우리는 통찰력있는 제안과 의견, 그리고 마우리 Grassano, 마리나 Boido 및 촬영 Ermira Pajaj에 대한 Annalisa 익살 감사합니다. 이 작품은 FP7-MC-214003-2 (마리 퀴리 초기 교육 네트워크 AXREGEN)와 COMPAGNIA 디 산 파올로, gliarep 프로젝트에 의해 투자되었다.

1. 미리 수술 <ol><li> 1.5 ML 튜브에 로즈 벵골 무게 15 MG / ML의 최종 농도에 도달 할 때까지 멸균 생리 식염수에 용해. 0.2 μm의 필터를 통해 소독을 필터링하고 최대 2 개월 상온에서 어둠에 저장합니다. </li><li> 고압 증기 멸균하여 모든 수술기구를 소독. 외과 영역 수술을 시작하기 전에 한 시간 미만을 소독해야한다. </li><li> 주입되는 로즈 벵골의 복용량을 조정하려면 마우스 체중을 기록합니다. 우리는 현재 프로토콜 12 주 오래 된 여성 CD1 생쥐의 10 μL / g의 동물 무게를 주입했다. 로즈 벵골의 양을 원하는 대뇌 피질의 병변의 크기는 쉽게 다른 복용량 (일반적으로 2 μL / g, 5 μL / g 또는 10 G / μL 체중) 테스트하여 예비 실험을 별도의 세트에서 확인할 수 생산하는 데 필요한. 주입되는 로즈 벵골의 양, 광원의 특히 유형 실험 조건에 따라 크게 달라집니다사용 및 빛의 노출의 기간. 본 연구에서는 10 g / μL (150 ㎍ / g) 용량이 다른 그룹이보고 된 반면, 15 분 동안 빛에 노출에 photothrombosis을 유도 할 필요가 발견되었다 50 ㎍ / g 6,8 및 100 ㎍ / g 이하도 10 복강 내 주입 photothrombotic 병변을 유도하기에 충분했다. </li></ol> 2. 마취 절차 <ol><li> 50 % 투명 유도 챔버 (유도 3.5-4 %, 유지 1.5 %) (v / v)의 oxygen/50 % (v / v)의 일산화이 질소 가스 혼합물에서 isoflurane을 가진 생쥐를 마취. 가스 마취 동물의 빠른 웨이크을 허용하고 마취 가스의 레벨을 쉽게 조절할 수 있습니다. 또는, 마우스는 케타민을 - xylazine 혼합하여 마취를 할 수 있습니다. </li><li> 깊은 마취에 도달하면, 얼굴에 마스크를 사용하여 마취를 유도 챔버에서 마취 동물을 제거 정위 프레임에 배치하고 유지합니다. isoflura를 조정네브래스카 선량 적절한 마취 수준을 달성 할 수 있습니다. 절차 전반에 걸쳐 호흡 속도를 모니터링하고 (40 - 분당 60 호흡) 상수 있는지 확인합니다. </li><li> 동물이 깊은 마취인지 확인하기 위해 발가락 핀치를 사용합니다. </li><li> 건조에서 눈을 방지하기 위해 눈 연고를 적용합니다. </li><li> 조심스럽게 수술을 통해 온도를 모니터링하기 위해 직장 프로브를 삽입합니다. ± 0.5 ° C. 37에서 마우스의 체온을 유지하기 위해 관련 피드백 제어 가열 패드를 설정 </li></ol> 3. 대상 영역의 조명 수술 <ol><li> 전기 면도기와 마우스 두피를 면도. </li><li> 단단히 머리를 보호하고 외부 도관에 귀 막대를 삽입합니다. 손상 고막을하지 않도록주의해야합니다. </li><li> 면봉을 사용하여 70 % 에탄올과 베타 딘의 와이프를 번갈아 표면에 피부를 소독. </li><li> 아이 르에서 정중선을 따라 절개를 만들기 위해 메스를 사용하여목 아래 VEL. 두개골 노출 유지하기 위해 피부 견인기를 적용합니다. </li><li> 부드럽게 메스와 두개골의 가장자리에 periostium을 철회하고 두개골 표면이 멸균 면봉을 사용하여 건조 할 수 있습니다. 브레 그마 및 람다를 식별합니다. 기준점으로 브레 그마에 유리 마이크로 피펫을 꽂은 후, 관심 영역의 좌표로 이동합니다. 이 문서에 대해 선택한 관심 영역은 대략 둥글게 모양입니다 브레 그마에 가로 약 2mm를 중심으로, 그리고 프랭클린 마우스 뇌 아틀라스에 따라 감각 피질의 많은 부분을 포함하고 약 30 mm 2의 지역을 커버 팍시 노스 11. </li><li> 참조 점으로 그 위치를 표시하고 빛의 산란을 방지하지만 압력을 발휘하지 관심을 지불 두개골 표면과 밀착 광섬유를 넣어. 조명 영역은 광섬유 GUI의 끝에 작은 구멍이나 모자와 두개골에 마스크를 적용하여 제한 할 수 있습니다드. </li></ol> 4. 로즈 벵골 주입 및 활성화 <ol><li> 1 ML의 주사기에 로즈 벵골 솔루션을로드하고 체중의 10 μL / g의 용량에 따라 주입되는 양을 계산합니다. </li><li> 느린 복강 주사로 이동합니다. </li><li> 염료 확산시켜 혈류를 입력합니다. 5 분 후 형광 조명을 켭니다. 빛의 다른 소스에 의해 동물의 조명을 피하십시오. 우리는 150 W 강도 광섬유 조명을 사용했다. </li><li> 조명의 15 분 후, 빛의 노출을 중지하고 상처를 봉합. 조명의 5 분은 이미 경색을 생산하고 10 분 최대 효과 12를 얻을 가능성이 충분하다. 가변성을 최소화하기 위해, 우리는 15 분 동안 조명을 선택합니다. </li></ol> 5. 봉합 <ol><li> 피부 견인기를 제거하고 탈수를 방지하기 위해 멸균 생리 식염수를 적용합니다. </li><li> 반대로 절단 needl를 사용하여 상처를 닫습니다전자 및 실크 또는 나일론 봉합 실. </li><li> 완전히 깨어 때까지 마취 전달을 방해,주의 깊게 정위 장치에서 마우스를 제거하고 미리 예열 가열 패드에 넣어, 다음의 케이지로 돌아갑니다. 체온 경색 확장에 다양성을 제한하는 절차를 통해주의 깊게 모니터링해야합니다. 농도와 투여 경로에 따라, 벵골은 여전히 주사 13 후 몇 시간 동안 혈류에서 발견 할 수있는 로즈. 잠재적 인 이차 손상 (로즈 벵골 흡수 파장 녹색 스펙트럼에있는)을 방지하기 위해 온난화 램프로 가열 담요를 선호합니다. </li></ol>

