cell and developmental marker in the Drosophila nervous system.</a> Methods Cell Biol. 58, 165-181 (1999).</li><li>Brand, A. H., Dormand, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GAL4+system+as+a+tool+for+unravelling+the+mysteries+of+the+Drosophila+nervous+system.">The GAL4 system as a tool for unravelling the mysteries of the Drosophila nervous system.</a> Curr Opin Neurobiol. 5, 572-578 (1995).</li><li>Vidal, M., Cagan, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+models+for+cancer+research.">Drosophila models for cancer research.</a> Curr Opin Genet Dev. 16, 10-16 (2006).</li><li>Parks, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+generation+of+high-resolution+deletion+coverage+of+the+Drosophila+melanogaster+genome.">Systematic generation of high-resolution deletion coverage of the Drosophila melanogaster genome.</a> Nat Genet. 36, 288-292 (2004).</li><li>Blair, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+mosaic+techniques+for+studying+Drosophila+development.">Genetic mosaic techniques for studying Drosophila development.</a> Development. 130, 5065-5072 (2003).</li><li>Xu, T., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+genetic+mosaics+in+developing+and+adult+Drosophila+tissues.">Analysis of genetic mosaics in developing and adult Drosophila tissues.</a> Development. 117, 1223-1237 (1993).</li><li>Xu, T., Wang, W., Zhang, S., Stewart, R. A., Yu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+tumor+suppressors+in+genetic+mosaics:+the+Drosophila+lats+gene+encodes+a+putative+protein+kinase.">Identifying tumor suppressors in genetic mosaics: the Drosophila lats gene encodes a putative protein kinase.</a> Development. 121, 1053-1063 (1995).</li><li>Rebay, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetic+screen+for+novel+components+of+the+Ras/Mitogen-activated+protein+kinase+signaling+pathway+that+interact+with+the+yan+gene+of+Drosophila+identifies+split+ends,+a+new+RNA+recognition+motif-containing+protein.">A genetic screen for novel components of the Ras/Mitogen-activated protein kinase signaling pathway that interact with the yan gene of Drosophila identifies split ends, a new RNA recognition motif-containing protein.</a> Genetics. 154, 695-712 (2000).</li><li>Therrien, M., Morrison, D. K., Wong, A. M., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetic+screen+for+modifiers+of+a+kinase+suppressor+of+Ras-dependent+rough+eye+phenotype+in+Drosophila.">A genetic screen for modifiers of a kinase suppressor of Ras-dependent rough eye phenotype in Drosophila.</a> Genetics. 156, 1231-1242 (2000).</li><li>Albini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+in+vitro+assay+for+quantitating+the+invasive+potential+of+tumor+cells.">A rapid in vitro assay for quantitating the invasive potential of tumor cells.</a> Cancer Res. 47, 3239-3245 (1987).</li><li>Zicha, D., Dunn, G. A., Brown, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+direct-viewing+chemotaxis+chamber.">A new direct-viewing chemotaxis chamber.</a> J Cell Sci. 99 (Pt 4), 769-775 (1991).</li><li>Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+developments+in+in+vivo+models+of+neoplasia.">New developments in in vivo models of neoplasia.</a> Cancer Metastasis Rev. 10, 191-192 (1991).</li><li>Mueller, B. M., Romerdahl, C. A., Trent, J. M., Reisfeld, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+spontaneous+melanoma+metastasis+in+scid+mice+with+an+antibody+to+the+epidermal+growth+factor+receptor.">Suppression of spontaneous melanoma metastasis in scid mice with an antibody to the epidermal growth factor receptor.