Name: harnessing the dna dye-triggered side population phenotype to detect and purify cancer stem cells from biological samples
Uploaded: 2017-05-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 57 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Harnessing the DNA Dye-triggered Side Population Phenotype to Detect and Purify Cancer Stem Cells from Biological Samples at JoVE.com

Maximilian Boeschはオーストリア科学基金FWFのErwinSchrödingerFellowship（助成金番号J-3807）の支援を受けています。

このプロトコルは、標準的な制度倫理審査委員会のガイドラインを完全に遵守しています。ここに示すプロトコールを用いてヒトまたは動物の組織を調査する場合、研究者はその機関または国の関連する審査委員会からの承認を得ることが義務付けられている。 注意：生物学的サンプルを安全に取り扱うための標準的な予防措置がこのプロトコルに適用されます。これには、手袋とラボコートを着用し、できる限りバイオセーフティキャビネットの下で作業を行うことが含まれます。 1.細胞の調製<ol><li> 癌細胞株 <ol><li>適切な培地（ 例えば 、10％（ v / v ）FBS、2mM L-グルタミンおよび1×ペニシリン/ストレプトマイシンを補充したRPMI 1640）中で、37℃でそれぞれのヒトまたはマウス癌細胞株を培養し、収穫する0.05％トリプシン-EDTAまたはいくつかの他の脱アタッチメントによる消化を用いて、サブコンフルエンス（ すなわち、 70〜90％）の細胞審査手続。細胞数を測定し、カウントチャンバーおよびトリパンブルー染色を使用して生存率をチェックする。生存細胞の割合は85％を超えるべきである。 注：SP区画を含むヒト癌細胞株の例には、MCF7 / HTB-22およびSKBR3 / HTB-30（乳癌）、A2780およびSKOV-3 / HTB-77（卵巣癌）およびA549（肺癌） 26が含まれる 。 </li></ol></li><li> 生体外の腫瘍組織 <ol><li>新鮮な外科的腫瘍標本を採取するか、あるいは移植可能なまたは遺伝子操作されたマウス腫瘍モデルから腫瘍組織を採取する。 200〜1,000mgの組織を採取し、機械的解離（ 例えば 、はさみまたはメスを使用）および酵素消化（ 例えば 、コラゲナーゼ/ディスパーゼ/ DNaseカクテルを使用）によって単一細胞懸濁液を生成する。 </li><li>サンプルを70μmカットオフストレーナーでろ過する。細胞数を決定し、カウントチャンバーおよびトリパンblを用いて生存率をチェックする。染色する。 注：消化カクテルには、200μg/ mLコラゲナーゼP、0.8 U / mLディスパーゼおよび25μg/ mL DNase Iが含まれていることが多く、インキュベーション時間は通常20〜50分です。理想的には、組織解離は、調査中の組織27,28,29に最適化されたプロトコルに従って行われる。 </li></ol></li></ol> 2.サンプルのテスト<ol><li>新鮮な培養液中で細胞濃度を1×10 6 cells / mLに調整してください（栄養素を含むビヒクルは、色素の抽出が活性なエネルギーを消費するプロセスで重要です）。最後に、1mLのサンプルを通常のフローサイトメトリー/ FACS丸底チューブ（「試験」と表示）に移す。 注：最適な結果を得るには、細胞濃度を滴定する必要があります（例えば、5 x 10 5 -1 x 10 6 -2.5 x 106細胞/ mL）が、19より高い解像度が得られる。最大数のSP細胞を回収するソートのアプリケーションでのみ、細胞濃度を1×10 7細胞/ mLまで上げることを推奨します。 </li><li>穏やかなボルテックスまたは3〜5倍の再懸濁のいずれかにより、10μMのDCVを試料に加え、よく混合する。阻害コントロールに進む。 注：最適な結果はトリガー色素の滴定（例えば2.5; 5; 10;20μM）に依存するかもしれませんが、より高い色素濃度は一般により高い解像度19をもたらす。 </li></ol> 3.阻害制御<ol><li> 250μLの色素含有細胞懸濁液を新しいフローサイトメトリー/ FACS丸底チューブ（「対照」と表示）に移す。 50μMのベラパミルまたは20μMのFTCを添加し、ピペッティングによりよく混合する。 