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관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

수정 및 대체 때문에 562 nm에서의 흡수 피크, 필터링 된 크세논 아크 램프에서 녹색 빛 레이저는 원래 감광성 로즈 벵골 조사하기 위해 선택되었다. 레이저 매개 여기가 여전히 recently5를 사용했지만, 그것은 또한 염료 여기 10,15을 보장하는 형광 램프로 교체 할 수 있습니다. 형광 광섬유 레이저 소스보다 조작하기 쉽고 저렴합니다. 그러나 레이저는 일반적으로 선박 별 ...

21 세기의 시작 부분에서, 허혈성 뇌졸중은 장기 장애 1 스트로크 2004 약 5.7 백만 명의 사망자를 차지하고있는 사망률 전세계의 두 번째 원인의 두 번째 원인을 나타내는 치명적인 질환이다. 에 배치 된 수많은 노력에도 불구하고, 뇌졸중 후 기능 회복을 개선 할 수있는 효과적인 치료는 아직 없습니다. 그들은 허혈성 손상의 병태 생리의 모델링을 허용하고 생체 내에서 서로 다른 신경 전략의 효능을 테스트 할 뇌졸중의 동물 모델은 널리 뇌졸중 연구 분야에 사용됩니다. 이러한 모델의 대부분은 다른 모델은 일반적으로 특정 영역, 모터 및 체성 감각 피질에 작은 크기의 병변을 연구하기 위해 개발 된 반면, 중간 대뇌 동맥 내 (일시적 또는 영구적) 혈액의 흐름을 방해하여 광범위한 경색을 유도하는 것을 목표로하고 있습니다. 그러나 여러 가지 요인 교류를 생성하기 위해 기여할 수사용하는 마우스 변형 등의 실험 뇌졸중 연구의 변화의 ertain 정도, 위의 모든 연령과 성별 연구에 포함 된 동물과, 기술은 허혈성 손상을 유도하기 위해 채택했다. 후자 점, 수술 기간 및 침입 (즉, 개두술에 대한 필요성)뿐만 아니라 안정적으로 허혈성 병변을 유발하는 운영자에게 필요한 수술 기술과 관련하여 매우 중요 결정 요소 성공과 생체 뇌졸중 연구에서 공정한 . photothrombosis의 개념은 처음 1977 3 로젠 엘 - Sabban에 의해 제안 왓슨 등으로 쥐의 뇌에서의 응용 프로그램에 의해 유명하게되었습니다 1985 4 기술은 크게 향상 현재 모델 3의 기준을 설정되었던되었다. - 6. photothrombotic 방법은 이전에 혈액 계, 어에 전달 빛에 민감한 염료의 사진 활성화를 통해 대뇌 피질의 경색을 유도하는 것을 목표로무형 문화 유산은 빛에 노출 된 지역에있는 지방 혈관 혈전증의 결과. 순환 염료는 형광 근원하여 적절한 파장 조명되면 결과적으로 반응성이 매우 높은 중항 산소 제품의 많은 양의를 생성하는 산소 분자에 에너지를 해제합니다. 이러한 산소 중간체, 내피 세포막의 과산화를 유도 혈소판 부착 및 응집을 선도하고, 결국 지역의 대뇌 흐름은 중단 7을 결정하는 혈전의 형성. Photothrombosis는 일반적으로 인간의 뇌졸중 발생하지만 빛에 노출 영역에 혈액 흐름을 선택적으로 차단 결과적으로 더 많은 표면 혈관에 병변을 유도로 하나 동맥 폐색이나 휴식하지 않는 비정규 허혈성 모델입니다. 이러한 이유로,이 방법은 대뇌 피질의 가소성의 세포 및 분자 연구에 적합 할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 실행의 단순성에 있습니다.를 제거하기 위하여 2 분, 두피를 면도하는 1 분; 정위 장치에 동물을 배치하는 3 ~ 5 분 또한, photothrombosis 쉽게 이십 분 대기 (마취 3 분을 포함한 동물 당 약 사십분에서 수행 할 수 소독액과 두피는 절개하고 두개골을 청소; 2 ~ 4 분 형광 섬유 배치, 장미 벵골 솔루션을 주입하는 1 분, 복강 내 확산 5 분 - 대기, 조명의 15 분, 5 분에 상처를 청소하고) 동물을 봉합. 또한, 어떤 수술 전문 지식 병변이 그대로 두개골의 간단한 조명을 통해 유도되는이 기술을 수행 할 필요가 없습니다. 