</a> Cancer Res. 51, 2193-2198 (1991).</li><li>Konantz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+xenografts+as+a+tool+for+in+vivo+studies+on+human+cancer.">Zebrafish xenografts as a tool for in vivo studies on human cancer.</a> Ann N Y Acad Sci. 1266, 124-137 (2012).</li><li>McIntyre, R. E., vander Weyden, L., Adams, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+gene+discovery+in+the+mouse.">Cancer gene discovery in the mouse.</a> Curr Opin Genet Dev. 22, 14-20 (2012).</li><li>Mattison, J., vander Weyden, L., Hubbard, T., Adams, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+gene+discovery+in+mouse+and+man.">Cancer gene discovery in mouse and man.</a> Biochim Biophys Acta. 1796, 140-161 (2009).</li><li>Miles, W. O., Dyson, N. J., Walker, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+tumor+invasion+and+metastasis+in+Drosophila.">Modeling tumor invasion and metastasis in Drosophila.</a> Dis Model Mech. 4, 753-761 (2011).</li><li>Stefanatos, R. K., Vidal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+invasion+and+metastasis+in+Drosophila:+a+bold+past,+a+bright+future.">Tumor invasion and metastasis in Drosophila: a bold past, a bright future.</a> J Genet Genomics. 38, 431-438 (2011).</li><li>Beaucher, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+brain+tumor+metastases+express+both+neuronal+and+glial+cell+type+markers.">Drosophila brain tumor metastases express both neuronal and glial cell type markers.</a> Dev Biol. 301, 287-297 (2007).</li><li>Beaucher, M., Hersperger, E., Page-McCaw, A., Shearn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+ability+of+Drosophila+tumors+depends+on+MMP+activity.">Metastatic ability of Drosophila tumors depends on MMP activity.</a> Dev Biol. 303, 625-634 (2007).</li><li>Joyce, J. A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironmental+regulation+of+metastasis.">Microenvironmental regulation of metastasis.</a> Nat Rev Cancer. 9, 239-252 (2009).</li><li>Igaki, T., Pagliarini, R. A., Xu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+cell+polarity+drives+tumor+growth+and+invasion+through+JNK+activation+in+Drosophila.">Loss of cell polarity drives tumor growth and invasion through JNK activation in Drosophila.</a> Curr Biol. 16, 1139-1146 (2006).</li><li>Uhlirova, M., Jasper, H., Bohmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-cell-autonomous+induction+of+tissue+overgrowth+by+JNK/Ras+cooperation+in+a+Drosophila+tumor+model.">Non-cell-autonomous induction of tissue overgrowth by JNK/Ras cooperation in a Drosophila tumor model.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 13123-13128 (2005).</li><li>Uhlirova, M., Bohmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JNK-+and+Fos-regulated+Mmp1+expression+cooperates+with+Ras+to+induce+invasive+tumors+in+Drosophila.">JNK- and Fos-regulated Mmp1 expression cooperates with Ras to induce invasive tumors in Drosophila.</a> EMBO J. 25, 5294-5304 (2006).</li><li>Menut, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mosaic+genetic+screen+for+Drosophila+neoplastic+tumor+suppressor+genes+based+on+defective+pupation.">A mosaic genetic screen for Drosophila neoplastic tumor suppressor genes based on defective pupation.</a> Genetics. 177, 1667-1677 (2007).</li><li>Wu, M., Pastor-Pareja, J. C., Xu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+Ras(V12)+and+scribbled+clones+induces+tumour+growth+and+invasion.">Interaction between Ras(V12) and scribbled clones induces tumour growth and invasion.</a> Nature. 463, 545-548 (2010).</li></ol>