注：ベラパミルおよびFTCは、SP分析のための最も確立された阻害剤であるが、異なる流出ポンプ特異性を有するy：ベラパミルは、ABCB1およびABCB5を含むいくつかのABC薬物トランスポーターを阻害するが、FTCはABCG2に特異的である（6,19）。個々のサンプルのSP状態が不明な場合、別のチューブでベラパミルとFTCの両方を使用することを推奨します。 </li></ol> 4.染色<ol><li> &#39;テスト&#39;チューブと &#39;コントロール&#39;チューブの両方をキャップし、37℃で暗所で90分間インキュベートし、15分おきに穏やかに攪拌します。 SP細胞の色素抽出の大半は最初の45分以内に起こるが、非SP細胞（分解に寄与する）の色素蓄積は75〜90分後に最大である。 </li><li>染色が完了した後、細胞を3〜4mLの氷冷PBSで洗浄し、100μL（PBSも同様）の容量でペレットを再懸濁する。細胞を暗所に保ち、氷上で冷却し、追加のマーカーの染色に進む。あるいは、フローサイトメトリーアナライト溶解。 </li></ol> 5.他のマーカーの費用<ol><li> DCVで染色した細胞に所望の蛍光色素結合抗体パネルを加え、よく混合し、4〜4℃で暗所で20〜30分間インキュベートする。細胞を3〜4 mLの氷冷PBSで洗浄し、死細胞の識別に進む。 注：DCVとの互換性があり実質的に補償を必要としない抗体フォーマットには、PerCPまたはPerCP-Cy5.5、PE-Cy7、APC、Alexa Fluor 647、APC-Cy7、APC-H7、BV711、Alexa Fluor 750およびBV786 。 DCVと互換性があるが補償が必要なフォーマットには、FITC、Alexa Fluor 488、PE、BV650などがあります。実質的にDCVと互換性のないフォーマットには、BV421、V450、V500などがあります。 </li><li>特定の製造業者が推奨する濃度でDCV染色細胞に7-AAD（またはPI）を添加し、暗所で5〜10分間サンプルをインキュベートする。 70μmのカットオフストレーナーを通してサンプルを濾過し、フローサイトメトリー分析に進む。</li></ol>フローサイトメトリー分析注：染色工程中に各フローサイトメトリー機器をオンにしておくと、サンプルの準備が整うとすぐにすべてが設定されます。これには、システム性能の追跡やタンク補充などの標準保守手順も含まれます。 <ol><li> フローサイトメーター上の細胞を取得し、二変量FSC / SSCドットプロット（図1B）でそれらをゲート。 FSCの異なるシグナル（ すなわち、高さ、幅、面積）を比較することにより、ダブレットおよび凝集物を除外する（図1C）。 <ol><li>死細胞マーカーが含まれている場合、生存細胞画分（ 例えば 、7-AAD陰性）上にゲートする（ 図1D ）。生存可能な一重項細胞を「青色」および「赤色」のDCV発光について二変量点プロット上で可視化する。この目的のために、y軸上に「青色」蛍光チャネル（ 例えば 、450/50）を表示し、X軸上の「赤色」蛍光チャネル（ 例えば 、525/50）。 </li><li>両方のチャンネルをリニアモードに切り替え、それに対応して検出器の電圧を調整して、SPが左下象限のプロットの側面に位置するようにします。逆に、非SPは、細胞周期分布（G1およびG2）を反映するプロットの右上象限に位置する。 SPをゲートし、捕捉を停止する（ 図1E ）。 注：DCVで定義されたSP細胞は、紫色レーザー励起源（ すなわち 、405nmレーザーライン）を備えたフローサイトメトリー機器を用いて検出することができる。放出された蛍光が線形モードで測定され、二変量ドットプロット上に表示された2つの別個のチャネルにおいて測定されることは、SP分析に特有のものである。 DCVの「青色」発光は約450nmで測定され（ 例えば 、450/40標準フィルターで）、DCVの「赤色」発光は約510-585nmで測定される（ 例えば 、510/50、a 525/50または585/15フィルター） 19 。アッセイの特定の化学的性質のために、SPおよび非SP細胞間の分離は、一般に、「赤色」蛍光チャネル19においてより高い。 </li></ol></li><li>禁止コントロールをロードし、データを取得します。 SP細胞は、現在消失しているか、または実質的に減少している（ 図1F ）。必要に応じて、これらのデータに基づいてSPゲートを調整します。 </li><li> SP細胞による表面マーカー発現を調べるために、x軸上にDCVの「赤色」蛍光を残し、対数モード（ 例えば 、APC）でy軸上にそれぞれの蛍光チャネルを表示する。それに対応して検出器の電圧を調整し、調べられたマーカーについて陽性に染色されたSP細胞の画分をゲートする（ 図1G ）。 SP細胞による特定のマーカーの同時発現は、プロット30の左上象限にそれぞれのシグナルを生じる。 </li><li>そのSPセルをデータ化および/またはソートする。 </li></ol>