고전적인 동맥 폐색과는 달리,이 메소드는 조사 영역 내 pial과 intraparenchymal 미세 혈관을 선택적으로 폐색을 결정하고 어떤 담보 용기가 대상 영역에 산소를 공급하는 남아 있지되는 병변 중 변동성을 줄일 수 있습니다. 그 특정 자연에도 불구하고photothrombotic 손상의 주가는 필수 메커니즘은 뇌의 뇌졸중 발생. 마찬가지로 인간의 뇌졸중 동맥 폐색, 혈소판 응집 및 혈전 형성 조사 면적 7 혈액 흐름의 중단을 결정합니다. 마찬가지로,이 모델은 중간 대뇌 동맥 폐색 8에서와 같이 중요한 염증 반응을 공유합니다. 그러나, 잘 delimitated 경계 부분적으로 보존 신진 대사의 영역에 해당하는 penumbral 영역, photothrombotic 병변 후 매우 감소 또는 inexistent입니다. 이 명확한 경계선은 허혈성 또는 그대로 대뇌 피질의 영역 내에서 세포 반응의 연구를 촉진 할 수있다. Photothrombosis 마우스 모델은 형질 전환 동물의 다양한 행정 연구에 특히 적합합니다. 실제로 고전적인 모델은 마우스 변형 바이어스 9 일으킬 수있는 높은 사망률 비율을보고 C57BL / 6의 모든 긴장과 오랜 기간 연구에 맞지 않을 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Solutions and chemicals&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Rose Bengal </td><td>Sigma, Italy</td><td>330000</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane Vet </td><td>Merial</td><td>103120022</td><td></td></tr><tr><td>Betadine </td><td>Asta Medica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde </td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;strong&gt;Surgical material and equipment&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Fluosorber Filter </td><td>Havard apparatus</td><td>340415</td><td></td></tr><tr><td>150W fiber optic illuminator</td><td>Photonic</td><td>PL3000</td><td></td></tr><tr><td>Temperature Controller for Plate TCAT-2DF </td><td>Havard apparatus</td><td>727561</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaxic Instrument </td><td>Stoelting</td><td>51950</td><td></td></tr><tr><td>Operating microscope </td><td>Takagi</td><td>OM8</td><td></td></tr><tr><td>Heating pad </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oxygen and nitrogen gas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Surgery Tools</td><td>World precision instrument</td><td></td><td>Optic fiber taps and mask are custom-made </td></tr></tbody></table>