I는 공개 아무것도 없어.

암은 과거에 비해 훨씬 더 잘 이해 오늘날 복잡한 질병입니다. 그러나, 많은 여전히​​ 배우고 우리가 기본 메커니즘의 완전한 그림이 전에 설명해야합니다. 여기에 제시된 간단한 프로토콜은 가능한 유전자 전체 유기체의 양성 및 침입 종양을 유발하고이 모델에서 종양의 진행과 관련된 생물학을 연구 할 수 있습니다. 초파리 및 다른 생물체에서 기존 기술의 대부분은 종양 발생 및 전이...

전이 된 상태로 양성의 종양의 진행 상황은 본체 (8)에 존재하는 보호 메커니즘을 회피 특징 단계 현명한 방법입니다. 예를 들어 몸에있는 종양 세포는 세포 사멸과 면역 체계를 회피 지하실 멤브레인라고하는 특수 세포 외 기질 (ECM)을 돌파구와 주변 세포 (8)에 의해 부과 된 사회 통제를 극복 할 수 있어야합니다. 이는 암세포가 전이 불리는 프로세스에서 먼 위치를 이주 및 정착 할 수있는 능력을 습득하는 것이 현명 단계 진행을 통해서이다. 종양 세포는 몸에 의해 부과 된 장벽을 극복하는 방법에 대한 우리의 이해는하지만, 연구의 새로운 그림이 암 세포 11 ~ 13로 정상 발달 과정 및 신호 전달 경로의 반복 사용으로 지금까지의 포인트를 수행, 아직 초기 단계에있다. 열매는 초파리 melanogaster의 우리 싶게에 엄청난 기여하고있다 비행지난 몇 년간 14 ~ 17에 걸쳐 개발 정교한 유전자 기술의 사용을 통해 정상적인 발달과 질병의 erstanding. 우리는 다양한 종양 유전자와 종양 억제 유전자 18-22의 더 나은 이해에 도착했습니다 돌연변이 유발 및 과발현 도구를 사용하여. 그러나, 종양 전이가 세포 배양 모델 (23, 24)뿐만 아니라, 다양한 이종 이식 모델에서 25-27 주로 연구되어 여러 유전자 ​​병변 간의 협력의 결과이다. 그들은 완전히 살아있는 유기체에서 발견되는 조건을 모방하지 않는 한이 모델 강력한하지만 자신의 제한이 있습니다. 또한, 마우스에서 사용할 수있는 형질 전환 모델은 복잡하고 침략적인 행동 (28, 29)의 유전자 분석에 도움이되지 않습니다. 몇몇 연구는 초파리 (30, 31)에서 종양 세포의 침윤을 이해하려고했습니다. 이러한 기술은 주로 호스트 일차 종양 이식을 활용하고 TRA 추적에 의존이웃 조직 (32, 33)의 침략 종양을 nsplanted. MARCM 10라는 강력한 기술은 초파리 9 종양의 침략을 모델로 Pagliarini와 쑤으로 적응했다. 종양의 침윤이 우아한 유전 모델링은 활성화 된 종양 유전자 및 세포 극성의 손실 사이의 협력을 악용. 이러한 모델링의 전력은 침습 종양 따라서 조직의 이식을위한 필요성을 우회 본래 유기체에서 생성된다는 사실에있다. 종양의 협력에 대해 가지고, 라스 V12 등 활성화 된 종양 유전자는 애벌레 눈 더듬이 디스크에있는 세포의 클론으로 표현된다. MARCM 기술의 결과로 이들 클론은 쉽게 시각화를 위해 녹색 형광 단백질 (GFP)로 표시되어 치명적인 거대한 애벌레 남겼, 대형 디스크와 같은 세포 극성 돌연변이에 대한 동형 접합 만들어집니다. 결과는 GFP가 침습성 종양 태그입니다 두개의 복잡한. 이 보고서 I유도하는 방법을 설명하고, 그대로 애벌레의 맥락에서 밖으로 해부 두개의 단지에 두 가지 침습적 종양을 시각화. 여기에 제시된 종양 유도 초파리의 두 번째 염색체에 시약을 사용한다. 표 2에서, 내가 같은 목적을 위해 이용 될 수있는 X와 3 번째 염색체에 주식의 목록을 제공합니다. 나는이 간단한 프로토콜은 종양의 진행의 분자 기초를 이해에 관심이 연구자들에게이 기술을 쉽게 액세스 할 수 있도록 것이라고 믿는다.

<table><tbody><tr><td>10X PBS (phosphate buffered saline) pH 7.2 stock solution</td><td>Invitrogen, Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chilled 1X PBS pH7.2 working solution</td><td>Invitrogen, Sigma Aldrich</td><td></td><td>Make fresh and refrigerate, can be used up to a week</td></tr><tr><td>Flynap</td><td>Carolina Biologicals</td><td></td><td>Fly anesthesia needed to anesthetize larvae</td></tr><tr><td>Fixative</td><td>0.1M PIPES, pH 7.2, 4% Paraformaldehyde</td><td></td><td>Needed to fix the dissected cephalic complex</td></tr><tr><td>Ice Bucket</td><td>Several</td><td></td><td>Maintain solutions on ice. Also, dissect cephalic complex in chilled 1X PBS and then place on ice in an Eppendorf tube</td></tr><tr><td>1.7ml Eppendorf tube</td><td>Various</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glass slides, cover glass</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vectashield Mounting Media or any other mounting media</td><td>Vector Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Halocarbon 200 or 700 Oil</td><td>Polysciences Inc. or Halocarbon.com</td><td></td><td>Halocarbon 200 is used to mount the larvae for visualization on a fluorescence stereoscope</td></tr><tr><td>Sally Hansen &quot;Hard as Nails&quot; nail polish</td><td>Can be found at any general merchandise store</td><td></td><td>Needed to seal the edges of Coverslip</td></tr><tr><td>A Leica MZ16.5 fluorescence stereomicroscope or any other fluorescence stereomicroscope</td><td>Leica and others</td><td></td><td>Needed to observe the GFP fluorescence in larvae</td></tr><tr><td>Dumont #5 forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pyrex 9 well spot plate or any other dissection dish</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paint Brush</td><td>Can be found at any general merchandise store</td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Table 1.&lt;/strong&gt; Materials needed to perform the experimental protocol presented in this article.</td></tr></tbody></table>

a protocol for genetic induction and visualization of benign and invasive tumors in cephalic complexes of drosophila melanogaster