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	<li>Pattabiraman, D. R., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tackling+the+cancer+stem+cells+-+what+challenges+do+they+pose?.">Tackling the cancer stem cells - what challenges do they pose?.</a> Nat Rev Drug Discov. 13 (7), 497-512 (2014).</li><li>Boesch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+Cancer+Stem+Cells:+Rationale+for+Targeting+the+Stem+Cell+Niche.">Heterogeneity of Cancer Stem Cells: Rationale for Targeting the Stem Cell Niche.</a> Biochim Biophys Acta. 1866 (2), 276-289 (2016).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+cancer+relapse+and+metastasis+by+inhibiting+cancer+stemness.">Suppression of cancer relapse and metastasis by inhibiting cancer stemness.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (6), 1839-1844 (2015).</li><li>Greve, B., Kelsch, R., Spaniol, K., Eich, H. T., G&#246;tte, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+in+cancer+stem+cell+analysis+and+separation.">Flow cytometry in cancer stem cell analysis and separation.</a> Cytometry A. 81 (4), 284-293 (2012).</li><li>Marcato, P., Dean, C. A., Giacomantonio, C. A., Lee, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aldehyde+dehydrogenase:+its+role+as+a+cancer+stem+cell+marker+comes+down+to+the+specific+isoform.">Aldehyde dehydrogenase: its role as a cancer stem cell marker comes down to the specific isoform.</a> Cell Cycle. 10 (9), 1378-1384 (2011).</li><li>Golebiewska, A., Brons, N. H., Bjerkvig, R., Niclou, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+appraisal+of+the+side+population+assay+in+stem+cell+and+cancer+stem+cell+research.">Critical appraisal of the side population assay in stem cell and cancer stem cell research.</a> Cell Stem Cell. 8 (2), 136-147 (2011).</li><li>Hirschmann-Jax, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+distinct+&amp;#34;side+population&amp;#34;+of+cells+with+high+drug+efflux+capacity+in+human+tumor+cells.">A distinct &amp;#34;side population&amp;#34; of cells with high drug efflux capacity in human tumor cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (39), 14228-14233 (2004).</li><li>Zhou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ABC+transporter+Bcrp1/ABCG2+is+expressed+in+a+wide+variety+of+stem+cells+and+is+a+molecular+determinant+of+the+side-population+phenotype.">The ABC transporter Bcrp1/ABCG2 is expressed in a wide variety of stem cells and is a molecular determinant of the side-population phenotype.</a> Nat Med. 7 (9), 1028-1034 (2001).</li><li>Boesch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+side+population+of+ovarian+cancer+cells+defines+a+heterogeneous+compartment+exhibiting+stem+cell+characteristics.">The side population of ovarian cancer cells defines a heterogeneous compartment exhibiting stem cell characteristics.</a> Oncotarget. 5 (16), 7027-7039 (2014).</li><li>Szotek, P. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+cancer+side+population+defines+cells+with+stem+cell-like+characteristics+and+Mullerian+Inhibiting+Substance+responsiveness.">Ovarian cancer side population defines cells with stem cell-like characteristics and Mullerian Inhibiting Substance responsiveness.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (30), 11154-11159 (2006).</li><li>Brown, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+benign+and+malignant+prostate+epithelial+Hoechst+33342+side+populations.">Characterization of benign and malignant prostate epithelial Hoechst 33342 side populations.</a> Prostate. 67 (13), 1384-1396 (2007).</li><li>Mathew, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ABCG2-mediated+DyeCycle+Violet+efflux+defined+side+population+in+benign+and+malignant+prostate.">ABCG2-mediated DyeCycle Violet efflux defined side population in benign and malignant prostate.</a> Cell Cycle. 8 (7), 1053-1061 (2009).</li><li>Engelmann, K., Shen, H., Finn, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MCF7+side+population+cells+with+characteristics+of+cancer+stem/progenitor+cells+express+the+tumor+antigen+MUC1.">MCF7 side population cells with characteristics of cancer stem/progenitor cells express the tumor antigen MUC1.</a> Cancer Res. 68 (7), 2419-2426 (2008).</li><li>Ho, M. M., Ng, A. V., Lam, S., Hung, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Side+population+in+human+lung+cancer+cell+lines+and+tumors+is+enriched+with+stem-like+cancer+cells.">Side population in human lung cancer cell lines and tumors is enriched with stem-like cancer cells.</a> Cancer Res. 67 (10), 4827-4833 (2007).</li><li>Kato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometrial+cancer+side-population+cells+show+prominent+migration+and+have+a+potential+to+differentiate+into+the+mesenchymal+cell+lineage.">Endometrial cancer side-population cells show prominent migration and have a potential to differentiate into the mesenchymal cell lineage.</a> Am J Pathol. 176 (1), 381-392 (2010).</li><li>Bleau, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PTEN/PI3K/Akt+pathway+regulates+the+side+population+phenotype+and+ABCG2+activity+in+glioma+tumor+stem-like+cells.">PTEN/PI3K/Akt pathway regulates the side population phenotype and ABCG2 activity in glioma tumor stem-like cells.</a> Cell Stem Cell. 4 (3), 226-235 (2009).