photothrombotic ischemia: a minimally invasive and reproducible photochemical cortical lesion model for mouse stroke studies

photothrombotic 치기 모델은 이전에 주입 빛에 민감한 염료의 사진 활성화의 수단으로 주어진 대뇌 피질의 영역 내에서 허혈성 손상을 유발하는 것을 목표로하고있다. 조명에 따라 염료 활성화 중항 산소를 생성합니다 후속 혈소판 응집 결국 국부적으로 혈액 흐름의 중단을 결정 혈전 형성과 혈관 내피 세포막의 손상 구성 요소. 처음 1977 년 로젠 엘 - Sabban에 의해 제안 된이 방법은 나중에 쥐의 뇌에서 1985 년에 왓슨 향상과 현재 모델의 기초를 설정했습니다. 또한, 유전자 변형 마우스 라인의 증가 여부는 더 photothrombosis 모델에 대한 관심을 높이기 위해 기여했다. 간단히, 감광성 염료 (로즈 벵골) 복강 내 주입하고 혈류를 입력합니다. 차가운 광원에 의해 조명 될 때, 염료 활성화되고 지역의 결과, 혈소판 활성화 및 혈전증과 혈관 손상을 유발혈액의 흐름이 중단. 광원 재현하고 비 침습적 방법으로 관심의 대뇌 피질의 지역을 대상으로 할 수 있습니다 개두술의 필요없이 그대로 두개골에 적용 할 수 있습니다. 마우스는 다음 봉합하고 일어나 허용됩니다. 허혈성 손상의 평가는 신속 페닐-tetrazolium 염화물 또는 크레 실 바이올렛 염색을 수행 할 수 있습니다. 이 기술은 정확한 세포의 특성이나 기능 연구에 매우 유리하다 작은 크기와 잘 구분 된 경계의 경색을 생산하고 있습니다. 또한, 형질 전환 생쥐에서 뇌의 가소성을 기본 세포 및 분자 반응 연구를 위해 특히 적당하다.