초파리는 복잡한 질병 1-7에 대한 우리의 이해에 상당히 기여하고 있습니다 지난 몇 년과 오늘 정상 개발 및 질병의 유전 적 기초에 대한 우리의 이해를 조명하고있다. 전이 된 상태로 양성의 종양의 진행 상황은 복잡한 이벤트 8하고 우리가 더 나은이 질병 (9)의 유전 적 기초를 이해하는 데 도움이 초파리 모델로하고있다. 여기에 유 전적으로 유도 관찰하고 초파리 유충에 종양의 진행을 분석하는 간단한 프로토콜을 제시한다. 종양 유도 기술은 MARCM 시스템 (10)을 기반으로 활성화 된 종양 유전자, 라스 V12 세포 극성 유전자의 손실 (남겼, 디스크 크고 치명적인 거대한 애벌레) 침략 종양 9를 생성 사이의 협력을 활용한다. 나는이 종양은 그대로 유충으로 시각화 할 수있는 방법을 설명하고그럼 어떻게 이러한 추가 분석을 위해 해부 할 수 있습니다. 여기에 제시된 단순화 된 프로토콜은 가능한이 기술은 종양의 침공에있는 유전자의 역할을 이해에 관심있는 연구자에 의해 이용 될 수 있도록해야한다.

프로토콜의 결과는 여기에 제시된 바와 같이, 사용자는 유충의 눈 더듬이, 상상 디스크에 활성화 된 종양 유전자를 과발현에 의해 양성 종양을 유도 할 수있을 것입니다. 사용자는 또한 세포 극성 유전자의 돌연변이 세포의 복제에 활성화 된 종양 유전자를 과발현에 의해 눈 더듬이 디스크에 침략 종양을 유도 할 수있을 것입니다. 종양은 쉽게 전체 유충이나 애벌레 체강 (그림 1) 중 ?...

Watch this Scientific Journal Video about A Protocol for Genetic Induction and Visualization of Benign and Invasive Tumors in Cephalic Complexes of Drosophila melanogaster at JoVE.com

A Protocol for Genetic Induction and Visualization of Benign and Invasive Tumors in Cephalic Complexes of Drosophila melanogaster

RAS V12 및 남겼, 종양 세포는 또한 침략적인 행동을 표시 초파리에있는 종양의 성장 결과와 같은 세포 극성 유전자의 돌연변이와 같은 활성화 된 발암 유전자 간의 협력. 여기에 양성 및 침입 종양의 유도 및 관찰을위한 간단한 프로토콜을 제시한다.

의 두부 컴플렉스 유전 유도하고 양성 및 침윤성 종양의 시각화를위한 프로토콜<em&gt; 초파리</em

Drosophila has illuminated our  understanding of the genetic basis of normal development and disease for the  past several decades and today it continues ...

a-protocol-for-genetic-induction-visualization-benign-invasive-tumors

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

A Protocol for Genetic Induction and Visualization of Benign and Invasive Tumors in Cephalic Complexes of Drosophila melanogaster

9.5K 조회수.  Western Kentucky University.  RAS V12 및 남겼, 종양 세포는 또한 침략적인 행동을 표시 초파리에있는 종양의 성장 결과와 같은 세포 극성 유전자의 돌연변이와 같은 활성화 된 발암 유전자 간의 협력. 여기에 양성 및 침입 종양의 유도 및 관찰을위한 간단한 프로토콜을 제시한다. 

비디오: A Protocol for Genetic Induction and Visualization of Benign and Invasive Tumors in Cephalic Complexes of Drosophila melanogaster

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the context of a whole organism. Sophisticated techniques to generate genetic mosaics facilitate induction of visually marked, genetically defined clones surrounded by normal tissue. The clones can be analyzed through diverse molecular, cellular and omics approaches. This study describes how to generate fluorescently labeled clonal tumors of varying malignancy in the eye/antennal imaginal discs (EAD) of Drosophila larvae using the Mosaic Analysis with a Repressible Cell Marker (MARCM) technique. It describes procedures how to recover the mosaic EAD and brain from the larvae and how to process them for simultaneous imaging of fluorescent transgenic reporters and antibody staining. To facilitate molecular characterization of the mosaic tissue, we describe a protocol for isolation of total RNA from the EAD. The dissection procedure is suitable to recover EAD and brains from any larval stage. The fixation and staining protocol for imaginal discs works with a number of transgenic reporters and antibodies that recognize Drosophila proteins. The protocol for RNA isolation can be applied to various larval organs, whole larvae, and adult flies. Total RNA can be used for profiling of gene expression changes using candidate or genome-wide approaches. Finally, we detail a method for quantifying invasiveness of the clonal tumors. Although this method has limited use, its underlying concept is broadly applicable to other quantitative studies where cognitive bias must be avoided.

