Monitoraggio a lungo termine dei tassi di consumo di ossigeno in colture epiteliali pigmentate retiniche altamente differenziate e polarizzate

La degenerazione dell'EPR, o epitelio pigmentato retinico, è alla base di molte cause di perdita della vista. La disfunzione mitocondriale è alla base di questa degenerazione dell'RPE in molti casi. Possiamo misurare la funzione mitocondriale osservando i tassi di consumo di ossigeno, o OCR.

Qui presentiamo un nuovo metodo per misurare l'OCR nell'RPE. Grazie al lavoro di più laboratori, è ormai ben consolidato, l'RPE richiede l'attività mitocondriale per mantenere la sua salute e funzione. La ricerca è ora più focalizzata su quali nutrienti l'RPE utilizza preferenzialmente e se questo cambia sotto stress.

I metodi precedenti per valutare l'OCR nell'RPE hanno dei limiti. O l'RPE è stato coltivato in condizioni non ideali, o non è stato possibile valutarlo per lunghi periodi di tempo. Pertanto, la misurazione dell'OCR in colture ad alta fedeltà che mantengono le caratteristiche in vivo è una delle sfide principali.

Il metodo per il monitoraggio dell'OCR introdotto in questo manoscritto ci consente di misurare l'OCR nell'arco di una settimana, manipolando l'RPE in molteplici sfide sperimentali. Tutto questo viene fatto mentre l'RPE si trova in condizioni di coltura ideali che gli consentono di imitare l'RPE ideale in vivo. Recipher è un nuovo dispositivo per il monitoraggio a lungo termine del consumo di ossigeno nelle colture cellulari, come l'epitelio pigmentato retinico.

A differenza dei metodi a breve termine come l'analizzatore di cavallucci marini, recipher supporta il monitoraggio esteso in condizioni standard, consentendo una profilazione bioenergetica dettagliata per settimane e preservando la salute delle cellule.