이 프로토콜은 이미 육안 (그림 1A-1C)의 피질의 절개시 볼 수있는 대뇌 피질의 병변을 생성합니다. photothrombotic 병변 조직 로즈 벵골의 사진 정품 인증을 허용하도록 충분히 반투명하는 표면과 깊은 대뇌 피질의 레이어를 개발하고 있습니다. 뇌경색의 정도의 측정은 4 % 파라 포름 알데히드 (PFA)에 고정 후 새로운 조직 또는 크레 실 바이올렛으로 페닐-tetrazolium 염화물 (TTC)와 조직 학적 ?...

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Photothrombotic Ischemia: A Minimally Invasive and Reproducible Photochemical Cortical Lesion Model for Mouse Stroke Studies

Photothrombosis 매우 재현성 방식으로 관심 분야의 작은 잘 구분 경색을 유도하기위한 빠르고, 최소 침습 기술입니다. 그것은 형질 전환 생쥐에서 뇌의 가소성을 기본 세포 및 분자 반응 연구를 위해 특히 적당하다.

Photothrombotic 국소 빈혈 : 마우스 스트로크 연구를위한 최소 침습 및 재현성 광화학 대뇌 피질의 병변 모델

The photothrombotic stroke model aims to induce an ischemic damage within a given cortical area by means of photo-activation of a previously injected ...

photothrombotic-ischemia-minimally-invasive-reproducible

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

34.7K 조회수.  University of Turin. Photothrombosis 매우 재현성 방식으로 관심 분야의 작은 잘 구분 경색을 유도하기위한 빠르고, 최소 침습 기술입니다. 그것은 형질 전환 생쥐에서 뇌의 가소성을 기본 세포 및 분자 반응 연구를 위해 특히 적당하다.

비디오: Photothrombotic Ischemia: A Minimally Invasive and Reproducible Photochemical Cortical Lesion Model for Mouse Stroke Studies

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

마우스의 모델링 스트로크 : 말초 중간 대뇌 동맥의 영구 응고

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

연구

의학

Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo: A Model of Single Vessel Stroke

In vivo imaging techniques have increased in utilization due to recent advances in imaging dyes and optical technologies, allowing for the ability to image cellular events in an intact animal. Additionally, the ability to induce physiological disease states such as stroke in vivo increases its utility. The technique described herein allows for physiological assessment of cellular responses within the CNS following a stroke and can be adapted for other pathological conditions being studied. The technique presented uses laser excitation of the photosensitive dye Rose Bengal in vivo to induce a focal ischemic event in a single blood vessel. 
The video protocol demonstrates the preparation of a thin-skulled cranial window over the somatosensory cortex in a mouse for the induction of a Rose Bengal photothrombotic event keeping injury to the underlying dura matter and brain at a minimum. Surgical preparation is initially performed under a dissecting microscope with a custom-made surgical/imaging platform, which is then transferred to a confocal microscope equipped with an inverted objective adaptor. Representative images acquired utilizing this protocol are presented as well as time-lapse sequences of stroke induction. This technique is powerful in that the same area can be imaged repeatedly on subsequent days facilitating longitudinal in vivo studies of pathological processes following stroke.

Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo:  A Model of Single Vessel Stroke

Here, we describe a semi-invasive optical microscopy approach for the induction of a Rose Bengal photothrombotic clot in the somatosensory cortex of a mouse in vivo. The technical aspects of the imaging procedure are described from induction of a photothrombotic event to application and data collection.