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

This protocol demonstrates how to generate fluorescently marked, genetically defined clonal tumors in the Drosophila eye/antennal imaginal discs (EAD). It describes how to dissect the EAD and brain from the third instar larvae and how to process them to visualize and quantify gene expression changes and tumor invasiveness.

그만큼<em&gt; 초파리</em&gt; 가상적인 디스크 종양 모델 : 유전 모자이크를 사용하여 유전자 발현 및 종양 침윤의 시각화 및 정량화

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

연구

암 연구학

Induction and Diagnosis of Tumors in Drosophila Imaginal Disc Epithelia

In the early stages of cancer, transformed mutant cells show cytological abnormalities, begin uncontrolled overgrowth, and progressively disrupt tissue organization. Drosophila melanogaster has emerged as a popular experimental model system in cancer biology to study the genetic and cellular mechanisms of tumorigenesis. In particular, genetic tools for Drosophila imaginal discs (developing epithelia in larvae) enable the creation of transformed pro-tumor cells within a normal epithelial tissue, a situation similar to the initial stages of human cancer. A recent study of tumorigenesis in Drosophila wing imaginal discs, however, showed that tumor initiation depends on the tissue-intrinsic cytoarchitecture and the local microenvironment, suggesting that it is important to consider the region-specific susceptibility to tumorigenic stimuli in evaluating tumor phenotypes in imaginal discs. To facilitate phenotypic analysis of tumor progression in imaginal discs, here we describe a protocol for genetic experiments using the GAL4-UAS system to induce neoplastic tumors in wing imaginal discs. We further introduce a diagnosis method to classify the phenotypes of clonal lesions induced in imaginal epithelia, as a clear classification method to discriminate various stages of tumor progression (such as hyperplasia, dysplasia, or neoplasia) had not been described before. These methods might be broadly applicable to the clonal analysis of tumor phenotypes in various organs in Drosophila.

Induction and Diagnosis of Tumors in Drosophila Imaginal Disc Epithelia

Mosaic clone analysis in Drosophila imaginal disc epithelia is a powerful model system to study the genetic and cellular mechanisms of tumorigenesis. Here we describe a protocol to induce tumors in Drosophila wing imaginal discs using the GAL4-UAS system, and introduce a diagnosis method to classify the tumor phenotypes.

종양의 유도 및 진단<em&gt; Drosophila</em&gt; 상피 디스크 상피 세포

In the early stages of cancer, transformed mutant cells show cytological abnormalities, begin uncontrolled overgrowth, and progressively disrupt tissue ...

Tumor Allotransplantation in Drosophila melanogaster with a Programmable Auto-Nanoliter Injector

This protocol describes the allotransplantation of tumors in Drosophila melanogaster using an auto-nanoliter injection apparatus. With the use of an autoinjector apparatus, trained operators can achieve more efficient and consistent transplantation results compared to those obtained using a manual injector. Here, we cover topics in a chronological fashion: from the crossing of Drosophila lines, to the induction and dissection of the primary tumor, transplantation of the primary tumor into a new adult host and continued generational transplantation of the tumor for extended studies. As a demonstration, here we use Notch intracellular domain (NICD) overexpression induced salivary gland imaginal ring tumors for generational transplantation. These tumors can first be reliably induced in a transition-zone microenvironment within larval salivary gland imaginal rings, then allografted and cultured in vivo to study continued tumor growth, evolution, and metastasis. This allotransplantation method can be useful in potential drug screening programs, as well as for studying tumor-host interactions.

Tumor Allotransplantation in Drosophila melanogaster with a Programmable Auto-Nanoliter Injector

This protocol provides detailed guidance for the initial and continued generational allotransplantation of Drosophila tumors into the abdomen of adult hosts for studying various aspects of neoplasia. Using an autoinjector apparatus, researchers can achieve improved efficiency and tumor yields compared to those achieved by traditional, manual methods.

프로그래밍 가능한 자동 나노리터 인젝터 를 사용한 초파리 멜라노가스터 에서의 종양 동종이식

This protocol describes the allotransplantation of tumors in Drosophila melanogaster using an auto-nanoliter injection apparatus. With the use of an ...

Microinjection Techniques for Studying Mitosis in the Drosophila melanogaster Syncytial Embryo

This protocol describes the use of the Drosophila melanogaster syncytial embryo for studying mitosis1. Drosophila has useful genetics with a sequenced genome, and it can be easily maintained and manipulated. Many mitotic mutants exist, and transgenic flies expressing functional fluorescently (e.g. GFP) - tagged mitotic proteins have been and are being generated. Targeted gene expression is possible using the GAL4/UAS system2. 