</li><li>Harris, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cells+are+enriched+in+the+side+population+cells+in+a+mouse+model+of+glioma.">Cancer stem cells are enriched in the side population cells in a mouse model of glioma.</a> Cancer Res. 68 (24), 10051-10059 (2008).</li><li>Murase, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Side+population+cells+have+the+characteristics+of+cancer+stem-like+cells/cancer-initiating+cells+in+bone+sarcomas.">Side population cells have the characteristics of cancer stem-like cells/cancer-initiating cells in bone sarcomas.</a> Br J Cancer. 101 (8), 1425-1432 (2009).</li><li>Boesch, M., Wolf, D., Sopper, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+Stem+Cell+Detection+Using+the+DyeCycle-Triggered+Side+Population+Phenotype.">Optimized Stem Cell Detection Using the DyeCycle-Triggered Side Population Phenotype.</a> Stem Cells Int. 2016, 1652389 (2016).</li><li>Golebiewska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Side+population+in+human+glioblastoma+is+non-tumorigenic+and+characterizes+brain+endothelial+cells.">Side population in human glioblastoma is non-tumorigenic and characterizes brain endothelial cells.</a> Brain. 136 (PT 5), 1462-1475 (2013).</li><li>Boesch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+transporter-mediated+protection+of+cancer+stem+cells+from+ionophore+antibiotics.">Drug transporter-mediated protection of cancer stem cells from ionophore antibiotics.</a> Stem Cells Transl Med. 4 (9), 1028-1032 (2015).</li><li>Fukunaga-Kalabis, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tenascin-C+promotes+melanoma+progression+by+maintaining+the+ABCB5-positive+side+population.">Tenascin-C promotes melanoma progression by maintaining the ABCB5-positive side population.</a> Oncogene. 29 (46), 6115-6124 (2010).</li><li>Dean, M., Fojo, T., Bates, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumour+stem+cells+and+drug+resistance.">Tumour stem cells and drug resistance.</a> Nat Rev Cancer. 5 (4), 275-284 (2005).</li><li>Goodell, M. A., Brose, K., Paradis, G., Conner, A. S., Mulligan, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+functional+properties+of+murine+hematopoietic+stem+cells+that+are+replicating+in+vivo.">Isolation and functional properties of murine hematopoietic stem cells that are replicating in vivo.</a> J Exp Med. 183 (4), 1797-1806 (1996).</li><li>Telford, W. G., Bradford, J., Godfrey, W., Robey, R. W., Bates, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Side+population+analysis+using+a+violet-excited+cell-permeable+DNA+binding+dye.">Side population analysis using a violet-excited cell-permeable DNA binding dye.</a> Stem Cells. 25 (4), 1029-1036 (2007).</li><li>Boesch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+prevalence+of+side+population+in+human+cancer+cell+lines.">High prevalence of side population in human cancer cell lines.</a> Oncoscience. 3 (3-4), 85-87 (2016).</li><li>Ali, M. Y., Anand, S. V., Tangella, K., Ramkumar, D., Saif, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Primary+Human+Colon+Tumor+Cells+from+Surgical+Tissues+and+Culturing+Them+Directly+on+Soft+Elastic+Substrates+for+Traction+Cytometry.">Isolation of Primary Human Colon Tumor Cells from Surgical Tissues and Culturing Them Directly on Soft Elastic Substrates for Traction Cytometry.</a> J Vis Exp. (100), e52532 (2015).</li><li>Azari, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+expansion+of+human+glioblastoma+multiforme+tumor+cells+using+the+neurosphere+assay.">Isolation and expansion of human glioblastoma multiforme tumor cells using the neurosphere assay.</a> J Vis Exp. (56), e3633 (2011).</li><li>Hasselbach, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+high+grade+glioma+cell+culture+from+surgical+specimens+for+use+in+clinically+relevant+animal+models+and+3D+immunochemistry.">Optimization of high grade glioma cell culture from surgical specimens for use in clinically relevant animal models and 3D immunochemistry.</a> J Vis Exp. (83), e51088 (2014).</li><li>Boesch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DyeCycle+Violet+used+for+side+population+detection+is+a+substrate+of+P-glycoprotein.">DyeCycle Violet used for side population detection is a substrate of P-glycoprotein.</a> Cytometry A. 81 (6), 517-522 (2012).</li><li>Patrawala, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Side+population+is+enriched+in+tumorigenic,+stem-like+cancer+cells,+whereas+ABCG2++and+ABCG2-+cancer+cells+are+similarly+tumorigenic.">Side population is enriched in tumorigenic, stem-like cancer cells, whereas ABCG2+ and ABCG2- cancer cells are similarly tumorigenic.</a> Cancer Res. 65 (14), 6207-6219 (2005).</li><li>Guha, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nicotine+promotes+apoptosis+resistance+of+breast+cancer+cells+and+enrichment+of+side+population+cells+with+cancer+stem+cell-like+properties+via+a+signaling+cascade+involving+galectin-3,+alpha9+nicotinic+acetylcholine+receptor+and+STAT3.">Nicotine promotes apoptosis resistance of breast cancer cells and enrichment of side population cells with cancer stem cell-like properties via a signaling cascade involving galectin-3, alpha9 nicotinic acetylcholine receptor and STAT3.</a> Breast Cancer Res Treat. 145 (1), 5-22 (2014).</li></ol>

