Le biobanche sono risorse essenziali per la ricerca traslazionale e clinica di base, ma fungono anche da attori chiave che collegano la ricerca accademica e l'industria farmaceutica-biotecnologica. Questo protocollo presenta le procedure operative standard della biobanca presso l'IAO, una biobanca completamente certificata che lavora in conformità con i più recenti standard per la biotecnologia, il biobanking e i requisiti generali per le biobanche. La disponibilità di campioni biologici di alta qualità da pazienti oncologici è fondamentale per lo sviluppo di strumenti diagnostici di prossima generazione e i terapisti lo adattano ai singoli pazienti.
La biobanca di materiale biologico proveniente da pazienti oncologici richiede personale specializzato e numerose certificazioni. Il personale deve essere costantemente formato e aggiornato. Questo protocollo deve quindi essere il punto di partenza per coloro che desiderano istituire una biobanca.
Per iniziare, trasmetti un video educativo nei cartoni animati nelle sale d'attesa per informare i pazienti sull'importanza dell'impatto dell'RPA. Fornire segnalibri gadget a tutti i pazienti. Utilizzare il software LIMS per tracciare tutti i campioni biologici.
Identificare i pazienti utilizzando i codici. Assegna un codice univoco a ciascun individuo che corrisponda al numero di cartella clinica. Verificare se il paziente è arruolato in una sperimentazione clinica o in un progetto di ricerca approvato specifico compilando correttamente il campo del progetto di studio in ciascun profilo del paziente.
Informare i tecnici se il rischio di infezione è sconosciuto. Scartare campioni con risultati positivi o rischi sconosciuti. Per i campioni freschi, registrare i campioni di sangue nel software della biobanca.
Etichetta i vacutainers con il codice ID della biobanca e consegnali agli utenti autorizzati. Per i campioni congelati conservati nella biobanca, preparare due provette rivestite 2D di criobanca ciascuna di 900 microlitri di sangue. Registrare le aliquote nel software della biobanca.
Posizionarli su una targhetta con codice a barre specificata e conservarli a meno 80 gradi Celsius per garantire una temperatura costante. Versare il sangue dai tubi di raccolta EDTA nel tubo conico sterile vuoto da 50 millilitri e diluirlo usando PBS 1X sterile. Utilizzare il PBS per sciacquare il tubo di sangue.
Centrifugare i tubi a 400 RCF per 30 minuti a 20 gradi Celsius e trattare i tubi sotto una cappa a rischio biologico. Recuperare lo strato bianco centrale contenente PBMC utilizzando una pipetta Pasteur e posizionarlo in un nuovo tubo conico sterile da 50 millilitri. Aggiungere fino a 45 millilitri di PBS per lavare i PBMC.
Mescolare e centrifugare a 400 RCF per 10 minuti a quattro gradi Celsius. Recuperare il pellet e risospenderlo in PBS. Quindi contare le celle usando camere Burker usa e getta.
Ripetere il lavaggio PBS per le PBMC come descritto nel manoscritto di testo. Diluire le PBMC nel mezzo congelatore e preparare provette rivestite 2D di criobanca trasferendo un millilitro di cellule risospese in ciascuna provetta criogenica. Posizionare i campioni in una scatola criogenica specifica e conservarli a meno 80 gradi Celsius il prima possibile.
Centrifugare il vacutainer contenente i campioni di sangue intero a 2.000 G per 10 minuti a quattro gradi Celsius. Rimuovere lo strato superiore del plasma utilizzando una pipetta Pasteur da tre millilitri e trasferirlo in un tubo conico sterile da 15 millilitri. Quindi centrifugare a 16.000 RCF per 10 minuti a quattro gradi Celsius per eliminare le cellule del sangue contaminanti.
Trasferire il plasma in provette rivestite 2D di criobanca da un millilitro. Registrare le aliquote nel software della biobanca. Posizionarli su una specifica piastra con codice a barre e conservarli a meno 80 gradi per garantire una temperatura costante.
Far esaminare campioni di tessuto da un patologo per determinare se il materiale che non è necessario per le procedure diagnostiche è sufficiente per scopi di ricerca. Quando possibile, raccogliere anche la controparte non patologica del tessuto patologico. Posizionare i campioni in piastre di Petri sterili in coltura cellulare etichettate come P e NP. Mantenere il tessuto sul ghiaccio a quattro gradi Celsius e dividerlo in tre parti ciascuna.
A, B e C se è disponibile materiale sufficiente. Per i campioni di tessuto fresco etichettati come A, collocare le aliquote fresche di tessuto P e NP in provette con il terreno di coltura appropriato definito in ciascun protocollo specifico e inviarle a unità di ricerca esterne. Per i campioni di tessuto OCT etichettati come B, riempirli con resina OCT e metterli immediatamente in un apparecchio di congelamento flash a meno 80 gradi Celsius.
Per i campioni di tessuto etichettati come C, posizionare i campioni di tessuto rimanenti in tubi rivestiti 2D di criobanca nell'apparecchio di congelamento flash. Conservare i piatti a meno 80 gradi Celsius. Un totale di 38.446 biopsie liquide biologiche annotate e 10.205 campioni di tessuto sono stati raccolti da aprile 2012 a dicembre 2021.
Il numero di campioni raccolti, in particolare i tessuti dal 2020 al 2021, è diminuito a causa della pandemia di COVID-19 e della relativa riduzione delle procedure oncologiche. I campioni raccolti ottenuti dalle divisioni di urologia, ginecologia, ecologia, e le divisioni di testa e collo, chirurgia addominale, pelvica e toracica sono stati analizzati in dettaglio. Il maggior numero di campioni di tessuto sono stati raccolti da tumori al seno.
La raccolta di altri campioni biologici, come urina, feci e tamponi buccali, è aumentata significativamente in seguito alla domanda nel corso degli anni. Questa opzione fornisce una piattaforma fondamentale per la conservazione di campioni biologici e migliora la riproducibilità dei programmi di ricerca sul cancro. Questi campioni possono essere utilizzati per diverse applicazioni di ricerca come il sequenziamento di prossima generazione o la spettrometria di massa.
La nostra piattaforma è in grado di implementare nuovi algoritmi di intelligenza artificiale nella ricerca traslazionale con il potenziale di cambiare il modo in cui vengono trattati i pazienti oncologici.