The Drosophila early embryo carries out multiple mitoses very rapidly (cell cycle duration, &asymp;10 min). It is well suited for imaging mitosis, because during cycles 10-13, nuclei divide rapidly and synchronously without intervening cytokinesis at the surface of the embryo in a single monolayer just underneath the cortex. These rapidly dividing nuclei probably use the same mitotic machinery as other cells, but they are optimized for speed; the checkpoint is generally believed to not be stringent, allowing the study of mitotic proteins whose absence would cause cell cycle arrest in cells with a strong checkpoint. Embryos expressing GFP labeled proteins or microinjected with fluorescently labeled proteins can be easily imaged to follow live dynamics (Fig. 1). In addition, embryos can be microinjected with function-blocking antibodies or inhibitors of specific proteins to study the effect of the loss or perturbation of their function3. These reagents can diffuse throughout the embryo, reaching many spindles to produce a gradient of concentration of inhibitor, which in turn results in a gradient of defects comparable to an allelic series of mutants. Ideally, if the target protein is fluorescently labeled, the gradient of inhibition can be directly visualized4. It is assumed that the strongest phenotype is comparable to the null phenotype, although it is hard to formally exclude the possibility that the antibodies may have dominant effects in rare instances, so rigorous controls and cautious interpretation must be applied. Further away from the injection site, protein function is only partially lost allowing other functions of the target protein to become evident.

Microinjection Techniques for Studying Mitosis in the Drosophila melanogaster Syncytial Embryo

This protocol describes the use of microinjection and high resolution imaging in the Drosophila melanogaster syncytial embryo to study mitosis.

의 유사 분열 유학을위한 Microinjection 기법 Drosophila melanogaster Syncytial 엠브료

This protocol describes the use of the Drosophila melanogaster syncytial embryo  for studying mitosis1.  Drosophila has useful genetics with a sequenced ...

생물학

Mesoscopic Fluorescence Tomography for In-vivo Imaging of Developing Drosophila

Visualizing developing organ formation as well as progession and treatment of disease often heavily relies on the ability to optically interrogate molecular and functional changes in intact living organisms. Most existing optical imaging methods are inadequate for imaging at dimensions that lie between the penetration limits of modern optical microscopy (0.5-1mm) and the diffusion-imposed limits of optical macroscopy (&gt;1cm) [1]. Thus, many important model organisms, e.g. insects, animal embryos or small animal extremities, remain inaccessible for in-vivo optical imaging. 
Although there is increasing interest towards the development of nanometer-resolution optical imaging methods, there have not been many successful efforts in improving the imaging penetration depth. The ability to perform in-vivo imaging beyond microscopy limits is in fact met with the difficulties associated with photon scattering present in tissues. Recent efforts to image entire embryos for example [2,3] require special chemical treatment of the specimen, to clear them from scattering, a procedure that makes them suitable only for post-mortem imaging. These methods however evidence the need for imaging larger specimens than the ones usually allowed by two-photon or confocal microscopy, especially in developmental biology and in drug discovery.
We have developed a new optical imaging technique named Mesoscopic Fluorescence Tomography [4], which appropriate for non-invasive in-vivo imaging at dimensions of 1mm-5mm. The method exchanges resolution for penetration depth, but offers unprecedented tomographic imaging performance and it has been developed to add time as a new dimension in developmental biology observations (and possibly other areas of biological research) by imparting the ability to image the evolution of fluorescence-tagged responses over time. As such it can accelerate studies of morphological or functional dependencies on gene mutations or external stimuli, and can importantly, capture the complete picture of development or tissue function by allowing longitudinal time-lapse visualization of the same, developing organism.
The technique utilizes a modified laboratory microscope and multi-projection illumination to collect data at 360-degree projections. It applies the Fermi simplification to Fokker-Plank solution of the photon transport equation, combined with geometrical optics principles in order to build a realistic inversion scheme suitable for mesoscopic range. This allows in-vivo whole-body visualization of non-transparent three-dimensional structures in samples up to several millimeters in size.
We have demonstrated the in-vivo performance of the technique by imaging three-dimensional structures of developing Drosophila tissues in-vivo and by following the morphogenesis of the wings in the opaque Drosophila pupae in real time over six consecutive hours.

Mesoscopic Fluorescence Tomography for In-vivo Imaging of Developing Drosophila

Mesoscopic fluorescence tomography operates beyond the penetration limits of tissue-sectioning fluorescence microscopy. The technique is based on multi-projection illumination and a photon transport description. We demonstrate in-vivo whole-body 3D visualization of the morphogenesis of GFP-expressing wing imaginal discs in Drosophila melanogaster.