著者らは宣言する利益相反はない。原稿の作成には、著者以外の人の関与もない。

癌の臨床管理の進歩は、CSCを標的とする治療様式の開発にも依存する。生物学的サンプルからのCSCの確実な単離を可能にする方法は、適切な標的の同定を促進し、したがって、この努力において非常に重要である。 SP分析は、ABCの薬物トランスポーターを発現するCSC集団を同定するための確立された、そして貴重な技術であり、DCVの実施は、標準的なフローサイトメトリー機器へのその適用?...

原発性癌治療の有効性は、この疾患の遺伝的および分子的理解の魅力的進歩、治療用抗体および小分子阻害剤などの標的薬物の出現のために、過去10年間で実質的に改善されている。対照的に、転移性および再発性の疾患は依然として典型的に治癒不可能であり、罹患率および死亡率はこれらの臨床的状況において依然として高いままである。 CSCは、腫瘍内の別個の亜集団を表し、クローン原性/腫瘍原性、多剤耐性および非対称細胞分裂1,2などの標準的な幹細胞特性を付与される。したがって、CSCは、転移性の進行および腫瘍の異種性を促進するだけでなく、患者の再発の素因となる治療中も持続する。したがって、治療的CSC除去は、疾患の再発を予防し、がんの長期治癒を可能にする重要な医学的必要性である3 </sup&gt;。 脆弱性の特定およびCSCを根絶する戦略の解明は、その後の発現プロファイリングおよび/または機能検査のための生物学的サンプルからの精製を可能にする方法に大きく依存する。次に、そのような方法は、これらの細胞に特異的な表面、細胞内または機能的マーカーに依存する。 CSC特異的表面マーカーには、CD44、CD133、CD24およびCD90が含まれるが、これらに限定されず、乳癌および大腸癌を含む様々な腫瘍実体におけるCSC集団を同定するために使用されてきた4 。別のマーカーであるアルデヒドデヒドロゲナーゼ（ALDH）は、細胞内局在を示し、機能的に検出することができ、その酵素的変換により光を生じるそれぞれの基質を提供することができる。この試験を用いて、CSC集団は多様な腫瘍実体においても同定されている5 。一般にSP分析と呼ばれ、ここではm<html> ABC薬物輸送体による活性色素流出を利用して、蛍光dim型幹様細胞の小さな集団を同定する6,7,8。これを達成するために、所与の試料を、受動拡散によってすべての細胞に入り、結合のために核およびミトコンドリアDNAを標的とする親油性DNA結合フルオロフォアの存在下でインキュベートする。 ABC薬物輸送体発現を欠いている非CSCsは染料を蓄積し、明るい蛍光をもたらし、CSCsは蛍光を減少させる染料を能動的に押し出す。薬物輸送体活性の薬理学的阻害は、SP表現型を排除し機能的に確認し、制御目的に使用すべきである。 SP特性を示すCSC集団が、とりわけ、卵巣癌9,10 、前立腺癌11 、&gt; 12、乳癌13 、肺癌14 、子宮内膜癌15 、神経膠腫16,17および骨肉腫18 。重要なことには、特定の腫瘍細胞識別戦略（ある種の宿主細胞集団もSP特性を示すことができる）のような追加の課題があるにもかかわらず、SPアッセイは癌細胞株および原発腫瘍組織の両方に適合する19,20 。 2つの最も確立されたSPを与える薬物輸送体は、ABCB1 / P-糖タンパク質/ MDR1 / CD243およびABCG2 / Bcrp1 / CD338である。しかし、他の薬物トランスポーターもSP表現型の分子決定因子（ 例えば 、ABCB5）であり得る22 。 ABCB1ABCG2の活性は、fumitremorgin C（FTC）6,19を用いて特異的に排除することができるが、ベラパミルで効率的にブロックすることができる。 SP分析の特別な強さは、他の染色（ 例えば 、表面マーカーおよびALDH）と組み合わせることができ、生細胞の回収を可能にし、下流の機能検査と互換性があることである。さらに、SPC検出は、CSC集団の中でABC薬物輸送体の高い保存率のために広く適用可能である（9,23）。 もともと、SP検出は、Hoechst 33342をトリガー色素24として用いて行われている。この染料は優れた解像度を達成するが、紫外線レーザー励起を必要とする。したがって、その適用性は当然、ハイエンドフローサイトメトリー機器に限定される。 DyeCycle Violet（DCV） 25の登場により、新しいAvenuこの方法を紫外線レーザー源を欠く標準的なフローサイトメトリー機器（DCV-SP細胞を分解するのに紫色レーザー源で十分）に応用することができました。重要なことに、Hoechst 33342およびDCVは共通のポンプ特異性を共有しており、どちらの色素も同じ細胞集団を同定する必要があることを示しています。 ここでは、DCVベースのSP分析の詳細な実験プロトコルを提供し、独立したラボで素早く簡単に再生することができます。我々は、この有用な細胞生物学的方法の最適化と標準化に貢献すべきであるCSC研究者のための資料としてこの論文を認識する。

<table><tbody><tr><td>Vybrant DyeCycle Violet</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>V35003</td><td>Ready to use</td></tr><tr><td>Verapamil hydrochloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V4629</td><td>Dissolve in ethanol</td></tr><tr><td>Fumitremorgin C</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F9054</td><td>Dissolve in DMSO</td></tr><tr><td>7-AAD (or propidium iodide - PI)</td><td>BioLegend</td><td>420403</td><td>Ready to use</td></tr><tr><td>Standard cell culture reagents (&lt;em&gt;e.g.&lt;/em&gt;, medium, FBS, L-glutamine, antibiotics, PBS, trypsin-EDTA, &lt;em&gt;etc.&lt;/em&gt;)</td><td>Different suppliers</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sample/cells of interest (&lt;em&gt;e.g.&lt;/em&gt;, human or murine cancer cell line, human or murine tumor tissue)</td><td>Different suppliers</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flow cytometric instrument (FACS; analyzer or cell sorter)</td><td>Different suppliers</td><td></td><td>Violet laser source required</td></tr><tr><td>FACS tubes (round-bottom)</td><td>Different suppliers</td><td></td><td>Tubes with cap recommended</td></tr><tr><td>70 &amp;micro;m cut-off strainers</td><td>Different suppliers</td><td></td><td>Optional but recommended</td></tr><tr><td>Digestion enzyme mix (&lt;em&gt;e.g.&lt;/em&gt;, collagenase/dispase/Dnase)</td><td>Different suppliers</td><td></td><td>Only relevant for tissue dissociation</td></tr><tr><td>Flurochrome-conjugated antibodies against surface markers of interest</td><td>Different suppliers</td><td></td><td>Optional</td></tr><tr><td>ALDEFLUOR Kit</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>01700</td><td>Optional</td></tr></tbody></table>

harnessing the dna dye-triggered side population phenotype to detect and purify cancer stem cells from biological samples

