自然界のほとんどの植物は、菌根菌と呼ばれる共生的な根に生息する真菌によって相互接続されている可能性が高い。この方法は、一般的な菌根ネットワークが植物の相互作用とその後の生態学的影響にどのような影響を与えるかを明示的に調べる。この方法では、植物の成長が不十分な真菌を除外するのではなく、すべての植物を真菌によって植民地化しながら、一般的な菌根ネットワークの役割を明示的に調べることができます。
柔軟なプラスチックで市販の管状の苗容器の変更を開始するには、ドリルプレスを使用し、ドリルプレスのフェンスに対して容器を保持し、掘削中にそれを所定の位置に保持するために容器の中に収まる短いダウエルで停止します。次に、2つの穴を、一方が他方の側に掘削し、穴が約1センチメートル離れているように容器の側面に穴を開けます。穴の間に残りの薄いプラスチック片を切り取り、細長い開口部を1つ、幅約2センチメートル、長さ5センチメートルにします。
容器の反対側にあるこれらの細長い開口部を切断を繰り返します。ナイロンメッシュでスロットをカバーするには、コンテナがあるのと同じくらい多くの9.5センチメートルで8.5センチメートルの部分に40マイクロメートルの細孔メッシュをカットします。次に、高強度の工業用ホットグルーを使用して、ナイロンメッシュを容器の外に留め、両方の開口部を覆い、布地に若干の重なりを付けます。
容器の開口部の周りに熱い接着剤を塗布し、ナイロンメッシュの長いエッジに沿って、使用すると容器をナイロンメッシュに転がし、使用すると疎水性膜を使用して指を焼かないようにします。メッシュエッジが重なっているファブリックエッジに沿って接着剤の層を追加し、しっかりとシールするためにいくつかの段ボールにエッジを押します。接着剤が冷却されたら、柔軟なテープを使用して布の上端と下端をコンテナに取り付け、エッジの緩みやリッピングを防ぎます。
同じテープを使用して、各コンテナの円錐端の側面にある小さな穴を覆い、容器からポットの残りの部分に根が生出するのを防ぎます。各容器の底にガラス大理石を入れて、排水を提供しながら土壌の損失を防ぎ、原稿に記載されているようにポットを組み立てます。CMNが植物間に形成される可能性を伴わない対照処理のために、固体、未変更の容器を使用してください。
長さ1.2センチのみじん切り根片を土壌と完全に混合して、AM真菌接種を土壌に加えます。植物が利用できるミネラル栄養素の濃度を減らすには、不妊シリカ砂またはガラスビーズと混合所望の土壌を選択します。充填容器を、以前に構築されたドリルフォームにポットに配置します。
十分な排水の栄養不良シリカ砂混合物を作るために、セメントミキサーで小さな粒径の砂と中粒径砂を混ぜます。小さなスペースを埋めるのを助けるために漏斗を使用して、この混合物で間質空間を埋めます。次に、所望の種の移植前処理、またはいわゆるナース植物が各容器に所望の種を取り込んで、容器の間に広がり、共通の菌根系ネットワークを確立するAM真菌を維持する。
温室で摂氏約24度で2~3ヶ月間植物を栽培し、CMNの設立を可能にします。実験植物を容器に播種して縫う。すべての容器が苗を発芽させるまで待ってから、前処理看護師の植物を取り除き、芽をクリッピングします。
CMN治療を確立するには、実験の間、いくつかのコンテナを移動しないようにしておきます。変更された容器の間に伸びるヒファエを物理的に切断するには、一部のコンテナを毎週回転させ、1回の完全回転を確実に行い、意図せずに地上の相互作用を変更しないようにします。回転直後に、すべてのポットに大きな水を与え、間質基板と容器の側面との接触を再確立する。
共通の菌根ネットワークを切断した後にすべてのポットを水で浸すは、容器と間質基板との接触を再確立するために重要であり、したがって容器の意図しない気流を防ぎます。0.5%窒素15濃縮硝酸カリウム、塩化アンモニウムで近隣の植物を受精させます。等濃度の窒素14肥料で対象個体を受精させる。
少なくとも毎月、実験の過程でポットの位置を再ランダム化します。長い葉長を測定することによって毎週成長を測定し、成長が遅くなり始める時期を監視し、植物が根束になる前に収穫することを確認する。収穫するには、すべての地上組織をクリップし、個々の植物を治療、ポット、位置でラベル付けされた封筒に入れます。
その後、強制空気乾燥オーブンで摂氏60度で地上組織を乾燥させ、一定の重量にし、各植物組織の乾燥重量を測定する。容器を取り除き、根を収穫する前に、土壌を2〜3日乾燥させます。収穫後、根系からできるだけ多くの土壌を優しく払い落とします。
根の損失を避けるために、250ミクロンの細孔サイズでふるいに根を洗います。根を空気乾燥させた後、根系全体の重量を量る。ルートシステムをランダムにクリップし、50%エタノールに断片を入れます。
残りの根系を再計量し、ラベル付きの紙封筒に入れ、乾燥重量評価のために摂氏60度で乾燥させます。標的植物実験でアンドロポゴン・ジェラルディ・ヴィットマンを成長させると、CMNを切断または防止すると、標的の地上乾燥重量が減少し、無傷のCMNが植物の成長を促進することが示唆された。切断されたCmNとCmNがない植物は、治療と同様に反応しました。
ある個体の成長が別の近くの個人の成長を抑制する競争は、無傷のCMN治療では検出されたが、CMN治療は切断または全くない。異なるミネラル栄養葉組織濃度の徹底的な比較は、植物サイズのみのマンガン濃度に対して、すべての治療にわたって、ターゲット植物の地上乾燥重量と肯定的に関連していた。ターゲット植物組織は、近隣の容器にのみ窒素15ラベルを添加した後、葉組織対植物サイズの窒素15について評価した。
無傷のCmNを有する標的植物は、他の両方の治療と比較して、より高い窒素15濃度を有していた。Intact Cmnは、切断されたCmn処理のそれとは、窒素量の強く有意に異なる斜面を有し、大きな植物が小さな標的個体よりも隣接する容器に到達するCmNからより多くの窒素を得ていることを示唆している。PVCパイプで作られた回転コアを用いたフィールド実験では、パイプを越えた外発性菌糸体は、13ヶ月間の実験中に石鹸ベリーの成長にほとんど影響を与えませんでした。
しかしながら、配管の回転によってそれを切断すると、葉面窒素、リン、および銅濃度が低下し、クロロキシ植物によって実質的に示される。布地の裂け目を避けるために、各容器に布が接着されているのと同じ方向に容器を回転させ、360度回転して植物への地上変化を減らします。この手順は、根の植民地化における外発性菌糸体の役割と栄養摂取への影響を調べるために、滅菌土壌で満たされた改変されたPVCパイプを持つ分野で使用することができます。
この技術は、最も頻繁に行われているように、一般的な菌根筋ネットワークと、ネットワークによって相互接続されていない菌根植物と比較することを可能にする。