에 대한 Mesoscopic 형광 Tomography 인 - 생체내</em개발> 이미징 Drosophila</em

Visualizing  developing organ formation as well as progession and treatment of disease often  heavily relies on the ability to optically interrogate ...

Imaging and Analysis of Tissue Orientation and Growth Dynamics in the Developing Drosophila Epithelia During Pupal Stages

Within multicellular organisms, mature tissues and organs display high degrees of order in the spatial arrangements of their constituent cells. A remarkable example is given by sensory epithelia, where cells of the same or distinct identities are brought together via cell-cell adhesion showing highly organized planar patterns. Cells align to one another in the same direction and display equivalent polarity over large distances. This organization of the mature epithelia is established over the course of morphogenesis. To understand how the planar arrangement of the mature epithelia is achieved, it is crucial to track cell orientation and growth dynamics with high spatiotemporal fidelity during development in vivo. Robust analytical tools are also essential to identify and characterize local-to-global transitions. The Drosophila pupa is an ideal system to evaluate oriented cell shape changes underlying epithelial morphogenesis. The pupal developing epithelium constitutes the external surface of the immobile body, allowing long-term imaging of intact animals. The protocol described here is designed to image and analyze cell behaviors at both global and local levels in the pupal abdominal epidermis as it grows. The methodology described can be easily adapted to the imaging of cell behaviors at other developmental stages, tissues, subcellular structures, or model organisms.

Imaging and Analysis of Tissue Orientation and Growth Dynamics in the Developing Drosophila Epithelia During Pupal Stages

This protocol is designed for the imaging and analysis of the dynamics of cell orientation and tissue growth in the Drosophila abdominal epithelia as the fruit fly undergoes metamorphosis. The methodology described here can be applied to the study of different developmental stages, tissues, and subcellular structures in Drosophila or other model organisms.

푸팔 단계 동안 개발 초파리 에피텔리아에서 조직 방향 과 성장 역학의 이미징 및 분석

Within multicellular organisms, mature tissues and organs display high degrees of order in the spatial arrangements of their constituent cells. A ...

발생학

Whole Animal Imaging of Drosophila melanogaster using Microcomputed Tomography

Biomedical imaging tools permit investigation of molecular mechanisms across spatial scales, from genes to organisms. Drosophila melanogaster, a well-characterized model organism, has benefited from the use of light and electron microscopy to understand gene function at the level of cells and tissues. The application of imaging platforms that allow for an understanding of gene function at the level of the entire intact organism would further enhance our knowledge of genetic mechanisms. Here a whole animal imaging method is presented that outlines the steps needed to visualize Drosophila at any developmental stage using microcomputed tomography (&#181;-CT). The advantages of &#181;-CT include commercially available instrumentation and minimal hands-on time to produce accurate 3D information at micron-level resolution without the need for tissue dissection or clearing methods. Paired with software that accelerate image analysis and 3D rendering, detailed morphometric analysis of any tissue or organ system can be performed to better understand mechanisms of development, physiology, and anatomy for both descriptive and hypothesis testing studies. By utilizing an imaging workflow that incorporates the use of electron microscopy, light microscopy, and &#181;-CT, a thorough evaluation of gene function can be performed, thus furthering the usefulness of this powerful model organism.

Whole Animal Imaging of Drosophila melanogaster using Microcomputed Tomography

A protocol is presented that allows for the visualization of intact Drosophila melanogaster at any stage of development using microcomputed tomography.

마이크로 컴퓨팅 단층 촬영을 사용하여 드로소필라 멜라노가스터의 전체 동물 이미징

Biomedical imaging tools permit investigation of molecular mechanisms across spatial scales, from genes to organisms. Drosophila melanogaster, a ...

Visualizing Cytoskeleton-Dependent Trafficking of Lipid-Containing Organelles in Drosophila Embryos

Early Drosophila embryos are large cells containing a vast array of conventional and embryo-specific organelles. During the first three hours of embryogenesis, these organelles undergo dramatic movements powered by actin-based cytoplasmic streaming and motor-driven trafficking along microtubules. The development of a multitude of small, organelle-specific fluorescent probes (FPs) makes it possible to visualize a wide range of different lipid-containing structures in any genotype, allowing live imaging without requiring a genetically encoded fluorophore. This protocol shows how to inject vital dyes and molecular probes into Drosophila embryos to monitor the trafficking of specific organelles by live imaging. This approach is demonstrated by labeling lipid droplets (LDs) and following their bulk movement by particle image velocimetry (PIV). This protocol provides a strategy amenable to the study of other organelles, including lysosomes, mitochondria, yolk vesicles, and the ER, and for tracking the motion of individual LDs along microtubules. Using commercially available dyes brings the benefits of separation into the violet/blue and far-red regions of the spectrum. By multiplex co-labeling of organelles and/or cytoskeletal elements via microinjection, all the genetic resources in Drosophila are available for trafficking studies without the need to introduce fluorescently tagged proteins. Unlike genetically encoded fluorophores, which have low quantum yields and bleach easily, many of the available dyes allow for rapid and simultaneous capture of several channels with high photon yields.