がんは幹細胞に起因する疾患であり、これらの細胞の根絶が主要な治療目標となっている。 Cancer Stem Cells（CSCs）の脆弱性を解読し、適切な分子標的を特定することは、細胞系やex vivo腫瘍組織などの異種試料での特異的差別を可能にする方法に依存しています。フローサイトメトリー/ FACSは、単一細胞レベルで生物学的サンプルをマルチパラメトリックに解剖するための強力な技術であり、下流の分析のために生きた細胞を回収するための選択方法である。 CD44およびCD133のような表面マーカーならびにアルデヒドデヒドロゲナーゼ酵素活性の検出は、FACSによる腫瘍サンプルからのCSCを定義および分類するためにしばしば用いられてきた。ここで方法論的詳細に示されている相補的アプローチは、一般に側方集団（SP）と呼ばれる蛍光dim細胞の明確な集団を同定するABC薬物トランスポーターによる機能的色素押出を利用する。 SPがん細胞は、標準的な幹細胞の特徴を示し、色素押し出し薬物輸送体（最も頻繁にはABCB1 / P-糖タンパク質/ MDR1 / CD243およびABCG2 / Bcrp1 / CD338）を阻害する物質を使用して廃止され、機能的に確認され得る。さらに、SPアッセイは、表面抗原の染色、アルデヒドデヒドロゲナーゼ検出、および死細胞識別（ 例えば 、7-AADまたはヨウ化プロピジウム（PI））などの他のフローサイトメトリー評価と適合する。したがって、我々は、表現型パラメータではなく機能的に基づいて、CSC同定、単離およびサブキャラクタリゼーションを機械的に行うための価値ある、広く適用可能な方法を記載する。もともとHoechst 33342をトリガー色素として使用していましたが、ここではバイオレットレーザー光源を備えたフローサイトメーターで分解可能な、より新しいViolet色素に基づくSP表現型に焦点を当てます。

A2780細胞の代表的なSP分析であり、これは、以前に細胞の1％未満を占めるSPを保持することが示されたヒト卵巣癌細胞株である9 。細胞を、10％（ v / v ）FBS、2mM L-グルタミンおよび1×ペニシリン/ストレプトマイシンを補充したRPMI1640中で37℃で培養し、0.05％トリプシン-EDTAでの処理を用いて85％コンフルエンシーで採取した。細胞をPBSで洗浄し?...

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Harnessing the DNA Dye-triggered Side Population Phenotype to Detect and Purify Cancer Stem Cells from Biological Samples

生物学的試料からの幹細胞集団の特徴付けおよび単離を可能にする方法は、癌およびそれを超える幹細胞標的化治療の進歩にとって重要である。ここでは、色素誘発性の側方集団表現型を用いた癌幹細胞単離のための詳細なプロトコールを提供する。

生物学的サンプルからの癌幹細胞の検出と精製のためのDNA色素誘発側母集団表現型の活用

Cancer is a stem cell-driven disease and eradication of these cells has become a major therapeutic goal. Deciphering vulnerabilities of Cancer Stem Cells ...

harnessing-dna-dye-triggered-side-population-phenotype-to-detect

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Cancer Research

7.6K ビュー.  Kantonsspital St. Gallen. 生物学的試料からの幹細胞集団の特徴付けおよび単離を可能にする方法は、癌およびそれを超える幹細胞標的化治療の進歩にとって重要である。ここでは、色素誘発性の側方集団表現型を用いた癌幹細胞単離のための詳細なプロトコールを提供する。 

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Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and recurrent disease. This population can be identified by surface markers, enzymatic activity and a functional profile. These approaches per se are limited, due to phenotypic heterogeneity and CSC plasticity. Here, we update the sphere-forming protocol to obtain CSC spheres from breast and gynecological cancers, assessing functional properties, CSC markers and protein expression. The spheres are obtained with single-cell seeding at low density in suspension culture, using a semi-solid methylcellulose medium to avoid migration and aggregates. This profitable protocol can be used in cancer cell lines but also in primary tumors. The tridimensional non-adherent suspension culture thought to mimic the tumor microenvironment, particularly the CSC-niche, is supplemented with epidermal growth factor and basic fibroblast growth factor to ensure CSC signaling. Aiming for robust identification of CSC, we propose a complementary approach, combining functional and phenotypic evaluation. Sphere-forming capacity, self-renewal and sphere projection area establish CSC functional properties. Additionally, characterization comprises flow cytometry evaluation of the markers, represented by CD44+/CD24- and CD133, and Western blot, considering ALDH. The presented protocol was also optimized for primary tumor samples, following a sample digestion procedure, useful for translational research.

The aim of this methodology is to identify cancer stem cells (CSC) in cancer cell lines and primary human tumor samples with the sphere-forming protocol, in a robust manner, using functional assays and phenotypic characterization with flow cytometry and Western blot.

婦人科腫瘍および乳がん腫瘍から癌幹細胞球体を取得する

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

がん研究

Analysis of Side Population in Solid Tumor Cell Lines

Cancer stem cells (CSCs) are an important cause of tumor growth, metastasis, and recurrence. Isolation and identification of CSCs are of great significance for tumor research. Currently, several techniques are used for the identification and purification of CSCs from tumor tissues and tumor cell lines. Separation and analysis of side population (SP) cells are two of the commonly used methods. The methods rely on the ability of CSCs to rapidly expel fluorescent dyes, such as Hoechst 33342. The efflux of the dye is associated with the ATP-binding cassette (ABC) transporters and can be inhibited by ABC transporter inhibitors. Methods for staining cultured tumor cells with Hoechst 33342 and analyzing the proportion of their SP cells by flow cytometry are described. This assay is convenient, fast, and cost-effective. Data generated in this assay can contribute to a better understanding of the effect of genes or other extracellular and intracellular signals on the stemness properties of tumor cells.