공 초점 광학 이미징에 의해 로즈 벵갈 Photothrombosis<em&gt; 생체</em&gt; : 단일 선박 스트로크의 모델

In vivo imaging techniques have increased in utilization due to recent advances in imaging dyes and optical technologies, allowing for the ability to ...

Photothrombosis-induced Focal Ischemia as a Model of Spinal Cord Injury in Mice

Spinal cord injury (SCI) is a devastating clinical condition causing permanent changes in sensorimotor and autonomic functions of the spinal cord (SC) below the site of injury. The secondary ischemia that develops following the initial mechanical insult is a serious complication of the SCI and severely impairs the function and viability of surviving neuronal and non-neuronal cells in the SC. In addition, ischemia is also responsible for the growth of lesion during chronic phase of injury and interferes with the cellular repair and healing processes. Thus there is a need to develop a spinal cord ischemia model for studying the mechanisms of ischemia-induced pathology. Focal ischemia induced by photothrombosis (PT) is a minimally invasive and very well established procedure used to investigate the pathology of ischemia-induced cell death in the brain. Here, we describe the use of PT to induce an ischemic lesion in the spinal cord of mice. Following retro-orbital sinus injection of Rose Bengal, the posterior spinal vein and other capillaries on the dorsal surface of SC were irradiated with a green light resulting in the formation of a thrombus and thus ischemia in the affected region. Results from histology and immunochemistry studies show that PT-induced ischemia caused spinal cord infarction, loss of neurons and reactive gliosis. Using this technique a highly reproducible and relatively easy model of SCI in mice can be achieved that would serve the purpose of scientific investigations into the mechanisms of ischemia induced cell death as well as the efficacy of neuroprotective drugs. This model will also allow exploration of the pathological changes that occur following SCI in live mice like axonal degeneration and regeneration, neuronal and astrocytic Ca2+ signaling using two-photon microscopy.

Photothrombosis is a minimally invasive and highly reproducible procedure to induce focal ischemia in the spinal cord and serves as a model of spinal cord injury in mice.

쥐의 척수 손상의 모델로 초점 국소 빈혈을 Photothrombosis는 유도

Spinal cord injury (SCI) is a devastating clinical condition causing permanent changes in sensorimotor and autonomic functions of the spinal cord (SC) ...

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of motor and cognitive disabilities. Its high prevalence poses a serious health burden, as stroke is among the principal causes of long-term disability and death worldwide1. Recovery of neuronal function is, in most cases, only partial. So far, treatment options are very limited, in particular due to the narrow time window for thrombolysis2,3. Determining methods to accelerate recovery from stroke remains a prime medical goal; however, this has been hampered by insufficient mechanistic insights into the recovery process. Experimental stroke researchers frequently employ rodent models of focal cerebral ischemia. Beyond the acute phase, stroke research is increasingly focused on the sub-acute and chronic phase following cerebral ischemia. Most stroke researchers apply permanent or transient occlusion of the MCA in mice or rats. In patients, occlusions of the MCA are among the most frequent causes of ischemic stroke4. Besides proximal occlusion of the MCA using the filament model, surgical occlusion of the distal MCA is probably the most frequently used model in experimental stroke research5. Occlusion of a distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA branch typically spares the striatum and primarily affects the neocortex. Vessel occlusion can be permanent or transient. High reproducibility of lesion volume and very low mortality rates with respect to the long-term outcome are the main advantages of this model. Here, we demonstrate how to perform a chronic cranial window (CW) preparation lateral to the sagittal sinus, and afterwards how to surgically induce a distal stroke underneath the window using a craniotomy approach. This approach can be applied for sequential imaging of acute and chronic changes following ischemia via epi-illuminating, confocal laser scanning, and two-photon intravital microscopy.

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Surgical occlusion of a distal middle cerebral artery branch (MCAo) is a frequently used model in experimental stroke research. This manuscript describes the basic technique of permanent MCAo, combined with the insertion of a lateral cranial window, which offers the opportunity for longitudinal intravital microscopy in mice.