Visualizing Cytoskeleton-Dependent Trafficking of Lipid-Containing Organelles in Drosophila Embryos

In the early Drosophila embryo, many organelles are motile. In principle, they can be imaged live via specific fluorescent probes, but the eggshell prevents direct application to the embryo. This protocol describes how to introduce such probes via microinjection, and then analyze bulk organelle motion via particle image velocimetry.

초파리 배아에서 지질 함유 소기관의 세포 골격 의존성 밀매 시각화

Early Drosophila embryos are large cells containing a vast array of conventional and embryo-specific organelles. During the first three hours of ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense organs provide an excellent model system for the study of mechanosensation. This protocol describes a simple touch behavior in fruit flies which can be used to identify mutations that interfere with mechanosensation. The tactile stimulation of a macrochaete bristle on the thorax of flies elicits a grooming reflex from either the first or third leg. Mutations that interfere with mechanotransduction (such as NOMPC), or with other aspects of the reflex arc, can inhibit the grooming response. A traditional screen of adult behaviors would have missed mutants that have essential roles during development. Instead, this protocol combines the touch screen with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) to allow for only limited regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP). By testing MARCM clones for abnormal behavioral responses, it is possible to screen a collection of lethal p-element mutations to search for new genes involved in mechanosensation that would have been missed by more traditional methods.

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

의 Mechanosensation에 대한 행동 분석 클론의 MARCM은 기반<em&gt; 초파리</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

신경과학

Visualization of the Axonal Projection Pattern of Embryonic Motor Neurons in Drosophila

The establishment of functional neuromuscular circuits relies on precise connections between developing motor axons and target muscles. Motor neurons extend growth cones to navigate along specific pathways by responding to a large number of axon guidance cues that emanate from the surrounding extracellular environment. Growth cone target recognition also plays a critical role in neuromuscular specificity. This work presents a standard immunohistochemistry protocol to visualize motor neuron projections of late stage-16 Drosophila melanogaster embryos. This protocol includes a few key steps, including a genotyping procedure, to sort the desired mutant embryos; an immunostaining procedure, to tag embryos with fasciclin II (FasII) antibody; and a dissection procedure, to generate filleted preparations from fixed embryos. Motor axon projections and muscle patterns in the periphery are much better visualized in flat preparations of filleted embryos than in whole-mount embryos. Therefore, the filleted preparation of fixed embryos stained with FasII antibody provides a powerful tool to characterize the genes required for motor axon pathfinding and target recognition, and it can also be applied to both loss-of-function and gain-of-function genetic screens.

Visualization of the Axonal Projection Pattern of Embryonic Motor Neurons in Drosophila

This work details a standard immunohistochemistry method to visualize motor neuron projections of late stage-16 Drosophila melanogaster embryos. The filleted preparation of fixed embryos stained with FasII antibody provides a powerful tool to characterize the genes required for motor axon pathfinding and target recognition during neural development.

배아 운동 뉴런의 Axonal 투영 패턴의 시각화<em&gt; Drosophila</em

The establishment of functional neuromuscular circuits relies on precise connections between developing motor axons and target muscles. Motor neurons ...

의 두부 컴플렉스 유전 유도하고 양성 및 침윤성 종양의 시각화를위한 프로토콜

요약

더 많은 비디오 탐색

이 비디오의 챕터

그만큼

종양의 유도 및 진단

프로그래밍 가능한 자동 나노리터 인젝터 를 사용한 초파리 멜라노가스터 에서의 종양 동종이식

의 유사 분열 유학을위한 Microinjection 기법 Drosophila melanogaster Syncytial 엠브료

에 대한 Mesoscopic 형광 Tomography 인 - 생체내 이미징 Drosophila

푸팔 단계 동안 개발 초파리 에피텔리아에서 조직 방향 과 성장 역학의 이미징 및 분석

마이크로 컴퓨팅 단층 촬영을 사용하여 드로소필라 멜라노가스터의 전체 동물 이미징

초파리 배아에서 지질 함유 소기관의 세포 골격 의존성 밀매 시각화

의 Mechanosensation에 대한 행동 분석 클론의 MARCM은 기반

배아 운동 뉴런의 Axonal 투영 패턴의 시각화