A convenient, fast, and cost-effective method to measure the proportion of side population cells in solid tumor cell lines is presented.

固形腫瘍細胞株における側集団の解析

Cancer stem cells (CSCs) are an important cause of tumor growth, metastasis, and recurrence. Isolation and identification of CSCs are of great ...

Combined Conditional Knockdown and Adapted Sphere Formation Assay to Study a Stemness-Associated Gene of Patient-derived Gastric Cancer Stem Cells

Cancer stem cells (CSCs) are implicated in tumor initiation, development and recurrence after treatment, and have become the center of attention of many studies in the last decades. Therefore, it is important to develop methods to investigate the role of key genes involved in cancer cell stemness. Gastric cancer (GC) is one of the most common and mortal types of cancers. Gastric cancer stem cells (GCSCs) are thought to be the root of gastric cancer relapse, metastasis and drug resistance. Understanding GCSCs&#160;biology is needed to advance the development of targeted therapies and eventually to reduce mortality among patients. In this protocol, we present an experimental design using a conditional knockdown system and an adapted sphere formation assay to study the effect of clusterin on the stemness of patient-derived GCSCs. The protocol can be easily adapted to study both in vitro and in vivo function of stemness-associated genes in different types of CSCs.

In this protocol, we present an experimental design using a conditional knockdown system and an adapted sphere formation assay to study the effect of clusterin on the stemness of patient-derived GCSCs. The protocol can be easily adapted to study both in vitro and in vivo function of stemness-associated genes in different types of CSCs.

患者由来胃癌幹細胞のステム関連遺伝子を研究するための条件付きノックダウンと適応球形成アッセイを組み合わせた

Cancer stem cells (CSCs) are implicated in tumor initiation, development and recurrence after treatment, and have become the center of attention of many ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for progression-free and overall survival. Therefore, translational research needs to provide further molecular evidence to improve targeted therapies for malignant melanomas. In the past, oncogenic mechanisms related to melanoma were extensively studied in established cell lines. On the way to more personalized treatment regimens based on individual genetic profiles, we propose to use patient-derived cell lines instead of generic cell lines. Together with high quality clinical data, especially on patient follow-up, these cells will be instrumental to better understand the molecular mechanisms behind melanoma progression.
Here, we report the establishment of primary melanoma cultures from dissected fresh tumor tissue. This procedure includes mincing and dissociation of the tissue into single cells, removal of contaminations with erythrocytes and fibroblasts as well as primary culture and reliable verification of the cells' melanoma origin.
Recent reports revealed that melanomas, like the majority of tumors, harbor a small subpopulation of cancer stem cells (CSCs), which seem to exclusively fuel tumor initiation and progression towards the metastatic state. One of the key markers for CSC identification and isolation in melanoma is CD133. To isolate CD133+ CSCs from primary melanoma cultures, we have modified and optimized the Magnetic-Activated Cell Sorting (MACS) procedure from Miltenyi resulting in high sorting purity and viability of CD133+ CSCs and CD133- bulk, which can be cultivated and functionally analyzed thereafter.

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

This article describes the preparation of freshly obtained melanoma tissue into primary cell cultures, and how to remove contaminations of erythrocytes and fibroblasts from the tumor cells. Finally, we describe how CD133+ putative melanoma stem cells are sorted from the CD133- bulk using Magnetic Activated Cell Sorting (MACS).

CD133の患者由来の細胞培養および分離<sup&gt; +</supメラノーマから&gt;推定されるがん幹細胞

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

医学

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly isolated from human tissues and serially propagated in immunodeficient mice, typically through antibody labeling of subpopulations of cells and fractionation by flow cytometry. However, the unique clinical features of prostate cancer have considerably limited the study of prostate CSCs from fresh human tumor samples. We recently reported the isolation of prostate CSCs directly from human tissues by virtue of their HLA class I (HLAI)-negative phenotype. Prostate cancer cells are harvested from surgical specimens and mechanically dissociated. A cell suspension is generated and labeled with fluorescently conjugated HLAI and stromal antibodies. Subpopulations of HLAI-negative cells are finally isolated using a flow cytometer. The principal limitation of this protocol is the frequently microscopic and multifocal nature of primary cancer in prostatectomy specimens. Nonetheless, isolated live prostate CSCs are suitable for molecular characterization and functional validation by transplantation in immunodeficient mice.

The isolation of cancer stem cells (CSCs) directly from human tissues is requisite for their biological characterization. This manuscript describes a methodology for the isolation of prostate CSCs from human tissues, while also providing tips on troubleshooting difficult steps.

ヒト前立腺癌サンプルからがん幹細胞の単離

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

サイドポピュレーション細胞の検出を容易にする代替レーザー励起法

Effective Detection of Hoechst Side Population Cells by Flow Cytometry

The side population (SP) cells are identified through Hoechst 33342 staining and analyzed using flow cytometry (FCM). The Hoechst SP method is utilized for the isolation of stem cells based on the dye efflux properties of ATP-binding cassette (ABC) transporters. The method was initially employed for the identification and isolation of hematopoietic stem cells (HSCs), but it has now evolved to primarily focus on the identification and isolation of cancer stem cells (CSCs). The traditional detection method of FCM uses a 355 nm laser to excite the dye to detect SP cells. Through this study, we have successfully identified alternative approaches for dye excitation that can effectively replace the detection of SP cells using a 355 nm laser. This is achieved through the utilization of high-power 375 nm or 405 nm lasers. This allows us to exercise enhanced selectivity in the detection of SP cells rather than being solely limited to the 355 nm laser flow cytometry.