측면 만성 두개골 창 준비 활성화<em&gt; 생체</em&gt; 마우스의 말초 중간 대뇌 동맥 폐색에 따라 관측

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of ...

신경과학

Induction of Ischemic Stroke and Ischemia-reperfusion in Mice Using the Middle Artery Occlusion Technique and Visualization of Infarct Area

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of stroke on tissue injury and to evaluate the effectiveness of therapeutic interventions, several experimental models in a variety of species were developed. They include complete global cerebral ischemia, incomplete global ischemia, focal cerebral ischemia, and multifocal cerebral ischemia. The model described in this protocol is based on the middle cerebral artery occlusion (MCAO) and is related to the focal ischemia category. This technique produces consistent focal ischemia in a strictly defined region of the hemisphere and is less invasive than other methods. The procedure described is performed on mice, given the availability of several genetic variants and the high number of tests standardized for mice to aid in the behavioral and neurodeficit evaluation.

We describe a mouse model of stroke induced by the occlusion of the middle cerebral artery using a silicone coated suture. The protocol can be applied to induce permanent occlusion or a temporary ischemia, followed by reperfusion.

경색 지역의 중간 동맥 폐색 기술 및 시각화를 사용하여 마우스의 허혈성 뇌졸중 및 허혈 - 재관류 유도

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of ...

A Fibrin-Enriched and tPA-Sensitive Photothrombotic Stroke Model

An ideal thromboembolic stroke model requires certain properties, including relatively simple surgical procedures with low mortality, a consistent infarction size and location, precipitation of platelet:fibrin intermixed blood clots similar to those in patients, and an adequate sensitivity to fibrinolytic treatment. The rose bengal (RB) dye-based photothrombotic stroke model meets the first two requirements but is highly refractory to tPA-mediated lytic treatment, presumably due to its platelet-rich, but fibrin-poor clot composition. We reason that combination of RB dye (50 mg/kg) and a sub-thrombotic dose of thrombin (80 U/kg) for photoactivation aimed at the proximal branch of middle cerebral artery (MCA) may produce fibrin-enriched and tPA-sensitive clots. Indeed, the thrombin and RB (T+RB)-combined photothrombosis model triggered mixed platelet:fibrin blood clots, as shown by immunostaining and immunoblots, and maintained consistent infarct sizes and locations plus low mortality. Moreover, intravenous injection of tPA (Alteplase, 10 mg/kg) within 2 h post-photoactivation significantly decreased the infarct size in T+RB photothrombosis. Thus, the thrombin-enhanced photothrombotic stroke model may be a useful experimental model to test novel thrombolytic therapies.

Traditional photothrombotic stroke (PTS) models mainly induce dense platelet aggregates of a high resistance to tissue plasminogen activator (tPA)-lytic treatment. Here a modified murine PTS model is introduced by co-injecting thrombin and photosensitive dye for photoactivation. The thrombin-enhanced PTS model produces mixed platelet:fibrin clots and is highly sensitive to tPA-thrombolysis.

피브린이 풍부하고 tPA에 민감한 광혈전 뇌졸중 모델

An ideal thromboembolic stroke model requires certain properties, including relatively simple surgical procedures with low mortality, a consistent ...

Modeling Stroke in Mice: Focal Cortical Lesions by Photothrombosis

Stroke is a leading cause of death and acquired adult disability in developed countries. Despite extensive investigation for novel therapeutic strategies, there remain limited therapeutic options for stroke patients. Therefore, more research is needed for pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity, and regeneration. Given the inability of in vitro models to reproduce the complexity of the brain, experimental stroke models are essential for the analysis and subsequent evaluation of novel drug targets for these mechanisms. In addition, detailed standardized models for all procedures are urgently needed to overcome the so-called replication crisis. As an effort within the ImmunoStroke research consortium, a standardized photothrombotic mouse model using an intraperitoneal injection of Rose Bengal and the illumination of the intact skull with a 561 nm laser is described. This model allows the performance of stroke in mice with allocation to any cortical region of the brain without invasive surgery; thus, enabling the study of stroke in various areas of the brain. In this video, the surgical methods of stroke induction in the photothrombotic model along with&#160;histological analysis are demonstrated.

Described here is the photothrombotic stroke model, where a stroke is produced through the intact skull by inducing permanent microvascular occlusion using laser illumination after administration of a photosensitive dye.

마우스에서 뇌졸중 모델링: 포심 피질 병변

Stroke is a leading cause of death and acquired adult disability in developed countries. Despite extensive investigation for novel therapeutic strategies, ...

허혈성 뇌졸중 마우스 모델을 개발하기 위한 원위 중동맥의 폐색

Induction of Acute Ischemic Stroke in Mice Using the Distal Middle Artery Occlusion Technique

Ischemic stroke remains the predominant cause of mortality and functional impairment among the adult populations globally. Only a minority of ischemic stroke patients are eligible to receive intravascular thrombolysis or mechanical thrombectomy therapy within the optimal time window. Among those stroke survivors, around two-thirds suffer neurological dysfunctions over an extended period. Establishing a stable and repeatable experimental ischemic stroke model is extremely significant for further investigating the pathophysiological mechanisms and developing effective therapeutic strategies for ischemic stroke. The middle cerebral artery (MCA) represents the predominant location of ischemic stroke in humans, with the MCA occlusion serving as the frequently employed model of focal cerebral ischemia. In this protocol, we describe the methodology of establishing the distal MCA occlusion (dMCAO) model through transcranial electrocoagulation in C57BL/6 mice. Since the occlusion site is located at the cortical branch of MCA, this model generates a moderate infarcted lesion restricted to the cortex. Neurological behavioral and histopathological characterization have demonstrated visible motor dysfunction, neuron degeneration, and pronounced activation of microglia and astrocytes in this model. Thus, this dMCAO mouse model provides a valuable tool for investigating the ischemiastroke and worth of popularization.

저자 스포트라이트: 뇌졸중 연구를 위해 마우스에서 신뢰할 수 있는 원위 MCA 폐색 모델 확립

Here, we present a protocol to establish a distal middle cerebral artery occlusion (dMCAO) model through transcranial electrocoagulation in C57BL/6J mice and evaluate the subsequent neurological behavior and histopathological features.

원위 중동맥 폐색 기법을 사용한 마우스의 급성 허혈성 뇌졸중 유도

Ischemic stroke remains the predominant cause of mortality and functional impairment among the adult populations globally. Only a minority of ischemic ...

Photothrombotic 국소 빈혈 : 마우스 스트로크 연구를위한 최소 침습 및 재현성 광화학 대뇌 피질의 병변 모델

요약

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마우스의 모델링 스트로크 : 말초 중간 대뇌 동맥의 영구 응고

공 초점 광학 이미징에 의해 로즈 벵갈 Photothrombosis

쥐의 척수 손상의 모델로 초점 국소 빈혈을 Photothrombosis는 유도

측면 만성 두개골 창 준비 활성화

경색 지역의 중간 동맥 폐색 기술 및 시각화를 사용하여 마우스의 허혈성 뇌졸중 및 허혈 - 재관류 유도

피브린이 풍부하고 tPA에 민감한 광혈전 뇌졸중 모델

마우스에서 뇌졸중 모델링: 포심 피질 병변

원위 중동맥 폐색 기법을 사용한 마우스의 급성 허혈성 뇌졸중 유도

원위 중동맥 폐색 기법을 사용한 마우스의 급성 허혈성 뇌졸중 유도

원위 중동맥 폐색 기법을 사용한 마우스의 급성 허혈성 뇌졸중 유도