著者スポットライト:サイド集団細胞を分析するためのヘキスト染色のための革新的なレーザー技術

Here, we show that high-power 375 nm and 405 nm lasers can effectively excite Hoechst 33342 and serve as a viable alternative to the 355 nm laser for side population (SP) cell detection, thereby expanding the range of available lasers in flow cytometry applications.

フローサイトメトリーによるHoechst側集団細胞の効果的な検出

The side population (SP) cells are identified through Hoechst 33342 staining and analyzed using flow cytometry (FCM). The Hoechst SP method is utilized ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor initiation, metastasis and resistance to radio- and chemotherapy. Here we describe a specific methodology for culturing primary human pancreatic CSCs as tumor spheres in anchorage-independent conditions. Cells are grown in serum-free, non-adherent conditions in order to enrich for CSCs while their more differentiated progenies do not survive and proliferate during the initial phase following seeding of single cells. This assay can be used to estimate the percentage of CSCs present in a population of tumor cells. Both size (which can range from 35 to 250 micrometers) and number of tumor spheres formed represents CSC activity harbored in either bulk populations of cultured cancer cells or freshly harvested and digested tumors 1,2. Using this assay, we recently found that metformin selectively ablates pancreatic CSCs; a finding that was subsequently further corroborated by demonstrating diminished expression of pluripotency-associated genes/surface markers and reduced in vivo tumorigenicity of metformin-treated cells. As the final step for preclinical development we treated mice bearing established tumors with metformin and found significantly prolonged survival. Clinical studies testing the use of metformin in patients with PDAC are currently underway (e.g., NCT01210911, NCT01167738, and NCT01488552). Mechanistically, we found that metformin induces a fatal energy crisis in CSCs by enhancing reactive oxygen species (ROS) production and reducing mitochondrial transmembrane potential. In contrast, non-CSCs were not eliminated by metformin treatment, but rather underwent reversible cell cycle arrest. Therefore, our study serves as a successful example for the potential of in vitro sphere formation as a screening tool to identify compounds that potentially target CSCs, but this technique will require further in vitro and in vivo validation to eliminate false discoveries.

Pancreatic cancer stem cells (CSCs) can be expanded in vitro using the anchorage-independent sphere culture technique, which represents a powerful tool to study CSC biology and can serve as the first step to develop novel CSC-targeting therapies. Here the methodology for expanding, analyzing and targeting of pancreatic CSCs is provided.

新しい治療戦略を開発するための膵臓癌幹細胞特性を研究

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Isolation of the Side Population in Myc-induced T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia in Zebrafish

Heterogeneous cell populations, from either healthy or malignant tissues, may contain a population of cells characterized by a differential ability to efflux the DNA-binding dye Hoechst 33342. This "side population" of cells can be identified using flow cytometric methods after the Hoechst 33342 dye is excited by an ultraviolet (UV) laser. The side population of many cell types contains stem- or progenitor-like cells. However, not all cell types have an identifiable side population. Danio rerio, zebrafish, have a robust in vivo model of T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL), but whether these zebrafish T-ALLs have a side population is unknown. The method described here outlines how to isolate the side population cells in zebrafish T-ALL. To begin, the T-ALL in zebrafish is generated via the microinjection of tol2 plasmids into one-cell stage embryos. Once the tumors have grown to a stage at which they expand into more than half of the animal's body, the T-ALL cells can be harvested. The cells are then stained with Hoechst 33342 and examined by flow cytometry for side population cells. This method has broad applications in zebrafish T-ALL research. While there are no known cell surface markers in zebrafish that confirm whether these side population cells are cancer stem cell-like, in vivo functional transplantation assays are possible. Furthermore, single-cell transcriptomics could be applied to identify the genetic features of these side population cells.

Here, we describe a technique to isolate the side population cells from a zebrafish model of myc-induced T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL). This side population assay is highly sensitive and is described for zebrafish T-ALL, but it may be applicable to other malignant and non-malignant zebrafish cell types.

ゼブラフィッシュのMyc誘導性T細胞急性リンパ芽球性白血病における側方集団の単離

Heterogeneous cell populations, from either healthy or malignant tissues, may contain a population of cells characterized by a differential ability to ...

生物学的サンプルからの癌幹細胞の検出と精製のためのDNA色素誘発側母集団表現型の活用

要約

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婦人科腫瘍および乳がん腫瘍から癌幹細胞球体を取得する

固形腫瘍細胞株における側集団の解析

患者由来胃癌幹細胞のステム関連遺伝子を研究するための条件付きノックダウンと適応球形成アッセイを組み合わせた

CD133の患者由来の細胞培養および分離

ヒト前立腺癌サンプルからがん幹細胞の単離

フローサイトメトリーによるHoechst側集団細胞の効果的な検出

フローサイトメトリーによるHoechst側集団細胞の効果的な検出

フローサイトメトリーによるHoechst側集団細胞の効果的な検出

新しい治療戦略を開発するための膵臓癌幹細胞特性を研究

ゼブラフィッシュのMyc誘導性T細胞急性リンパ芽球性白血病における側方集団の単離